Михаэлиса температуры

На активность ферментов в организме, а следовательно на скорость ферментативной реакции, влияет ряд факторов сродство к субстрату, константа Михаэлиса, температура, pH среды, концентрация субстрата и различных кофакторов, необходимых для действия ферментов, наличие активаторов и ингибиторов. [c.434]

Подобным образом можно анализировать температурные зависимости констант ингибирования или констант диссоциации ионогенных групп активного центра фермента. Однако при анализе зависимостей констант равновесия ферментативной реакции от температуры следует принимать во внимание, что они могут быть эффективными величинами. Так, например, константы Михаэлиса в обш,ем случае не являются истинными константами равновесия даже при наличии двухстадийного механизма ферментативной реакции [см. уравнение (6.7)]. Более того, даже если изучаемый процесс равновесный, его константа равновесия может оказаться эффективной величиной, зависящ,ей, например от pH среды [см. уравнение (6.182)]. В этом случае при корректном анализе температурной зависимости реакции необходимо учитывать теплоты ионизации ионогенных групп субстрата или активного центра фермента. [c.264]

Величина константы Михаэлиса Км. для различных систем изменяется от 1 до 10" моль/л. Помимо природы субстрата, она зависит от величины pH, температуры и других факторов. Поэтому ее значение приводят для характеристики конкретных фермент-субстратных систем в определенных условиях. [c.304]

Величины кажущихся констант Михаэлиса для субстратов колеблются в зависимости от природы используемого буфера, pH, температуры, источника выделения фермента и прочих условий. Кажущиеся константы Михаэлиса цитоплазматических креатинкиназ равны для Mg—АТФ—0,5—1,0 мМ Mg—АДФ—0,2—0,8 мМ для креатина — [c.292]

Скорости реакций являются не только функциями температуры воды, но часто зависят и от концентрации ЗВ, что приводит к нелинейным уравнениям. Среди таких уравнений наиболее широко используются соотношения типа Михаэлиса-Ментена, которые имеют вид [c.288]

По полученному значению к+1 и на основании измерения активности фермента (и) при тех же условиях (pH, температура, состав среды и т. п.), при которых проводились эксперименты с ингибитором, можно рассчитать концентрацию фермента по уравнению Михаэлиса [c.124]

Очевидно, что при постоянстве [Е]о и [8] изменение температуры может изменять стационарную скорость реакции вследствие влияния на константу скорости распада комплекса Е8 +2) и константу Михаэлиса Кт), причем это влияние может быть существенно различным. Более того, влияние температуры на константу Михаэлиса также является сложным, поскольку эта константа определяется даже в простейшем случае соотношением трех констант скорости [c.127]

В связи с этим одна из важных задач ферментативной кинетики — это разработка методов количественной оценки влияния температуры на скорость отдельных стадий процесса. Решение этой задачи зависит от возможностей измерения констант скорости этих стадий По-видимому, наиболее простой могла бы быть оценка влияния тем пературы на константу скорости распада комплекса Михаэлиса сопровождающегося образованием продуктов реакции и регене рацией фермента. Для реакции рассматриваемого механизма макси мальная скорость, которая может быть определена экспериментально, связана с константой скорости соотношением [c.127]

Это равновесие определяется, как известно, константой субстрата Кв — константой диссоциации комплекса Михаэлиса, равной отношению Согласно закону Вант-Гоффа, влияние температуры на константу равновесия выражается уравнением [c.128]

Таким образом, если методически возможно определение К ферментативной реакции при различных температурах, то, выражая экспериментальные данные графически в координатах 1п/(5 (или lg Кз) против 1/Т, представляется возможным вычислить изменение энтальпии АН системы при образовании комплекса Михаэлиса. Для того чтобы не ошибиться в знаке АН, необходимо иметь в виду условность выражения константы равновесия через константы скорости прямой и обратной реакции. В физической химии принято, что константой равновесия Кр реакции [c.128]

Зависимость константы Михаэлиса и максимальной удельной скорости гидролиза от строения субстрата холинэстераза сыворотки крови (pH 8,0, температура 25°) [c.160]

В литературе встречаются разрозненные и довольно противоречивые данные о влиянии температуры на кинетические константы реакций, катализируемых холинэстеразами. Удивительным фактом является то, что значение констант Михаэлиса не зависят от температуры как показали разные авторы. [c.174]

Из этого факта авторами был сделан логичный вывод, что если для субстратов (3) и (4) в пределах исследованных температур (15—30°) лимитирующей общую скорость процесса является одна и та же промежуточная стадия (вторая), то в случае субстратов (1) и (2) суммарная скорость процесса определяется при разной температуре разными промежуточными реакциями, каждая из которых характеризуется своей энергией активации. При этом необходимо иметь в виду, что в соответствии с предполагаемым механизмом ферментативного гидролиза эфиров карбоновых кислот (см. схему стр. 160) последняя стадия процесса—деацетилирование фермента должна быть для всех четырех субстратов одинаковой. Однако, ввиду того, что максимальная скорость процесса для всех четырех субстратов весьма различна (при всех температурах), можно сделать вывод, что лимитирующим звеном является не эта общая реакция, а вторая фаза процесса — распад первичного комплекса Михаэлиса с отщеплением холина и образованием ацетилированного фермента. Что касается субстратов (1) и (2), то отсутствие линейной зависимости In от 1/Г для этих соединений, по мнению авторов, свидетельствует о том, что при низкой температуре лимитирующим звеном служит вторая стадия реакции, а при высокой температуре — третья — гидролиз ацетилированного фермента. Уилсон и [c.175]

Зависимость скорости реакции от концентрации субстрата описывается гиперболической кривой (рис. 4.5). Согласно Михаэлису является главной характеристикой ферментативной реакции для данного субстрата при фиксированных значениях температуры, pH и т. д. Широко используемая схема Михаэлиса ферментативного катализа [c.66]

Еще Б ранних работах Михаэлиса [2] и других авторов отмечалось, что при нагревании из углеводов в щелочных растворах образуются продукты распада, которые по своим свойствам значи -тельно отличаются от первоначально взятых веществ. В частности, было показано, что нагревание сахаров в щелочной среде сопровождается увеличением отрицательного значения окислительно-восстановительного потенциала. Это увеличение зависит от pH среды, а скорость достижения равновесного потенциала резко возрастает с увеличением температуры, [c.27]

Поскольку р/С/л для ряда индикаторов, предложенных Михаэлисом, зависит от температуры, эту зависимость нужно всегда учитывать. [c.100]

Например, если оказывается, что константа Михаэлиса в разумном интервале температур близка к истинной константе равновесия, или если константу равновесия удается определить прямым методом, то появляется возможность установить, какими конформационными изменениями молекулы фермента ( принудительный контакт ) или субстрата ( замораживание ) [c.198]

В простой формулировке Михаэлиса имеется указание на существование одного комплекса Е5. В более сложных случаях энергетический барьер, определяющий скорость, может меняться, например, при изменении pH [15] или температуры, что приводит к заметному отклонению от уравнения Аррениуса, и кажущаяся энергия активации убывает по мере возрастания температуры [16]. [c.316]

Еслп есть возмо5Кность получить точные экспериментальные данные в некотором интервале концентраций и температур, то с помощью модели Михаэлиса — Ментена можно рассчитать величины констант /с , (скорости реакции первого порядка) и Км (Л 2+ Аз)/ ) и их кажуп ,иеся энергии активации Ез и Ещ. [c.564]

Величины кажущихся констант Михаэлиса колеблются в зависимости от используемого буфера, pH, температуры и других условий. В трнс-НС1 буфере, pH 7,4, Кт для АДФ — 0,25 мМ, для фосфоенолпирувата — 0,048 мМ. [c.270]

ТЫ Р уравнений, описывающих данные по константам Михаэлиса и ингибирования, близки к средним температурам опытов Тср. Такое же соотношение выполняется и для данных, полученных на одном и том же ферменте в разных температурных областях. Для кинетических параметров, соответствующих разным субстратам, активаторам или ингибиторам, как правило, р Тср- Примеры компенсационных эффектов (КЭФ) для процессов координации лигандов гемоглобином, окисления спиртов кагалазой и гидроксилирования субстратов цитохромом Р-450 приведены на рис. 20.1. Приближенная корреляция параметров и Д5°, и Д5 наблюдалась и для реакции электронного переноса с участием металлопереносчиков. [c.554]

В число основных факторов, определяющих начальную скорость ферментативной реакции, входят концентрация фермента и субстрата, pH и температура, наличие активаторов и ингибиторов, причем концентрация субстрата является одним из наиболее важных. График зависимости между начальной скоростью и концентрацией субстрата выражается в виде ветви равнобочной гиперболы. Краеугольным камнем ферментативной кинетики является теория Михаэлиса-Ментен о механизме взаимодействия фермента и субстрата через образование про.межуточного фермент-субстратного комплекса, что является исходным моментом самых современных концепций. Теория исходила из факта, что равновесие между ферментом и субстратом достигается быстрее, чем разрушается фермент-субстратный комплекс. Однако анализ, проведенный Бригсом и Холдейном, показал, что в любой момент реакции скорости образования и распада фермент-субстратного комплекса практически равны, то есть достигается стационарное состояние, в котором концентрация промежуточного соединения постоянна. На основании этого было предложено уравнение, выполняемое для многих механизмов реакций, катализируемых ферментами, которое на- [c.203]

Выдерживание перфторалкилацетиленкарбоновой кислоты с 2-меркаптоэтанолом в присутствии эквимолярных количеств КОН при комнатной температуре в смеси этиловый спирт — вода (1 3) приводит к аддукту 282 Михаэлиса [смесь Е- и 2-изомеров (1 1)] с выходом > 85%. Аддукт при 60 °С подвергается циклизации с образованием 2-(карбоксиметил)-2-полифторалкил-1,3-оксатио-лана 283. [c.176]

Однако отщепление гидроксильных групп не всегда идет до конца часто из реакционной смеси можно выделить фенолы, по крайней мере в небольших количествах. Адкинс и Дэвис [1] получили с 20%-ным выходом 2-нафтол при дегидрировании 2-де-калола в присутствии платины в бензоле и с 65%-ным выходом тимол — из ментола при дегидрировании в присутствии никелевого катализатора. Вессели и Грилл [291] исследовали дегидрирование р-тетралолов и р-декалолов серой при 170—290°С и обнаружили, что хороший выход 2 нафтола можно получить нри Относительно низкой температуре. Аналогично Линстед и Михаэлис [179] нашли, что жидкофазное дегидрирование Р-тетралолов и Р-декалолов в присутствии палладия в достаточно мягких условиях дает умеренные выходы Р-нафтола. [c.174]

Возможно также отщепление галоидного алкила непосредственно от фосфониевого комплекса . Этот многоступенчатый механизм недостаточно обоснован. Экспериментально показано, что диалкилфосфонаты реагируют с галоидными металлами только при высокой температуре , тогда как реакция Михаэлиса—Беккера проходит в сравнительно мягких условиях, при невысокой температуре. Поэтому более вероятно, что образование эфиро-солей обусловлено алкилированием диалкилфосфористого натрия образовавшимися фосфонатами [c.52]

Проведение реакции в том или другом растворителе сильно влияет на выход конечного продукта. Так, при взаимодействии диэтилфосфористого натрия с этиловым эфиром хлоруксусной кислоты в лигроине 0,0-диэтилкарбэтокснметилфосфонат образуется с выходом 56,6%. В эфире выход этого продукта достигает 59,6%, а в абсолютном спирте — 94,6%" . В качестве растворителя употребляют гексан, гептан, лигроин, эфир, спирты, толуол, бензол или тетрагидрофуран. Реакции типа Михаэлиса—Беккера можно проводить в органическом растворителе, температура кипения которого выше, чем температура кипения образующихся продуктов, например, в гидрогенизированной тер-фениловой смеси , высококипящих погонах пефти или эвтектической смеси бифенила и дифенилового эфира . Недавно появилось сообщение о проведении реакций Михаэлиса—Беккера в жидком аммиаке. [c.70]

Михаэлиса для четырех известных субстратов одним и тем же методом и при строго одинаковых условиях [71]. Исследована кинетика ферментативного гидролиза ацетилхолина, ацетил-Р-метил-холина, бутирилхолина и бензоилхолина, катализируемого холинэстеразой сыворотки крови лошади (очищенный препарат фермента с уд. активностью по ацетилхолину 4,3 Е/мг при температуре 25°, pH 8,0 и концентрации Na l в среде 6,05 М). Для измерения начальной скорости реакции использован потенциометрический метод с регистрирующим рН-метром. [c.160]

Уилсон и Кабиб по вычисленным значениям +2 и для разных температур, а также по экспериментально найденным величинам константы Михаэлиса для всех четырех субстратов смогли приближенно оценить /Сз (предполагая, что для этих же температур и, таким образом, рассчитать термодинамические константы для образования фермента — субстратного комплекса (табл. 20). [c.176]

Общая тенденция кинетики реакций заключается в разложении химических реакций на ступени, включающие в себя передачу. 1ишь одной элементарной простои частицы (электрон, протон или водородный атом). Михаэлис полагает, что гидрирования и дегидрирования органических соединений совершаются в одну ступень с передачей сразу одного атома водорода (или одного электрона). Такой механизм был бы невозможен (кроме условий высоких температур), если бы свободные радикалы имели высокие энергии, вычисленные по прочностям стандартных связей. [c.240]

В качестве аффинных лигандов можно использовать любые соединения, прочно, специфично и обратимо связывающиеся с выделяемым веществом. Химическое строение аффинных лигандов может быть самым различным. Поскольку в настоящее время метод аффинной хроматографии применяется главным образом для выделения ферментов и их ингибиторов [89J, мы рассмотрим примеры, взятые из этой области. Как уже упоминалось, при выделении фермента аффинными лигандам1И могут служить его ингибитор, аналогичный субстрату, а также эффектор, кофактор и в отдельных случаях даже субстрат. Это справедливо и для фермента, требующего длл реакции два субстрата, но способного достаточно сильно связываться только с одним из них. Субстрат также можно использовать для адсорбции фермента в таких условиях, когда фермент связывается, но сам не способен катализировать реакцию (например, в отсутствие ионов металлов, необходимых для реакции), а также когда константа Михаэлиса зависит от pH или температуры. Аффинный адсорбент для выделения белков обычно трудно получить из аффинного лиганда, если константа диссоциации его комплекса с белком превышает (0,5—1,0)-Ю [16]. Однако Стире и сотр. [84] показали, что очень эффективный адсорбент для р-галактозидазы можно получить даже из такого относительно слабого ингибитора, как н-аминофенил-р-о-тиогалактопирано-зид (/i , 5-10 ). Этого удается достигнуть, повышая концентрацию нерастворимого аффинного лиганда и увеличивая расстояние между аффинным лигандом и матрицей носителя, что приводит к максимальной доступности аффинного лиганда, для белка в растворе. [c.9]

H5)зN + (СбН5)з№ + е). В некоторых случаях последний тип диссоциации или фотоокисления дает семихиноны, идентичные полученным Михаэлисом при химическом окислении. Действие света на раствор смеси флуоресцирующего красителя и восстановителя может вызвать выцветание красителя или обратимое или необратимое окисление восстановителя. Для объяснения первичных химических реакций был предложен механизм переноса электронов. Фотохимическая активность некоторых сортов окиси цинка была связана с тем фактом, что окись цинка не обладает флуоресценцией в видимом свете при комнатной температуре после облучения ультрафиолетовым светом. Было высказано предположение, что богатая энергией часть солнечной радиации является источником фотохимической энергии, в то время как в тех сортах окиси цинка, которые обладают сильной желтой флуоресценцией, энергия рассеивается в виде излучения с более низким уровнем энергии. Между флуоресценцией и фотосенсибилизацией существует сложная зависимость поэтому интересно изучить флуоресценцию активных кубовых красителей в присутствии целлюлозы. [c.1428]