Дифосфаты определение

Первый раздел Практикума должен помочь студентам освоить методические приемы и основы аналитической биохимии. Он содержит описание основных принципов и методов концентрационного анализа, принятых в биохимии (спектрофотометрического, колориметрического, манометрического), в частности, для количественного определения гликогена, глюкозы, неорганического фосфата, фосфорных эфиров углеводов, молочной и пировиноградной кислот. В раздел включены работы, посвященные анаэробному превращению углеводов. Каждая задача, выполняемая студентом, предусматривает анализ чистоты исходного препарата углевода или его фосфорного эфира, получение ферментного препарата (гомогената или экстракта ткани), постановку биохимического эксперимента, количественную оценку результатов. Количественное определение веществ проводится несколькими методами, результаты сопоставляются. Так, выполняя задание по теме Превращение фруктозо-1,6-дифосфата в молочную кислоту , студент анализирует фруктозо-1,6-дифосфат по фруктозе и по фосфату, молочную кислоту определяет спектрофотометрическим и колориметрическим методами. Подобным образом выполняются работы, связанные с превращением других фосфорных эфиров углеводов, гликогена, глюкозы. [c.5]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФРУКТОЗО-1,6-ДИФОСФАТА [c.41]

Реактивы для определения фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе (с. 42). [c.55]

Анализ чистоты препарата фруктозо-1,6-дифосфата. Изучение его ферментативного расщепления. Определение константы равновесия реакции. Влияние температуры и времени инкубации. [c.503]

Недавние исследования показали, однако, что иногда холостые циклы могут происходить и в физиологических условиях, имея при этом вполне определенный биологический смысл-производство тепла. Любопытный пример подобного холостого цикла обнаружен у некоторых насекомых. В холодную погоду шмель не может летать до тех пор, пока он не прогреет свой мотор температура мышц должна подняться у него примерно до 30°С и поддерживаться на этом уровне за счет холостого цикла с участием фруктозо-6-фосфата и фруктозо-1,6-дифосфата и последующим гидролизом АТР, который служит источником тепла. Полагают также, что холостые циклы, генерирующие тепло, имеют место, возможно, и у некоторых животных, пробуждающихся после зимней спячки, т. е. в период, когда температура тела животного бывает гораздо ниже нормы. [c.612]

Преимущества метода отделения дифосфата с использованием методов осаждения проявляются в некоторых комплексометрических методах определения дифосфата. Например, дифосфат осаждают при pH = 3,8 ацетатом цинка [3], при этом ортофосфаты остаются в растворе, их осаждают затем после отделения дифосфата цинка магнезиальной смесью оба аниона косвенно, по металлу, определяют комплексо.метрическим титрованием. Тот же прием можно использовать при анализе смеси дифосфата и метафосфата, в этом случае дифосфат осаждают в виде нерастворимой соли цинка, а метафосфат определяют в фильтрате. [c.416]

Титриметрическое определение дифосфата [19] [c.418]

Это, как правило, косвенные методы, некоторые из них основаны на уменьшении интенсивности окраски комплексных соединений. Метод, описанный в работе [21], основан на определении следовых концентраций дифосфата в ортофосфате по уменьшению интенсивности окраски роданидного комплекса железа(III), которое происходит за счет образования дифосфатного комплекса же- [c.418]

Для определения дифосфата применяют комплекс железа (И) с 1,10-фенантролином [23]. Как было найдено, железо и алюминий, часто присутствующие в реактивных фосфатах натрия, мешают определению и должны быть удалены. [c.419]

Этот метод, на определение с помощью которого не влияют орто- и трифосфаты, основан на образовании при pH — 4,0 в смеси вода — этанол (2,5 1) нерастворимого дифосфата кадмия [25]. [c.419]

Дифосфат (пирофосфат) в основном рассматривается в подразделе, посвященном методам разделения, хотя при обсуждении некоторых методов определения он тоже будет упоминаться. [c.480]

Уже упоминалось, что осаждение Ва + —способ разделения линейных и циклических фосфатов этот метод не всегда позволяет добиться количественного отделения линейных фосфатов. Трудность отделения заключается в неполном осаждении и соосажде-нии, особенно при малых концентрациях полифосфатов. Для разделения сейчас успешнее используют хроматографию. В качестве осадителей полифосфатов изучали комплексные соли кобальта, в некоторых случаях были достигнуты определенные успехи [3]. С помощью хлорида три (этилендиамин) кобальта (Н) можно разделить трифосфат и дифосфат [4, 5], если проводить осаждение при pH = 3,6 с помощью было показано, что процессы неполного осаждения и соосаждения проходят даже при тщательно контролируемых условиях осаждения. [c.480]

Субстратная смесь для определения альдолазы, содержащая фруктозо-1,6-дифосфат. Готовят следующие запасные растворы [c.288]

Количественное определение пиримидиновых дезоксинуклеозид-3, 5 -дифосфатов и низкомолекулярных олигонуклеотидов, освобождающихся из дезоксинуклеиновых кислот при кислотном гидролизе в стандартных условиях (так называемый метод дифференциального распределительного анализа [411]) с применением поправок на вторичные гидролитические реакции привело к установлению распределения тимина и цитозина. Сравнение результатов для дезоксинуклеиновых кислот из различных источников показало, что распределение пиримидинов (а отсюда, возможно, и пуринов) варьирует в препаратах различного происхождения (и в различных фракциях одного и того же препарата). В общем по сравнению с цитозином значительно большая пропорция тимина встречается в виде одиночных звеньев, ограниченных пуриновыми, и около 70% всех пиримидиновых звеньев присутствует в виде олигонуклеотидных участков из трех и более рядом стоящих пиримидинов. Полученные результаты показывают, что распределение компонентов далеко не беспорядочно (хотя гетерогенность исследованных дезоксинуклеиновых кислот могла бы привести к появлению полной беспорядочности), причем выходы продуктов с низким молекулярным весом значительно ниже, чем предсказано математическими расчетами [411]. [c.433]

Отцентрифигируйте осадок, промойте его слабым раствором гидроксида аммония и перенесите в тигель. Поставьте тигель на фарфоровый треугольник и прокалите его на голом огне. При прокаливании ортофосфата магния-аммония держите над тиглем при помощи пинцета красную лакмусовую бумажку, смоченную дистиллированной водой, для определения выделяющегося аммиака. Напишите уравнение реакции получения ортофосфата магния-аммония и его разложение с получением дифосфата магния Mg2P20,. [c.146]

Липосомы предоставляют уникальную возможность собирать на своей поверхности ансамбли молекул для взаимодействия их с белками мишенями. Этот подход используется нами для конструирования препаратов, регулирующих активность комплемента. Для определения оптимального расстояния между заряженными группами и выявления наиболее активной кислотной группы синтезированы дисульфаты, дифосфаты и дикарбоксиметильные производные бисфенолов. [c.182]

Липосомы предоставляют уникальную возможность собирать на своей поверхности ансамбли молекул для взаимодействия их с белками мипшнями. Этот подход используется нами для конструирования препаратов, регулирующих аетивность комплемента. Для определения оптимального расстояния между заряженными группами и выявления наиболее активной кислотной группы синтезированы дисульфаты, дифосфаты и дикарбоксиметильные производные бисфенолов. Регрессионный анализ взаимосвязи структура-активность для дикарбоновых кислот выявил перио щческую зависимость. [c.157]

Лиазы являются катализаторами отщепления от субстратов негидролитическим путем определенных групп с образованием двойной связи или с присоединением группы к двойной связи. Одни из них катализируют отщепление воды, другие — углекислоты или аммиака. Фермент альдолаза катализирует расщепление фруктозо-дифосфата на две молекулы фосфотриоз. Многие из них принимают участие в реакциях цикла Кребса. [c.120]

Определение фруктозо-1,6-дифосфата может быть проведено пс фосфату после 3-часового гидролиза при 100°С в 1 н. растворе H i или после гидролиза при 100°С в течение 10 мин в 0,2 н. растворе NaOH (с. 496). Определение фруктозодифосфата может быть проведено также по фруктозе. [c.41]

Осваивая методы определения фруктозо-1,6-дифосфата, полезно определить чистоту препарата его бариевой соли. Навеску, соответствующую 30 мкмоль, растворяют в 5 мл 0,1 н. раствора НС1. 1 мл раствора отбирают для определения фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе. Оставшиеся 4 мл солянокислого раствора бариевой соли фруктозодифосфата используют для получения натриевой соли, хорошо растворимой в воде (см. ниже). Раствор натриевой соли фруктозо-1,6-дифосфата нейтрализуют, доводят водой до 15 мл. В полученном растворе определяют содержание фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе и по фосфату в микромолях, рассчитывают чистоту препарата по фруктозе и по фосфату, сопоставляют данные. Определяют процент потери фрук-тозо-1,6-дифосфата при переводе бариевой соли в натриевую. [c.43]

Заполнение проб проводят следующим образом. Во все пробиркт наливают раствор фруктозо-1,6-дифосфата и буфер. Первые три пробирки оставляют при 20°С, а четвертую помещают в термостат при 60°С на 5 мин. Одновременно в тот же термостат помещают небольшое количество приготовленного диализованного экстракта. Большую часть экстракта оставляют при комнатной температуре. Через 5 мин во вторую и третью пробирки добавляют экстракт, стоящий при 20°С, а в четвертую экстракт, стоящий при 60°С. Содержимое пробирок перемешивают и проводят инкубацию по схеме. Затем во все пробы добавляют равный объем 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и осадок белка удаляют центрифугированием или фильтрованием. В безбелковом растворе проводят определение трио-зофосфатов (в пробах, взятых на анализ, предварительно нейтрализуют трихлоруксусную кислоту) и фруктозо-1,6-дифосфат. [c.64]

Для определения фрукгозо-1,6-дифосфата реакционная смесь содержит систему сопрягающих ферментов, указанных на схеме I. [c.240]

Активность альдолазы может быть измерена двумя методами химическим, основанным на определении концентрации продуктов реакции — фосфотриоз (по нарастанию щелочнолабильного фосфорл), и энзиматическим, в сопряженной системе, содержащей помимо альдолазы и фруктозо-1,6-дифосфата также НАД+ и глицеральдегид-З-фосфат-дегидрогеназу или НАДН и глицерол-З-фосфатдегидрогеназу. Скорость альдолазной реакции определяют по нарастанию или убыли НАДН. [c.246]

Второй компонент козимазы — трифосфопиридиннуклеотид (ТПН) чрезвычайно близок по структуре к ДПН. Кислый и щелочной гидролиз. ТПН дает результаты, указывающие на то, что структура этого соединения соответствует ДПН, в молекуле которого находится один дополнительный остаток фосфорной кислоты. Для определения положения этого остатка ТПН подвергался ферментативному гидролизу, который привел к образованию дифосфата аденозина, не являющегося АДФ. Гидролиз этого дифосфата в присутствии нуклеотидазы змеиного яда дает аденозин-2-фосфат. Отсюда следует, что дополнительная фосфатная группа ТПН находится у С(2>—рибозного остатка аденозина и строение ТПН выражается формулой ( XVII). [c.236]

A. Проводят определение, как описано в разделе Спектрофотометрия в инфракрасной области спектра (т. 1, с. 45). Инфракрасный спектр соответствует спектру, полученному со стандартным образцом примахина дифосфата СО, или спектру сравнения примахина дифосфата. [c.255]

В теле взрослого человека содержится 7—15 мг С. При профессиональном контакте содержание С. в организме может возрастать до 135—240 мг. После всасывания в кишечнике С. транспортируется кровью, главным образом эритроцитами, в виде органических комплексов с белками, коллоидного дифосфата, дифосфоглицерата. Свыше 90 % всосавшегося С. избирательно фиксируется в костях. Часть металла, циркулирующего в ионизированном состоянии или связанного внутриклеточно, постепенно выводится, но отложившийся в скелете С. остается прочно связанным. Однако депонированный С. при определенных условиях может вымываться в кровь, вызывая рецидивы интоксикации. С. фиксируется во внутренних органах (мг/100 г) печень 0,04—0,28, почки 0,027, желудок и кишечник 0,022 и 0,023 (Швайкова). Содержание С. в женском молоке колеблется от 0,006 до 0,58 мкг/мл (Dillon et al.). Значительные количества С. концентрируются в волосах и зубах человека. У сельских жителей в волосах до 20 мкг/г, у горожан— до 60 мкг/г, у рабочих свинцового производства — от 95 до 250 мкг/г. Существует корреляция между содержанием С. в волосах и в крови концентрация в волосах 7 мкг/г соответствует уровню в крови 600 мкг/л. Имеется корреляция между уровнем С. в волосах и клиническими проявлениями интоксикации (Ревич). Из общего количества поступающего в организм человека С. только около 4 % задерживается, остальное выводится, главным образом через кишечник, в меньшей степени через почки, с желчью, потом и через волосяной покров. [c.431]

Очевидно, что в дополнение к регуляторным механизмам, которые можно предсказать на основании законов химической кинетики интегрированной системы, живая природа разработала специфические механизмы ферментативного контроля. Прежде чем перейти к обсуждению таких механизмов, отметим, что скорость определенной последовательности реакций будет зависеть от доступности субстратов и кофакторов соответствующих ферментов. Как мы видели, изучение процесса гликолиза началось с наблюдения, что распад глюкозы под действием дрожжевого сока быстро замедлялся и прекращался совсем, но потом возобновлялся, если в реакционную смесь добавляли ортофосфат. В другом случае гликолиз не протекал дальше образования фруктозо-1,6-дифосфата без добавления АДФ именно таким способом Гарден и Йонг впервые обнаружили АДФ. [c.53]

Чтобы определить количество усвояемой РгОд в суперфосфате, из навескв его при анализе последовательно делают две вытяжки водную и щелочным раствором лимоннокислого аммония второй из реактивов растворяет дифосфат кальция и частично — фосфаты алюминия и железа, которые цри этом неверно относят к усвояемым. Поэтому чем богаче фосфатное сырье полутор ными окислами, тем менее достоверные результаты дает этот метод оценки суперфосфата. В некоторых странах для определения усвояемой фосфорной кислоты в суперфосфате используют нейтральный раствор лимоннокислого аммония. Недостаток его в том, что он растворяет не только дифосфат, но и трифосфат кальция, хотя последний и не включают в группу усвояемых. Из сказанного видно, что понятие усвояемый фосфор условно, тем более, что усвояемый по отношению к пшенице и гречихе или конопле, люпину, горчице означает далеко не одно и то же (последние могут питаться и труднорастворимыми солями, чего нельзя ожидать от злаков). [c.262]

Разработаны методы определения дифосфата с использованием хлорида три (этилендиамин) кобальта (П1) [1, 2]. При их использовании были обнаружены эффекты соосаждения и неполного осаждения, особенно при низких концентрациях дифосфата. В аналогичном методе 16] для осаждения дифосфата в виде Na[ o( 2H8N2)2P207] используют хлорид цис-дихлорбис(этилен-диаминкобальт(П1). Осаждают 20—80 мг дифосфата при pH = = 11—12 и сушат при 100—120°С. Ортофосфат, трифосфат, триметафосфат и тетраметафосфат в 10-кратном избытке не мешают определению. Другие мешающие ионы, кроме Ag+, u +, VO2", Mg +, As +, Br +, e + и Th +, можно маскировать. [c.417]

В горячих сильных кислотах дифосфат гидролизуется до ортофосфата, который можно определять титриметрически. Другим вариантом определения является титрование кислоты, об- [c.417]

Разработанный в 1927 г. Брицке и Драгуновым [17] метод впо-следстапи был улучшен. Белл рекомендовал доводить pH до 3,8 перед добавлением сульфата цинка и титровать выделяющийся водород до pH = 3,8 [18]. Было замечено, что при постоянной концентрации сульфата цинка кислотность раствора после его введения является также функцией концентрации трифосфата. В отсутствие дифосфата методику можно использовать для определения трифосфата, для этих же целей методику можно использовать в том случае, если дифосфат определить другим методом. В работе [19] рекомендуют pH добавляемого раствора сульфата цинка также доводить до pH = 3,8. [c.418]

Дифосфат можно осаждать [20] в виде МпРгОу при pH = 4,1, добавляя к анализируемому раствору избыток стандартного раствора Мп2+. Через 16 ч осадок отфильтровывали и избыток Мп + в фильтрате титровали при pH = 10 с эриохром черным Т. Осаждение, как было найдено, проходит количественно, если jionnenTpa-ция дифосфата не меньше 0,2 мг РгО в 1 л, избыток Мп + должен быть не менее пятикратного. Ортофосфат мешает определению и должен отсутствовать. [c.418]

Для определения дифосфата в ортофосфате были использованы различные приемы [24]. К смеси добавляли железо (HI) и дифосфат железа(III) экстрагировали раствором додециламина в смеси ацетона и H I3. Железо в экстракте (а следовательно, содержание дифосфата) определяли после реэкстракции его гидроксидом аммония с сульфосалициловой кислотой. Светопоглощение водных растворов измеряли при 440—460 нм. [c.419]

Предложен метод титрования сульфатов смесью нитратов бария и свинца с поляризоваипым висмутовым электродом [189]. Титрование сульфатов этой смесью можно сочетать с рН-метриче-ской индикацией конечной точки титрования (использованы стеклянный и каломельный электроды), при титровании pH изменяется на 1—3 единицы [190]. Определению сульфатов этим методом мешают фосфаты, дифосфаты, сульфиды, сульфиты, тиосульфаты и ацетаты. [c.552]

Совершенно иного типа эксперименты необходимы для выяснения природы реакции, в результате которой происходит превращение рибулозо-5-фосфата в рибулозо-1,5-дифосфат [уравнение (9)]. Кальвин и Массини разработали установку, с помощью которой можно было пропускать ток Og через суспензию фотосинтезирующих водорослей. Подача С Ог менялась в ходе опыта лишь незначительно [18]. Через определенные промежутки времени проводили отбор проб отобранные водоросли фиксировали. Последующий анализ с помощью хроматографии на бумаге и радиоавтографии показал, что при длительности фотосинтеза около [c.543]

Сплошные стрелки указывают те реакции цикла восстановления углерода, которые были выяснены Кальвином и его сотрудниками. Прерывистая линия изображает гипотетическую реакцию восстановительного карбоксилирования (подробности см. в тексте). Двойными стрелками отмечены некоторые биосинтетические пути, ведущие свое начало от промежуточных соединений цикла. Звездочками указана относительная степень включения метки (приближенно) после нескольких секунд фотосинтеза, определенная методом химической деградации, как указано в тексте. Сокращения Р — РОзН- РДФ — рибулозо-1,5-дифосфат ФДФ — фруктозо-1,6-дифосфат СГДФ — седогептулозо-1,7-дифосфат ТПФ — тиаминпирофосфат ГФ — глюкозо-6-фосфат ФЕП — фосфоенолпировиноградная кислота. Цифры у стрелок —это номера уравнений реакций, приведенных в тексте римские цифры при структурных формулах те же, что ив тексте. [c.545]

В результате щелочного или нейтрального [225] гидролиза рибонуклеотидов (катализируемого ионами металла) образуются соответствующие нуклеозиды и фосфорная кислота. Освобождению фосфорной кислоты при кислотном гидролизе (pH —1), вероятно, предшествует разрыв гликозидной связи, после чего образуется неустойчивый фосфат сахара , расщепляющийся затем дальше [226]. Так как пиримидиновые гликозиды значительно более устойчивы, чем соответствующие пуриновые соединения, фосфорная кислота при кислотном гидролизе освобождается значительно медленнее в случае цитидиловой и уридиловой кислот, чем адениловой и гуаниловой (а также 4,5-дигидропиримидиннуклеотидов). Однако при pH 4 механизм гидролиза иной и включает прямой разрыв связи Р — О при отсутствии расщепления гликозидной связи и без заметной миграции фосфорного остатка [148]. Для определения расположения фосфатных групп в аденозин-2, 5 -дифосфате и аденозин-3, 5 -дифосфате оказался полезным гидролиз в аммонийно-формиатном буфере при гидролизе 2, 5 -изомера образуется аденозин, аденозин-2 -фосфат, аденозин-5 -фосфат и лишь в очень незначительном количестве аденозин-З -фосфат. Структура этих синтетических дифосфатов была подтверждена при помощи моноэстеразы, специфически расщепляющей З -фосфоэфирную связь в аденозин-3, 5 -дифосфате. [c.175]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология