Определение фруктозо-6-фосфата

Определение фруктозо-6-фосфата по фруктозе проводят совершенно так же, как и определение фруктозодифосфата (с. 41), но для расчета его количества величину фруктозы, найденную по калибровочному графику, умножают на коэффициент 1,65, если в качестве стандарта была использована фруктоза (1,65=100 60,5). Если в качестве стандарта используют раствор фруктозо-6-фосфата, то при расчете коэффициент не вводят. [c.44]

Первый раздел Практикума должен помочь студентам освоить методические приемы и основы аналитической биохимии. Он содержит описание основных принципов и методов концентрационного анализа, принятых в биохимии (спектрофотометрического, колориметрического, манометрического), в частности, для количественного определения гликогена, глюкозы, неорганического фосфата, фосфорных эфиров углеводов, молочной и пировиноградной кислот. В раздел включены работы, посвященные анаэробному превращению углеводов. Каждая задача, выполняемая студентом, предусматривает анализ чистоты исходного препарата углевода или его фосфорного эфира, получение ферментного препарата (гомогената или экстракта ткани), постановку биохимического эксперимента, количественную оценку результатов. Количественное определение веществ проводится несколькими методами, результаты сопоставляются. Так, выполняя задание по теме Превращение фруктозо-1,6-дифосфата в молочную кислоту , студент анализирует фруктозо-1,6-дифосфат по фруктозе и по фосфату, молочную кислоту определяет спектрофотометрическим и колориметрическим методами. Подобным образом выполняются работы, связанные с превращением других фосфорных эфиров углеводов, гликогена, глюкозы. [c.5]

Путем такого расчета можно лишь судить, насколько предполагаемые метаболические процессы возможны термодинамически, однако это отнюдь не означает, что уравнение (2) адекватно описывает все реакции, участвующие в синтезе сахарозы. И действительно, реакции синтеза сахарозы отображены в этом уравнении неверно. Так, глюкоза реагирует сначала с АТФ с образованием глюкозо-6-фосфата, а это соединение превращается в глюкозо-1-фосфат, которое и вступает в реакцию с фруктозой. Более того, изменения стандартной свободной энергии, использованные в расчетах, относятся лишь к определенным условиям, а именно реакция протекает при pH 7,0, а расчет реагентов и продуктов реакции ведется на единицу активности фермента. Поскольку условия эти, вероятно, не соответствуют физиологическим, величины АС, использованные в этих расчетах, весьма отдаленно отражают действительные изменения свободной энергии в клетке. [c.13]

Окраска, образующ,аяся с фруктозофосфатом, менее интенсивна, чем с фруктозой. Интенсивность окраски с фруктозодифосфатом составляет только 52,5% интенсивности окраски свободной фруктозы, а с фруктозо-6-фосфатом — 60,5%, если проводить определение по данной прописи. Метод чувствителен в пределах от 0,05 до 0,7 мкмоль фруктозы в пробе. [c.42]

Реактивы для определения фруктозо-6-фосфата с резорцином (с. 49). [c.62]

Определение фруктозо-1,6-дифосфата может быть проведено пс фосфату после 3-часового гидролиза при 100°С в 1 н. растворе H i или после гидролиза при 100°С в течение 10 мин в 0,2 н. растворе NaOH (с. 496). Определение фруктозодифосфата может быть проведено также по фруктозе. [c.41]

Активность альдолазы может быть измерена двумя методами химическим, основанным на определении концентрации продуктов реакции — фосфотриоз (по нарастанию щелочнолабильного фосфорл), и энзиматическим, в сопряженной системе, содержащей помимо альдолазы и фруктозо-1,6-дифосфата также НАД+ и глицеральдегид-З-фосфат-дегидрогеназу или НАДН и глицерол-З-фосфатдегидрогеназу. Скорость альдолазной реакции определяют по нарастанию или убыли НАДН. [c.246]

Недавние исследования показали, однако, что иногда холостые циклы могут происходить и в физиологических условиях, имея при этом вполне определенный биологический смысл-производство тепла. Любопытный пример подобного холостого цикла обнаружен у некоторых насекомых. В холодную погоду шмель не может летать до тех пор, пока он не прогреет свой мотор температура мышц должна подняться у него примерно до 30°С и поддерживаться на этом уровне за счет холостого цикла с участием фруктозо-6-фосфата и фруктозо-1,6-дифосфата и последующим гидролизом АТР, который служит источником тепла. Полагают также, что холостые циклы, генерирующие тепло, имеют место, возможно, и у некоторых животных, пробуждающихся после зимней спячки, т. е. в период, когда температура тела животного бывает гораздо ниже нормы. [c.612]

Препараты фермента были получены путем гомогенизирования свежих или лиофильно высушенных тканей с вероналовым или трис-буфером и последующего центрифугирования при 3000 g. Особенностью этих препаратов являлось высокое содержание в них сахаров и неорганического фосфата, что характерно как для проводящих, так и для паренхимных тканей. Поэтому определение активности гексокиназы по убыли глюкозы в опытной смеси или по убыли суммы легкогидролизуемого фосфата АТФ неорганического фосфата оказалось невозможным. Мы определяли действие гексокиназы непосредственно по количеству образующегося в течение опыта глюкозо-6-фосфата (и фруктозо-6-фосфата). Гексозомонофосфаты были выделены из опытной смеси путем фракционирования по Умб-рейту. Их количественное определение производили с помощью хроматографии на бумаге. Пятна глюкозо-6-фосфата и фруктозо-6-фосфата были элюированы с бумаги, и фосфорные эфиры определены по их сахарному компоненту с антроном [18]. [c.249]

Отметим, что фосфофруктокиназа активируется ADP, представляющим собой продукт катализируемой данным ферментом реакции (АТР + фруктозо-6-фосфат ADP + фруктозе-1,6-бисфосфат), и ингибируется АТР - одним из субстратов этой реакции. В результате этот фермент может активировать сам себя, являясь объектом сложного контроля по принцип положительной обратной связи. При определенных условиях такой контроль по принципу обратной связи вызывает необычные колебания активности данного фермента, что приводит к соответствующим колебаниям концентраций различных промежуточных продуктов гликолиза (рис. 2-39). Физиологическое значение таких специфических колебаний неясно. Однако на их примере можно видеть, как благодаря нескольким ферментам может быть создан биологический осциллятор. Такие осцилляции в принципе могут служить своеобразными внутренними часами , позволяющими клетке отсчитывать время и, к примеру, выполнять конкретные функции в определенные периоды. [c.109]

Осваивая методы определения фруктозо-1,6-дифосфата, полезно определить чистоту препарата его бариевой соли. Навеску, соответствующую 30 мкмоль, растворяют в 5 мл 0,1 н. раствора НС1. 1 мл раствора отбирают для определения фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе. Оставшиеся 4 мл солянокислого раствора бариевой соли фруктозодифосфата используют для получения натриевой соли, хорошо растворимой в воде (см. ниже). Раствор натриевой соли фруктозо-1,6-дифосфата нейтрализуют, доводят водой до 15 мл. В полученном растворе определяют содержание фруктозо-1,6-дифосфата по фруктозе и по фосфату в микромолях, рассчитывают чистоту препарата по фруктозе и по фосфату, сопоставляют данные. Определяют процент потери фрук-тозо-1,6-дифосфата при переводе бариевой соли в натриевую. [c.43]

При изучении влияния pH и температуры на максимальную скорость превращения 0-глюкоэо-6-фосфата в 0-фруктозо-6-фосфат под действием глюкозофосфатизомеразы [2] были найдены значения рК ионогенной группы активного центра фермента, равные 9,35+0,06 и 8,71+0,11 при температурах 30 и 40° С соответственно. Оценить значение теплоты ионизации найденной ионогенной группы и вычислить ошибку экспериментально определенной величины АЯион- [c.252]

Определение глюкозо-6-фосфата может быть проведено по нарастанию неорганического фосфата после щелочного гидролиза. При нагревании в 0,2 н. растворе щелочи в кипящей водяной бане за 10 мин достигается максимум гидролиза. При этом происходит гидролиз и других гексозофосфатов глюкозо-6-фосфат, фруктозо-6-фосфат и фрук-тозодифосфат расщепляются на 65%. Глюкозо-1-фосфаг и глицерофосфат в этих условиях практически не подвергаются гидролизу. [c.40]

Кажущаяся величина константы Михаэлиса для субстратов (фрук-тозо-6-фосфата и АТФ) зависит от pH реакционной среды, в которой проводится определение ферментативной активности и от концентрации второго субстрата. В зависимости от условий эксперимента она может изменяться в широких пределах для фруктозо-6-фосфата — от [c.238]

Для определения количества образующегося фруктозо-1,6-фосфата вместо а-глицерол-З-фосфатдегидрогеяазы может быть использована дегидрогеназа 3-фосфоглицеринового альдегида. В этом случае активность фосфофруктокиназы измеряют по скорости восстановления НАД+ (см. определение активности глицеральдегид-З-фосфатдегидро-геназы на с. 253). [c.240]

Определение активности фруктозо-1,6-дифосфатазы. Активность фермента определяют энзиматическим методом по количеству образовавшегося фруктозо-6-фосфата. Метод основан на использовании системы двойного ферментного сопряжения с участием глюкозо-6-фос-фатизомеразы и дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата согласно схеме [c.355]

При определенных условиях пентозофосфатный путь на этом этапе может быть завершен. Однако при других условиях наступает так называемый неокислительный этап (стадия) пентозофосфатного цикла. Реакции этого этапа не связаны с использованием кислорода и протекают в анаэробных условиях. При этом образуются вещества, характерные для первой стадии гликолиза (фруктозо-6-фосфат, фруктозо-1,6-бисфосфат, фосфотриозы), а другие—специфические для пентозофосфатного пути (седогептуло-зо-7-фосфат, пентозо-5-фосфаты, эритрозо-4-фосфат). [c.356]

Другие моносахариды оинтези руются на основе фосфатов, полученных из /)-фруктозо-6-фосфата. Дальнейшие превращения происходят при участии нуклеозиддифосфатов сахаров, которые получаются из фосфатов сахаров и нуклеозидтрифосфатов, причем каждый моносахарид взаимодействует с определенным нуклеозидтрифосфатом. Напри мер, манноза дает ГДФ-производное, нейраминовая кислота — УДФ-производное, а глюкоза — УДФ- и ТДФ-производные. Возможно, что существует стереохимическое соответствие между структурой гетероциклического основания и остатка сахара. [c.66]

Остановимся теперь на функциях последнего этапа пути. Как механизм, обеспечивающий полную деградацию углеводов, этот путь не получил универсального распространения, хотя есть эубактерии, осуществляющие разложение углеводов в аэробных условиях только по окислительному пентозофосфатному пути. У многих организмов, использующих пентозы в качестве субстратов брожения, окислительный пентозофосфатный путь служит для превращения пентоз в гексозы, которые затем сбраживаются в гликолитическом пути. Кроме того, выще мы упоминали о двух точках пересечения этого пути с гликолизом на этапах образования 3-ФГА и фруктозо-6-фосфата. Все это говорит о тесном контакте окислительного пентозофосфатного пути с гликолизом и о возможном переключении с одного пути на другой. Наконец, помимо пентоз, образующихся на начальных этапах пути, возникновение С4- и С7-сахаров в транскетолазной и трансальдолазной реакциях также представляет определенный интерес для клетки, так как эти сахара являются исходными субстратами для синтеза ряда важных клеточных метаболитов. [c.257]

Скорость гликолиза в нормальных условиях согласована со скоростью функционирования цикла лимонной кислоты в клетке до пирувата расщепляется ровно столько глюкозы, сколько необходимо для того, чтобы обеспечить цикл лимонной кислоты топливом , т. е. ацетильными группами ацетил-СоА. Ни пируват, ни лактат, ни ацетил-СоА обычно не накапливаются в аэробных клетках в больших количествах их концентрации поддерживаются на некоем постоянном уровне, соответствующем динамическому равновесию. Согласованность между скоростью гликолиза и скоростью функционирования цикла лимонной кислоты объясняется не только тем, что первый процесс ингибируется высокими концентрациями АТР и NADH, т.е. компонентами, общими для гликолитической и дыхательной стадий окисления глюкозы определенную роль в этой согласованности играет также и концентрация цитрата. Продукт первой стадии цикла лимонной кислоты-цитрат-является аллостерическим ингибитором фосфофруктокиназы, катализирующей в процессе гликолиза реакцию фосфорилирования фруктозо-6-фосфата (разд. 15.13 и рис. 15.15). [c.495]

Сплошные стрелки указывают те реакции цикла восстановления углерода, которые были выяснены Кальвином и его сотрудниками. Прерывистая линия изображает гипотетическую реакцию восстановительного карбоксилирования (подробности см. в тексте). Двойными стрелками отмечены некоторые биосинтетические пути, ведущие свое начало от промежуточных соединений цикла. Звездочками указана относительная степень включения метки (приближенно) после нескольких секунд фотосинтеза, определенная методом химической деградации, как указано в тексте. Сокращения Р — РОзН- РДФ — рибулозо-1,5-дифосфат ФДФ — фруктозо-1,6-дифосфат СГДФ — седогептулозо-1,7-дифосфат ТПФ — тиаминпирофосфат ГФ — глюкозо-6-фосфат ФЕП — фосфоенолпировиноградная кислота. Цифры у стрелок —это номера уравнений реакций, приведенных в тексте римские цифры при структурных формулах те же, что ив тексте. [c.545]

Если в растворе присутствует в-глюкоза или в-фруктоза, которые дают коричневое или красновато-коричневое окрашивание с орсином, их влияние мо кно исключить, проводя дихроматические измерения при 670 ммк и несколько ниже 600 Л1М,к. При длине волны 600 ммк соответствующие гексозы имеют те же коэффициенты экстинкции, что и при 670 ммк. Четыре альдопептозы в этой цветной реакции имеют почти одинаковые коэффициенты экстинкции, а коэффициенты экстинкции пуриновых рибонуклеотидов и свободной пентозы идентичны. Однако скорость появления окраски для в-рибозо-5-фосфата много выше, чем для свободной в-рибозы или в-рибозо-З-фосфата, что можно использовать для дифференциации и количественного определения двух типов в-рибо-зофосфатов [5]. Пиримидиновые рибонуклеотиды не вступают в эту реакцию, за исключением тех случаев, когда ниримидины до введения в реакцию подвергаются бромировапию и продолжительному кислотному гидролизу при 105° [61. Кетопентозы дают зеленую окраску с максимумом поглощения при 670 ммк. [c.28]

Установлено, что фосфаты не только способствуют распаду углеводов в организме, но и ускоряют всасывание моносахаридов. Часть фруктозы и галактозы в кишечной стенке фосфорилируется и затем превращается в глюкозу. Эти три моносахарида взаимопревращаемы. Обратимое превращение фруктозы, глюкозы в галактозу и обратно связано с участием фосфорной кислоты и соответствущих ферментов. Особенно важно превращение глюкозы в галактозу в молочной железе, которая синтезирует из них молочный сахар — лактозу. В составе крови всегда содержится определенное количество глюкозы, часть которо используется молочной железой. [c.312]

НОСТЬ которого подвержена аллостерическому регулированию различными компонентами и продуктами всего гликолитического пути. В частности, энзим весьма чувствителен к адени-новым нуклеотидам он ингибируется АТФ, но активируется АДФ и АМФ, а также субстратом фруктозо-6-фосфата (Ф6Ф). При определении в разное время содержания различных участников гликолитического пути обнаружены колебательные циклы, в которых одни участники колеблются с отставанием на 180° от других. Анализ этих отношений в течение колебательного цикла позволил объяснить два крайних уровня актив- [c.92]

В методах, основанных на определении фосфата, освобождающегося под действием фермента, можно использовать любой субстрат, позволяющий обнаруживать специфические фосфата- зы. Так, например, в одной из работ [929] субстратом служид фруктозо-1,6-дифосфат. [c.299]

Если бы обе реакции протекали неконтролируемым образом с одинаковыми скоростями, то суммарный поток между фруктозо-6-фосфатом. и фруктозо-1,6-дифосфатом оказался бы равным нулю, однако при этом должен был бы происходить непрерывный гидролиз АТФ, что неминуемо ведет к смерти. Подобная совокупность реакций названа бесполезным циклом . Воспрепятствовать протеканию бесполезного цикла можно либо пространственным разделением двух процессов, либо обеспечением такого контроля, при котором активность одного из ферментов возможна только при подавлении активности другого. В какой-то степени контроль достигается компартментализацией, однако в таких тканях, как почка и печень, где может происходить и гликолиз и глюконеогенез, подобный путь невозможен, и поэтому здесь необходим определенный контроль активности фосфофруктоки-назы и фруктозодифосфатазы. [c.163]

Пара реакций, таких, как фосфорилирование фруктозо-6-фосфата во фруктозо-1,6-бисфосфат и обратный гидролиз последнего до фруктозо-6-фосфата, называется субстратным циклом. Как уже упоминалось, в большинстве клеток эти реакции никогда не осуществляются с максимально возможной скоростью одновременно в силу реципрокного аллостернческого контроля. Однако исследования с применением изотопной метки показали, что в ходе глюконеогенеза имеет место фосфорилирование фруктозо-6-фосфата во фруктозо-1,6-бис-фосфат. Ограниченное функционирование таких циклов обнаружено и в случае других пар противоположно направленных необратимых реакций. Наличие таких циклов объясняли несовершенством метаболической регуляции, и субстратные циклы называли иногда бесполезными, или хо-лостыми, циклами Однако в настоящее время представляется более вероятным, что субстратные циклы имеют определенное биологическое значение. Одна из возможностей состоит в том, что эти циклы амплифицируют биологические сигналы. Предположим, что скорость превращения А в В равняется 100, а В в А-90, так что начальный чистый выход реакции составляет 10. Примем, что аллостерический эффектор повышает скорость реакции А -> В на 20% (до 120) и реципрокно снижает скорость реакции В -> А на 20% (до 72). Новый чистый выход равен 48. Таким образом, изменение на 20% скоростей противоположно направленных реакций приводит к повышению чистого выхода [c.110]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология