Глобулины высаливание

Высаливание белков концентрированными растворами солей является одним из основных методов фракционирования белковых смесей на альбумины и глобулины. Понижения растворимости белков можно достичь также добавлением спирта и действием низкой температуры. На сочетании действия спирта, солей и охлаждения основаны способы детального фракционирования белковых смесей по Кону например, из сыворотки крови этим путем выделено свыше 12 белков. [c.369]

Одним из широко применяемых методов фракционирования белков является высаливание нейтральными солями. Впервые этим способом были отделены глобулины от альбуминов. Глобулины осаждаются при 50%-ном насыщении сернокислым аммонием, а альбумины — при более высокой концентрации. Сульфат натрия, обладая меньшей растворимостью, чем сернокислый аммоний, осаждает только глобулины. [c.59]

Высаливание. Классический метод разделения альбуминов и глобулинов сыворотки крови основан на осаждении последних, 2 М сульфатом аммония (50%-ное насыщение). Альбумины осаждаются лишь 4 М сульфатом аммония (100%-ное насыщение). Вместо сульфата аммония могут быть использованы и другие нейтральные соли — сульфат натрия, сульфат магния, смеси одно- и двухзамещенных фосфатов и др. Однако наибольшее распространение в качестве солевого осадителя - белков получил именно сульфат аммония. Это обусловлено главным образом тем, что высокая растворимость в воде сочетается у него с практической независимостью растворимости от температуры. Так, концентрация насыщенного раствора сульфата аммония при переходе от 25 к 0° снижается лишь с 4,1 до 3,9 М. Напротив, такие осадители, как, например, сульфат натрия, имеют ограниченную область применения из-за низкой растворимости при температуре, близкой к 0°. Сульфат аммония весьма удобен также тем, что не оказывает денатурирующего воздействия на самые лабильные из известных белков. [c.17]

Ход работы. Яичный белок смешать с пятикратным объемом воды и выпавший яичный глобулин отфильтровать. В полученном фильтрате определить наличие альбумина осаждением путем нагревания и применением алкалоидных реактивов, а затем для подтверждения альбуминового характера обнаруженного белка- определить границы высаливания. Для этого в девять пробирок налить (в каждую ) по 1 мл раствора белка. После этого долить различное количество воды так, как это указано в приведенной форме, а затем в первые восемь пробирок добавить возрастающий объем насыщенного раствора сернокислого аммония, а в девятую твердой соли (МН4)2304 до полного насыщения. [c.178]

Возможность отделения глобулинов от альбуминов путем высаливания сернокислым натрием или сернокислым аммонием имеет и большое практическое значение. Этот метод используется, например, при производстве так называемых очищенных и концентрированных лечебных сывороток. [c.52]

Одним из распространенных способов разделения белков на фракции является высаливание (стр. 14). Для этого применяют большей частью сернокислый аммоний в различных концентрациях. После прибавления к раствору белка (например, сыворотки крови) сернокислого аммония до полунасыщения вьшадает фракция белков, которая носит название глобулинов. Если отфильтровать глобулины и к фильтрату продолжать прибавлять сернокислый аммоний до полного насыщения, вьшадает осадок, получивший название фракции альбуминов. Изучение альбуминов и глобулинов обнаружило разницу в их физико-химических свойствах. Оказалось, что их растворимость в воде, также как в растворах солей неодинакова альбумины растворяются в дистиллированной воде, тогда как глобулины обычно растворяются в воде только в присутствии небольшого количества солей. На основании этого отделение глобулинов от альбуминов может быть произведено и путем диализа белкового раствора. В этом случае электролиты, удерживающие глобулины в растворе, проходят через полупроницаемую мембрану. По мере обеднения раствора солями глобулины выпадают в осадок, а альбумины остаются в растворе. Точно так же при большом разбавлении растворов белка (например, сыворотки крови) дистиллированной водой сыворотка мутнеет и в осадок выпадают глобулины вследствие понижения концентрации электролитов ниже той границы, при которой глобулины могут оставаться в растворенном состоянии. В табл. 5 приведены данные о растворимости альбуминов и глобулинов. [c.50]

В этом разделе будут в широком аспекте рассмотрены два опубликованных обзора [119, 75]. Совокупность, которую принято называть растворимыми белками, оказывается разнородной, даже если альбумины и глобулины рассматривать по отдельности. Их можно фракционировать, а некоторые компоненты — очищать методами, традиционно применяемыми для белков, среди которых наиболее популярными являются высаливание сульфатом аммония, ионообменная хроматография и препаративный электрофорез. [c.181]

Фракционирование белков высаливанием не свободно от недостатков. Оно не дает достаточно четкого разде тения индивидуальных компонентов смеси. Концентрации солей, осаждающие ту или иную фракцию белков нормальной сыворотки, могут отличаться от концентраций, необходимых для фракционирования сывороток, содержащих патологические белки и т. д. Несмотря на это, до сих пор высаливание широко используется в клинических лабораториях для разделения глобулинов и альбумина, так как этот прием является относительно простым и быстрым способом определения альбумин-глобулинового коэффициента (А/Г-коэффициент). [c.8]

Высаливание различных белков происходит, если концентрация электролита достигает определенной величины (порог коагуляции). Это дает возможность отделять одни белки от других. Например, если к раствору куриного белка прибавлять сернокислый аммоний с таким расчетом, чтобы степень его насыщения достигла 50% (то есть чтобы концентрация сернокислого аммония равнялась половине концентрации его насыщенного раствора), из раствора выпадает белок, называемый глобулином (в данном случае яичным глобулином, так как глобулины — это целая группа белковых веществ), а в растворе остается другой белок, который начинает выпадать, когда степень насыщения сернокислого аммония достигнет 70%—это яичный альбумин. [c.325]

Из 9—10% сухого остатка плазмы крови на долю белков приходится 6,5—8,5%. Используя метод высаливания нейтральными солями, белки плазмы крови можно разделить на три группы альбумины, глобулины и фибриноген. Нормальное содержание альбуминов в плазме крови составляет 40—50 г/л, глобулинов —20—30 г/л, фибриногена—2,4 г/л. Плазма крови, лишенная фибриногена, называется сывороткой. [c.568]

Классическое определение глобулинов сыворотки связано с высаливанием ее сульфатом аммония, поскольку глобулинами называют белки, выпадающие в осадок при полунасыщении сыворотки этой солью. [c.8]

Высаливание. При добавлении растворов солей щелочных и щелочноземельных металлов происходит осаждение белков из раствора. Обычно белок не теряет способности растворяться вновь в воде после удаления солей методами диализа или гельхроматографии. Высаливанием белков обычно пользуются в клинической практике при анализе белков сыворотки крови и других биологических жидкостей, а также в препаративной энзимологии для предварительного осаждения и удаления балластных белков или выделения исследуемого фермента. Различные белки высаливаются из растворов при разных концентрациях нейтральных растворов сульфата аммония. Поэтому метод нашел широкое применение в клинике для разделения глобулинов (выпадают в осадок при 50% насыщении) и альбуминов (выпадают при 100% насыщении). [c.26]

Для выделения у-глобулинов из сыворотки кролика обычно используют метод трехкратного высаливания сульфатом аммония при конечном насыщении 33%. Соли затем удаляют диализом. [c.308]

Также различно относятся они к высаливанию. Глобулин можно высолить раствором сернокислого магния, который не высаливает молочного альбумина. [c.69]

Альбумин можно легко выделить в кристаллическом виде из плазмы крови лошади методом высаливания, сходным с методом, описанным для яичного альбумина. Большинство глобулинов осаждается при полунасыщении раствора сернокислым аммонием (т. е. (Приблизительно при 2 М его концентрации см. ниже) [30] увеличение концентрации соли вызывает осаждение кристаллического альбумина (ом. табл. 2). Однако осажденный альбумин не является гомогенным [30, 108, 237, 245] и разделяется на несколько четко различимых фракций. Одна из них не содержит углевода и, если судить по растворимости, ведет себя, как гомогенное вещество эту фракцию можно выделить при рН 4 в виде нерастворимого в воде сульфата альбумина [106], а также с по- [c.55]

Метод высаливания, как известно, позволяет разделить сыворотку на три фракции альбумин, эуглобулин и псевдоглобулин. С введением электрофореза стало возможным выделять для повседневного клинического анализа по меньшей мере пять белковых фракций сыворотки альбумин, а-1 -,а-2-,р- и 7-глобулины. [c.9]

При высаливании белка нейтральными солями щелочных или щелочноземельных металлов, а также сернокислым аммонием необходимо применять высокие концентрации этих солей. Различные белки высали в а ю т ся при неодинаковых концентрациях солей. Этим обстоятельством пользуются для разделения белков на различные фракции. Так, для высаливания так называемых глобулинов [c.17]

Хотя различная растворимость белков в тех или иных растворителях неоднократно использовалась для их классификации, тем не менее ни одна из предложенных до сих пор схем классификации не может считаться достаточно удовлетворительной. Впервые фракционирование растворимых белков было произведено путем высаливания сернокислым аммонием [1]. Фракция, осаждаемая сернокислым аммонием при полунасыщении раствора, была названа глобулином фракция, осаждаемая сернокислым аммонием при более высоком проценте насыщения, получила название альбумина. [c.171]

Техника высаливания оказалась исключительно полезной для очистки белков, поскольку индивидуальные белки по характеру их высаливания, как это видно на рис. 4.14, сильно отличаются друг от друга. Одним из классических критериев, позволяющих отличить альбумины от глобулинов, является их различная растворимость в растворах сульфата аммония. В связи с тем, что сульфат аммония представляет собой соль слабого основания [c.259]

При высаливании белка нейтральными солями щелочных или щелочноземельных металлов, а также сернокислым аммонием необходимо применять высокие концентрации этих солей. Р а з л и ч н ы е б е л к и высаливаются при неодинаковых концентрациях соле й. Эгим обстоятельством пользуются для разделения белков на различные фракции. Так, для высаливания так называемых глобул и н о в (например, из сыворотки крови) достаточно прибавлять сернокислый аммоний до иолунасыщеиия. Отделив глобулины фильтрованием, можно оставшуюся в фильтрате так называемую альбуминовую фрак ц и ю осадить добавлением сернокислого аммония до полного насыщения. Методом фракционирования белков путем высаливания широко пользуются для получения различных белковых препаратов. [c.17]

Белки чрезвычайно разнообразны. При переходе от одного белка к другому не только и зменяется качественный и количественный аминокислотный состав, но наблюдаются также большие различия в ф изико-химических свойствах. Многие белки, подобно альбуминам, образуют в воде коллоидные растворы другие, например глобулины, не растворяются в воде, но растворимы в растворах нейтральных солей (поваренная соль и др.) кератин, эластин, фиброин и аналогичные им белки характеризуются полной нерастворимостью. Между белками, образующими коллоидные растворы, в свою очередь, существуют различия в отношении способности к высаливанию и осаждению. Эти различия в растворимости используются для разделения белков наряду с описанными [c.395]

Большое значение для растворимости белка имеет концентрация электролита. Белки с ярко выраженным асимметрическим распределением заряда, как, например, сывороточные глобулины, требуют для растворения или стабилизации раствора определенной концентрации соли. Этот солевой эффект основан на снижении ассоциации или агрегапии белковых молекул, вызванном присоединением низко молекулярных противоионов. Результатом являются повышенная гидратация и улучшение растворимости белка, его реассоциация при этом затруднена. Высаливание, ведущее к осаждению белка, основано на понижении гидратации белка за счет гидратации ионами электролита. Так как для различных белков необходима различная высаживающая концентрация электролита, высаливание относится к важным и удобным методам грубого фракционирования белков. [c.358]

Реакция высаливания (осаждения белков с помощью высоких концентраций нейтральных солей) обусловлена дегидратацией макромолекул белка с одновременной нейтрализацией электрического заряда. Для высаливания различных белков требуется неодинаковая концентрация одних и тех же солей. Глобулины, имеющие большую молекулярную массу, легче высаливаются, чем альбумины. Глобули- [c.27]

Глобулины. Сывороточные глобулины при высаливании нейтральными солями можно разделить на 2 фракции —эуглобулины и псевдоглобулины. Фракция эуглобулинов в основном состоит из у-глобулинов, а фракция псевдоглобулинов включает а-, 3- и углобулины, которые при электрофорезе, особенно в крахмальном или полиакриламидном геле, способны разделяться на ряд подфракций. а- и 3-Глобулиновые фракции содержат липопротеины, а также белки, связанные с металлами. Большая часть антител, содержащихся в сыворотке, находится во фракции у-глобулинов. При снижении уровня белков этой фракции резко понижаются защитные силы организма. [c.571]

В 1878 г. Хаммарстену удалось с помощью высаливания насыщенным сульфатом магния отделить глобулины от альбуминов сыворотки. Это открытие резко изменило существовавшее тогда представление о сывороточных белках. Применение сульфата магния положило начало целой серии методов фракционирования белков путем высаливания. В течение нескольких десятилетий процедура высаливания была единственно доступной как в клинических, так и в научных исследованиях белков крови. На этом этапе сывороточные белки крови были охарактеризованы по их растворимости в воде и в растворах солей разной концентрации. На основании этих данных стали различать нерастворимую в воде фракцию— эуглобулин и расгворшые — псевдоглобулин и альбумин. [c.8]

Высаливание белков концентрированными растворами ЫагЗО или (NH4)2S04 применяется при выделении ферментов из экстрактов тканей и является одним из методов фракционирования белковых смесей на альбумины и глобулины. Растворимость белков уменьшается также при добавлении дегидратирующих веществ (спирта, ацетона). [c.114]

Извлечение глобулинов. Остаток муки после выделения альбуминов обрабатывают в ступке 3 мл 10% раствора хлористого натрия и после отстаивания фильтруют. С фильтратом, содержащим глобулин, проделывают биурето-вую реакцию и реакцию высаливания (см. стр. 9 и 37). [c.286]

Кроме этих белков, в молоке были найдены и некоторые другие белки. К ним следует причислить опализин, выделенный из сыворотки женского молока высаливанием хлористым натрием. Имеются также указания на присутствие в молоке белка, похожего на проламин. Однако эти белки (кроме казеиногена, альбумина и глобулина) находятся в молоке в весьма незначительных количествах и в настоящее время мало изучены. [c.319]

Этим обстоятельством воспользовались для электрофоретического анализа белкового состава биологических жидкостей. Давно было известно, что сыворотка крови неоднородна и состоит, по крайней мере, из двух белков — альбумина и глобулина, причем последний также не является однородным компонентом крови. Наличие различных фракций сыворотки устанавливалось путем высаливания ртдельных белков различными концентрациями соответствующих солей. Анализ выделенных фракций показал, что альбумин и глобулин отличаются своими изоэлектрическими пунктами. Поэтому при электрофоретическом анализе сыворотки, имеющей pH выше 7, эти белки, заряжаясь отрицательно, должны передвигаться к аноду с различной скоростью в силу различной величины своих зарядов. [c.278]

В сыворотке новорожденного теленка был найден, однако, нйзкомолекулярный специфический глобулин, так называемый фетуин, который составляет около 90% всех глобулинов плазмы теленка [21]. Молекулярный вес этого белка — 50 ООО высаливание его происходит при насыщении раствора сернокислым аммонием на 35—45%. В плазме Ре1готугоп тагШиз Ь. был также найден специфический глобулин с молекулярным весом 34 000 [48]. [c.180]

Белки типа альбумина и глобулина можно выделить не только из жидкостей тела, но такл<е и из различных органов. В этих случаях желательно предварительно удалить кровь из органов путем перфузии их изотоническим раствором хлористого натрия. Обескровленный орган после размельчения и растирания подвергается экстракции растворами хлористого натрия или буферными растворами. Белки, полученные таким способом из мышцы, описаны в разделе Мышечные белки . Многие из белков, выделенные из органов, обладают ферментативной активностью они будут рассмотрены в гл. XII. Белковые гормоны, выделенные из эндокринных желез, рассматриваются в гл. XIV. Экстракты из органов содержат белки, относящиеся главным образом к глобулинам, т. е. к тем белкам, которые выпадают в осадок при нодкислении растворов, при высаливании или при диализе против дестиллированной воды. В подобных экстрактах редко можно обнаружить белки типа альбумина. Так, например, 51,5% всего количества белков хрусталика глаза составляет глобулин и только 0,5% —альбумин остальные 48% приходятся на долю нерастворимого белка — склеропротеина. Из фракции глобулинов хрусталика выделены два белка, названные а- и -кристал-линамн [161]. [c.195]

Высаливание белков концентрирохшнными растворами солей является одним из основных методов фраЕ ционирования белковых смесей на альбумины и глобулины. Понижения растворимости белков можно достичь также добавлением спирта и действием низкой температуры. На тонком сочетании действия спирта, солей и охлаждения до —5° основаны способы детального фракционирования белковых смесей но Кону например, из сыворотки крови этим путем выделено свыше 12 белков. Растворимость белков также сильно зависит от рИ и имеет минимум в изоточке (рис. ИЗ). При смеш,ении от изоточки вырастают заряд и гидратация белковых молекул, что повышает их растворимость. Поэтому ири высаливании белков всегда поддерживают pH близким к изоточке. 1000 Растворимость полимеров и условия их выделения из растворов при добавлении осадителя сильно зависят от их молекулярного веса. [c.259]

Общего правила, выражающего влияние температуры на растворимость белка, нет. Растворимость многих белков растет с повышением температуры. В случае одних белков растворимость увеличивается в разбавленном, а в случае других — в концентрированном растворе соли, а также в водно-спиртовых смесях. К числу белков, очищенных или выделенных в кристаллическом состоянии путем использования различия в растворимости, относятся глобулины семян [32], фосфорилаза мышц [23] и пепсин [14]. В то же время растворимость белка часто резко убывает с повышением температуры, что изображено на рис. 6. Альдолаза мышц [96] и карбокоигемоглобин человека [29] были выделены в кристаллическом состоянии из концентрированных растворов (NH4)2SO4 или фосфатов калия путем повышения температуры насыщенного раствора от 0 до 20°. Указанное явление, невидимому, чаще наблюдается в условиях, при которых происходит высаливание, однако оно не ограничивается этими случаями. Согласно опубликованным данным [9г], сульфат альбумина плазмы и сульфат инсулина обнаруживают отрицательный температурный коэффициент растворимости в воде. [c.49]

Глобулины, подобно большинству других белков, также можно осаждать из раствора методом высаливания. Эвглобулины плазмы имеют тенденцию осаждаться при минимальных концентрациях соли, -причем легче других осаждается фибриноген однако, мак и в случае большинства кривых высаливания, здесь имеет место. значительное перекрывание. интервалов осаждения. Такое осаждение может быть полезным в качестве предварительной стадии фракционирования или концентрирования растворов белков. [c.54]

Хотя различия растворимости белков в тех или иных растворителях неоднократно использовались для их классификации, тем не менее ни одна из предложенных до сих пор схем классификации не может считаться достаточно удовлетворительной. Впервые фракционирование растворимых белков было произведено путем высаливания сернокислым аммонием. Фракция, осаждаемая сернокислым аммонием при полунасыщении раствора, была названа глобулином фракция, осаждаемая сернокислым аммонием при более высоком проценте насыщения, получила название альбумина. Впоследствии было найдено, что фракция глобулина при диализе дает осадок, тогда как альбумин остается в растворе даже в отсутствие солей. В соответствии с этим глобулины определялись так же, как белки, растворимые в растворах нейтральных солей, но нерастворимые в чистой воде. В настоящее время мы, однако, знаем, что только некоторые из белков, входящих во фракцию глобулинов, так называемые эвглобулины нерастворимы в чистой воде, другие же белки этой фракции, так называемые псевдоглобулины, хорошо растворяются в чистой воде. Глобулиноподобные белки были выделены не только из животных тканей, но также и из семян злаков некоторые из этих белков, так называемые проламины, растворимы в водном спирте. Одни авторы выделяли проламины в отдельную группу белков, другие считали их подгруппой глобулинов . [c.257]

Высапивание белков. Осажденные солями щелочноземельных металлов белки не подвергаются глубоким изменениям и могут быть вновь растворены, если соли удалить методом диализа. Такой способ разделения белков называют высаливанием. Чаще всего для высаливания используют сернокислый аммоний (NH4)2S04- При полуна-сыщении (N114)2804 выпадают в осадок глобулины сыворотки крови, 100% насыщение приводит к осаждению альбуминов. Определение глобулин-альбуминового коэффициента, имеющего значение для Диагностики воспалительных процессов и поражений печени (абсолютное или относительное увеличение глобулинов), используют в клинико-биохимических лабораториях. [c.23]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология