Дауэкс в ионообменной хроматографи

Рааделение амино слот на ионообменниках основано на способности аминокислот образовывать соли с кислотами и щелочами. Подбирая соответствующие катиониты или аниониты, можно быстро и с успехом разделить гидролизат белка, пользуясь для этого 2,5—3,5 мг белка. Ионообменную хроматографию хорошо сочетать с элюционным или вытеснительным анализом. Мур и Штейн пользуются для этого катионитной смолой сульфополистирольного типа Дауэкс-50, через колонку которого пропускают аминокислоты последние вымывают затем соответствующими буферными растворами. Для разделения достаточно 3 мг аминокислот. [c.481]

Для предварительного разделения пептидов на фракции часто применяют так называемый четырех- или пятикамерный электрофорез. Он позволяет отделить основные, кислые н нейтральные пептиды друг от друга. Каждую из фракций можно подвергнуть затем разделению яри помощи ионообменной хроматографии, микропрепаративным электрофорезом на бумаге или противоточным распределением, ограничиваясь при этом несколькими миллиграммами вещества. В качестве примера представлена схема разделения химотрипсиногена, проведенная Шор-мом с сотрудниками (см. схему на стр. 517). Прекрасные результаты дает метод Хирса, Мура и Штейна— автоматическое разделение пептидов на смоле Дауэкс-50. Строение пептидов, полученных в результате разделения, устанавливают. описанными выше методами. [c.519]

Ионообменная хроматография на анионообменнике Дауэкс-1 (С1 ) [c.143]

Метод ионообменной хроматографии для,выделения рубидия и цезия из смеси щелочных металлов впервые был использован В. Коном и Г. Коном [363], применившими для этой цели катионит Дауэкс-50 . С тех пор ионообменному выделению рубидия и цезия из смесей с другими катионами посвящено значительное. количество работ, имеющих, однако, в большинстве случаев значение только в аналитической практике [362] и поэтому в настоящей монографии не рассматриваемых. [c.344]

Ионообменная хроматография. Для поглощения разделяемых катионов чаще всего применяются анионитные смолы дауэкс 1, амберлит и другие в хло-ридной, фосфатной или цитратной форме. Методы разделения основаны на способности катионов кобальта давать в сильно солянокислом растворе хлоридные анионные комплексы, поглощающиеся анионитом катионы никеля, марганца и некоторых других металлов в этих условиях не задерживаются анионитом и проходят в фильтрат. При промывании колонки более разбавленным раствором соляной кислоты, например 4 N раствором, происходит вымывание кобальта, в то время как медь, железо остаются адсорбированными смолой. Описаны и другие методы, когда разделяемые катионы поглощают катионитами, а затем вымывают кобальт растворами подходящих комплексообразующих веществ, например, раствором нитрозо-К-соли, комплексо-ном III и др., или смесью растворов соляной кислоты и органических растворителей. В табл. 18 дана сводка предложенных мето- [c.81]

Ионообменную хроматографию также применяли для анализа продуктов радиолиза в системе водный нитрат—этилен с использованием смолы дауэкс 50Ш-Х8. Подвижной фазой служили растворы сульфата аммония различной концентрации. Присутствие в смеси нитрометана, перекиси водорода и нитрита [c.297]

Другим общепринятым методом разделения оснований является ионообменная хроматография. Большинство оснований содержит по крайней мере один заместитель, способный к ионизации, в результате чего молекулы приобретают положительный или отрицательный заряд (табл. 37.5). Вследствие этого возможно использование как катионитов, так и анионитов. Хорошим примером разделения оснований является хроматография на катионите дауэкс 50 (№) в 2 н. соляной кислоте [33]. При этом основания элюируются в следующем порядке урацил, цитозин, гуанин, аденин. Аналогичным образом, но при элюировании в линейном градиенте соляной кислоты (1—4 М) выделяли метилированные основания (в основном метилированные производные гуанина) из полных гидролизатов РНК хлорной кислотой [63]. Также на катионите анализировали основания, отщепленные от полирибонуклеотидов в ходе ступенчатой деградации полинуклеотидной цепи периодатным окислением [53]. [c.44]

Методом ионообменной хроматографии проводили препаративное разделение суммарного гентамицина (34]. Для этой цели использовали сильноосновной анионит дауэкс 1-Х2, 100— 200 меш. Вначале смолу переводили в свободное основание, промывая 10 объемами 8%-ного едкого натра, не содержащего карбонат-ионов. Последующее промывание смолы и элюирование также проводили в дистиллированной воде, не содержащей карбонат-ионов. В типовом эксперименте растворяли 35 г [c.215]

Диметоат и продукты его метаболизма Градиент -гексан— хлороформ Водорастворимые метаболиты, выделенные ионообменной хроматографией на смоле дауэкс 1-Х8 39 [c.249]

Другим методом анализа фосфорорганических пестицидов является ионообменная хроматография. Было изучено разделение моно- и ди-эфиров фосфорной и тиофосфорной кислот на анионите дауэкс 1-Х8 [45]. В этой работе фосфорную, тиофосфорную и моно- и диалкил фосфор ную кислоты элюировали в градиенте [c.251]

Рис. 10. Разделение продуктов щелочного гидролиза т. РНК печени крысы [32] с помощью ионообменной хроматографии на анионите Дауэкс 1X8 (формиат), 400 меш, колонка — 45х 1,0 см, скорость элюции — 90 мл час, элюирующие растворы Н2О, I — 0,1 н. НСООН, II — 1,0 н. НСООН, III — 0,5 н. НС1.

Ионообменная хроматография. Получение чистых солей рубидия и цезия в промышленных масштабах принципиально возможно как с помощью классической хроматографии (т. е. чисто адсорбционных процессов), так и ионообменной хроматографии, в которой вместо адсорбентов используют органические и неорганические иониты. После исследований В. Кона и Г. Кона, которые для выделения рубидия и цезия из смеси щелочных металлов применили катионит дауэкс-50 (стирольная смола с активной группой —SO3H), было выполнено значительное число работ в этом плане и другими [c.143]

Существует еще много Других методов хроматографии — осадочная, газовая, газо-жидкостная и др., однако наибольшее значение при работе с веществами биохимического значения, антибиотиками, лекарственными препаратами и др. имеют ионообменная и распределительная хроматографии. Успехи ионообменной хроматографии в значительной мере обусловлены развитием синтеза ряда специальных ионообменных полимеров или смол (ионитов). Различают два основных вида ионитов 1) катиониты, способные к обмену катионов, представляющие собой сетку высокол олекулярных полиэлектролитов с многочисленными yльфoгpyппa п (рис. 44) карбоксильными группами и др. (амберлит Л7 -100, дауэкс-50, отечественные КВ-4, СБС и др.) и 2) аниониты, способные к обмену анионов (ОН , С1- и др ) и представляющие собой сетку высокомолекулярных катионов (амберлит Л/ А-400, дауэкс-2, вофатит-М, отечественные ЭДЭ-10, ПЭК и др.). Поглотительные емкости ионитов доходят до 3—10 мэкв на 1 г ионита. Имеются также окислительно-восстановительные иониты (получаемые псли-конденсацией гидрохинона, пирогаллола и пирокатехина с формальдегидом и фенолом), иониты с оптически-актив-ными группировками (для разделения оптических изоме- [c.129]

Получение й- и /-форм, а также /-Ы-карбамоил-С -аспара-гиновой кислоты из соответствующих изомеров аспарагиновой кислоты описано Либерманом [3]. Очистка осуществлялась при помощи ионообменной хроматографии (дауэкс-1 0,055 М раствор формиата натрия, подкисленный муравьиной кислотой до pH 3,2), так как кристаллизацию оптически активных форм изомеров провести не удалось. [c.338]

Разделение полученных веществ проведено на ионообменной смоле дауэкс-2. Водные фракции содержали никотинамиднуклеотид и симметричный Р , Р -диникотинамиднуклеозид-5 -пирофосфат, а НАД удерживался на смоле вместе с АМФ и Р , Р -диаденозин-5 -пирофосфатом. НАД вымывался со смолы 0,01 н. муравьиной кислотой, АМФ — 0,1 н. и Р , Р -диа-денозин-5 -пирофосфат — 1 н. муравьиной кислотой. В результате ионообменной хроматографии НАД выделяли в виде аморфного порошка с содержанием 70% кофермента. [c.315]

В последнее время появилась возможность определять аминокислотный состав белков с помощью автоматических аминокислотных анализаторов. Когда в 1948 г. Мур и Стейн [551 в дополнение к классическим методам органической химии, а также манометрическому и бактериологическому анализу ввели ионообменную хроматографию, наступил поворотный момент в развитии химии аминокислот. В основу работы созданных сотрудниками Рокфеллеровского института современных автоматических аминокислотных анализаторов была положена ионообменная хроматография. Принцип работы этих приборов заключается в следующем. Исследуемый белок гидролизуют, затем гидролизат подвергают хроматографии на смоле типа дауэкс 50 х8 в Na-форме. Элюирование производят с помощью непрерывной подачи буферного раствора. Выходящий из колонки элюат попадает в пластмассовую ячейку особой формы, где он смешивается с раствором нингидрина. Подачу нингидрина осуществляет специальный насос, работающий синхронно с насосом, подающим буферный раствор на колонку. Затем смесь элюата с нингидрином проходит через тефлоновый капилляр, который погружен в кипящую баню. В этих условиях в растворах происходит нингидриновое окрашивание, интенсивность которого измеряется в проточной кювете спектрофотометрически. Поглощение света регистрируется самописцем. Применение сферических смол [80] позволило сократить время исследования одного образца примерно в четыре раза, а использование особых ячеек сделало вполне допустимыми для анализа очень малые количества исследуемого вещества — порядка 0,01—0,05 мкмоля [38]. Введение одноколоночной процедуры значительно упрощает метод [9, 29, 43, 60]. С помощью этой методики в одной и той же пробе можно определить кислые, нейтральные и основные аминокислоты, что не только экономит исследуемый материал, но и повышает точность и сокращает время исследования. Работая на стандартном аминокислотном анализаторе и пользуясь некоторыми модификациями известных методов, можно полностью закончить анализ одного вещества в течение 3 ч [91. [c.32]

Для разделения конденсированных фосфатов применяют ионообменную хроматографию [947]. Орто- и пирофосфаты, содержащиеся в виде примесей в перекристаллизованном триполифосфате, разделяют путем градиентного элюирования 0,002 N HG1, к которой непрерывно добавляют 0,6 М R 1. Последовательно элюируются орто-, пирО и триполифосфат в элюатах объемом 100, 200 и 300—350 мл соответственно. Фосфат в элюатах определяют фотометрически в виде фосфорномолибденового комплекса. В качестве ионита применяют смолу дауэкс-1Х8. Для анализа более конденсированных фосфатов используют элюент с большей концентрацией KG1 (1 М или 2М раствор KG1). Выход фосфатов составляет >95%. [c.166]

Ионообменная хроматография в колонках со смолой дауэкс привела к открытию и разделению изомерных 2 - и 3 -мононуклеотидов [18]. Таким же образом были найдены и другие новые мононуклеотиды [18, 20, 27, 28]. Смилли [79] фракционировал мононуклеотиды из рибонуклеиновой кислоты на ионообменной бумаге. Он применил целлюлозную бумагу, пропитанную обменником амберлит . [c.446]

Но рано или поздно бред и ад должны были кончиться. В начале 1945 г. в лаборатории был освоен метод ионообменной хроматографии, и на катионите Дауэкс-50 новые элементы удалось разделить. В качестве элгоента — жидкости, последовательно смывающей комплексы сходных элементов, был применен альфа-оксиизобутират аммония, который обладал наибольшей избирательной способностью для данной системы. [c.410]

Применение ионообменной хроматографии оказалось успешным для таких важных сравнительно низкомолекулярных белков, как лизоцим [123], )ибонуклеаза [60], цитохром С [83, 96], химотрипсиноген [61], инсулин 14] и папаин [73]. В каждом случае разделение производили на смоле R -50 в карбоксильной форме. Разделение смеси белков яичного белка на три компонента было произведено с помощью фронтального анализа на смоле дауэкс-50 [115, 116]. Одновременный электрофоретический анализ исходной альбуминовой фракции подтвердил присутствие трех основных компонентов. Бордман и Партридж [11—13] распространили ионообменную методику на разделение таких больших молекул, как СО-гемоглобин быка и СО-гемоглобин плода овцы. Денатурация была доведена до минимума тем, что работу проводили вблизи 0°. [c.331]

Ионообменная хроматография имеет гораздо меньшее значение для разделения свободных спиртов по сравнению с другими методами хроматографии. Высаливаюш,ую хроматографию на колонке, наполненной дауэксом 1-Х8 (ЗО -), использовали для [c.27]

Ионообменная смола в боратной форме впервые была использована в работе [105]. В 1967 г. Кезлер [45] привел быстрый (4—6 ч) количественный метод ионообменной хроматографии углеводов на дауэксе 1-ХВ (ВО -форма, 200—400 меш), биораде АО 1-ХВ (ВО -форма) или техниконе 3/28/У1 В0 -- [c.89]

В связи с быстрым развитием хроматографии аминокислот на сульфокатионитах использование других ионитов носит ограниченный характер. На начальных этапах ионообменной хроматографии для разделения аминокислот пытались использовать амберлит IR -50 [23, 24]. К недостаткам этого катионита относятся трудности уравновешивания колонки, и необходимость соблюдения точных значений pH образца. Сильноосновный анионит дауэкс 2-Х10 находит применение для разделения аспарагиновой и глутаминовой кислот, а также их производных [25]. На анионитах сильнее других аминокислот удерживаются ци-стеиновая кислота, фосфосерин и подобные им вещества, которые, следовательно, можно отделять и получать в чистом виде. Как и в случае сульфокатионитов, степень разделения на анионитах зависит от диаметра частиц, их однородности, степени. сшитости и других факторов. [c.334]

Как уже отмечалось, иониты на основе целлюлозы и декстрана не обладают необходимыми механическими и ионообменными свойствами и вследствие этого их редко используют для хроматографического разделения аминокислот. Карбоксиметилцеллюлозу применяли для отделения лизина от его олигомеров и полимеров [26]. Известны попытки модификации DEAE-и QAE-сефадексов путем введения дополнительных поперечных связей и применения их для разделения цистеина и глутатиона [27]. Использование дауэкса 1-Х8 и сефадекса G-10 означает переход от ионообменной хроматографии к гелевой [28]. [c.334]

Природные нуклеозиды разделяют ионообменной хроматографией в условиях, описанных ранее для фракционирования оснований, например на смоле дауэкс 1 в формиатной форме при элюировании формиатом аммония с pH 10,2 [73, 74] или на дауэкс 50 в нуклеозидном анализаторе [52]. Наилучшие результаты получены [75] при разделении нуклеозидов за счет ионной эксклюзии (исключения ионов) на колонке с катионитом аминекс А-6 [75] (рис. 37.7). В случае элюирования боратом натрия или калия (с концентрацией Ю- —Ю- М) при pH 8— 10 соединения, имеющие цыс-диольную группировку, образуют боратный эфир и приобретают вследствие этого дополнительный отрицательный заряд, что создает благоприятные условия для ионообменного разделения. При разделении рибонуклеозидов на сильном анионите (в боратной форме) в градиенте концентрации боратного буферного раствора (pH 9,2) и раствора хлорида натрия (0,01—0,1 М) компоненты смеси элюируются в следующем порядке цитидин, аденозин, уридин, гуанозин [76]. [c.47]

При предварительном фракционировании природных препаратов удобно разделять индолы на кислые, основные, нейтральные и амфотерные фракции. Эффективным методом фракционирования индолов является ионообменная хроматография [116]. Смесь индолов последовательно пропускают через смолу дауэкс 50 [( 2Hs)3N+], удерживающую соединения с основными и амфотерными свойствами, затем через сефадекс А-25 (в ацетатной форме), который адсорбирует соединения, обладающие кислыми свойствами, и в элюате получают нейтральную фракцию. Основные и амфотерные индолы элюируют триэтиламином и далее разделяют на смоле дауэкс 1 (НСОО ). Индолы с кислотными свойствами элюируют уксусной кислотой или ацетатом аммония. [c.139]

Ионообменную хроматографию использовали при исследовании продуктов, выделенных из культуральной жидкости Pseudomonades. Продуцент выращивают на синтетической среде, содержащей биотин, к которой добавляют С-меченый по карбонилу биотин. Культуральную жидкость центрифугируют (16 000 g, 20 мин) для отделения клеток. К 9 л полученного раствора добавляют дауэкс 50W-X8 (100—200 меш) и после перемешивания фильтруют на бумаге. Смолу промывают 6 л 70%-ного этанола, элюат объединяют с предыдущим фильтратом и концентрируют до 600 мл. После отделения осадка раствор (рн 7,0) делят на три равные части и каждую порцию пропускают через колонку (1,5X70 см) со смолой дауэкс 1-Х2 (НСОО-, 100—200 меш). Соединения, содержащие радиоактивную метку, элюируют последовательно водой, а затем 0,01 и 0,1 М муравьиной кислотой. [c.194]

Циклосерин выделяли из культуральной жидкости адсорбцией на смоле дауэкс 50-Х2 (Ыа+) при pH 3 с последующим элюированием 1%-ным водным раствором пиридина [95]. Методом ионообменной хроматографии были выделены и очищены три новых антиметаболита ь-2-амино-4-метокси-гранс-3-бутено-вая кислота [96], иминометильное производное орнитина [97] и 2гамино-4-метил-5-гексеновая кислота [98]. [c.227]

Р азделение катионов методом ионообменной хроматографии обычно производят на катионите, но в настоящее время все больщее применение находят и аниониты. О. Са1муэльсо Н [6] отделил катионы щелочных и щелочноземельных металлов от катионов ванадия, железа, меди, никеля, кобальта, алюминия на анионите дауэкс в цитратной форме. [c.371]

В ряде случаев для разделения продуктов реакций глубокого расщепления весьма успешно применялся метод ионообменной хроматографии. Так, например, лантаниды, образующиеся при бомбардировке Та протонами с энергией 660 Мэе, выделялись на одном миллиграмме неизотопного носителя — лантана. После необходимой радиохимической очистки их разделение производилось хроматографически на колонке длиной 100 мм и диаметром 2 мм, заполненной катионитами КУ-2 или Дауэкс-50 (X = 12) [7]. [c.643]

Для очистки соединений рубидия и цезия и получения Их чистых солей вполне применима и ионообменная хроматография. После исследований В. Кона и Г. Кона [234], которые для выделения рубидия и цезия из смеси щелочных металлов применили катионит дауэкс-50 (стирольная смола с активной группой SO3H), было выполнено значительное количество работ в этом плане и другими исследователями. Но, как правило, сделанные ими рекомендации представляли интерес лишь для аналитической химии 235]. Однако в последние годы было показано [236—239], что ионообменная хроматография в форме непрерывного противоточного процесса может рассчитывать на применение в промышленном масштабе. В частности, в Советском Союзе В. И. Горшковым и соавторами [237— 239] разработана технологическая схема разделения рубидия и цезия с использованием отечественного фенолсульфоформальдегидного катионита КУ-1 и получением чистого s l. [c.86]

Использование этих приемов приводило к потере пептидов и требовало дополнительного времени. Поэтому большим шагом вперед явилось применение для ионообменной хроматографии пептидов летучих органических элюентов, в качестве которых применялись смеси пиридина и уксусной кислоты [40] для разделения на катионитах Дауэкс 50X2 и смеси пиридина, колидина и уксусной кислоты для анионообменной хроматографии на Дауэкс 1X2 [41]. [c.170]

Нин е мы остановимся на одной из последних работ Шредера [42] по ионообменной хроматографии пептидов, представляющей большой интерес как с хроматографической точки зрения, так и по методике детектирования элюатов. В указанной работе производилось разделение триптических гидролизатов а, р и у цепей человеческого гемоглобина путем последовательной хроматографии па катионите Дауэкс 50X2 и анионите Дауэкс 1X2. [c.170]

Рис. 4. Разделение пуриновых и пиримидиновых оснований с помощью ионообменной хроматографии на катионите Дауэкс 50 (Н+), около 300 меш, колонка — 8,1 X Х0.74 см , элюирующий раствор — 2 н. НС1, скорость элюции 0,6 мл1мин (0,5—1,0 мз каждого основания в 7,5 мл 2 н. НС1).

Рис. 8. Разделение рибонуклеотидов (26) с помощью ионообменной хроматографии на анионите Дауэкс 2 (С1 ), колонка — 2,5Х 0,94 см , элюирующий раствор — 0,003 М НС1, скорость элю-1ЩИ — 0,8 мл/мип.

Рис. 9. Разделение изомерных 2 -, 3 - и 5 -нуклеотидов [19] с помощью ионообменной хроматографии на анионите Дауэкс 1x2 (формиат), 400 меш, колонка — 5X0,82 см" , элюирующий раствор — муравьиная кислота и формиат аммония (в концентрациях, указанных на рисунке), 2, 3 и 5 — соответственно 2 -, 3 - и 5 -нуклеотиды.

Для разделения смеси галогенатов используют метод ионообменной хроматографии на колонках с Дауэкс-21К и Дауэкс-2 в NO -форме. В качестве элюентов применяют 0,5 М раствор NaNOg (до 370 мл) ж 2 М раствор NaNOg (свыше 370 мл). Ионы J0 , ВгО и СЮз вымывают соответственно 80—185, 195—390 и 450—650 мл элюента [958]. [c.137]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология