Оксипролин, определение

Для построения пространственной структуры белка пептидные цепи должны принять определенную, свойственную данному белку конфигурацию, которая закрепляется водородными связями, возникающими между пептидными группировками отдельных участков молекулярной цепи. По мере образования водородных связей пептидные цепи закручиваются в спирали, стремясь к образованию максимального числа водородных связей и соответственно к энергетически наиболее выгодной конфигурации. Но образованию правильной спирали часто мешают силы отталкивания или притяжения, возникающие между группами аминокислот, или стерические препятствия, например за счет пирроли-диновых колец пролина и оксипролина, которые заставляют пептидную цепь резко изгибаться и препятствуют образованию спирали на некоторых ее участках. Далее отдельные участки макромолекулы белка ориен- тируются в пространстве, принимая в некоторых случаях достаточно [c.373]

Г. Определение пролина и оксипролина. 100 мг изатина растворяют в 50 мл бутанола и прибавляют 5 мл уксусной кислоты. Проявляемую хроматограмму опрыскивают этим раствором и [c.193]

При окислении альфа-аминокислот нингидрином при pH 1 образуется аммиак, двуокись углерода, восстановленный нингидрин и другие продукты. При pH выше 3 аммиак, восстановленный нингидрин и невосстановленный нингидрин образуют окрашенное в синий цвет соединение. Оно гидролизуется при pH 11 с выделением азота в виде аммиака, который затем, после аэрации, определяют реактивом Несслера. Метод применяют для определения альфа-аминного азота, хотя он дает некоторую ошибку вследствие того, что оксипролин, пролин и триптофан взаимодействуют с нингидрином при pH 1 не количественно. Из 23 исследованных альфа-аминосоединений для 14 точность результатов количественных определений находилась в пределах 5%, а для 16 соединений — в пределах +10%. [c.115]

Смешивают 1 мл раствора, содержащего 0,02—0,4 мг а-аминокислоты [127], с 0,5 мл буферного раствора (рН = 5,3— 5,4) и 0,5 мл 3%-ного раствора нингидрина в метилцеллозольве. Нагревают 15 мин при 100 С, после чего добавляют 5 мл 50%-ного изопропилового спирта и взбалтывают. После охлаждения до комнатной температуры измеряют оптическую плотность красного раствора при 570 нм. Таким способом определяют аланин, аспарагиновую кислоту, аспарагин, валин, глицин, глутамин, глутаминовую кислоту, гистидин, изолейцин, лизин, метионин, орнитин, серии, таурин, тирозин, треонин, фенилаланин, этаноламин, а также аммиак. При определении пролина и оксипролина получают раствор, оптическую плотность которого измеряют при 440 нм. [c.169]

ВЫДЕЛЕНИЕ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОЛИНА И ОКСИПРОЛИНА [c.338]

Выделение и определение пролина и оксипролина 341 [c.341]

Это определение не охватывает аминокислоты — пролин и оксипролин, которые содержат не амино-, а иминогруппу, к тому же еще замкнутую в цикл (см. табл. 20, стр. 236). Вместе с тем оба упомянутых соединения относят неизменно к аминокислотам и поступают таким образом потому, что в организме животных и человека пролин и оксипролин, с одной стороны, легко превращаются в истинные аминокислоты, обладающие свободной аминогруппой, а с другой, — образуются в организме из аминокислот, полностью соответствующих приведенному выше определению. [c.232]

Оптическая плотность возникающей окраски фотометрируется при 570 нм (желтая окраска, возникающая при определении пролина и оксипролина фотомет- [c.189]

ЖЕЛАТИНА — продукт переработки коллагена, распространенного в природе белкового вещества, образующего главную составную часть соединительной ткани позвоночных, особенно в коже, оссеине костей и в сухожилиях. Но аминокислотному и элементарному составу Ж. близка к коллагену. Главнейшие к-ты глицин (ок. 27%), пролин (ок. 16%), оксипролин (ок. 14%), глутаминовая к-та (ок. 12%), аргинин (ок. 9%), лизин (ок. 5%). Элементарный состав Ж. 48,7—51,5% С 6,5—7,2% Н 17,5—18,8% N 24,2—26,8% О 0,3—0,7% 8. В Ж. ок. 15% НгО и ок. 1% золы. Лучшие сорта Ж. слабо окрашены в желтый цвет <1 1,3—1,4 Ид 1,5 средний мол. в. ок. 60000 благодаря наличию в Ж. кислых (карбоксильных) и основных (амино) групп она имеет амфотерный характер. Ж., полученная по щелочному способу, имеет изоэлектрич. точку при pH 4,8—5,1, а полученная по кислотному способу — при pH ок. 9. Ж. набухает в воде и при нагревании растворяется при охлаждении р-р Ж. образует студень (гель), к-рый при нагревании опять переходит в р-р. Темп-ра застудневания и прочность студня зависят от концентрации р-ра и качества Ж. Основными критериями качества Ж. являются вязкость р-ра, прочность студня, темп-ра его плавления и застудневания, измеренные при определенных условиях. В конц. р-рах нек-рых веществ (нанр., роданистого калия, бензолсульфоната натрия и др.) Ж. растворяется на холоду. Эти же вещества препятствуют образованию студня. Под действием дубителей Ж. теряет снособность набухать в воде и растворяться. [c.8]

Пятна ФТГ-лейцина и ФТГ-изолейцина перекрываются, и эти производные определяют вместе. ФТГ-пролин в системе I движется вместе с ФТГ-фенилаланином, а в системе П — вместе с ФТГ-валином. Так как ФТГ-валин и ФТГ-фенилаланин полностью разделяются в системах I и П, то можно рассчитать количество ФТГ-пролина. ФТГ-лизин определяется подобным же путем по результатам хроматографирования в системе П. Появление пятна фенил-тиомочевины указывает на присутствие ионов аммония в качестве примеси или продукта гидролиза амидных групп. Наличие ФТГ-оксипролина мешает определению аминокислот. [c.166]

Применение Н.2804 в органическом анализе. Кроме мокрого озоления органических веществ (см. разд. 5.6) серная кислота применяется для проведения гидролиза эфиров н углеводов. Ароматические сульфокислоты разлагают нагреванием прп 140— 190 "С с 60-70 %-ной серной кислотой [4.251]. Иногда гидролиз протеинов проводят 3 М серной кислотой, а не хлороводородной кислотой [4.252]. При определении оксипролина к 5 г пробы добавляют 1 г хлорида олова (И) и гидролизуют 3 М серной кислотой при ПО °С 16 ч 14.2531. [c.85]

НОСТИ цветных реакций. Эти попытки, однако, не имели достаточного основания, поскольку окраска, получаемая с белками, как правило, слабее окраски, получаемой с соответствующими белковыми гидролизатами. Это обусловлено, по всей вероятности, тем, что в белковой молекуле некоторые реактивные группы скрыты внутри глобулы и вследствие этого недоступны действию окрашивающего реагента (см. гл. VII). Поэтому для определения аминокислотного состава белка необходимо подвергнуть его полному гидролизу. Большинство аминокислот можно определить в кислотном гидролизате, однако некоторые аминокислоты обнаруживаются только после гидролиза белка гидроокисью бария (см. выше). Разделение смеси аминокислот представляет собой трудную задачу, так как аминокислоты являются амфолитами, растворимыми в воде и нерастворимыми в таких органических растворах, как спирт. Только иминокислоты пролин и оксипролин раство римы в этиловом спирте. Ввиду того что аминокислоты обладают сходными физико-химическими свойствами, их нельзя разделить фракционированием спиртом или нейтральными солями. Некоторые аминокислоты можно, однако, отделить путем осаждения их при соответствующих условиях. Например, растворимость цистина при нейтральной реакции и тирозина при слегка кислой реакции настолько мала, что при доведении реакции среды до соответствующего значения pH они почти полностью выпадают в осадок. Другие аминокислоты можно осадить специфическими реактивами. Однако ни один из этих методов не является полностью удовлетворительным в количественном отношении, так как все соответствующие осадки до известной степени растворимы. [c.31]

В работе [223] описано непосредственное определение аминокислот на тонких слоях целлюлозы сканированием при 523 нм после опрыскивания нингидрином. Относительное стандартное отклонение составляло 10%, предел чувствительности 0,05 мкг. После обнаружения реактивом Т-176 зон, полученных на слоях целлюлозы, авторы работ [224—226] измеряли изменение отражательной способности при 490 нм при обнаружении пролина или оксипролина пластинку обрабатывали реактивом Т-152, а измерение проводили при 620 нм. Чувствительность для большинства аминокислот составляла 0,5 нмоля. Мочу ана- [c.518]

Для определения пролина нингидрин малочувствителен, поэтому используют 0,5%-ный раствор изатина в изопропиловом спирте, содержащем 4% уксусной кислоты по объему. После прогревания обработанной этим реактивом хроматограммы в сушильном шкафу пролин проявляется в виде яркого синего пятна. Чувствительность реакции для пролина 0,1 мкг в 1 мкл. Пятна других аминокислот с изатином приобретают слабую розовую окраску. Оксипролин окрашивается в голубой цвет. [c.43]

С помощью биохимического метода определяется коллаген по содержанию оксипролина в гидролизате легкого и содержание липидов в легких. Наиболее принятой методикой определения оксипролина является методика Neumann и Logan (1950), модифицированная Хвапилом (1960). Содержание суммарных липидов в легких определяется в сухой легочной ткани по потере веса прп экстрагировании эфиром в аппарате Сокслета (Б. А. Кацнельсон, Л. Г. Бабушкина, Б. Т. Ве-личковский, 1964). [c.58]

Колонка 0,9X69 см. Ионит смола РА-28. Буферные растворы / — 0,2 М натрийцитратный буфер pH 3,05 II — 0,2 М натрийцитратный буфер, pH 4,25. Скорость подачи буферов и нингидринового реагента 34 мл/ч. Температура 56 С. Переключение буферных растворов через 230 мин. Детектирование определение поглощения при 570 и 440 нм. Порядок выхода и времена удерживания (мин) У — L-оксипролин, 110 2 —L-треонин, 137 3 —саркозин, 163 4 — К-метил-0,Ь-валин, 175 5 — L-пролин, 193 6 — Н-метил-В,Ь-алло-изолей-дин. 235 6а — К-метил-0,Ь-изолейцин, 279 7 — D-валин, 320 8 — D-алло-изолейцин, 337 [c.227]

При рассмотрении результатов анализа (см. табл. 15) видно, что белки отличаются от других природных макромолекулярных соединений, нанример от целлюлозы или крахмала, большим числом различных единиц, входяш их в состав макромолекул (20 аминокислот вместо только одного моносахарида —глюкозы). Кроме того, белки содержат различные аминокислоты в определенных соотношениях. Некоторые белки содержат большое количество определенных аминокислот так, например, коллаген богат гликоколем, пролином и оксипролином, кератин — цистеином и оксикислотами, глиадин пшеницы — глутаминовой кислотой, а салъмин — белок из спермы рыб — состоит почти исключительно из аргинина и не содержит кислотных групп. [c.424]

Существует несколько аминопептидаз, причем каждая специфична для определенной аминокислоты. Так, лейцилпептидаза гидролизует только остатки лейцина, валина и аланина, а пролиназа — только остатки пролина и оксипролина у аминного конца пептидной цепи пролидаза гидролизует остатки пролина, а протаминаза — остатки аргинина у карбоксильного конца пептидной цепи. Вероятно., существует большое число и дипептидаз, специфичных для различных аминокислот. [c.428]

В. с., макромолекулы к-рых содержат несколько типов мономерных звеньев, наз. сополимерами. В зависимости от характера распределения звеньев в макромолекулах различают регулярные и нерегулярные сополимеры. В регулярных сополимерах распределение различающихся мономерных звеньев характеризуется определенной периодичностью. Простейшими примерами могут служить чередующиеся сополимеры стирола с малеиновым ангидридом и нек-рых олефинов с ЗОг, построенные по принципу. ..АВАВАВ... (А и В — различные мономерные звенья), и др. Возможны и более сложные регулярные последовательности чередования звеньев, что, в чгастности, характерно д.ття различных аминокислотных остатков в нек-рых белках, напр, глицин — пролин — оксипролин в коллагене, В нерегулярных сополимерах распределение звеньев случайное. Это характерно для многих синтетич. сополимеров. В нуклеиновых к-тах и в большинстве белков нерегулярные последовательности звеньев задаются соответствующим кодом и определяют биохимич. и биологич. специфичность соответствующих соединений. Сополимеры, в к-рых звенья каждого типа образуют достаточно длинные непрерывные последовательности, сменяющие друг друга в пределах макромолекулы, наз. блоксополимерами (см. Блоксополи.меры). Последние наз. регулярными, если длины блоков и их чередование подчиняются определенной периодичности. При уменьшении длины блоков различие между блок-сополимерами и статистич. сополимерами постепенно утрачивается. [c.272]

По нескольким причинам эти производные представляют особый интерес. Наличие ДНФ-группы придает специфичность, а также позволяет использовать электронозахватные детекторы с чувствительностью до 3-10 моль/с [79]. Хотя ДНФ-производ-ные использовали для определения М-концевых аминокислот и последовательности пептидов, их рассмотрение будет ограничено установлением последовательности в тех пептидах, которые с трудом поддаются очистке или доступны в малых количествах. В общем же случае они оказываются непригодными, поскольку аминокислоты с дополнительными функциональными группами нельзя разделить без дальнейшей обработки. Оксигруппы треонина, серина и оксипролина обрабатывали триметилсилилирую-щими реагентами [67], но триптофан и тирозин, по-видимому, не удалось удовлетворительно хроматографировать (см. разд. Обсуждение в работе [96]). [c.90]

Поскольку поглощение при этой длине волны практически линейно зависит от числа исходных аминогрупп, на основе нингидриновой реакции удалось разработать удобный колориметрический метод количественного определения аминов. Если нагревание с нингидрином проводить при pH 1—5, то количество свободной аминокислоты можно определить по объему выделившейся двуокиси углерода (полипептиды и первичные амины также дают лиловое окрашивание с нингидрином, однако в этом случае СО2 не образуется). Таким образом, нингидриновая реакция позволяет определять свободные аминокислоты даже в присутствии полипептидов. В случае имино-кислот (пролина и оксипролина) образуется продукт ярко-желтого цвета с максимумом поглощения около 440 ммк. Это позволяет использовать нин-гидриновую реакцию для определения иминокислот в белковых гидролизатах, содержащих большой избыток аминокислот. [c.48]

Однако в большом числе экспериментов показано, что в пределах одного опыта и даже большой серии опытов, проведенных в одном строго определенном режиме работы, отношения С для разных аминокислот имеют вполне определенную величину. Если в качестве стандартной аминокислоты выбрать лейцин и его цветовой показатель при 570 ммк принять за 100, то по отношению к нему остальные аминокислоты имеют следующие значения цветового показателя оксипролин — 8 (при 440 ммк), аспарагиновая кислота — 94, треонин — 94, серин — 95, глутаминовая кислота — 99, пролин — 22,5 (нри 440 ммк), глицин — 95, аланин — 97, полуцистин — 55, валин — 57, метионин — 102, изолейцин — 100, тирозин — 100, фенилаланин — 100, триптофан — 94, гистидин — 102, лизин — 110, аммиак — около 97 и аргинин — 101. Пользуясь этими соотношениями, можно калибровать прибор, используя лишь одну аминокислоту, например лейцин, с известной степенью чистоты. Обращает на себя внимание очень низкий цветовой показатель для оксипролина. В связи с этим предлагается определять оксипролин, а также пролин с помощью нингидриновой реакции в кислой среде [20]. [c.140]

ЭВМ сообщает номера пиков, названия аминокислот, время, прошедшее с момента начала анализа до момента выхода пика соответствующей кислоты в минутах и секундах, тип разрешения пика, площадь пика, количество соединения в наномолях, калибровочный коэффициент, используемый для расчетов, и уровень нулевой линии для того пика, для которого проводились расчеты. Можно также рассчитать молярное соотношение аминокислот в образце. С помощью этого прибора возможно количественное определение аминокислот при содержании их менее 1 нмоля отношение сигнала к шуму выше, чем 30 1. ЭВМ также контролирует динамическую область анализатора. Полную область шкалы поглощения можно менять либо вручную, либо по команде ЭВМ в интервалах 0,1—0,2—0,5—1,0 и 2,0. Кроме того, при установленной шкале чувствительности область поглощения можно автоматически увеличить или уменьшить в соотношении 1 10 для определенного компонента. Изменение области поглощения проводится, в частности, в тех случаях, когда все компоненты (аминокислоты), исключая пролин и оксипролин, определяют в области поглощения 2,0, и только для этих двух компонентов ее необходимо расширить до 0,2 ед. погл. [c.77]

Среднее содержание а-аминоазота в человеческой плазме — 4,07 мг% с колебаниями от 3,4 до 5,5 мг%- Цифры ниже, чем при определении разложением аминокислот нитритом, так как в последнем случае определяется и аминовый азот из амидов кислот (например, глютамина) и, отчасти, из пептидов и пуринов (но не определяется аминоазот пролина и оксипролина, определимый нингидринным способом). Эритроциты по нингид-риновому способу содержат его приблизительно вдвое больше, чем плазма. [c.149]

Оба метода определения числа К-копцов и исследования концевых аминокислот оказываются вполне удовлетворительными. Что касается измерения,,числа С-концов, то тут дело обстоит хуже. Один из практичных методов исследования С-конца — отщепление концевого звена с помощью чистого кристаллического фермента — панкреатической карбоксипептидазы. Этот фермент способен отщеплять постепенно по одному звену с С-конца поли-пептидной цепи. При этом некоторые аминокислоты им не атакуются (лизин, аргинин, пролин, оксипролин) поэтому этот метод не универсален, по все же чаще всего он применим. Отделив от конца цепи одно звено (путем кратковременного действия фермента), можно его выделить и идентифицировать с помощью бумажной или ионообменной хроматографии. [c.23]

Блоу [34] недавно предложил классифицировать полипептиды на три группы. Группа I, в которую входят полипептиды со стандартными оптическими свойствами, характеризуется тем, что к Р-углеродному атому остатка аминокислоты присоединен оптически неактивный радикал насыщенного углеводорода. Все остальные полипептиды делятся на две группы. В группу II входят полипептиды, у которых заместителем у Р-углеродного атома является любая другая группа, кроме — СНг—, например тирозин и аспарагиновая кислота. Пролин и оксипролин принадлежат к группе III, которую можно рассматривать как подгруппу группы II. Полипептиды, принадлежащие к последним двум группам, имеют необычные оптические свойства. Это рабочее правило в дальнейшем нашло поддержку в исследованиях Шеллмана, который подробно изучал влияние р-заместителей на оптическое вращение отдельных аминокислот [60]. Карлсон и др. [53] показали также, что спираль полипептидов, принадлежащих к группе I, более устойчива, чем спираль полипептидов группы II. В сополимере, таком, как, например, сополимер Ь-глутамата и Г-аспартата, именно те аминокислотные остатки оказывают доминирующее влияние на направление закручивания спирали, которые имеют стандартные оптические свойства. Этот факт является решающим для определения спираль-ности белков методом ДОВ (раздел Г-4). Исключительное поведение полипептидов групп II и III фактически подтверждает то, что величина Ьо, равная приблизительно — 630 (Яо = 212 мц), является непосредственно мерой стандартной правой спирали. [c.107]

Все а-аминокислоты и образованные из них пептиды в большинстве случаев реагируют при комнатной температуре с азотистой кислотой количественно в течение 5 мин Вторая аминогруппа лизина (е-поло-жение) реагирует в течение 30 мин. Азот, входящий в состав пирро-лидинового, индолового и имидазолового колец, не реагирует, поэтому в результате анализа определяется только половина всего количества азота триптофана, треть количества азота гистидина и четверть количества азота аргинина. Пролин и оксипролин совсем не отщепляют азота. Гуанидиновая группировка H2N— ( = NH)—НН—, содержащаяся в гуанидине, креатине и аргинине, не реагирует с азотистой кислотой. При определении метиламина и аммиака приходится встряхивать в течеиие %—2 ч реакция с мочевиной заканчивается только через 8 ч амино- [c.711]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология