Полисахариды, удаление из белковых

Природа белков, которые синтезируются в клетке и представляют собой вещество ее ферментов, а также скорость, с которой могут синтезироваться различные ферменты, зависят от вида и количества различных нуклеиновых кислот. В свою очередь, сами нуклеиновые кислоты синтезируются в реакциях, которые полностью зависят от ферментов. Кроме того, для поддержания существования клетки необходимы стенки и пограничные слои, управляющие скоростью притока субстратов и удаления продуктов. Эти слои состоят, кроме всего прочего, из полисахаридов и близких к ним веществ, которые сами образуются в ферментативных реакциях из простых молекул. Таким образом, мы имеем очень сложную взаимозависимую систему макромолекул, в которой образование белков зависит от нуклеиновых кислот и косвенно от полисахаридов, образование нуклеиновых кислот и полисахаридов — от белков и т. д. [c.526]

Солодовую муку смешивают с водой и для лучшего расщепления ферментами высокомолекулярных соединений (полисахаридов и белков) нагревают. Самый простой способ — это затирание солода водой постоянной температуры солод замачивают в течение определенного времени при температуре около 65 °С. Такое затирание происходит в одной емкости, используемой также и для фильтрования (удаления нерастворимых фракций), — его часто применяют в Великобритании при производстве сусла [c.65]

Через 16—20 сут ферментации суспензию центрифугируют. В результате варки белки денатурируются, клеточные стенки рвутся при последующем ферментативном гидролизе белки, а также белково-полисахаридные комплексы клеточной оболочки разрушаются до аминокислот и полисахаридов. Осадок после центрифугирования промывают несколько раз холодной и горячей водой для удаления растворимых сахаров, промывают этиловым спиртом и высушивают в вакууме. Размельченный препарат используют в медицине. [c.135]

Высокомолекулярные примеси, неудаляемые диализом, обычно осаждаются впоследствии вместе с выделяемым полисахаридом. В ряде случаев можно провести их предварительное разрушение действием соответствующих ферментов. Так, для отделения белка широко применяется протео-лиз " , удаление нуклеиновых кислот достигается обработкой соответствующими нуклеазами многочисленные препараты полисахаридов были очищены от примесей крахмала или гликогена действием амилаз [c.486]

Неспецифическое связывание красителя учитывается в параллельных препаратах, обработанных сначала хлорамином Т или уксусным ангидридом, затем РНК-азой. Неспецифическое связывание красителя после обработки хлорамином Т и уксусным ангидридом обусловлено двумя факторами. Во-первых, наличием в протоплазме свободных кислых групп белков и полисахаридов, во-вторых, некоторым смещением ИЭТ белка в кислую сторону за счет блокирования или удаления аминогрупп. [c.169]

Следующий этап очистки — удаление балластных белков и других загрязняющих веществ главным образом смещением pH среды и фракционной денатурацией нагреванием. Небелковые примеси (липидов, полисахаридов, нуклеиновых кислот) удаляются многими специфическими методами. [c.142]

Осаждение белков фенолом с целью их удаления (депротеинизация) получило широкое распространение при выделении и очистке нуклеиновых кислот и специфических полисахаридов. К числу последних относятся вещества, от которых зависит принадлежность крови человека к той или иной группе (изоантигены системы ABO). [c.67]

Присоединение мономеров к белкам, полинуклеотидам и полисахаридам крайне упрощенно показано на рис. 2-33. Хотя в реакциях синтеза каждого полимера участвуют ковалентные связи разных типов, а также различные ферменты и кофакторы, тем не менее все эти реакции обнаруживают сильное сходство. Присоединение мономеров в каждом случае происходит путем реакции дегидратации - удаления молекулы воды из состава реагирующих соединений. [c.103]

Обессоливание растворов. С помощью колонки, заполненной сефадексом G-25, можно проводить обессоливание растворов высокомолекулярных соединений. Фракции высокомолекулярных соединений элюируются с внешним объемом колонки, в то время как фракции, содержащие низкомолекулярные соединения, распределяются между подвижной и неподвижной фазами и поэтому движутся с меньшей скоростью. Обессоливание — более быстрый и эффективный метод, чем диализ, и используется, в частности, для удаления фенола из растворов нуклеиновых кислот, сульфата аммония из растворов белков, а также для отделения моносахаридов от полисахаридов и аминокислот от белков. [c.100]

В вине помимо микроорганизмов содержатся очень маленькие частички размерами 0,01—0,1 мкм. Они состоят из белков, полисахаридов, кристаллов солей винной кислоты и аморфных фрагментов веществ, получающихся в ходе технологического процесса. Именно все эти частицы и придают вину мутный вид. Лучшим способом их удаления является не фильтрация, а облагораживание , заключающееся в коагуляции и отстаивании с применением специальных веществ, благоприятствующих образованию агломератов частиц. Наиболее широко применяемыми агентами такого рода являются желатин, казеин, яичный альбумин и бентонит. [c.198]

Однако при ферментативных воздействиях всегда приходится учитывать, что препарат фермента может обладать неизвестной активностью, способной изменить выделяемый полисахарид. Удаление белка после ферментативной обработки достигается обычно одним из методов денатурирования. К ним относятся нагревание, действие щелочи , хлороформа с амиловым спиртом (особенно распространеньый метод ), трифтортрихлорэтана , трихлоруксусной кислоты фссфоЕольфрамовой кислоты и т. д. Кроме того, используется избирательная сорбция белков на геле фосфата кальция , бентоните или каолине . Зти же методы, конечно, могут применяться и для удаления неферменткых белков, загрязняющих растворы полисахаридов. [c.486]

В зависимости от метода последующей переработки получаемые гемицеллюлозные гидролизаты отбираются отдельно или одновременно с продуктами гидролиза трудногидролизуемых полисахаридов. Так, длй производства этилового спирта, кормовых дрожжей все моносахариды, образующиеся из легко- и трудногидролизуемых полисахаридов, собираются вместе. Никакой предваретельной обработки растительного сырья не производится. Наоборот, при получении чистых пентозных гидролизатов для выделения кристаллической ксилозы и ее переработки в пятиатомный спирт ксилит растительное сырье, богатое пентозанами, вначале подвергается обработке горячей водой для удаления белков, дубильных веществ, пектинов и части минеральных веществ. Последние остатки растворимых катионов удаляются промыванием сырья теплой разбавленной серной кислотой. Эта обработка носит название облагораживания сырья. Только после этого производится пентозный гидролиз в условиях, исключающих одновременный гидролиз целлюлозы. Для этого используют большую разницу коэффициентов б для гемицеллюлоз и целлюлозы. Например, при получении пентозных гидролизатов из хлопковой шелухи водную обработку ведут 1—2 ч при 120° С, после чего остаток тщательно отмывают и подвергают кисловке 0,1 %-ной серной кислотой для удаления зольных элементов. Иногда эти обе обработки совмещают. Затем производится пентоз-ныи гидролиз 1—2 ч при 125° С с 0,57о-ной серной кислотой. [c.409]

Деиротеинизацию осуществляют рядом способов. Наиболее рас-фостранено удаление белков с помощью довольно мягкого метода Севага, основанного на обработке раствора полисахаридов, содержащего белок, хлороформом с добавлением бутанола либо пен-ганола, что приводит к денатурации белка. Иногда примесь белка удаляют, растворяя полисахарид в 5—10%-ном растворе трихлор-уксусной кислоты и отделяя коагулирующий в этих условиях бе-ло к. В последнее время для этих целей применяют различные ферментативные препараты — протеазы. [c.46]

В современных методиках выделения ДНК (обзоры — см. ) основной стадией является обычно экстракция биологического материала фенолом 9. При этом ДНК после разделения слоев переходит в водный слой или остается в виде осадка в интерфазе, а большая часть белка денатурирует и переходит в фенольный слой. Для удаления белка из препаратов ДНК используют также обработку детергентами смесью хлороформ — изоамиловый (или октиловый) спирт а также инкубацию с протеолитическими ферментами, например с проназой РНК отделяют от ДНК фракционным осаждением спиртом и обработкой препарата рибонуклеа-зами. Большая часть полисахаридов обычно удаляется при фракционном осаждении этанолом или изопропанолом в некоторых случаях приходится применять дополнительную очистку (экстракция метилцеллозольвом, фракционирование цетавлоновых солей, электрофорез). [c.29]

Примесь белков удаляется при помощи трихлоруксусной кислоты (ТХУ) полисахарид растворяют в 5—10%-ной ТХУ, отделяют белковый коагулят центрифугированием, а затем из раствора осаждают полисахарид спиртом. Иногда такие переосаждения полисахарида из раствора в ТХУ повторяют. Метод хорош для освобождения от белков, но не безразличен для полисахарида, вызывая некоторую деполимеризацию (см.с. 109). Более щадящим является метод Севага при обработке раствора полисахарида хлороформом с амиловым спиртом белок собирается на поверхности раздела хлороформ— водный раствор. Пользуются и рядом других реагентов и методов для удаления белков фосфорновольфрамовой кислотой, нагреванием, действием протеолитических ферментов, сорбцией белков на каолине и других сорбентах. [c.55]

Одним из самых мягких приемов удаления белков из раствора полисахарида является метод, введенный Севагом [1]. Белки денатурируются при встряхивании с хлороформом и образуют голь, остающийся после центрифугирования на границе раздела вода — хлороформ. Чтобы облегчить денатурацию, часто вместо воды лучше использовать буфер с pH 4—5 и всегда необходимо прибавлять небольшие количества и-бутанола или к-пентанола. [c.261]

Получение хондроитин-4-сульфата в крупных масштабах основано на экстракции ткани раствором щелочи, удалении белков и фракционном осаждении смеси полисахаридов спиртом. Первоначально для экстракции полисахарида использовали холодный 2%-ный раствор едкого кали или едкого натра [4, 5]. В методике с более мягкими условиями исполь- <уются растворы нейтральных солей [4, 6], но при этом экстрагируется. [ИШЬ незначительная часть хондроитин-4-сульфата, если хрящ не был предварительно выдержан в течение 4—6 недель ири 0° [7]. Ниже приво- 1ится методика, предусматривающая экстракцию растворами нейтральной соли и слабой щелочи [7]. Удаление белка из раствора достигается осаждением фосфорновольфрамовой кислотой 18], денатурацией амиловым спиртом и хлороформом 151 (см. стр. 261) и адсорбцией на каолине с пред- арительной обработкой формальдегидом [9] или без нее [7]. Последний метод описан ниже. [c.347]

У подвергнутых облучению растворов кислоты, кроме падения вязкости в ходе облучения, обнаруживается дальнейшее снижение вязкости после прекращения облучения. Это явление напоминает поведение белков (стр. 239, 245) и полисахаридов (стр. 211). Тейлор, Гринстейн и Холлендер [124] нашли, что в растворе дезоксирибонуклеиновой кислоты, подвергнутом облучению дозой 56 000 р, происходит дальнейшее снижение вязкости даже через несколько часов после прекращения облучения. Снижение вязкости протекает приблизительно с одинаковой скоростью как при 5°, так и при 25° В необлученном контрольном растворе кислоты наблюдалось вполне определенное, но значительно меньшее снижение вязкости. В этих опытах воздух из растворов дезоксирибонуклеиновой кислоты при облучении не удалялся. Г. Батлер [128] обнаружил одинаково быстрое падение вязкости как в растворах, содержавших кислород, так и в растворах, из которых был удален воздух. Даниэльс, Сколз и Вейсс [130] нашли, что кислород ускоряет последействие,, однако они считают, что последействие имеет место и при отсутствии кислорода. Дж. Батлер и Конвей [131], наоборот, не обнаружили никакого последействия в растворах дезоксирибонуклеиновой кислоты после облучения рентгеновскими лучами дозами 7000 и 20 ООО р в отсутствие кислорода последействие наблюдалось этими авторами только в присутствии кислорода непосредственно в ходе облучения. Поэтому основные явления в области последействия нельзя считать прочно установленными. В настоящее время представляется, что данные Дж. Батлера и Конвея [131] более близки к истинному положению вещей, чем данные Г. Батлера [128] и Вейсса с сотрудниками. Данные последних авторов являются сомнительными ввиду возможного присутствия случайных следов кислорода в системе. [c.255]

Процесс выделения полисахаридов можно облегчить путем изменения поверхностных свойств микроорганизма-продуцента (например, за счет удаления поверхностного полимерного ма-териала типа липополисахаридов) В подобных мутантных культурах происходит аутоагглютинация и спонтанная флоку-ляция, что уменьшает число необходимых операций центрифугирования. Однако нужно внимательно следить зачтем, чтобы у таких мутантов клеточный материал, например белки, не утекал из периплазматического пространства или не происходил лизис с загрязнением конечного продукта. К другим изменениям относятся мутации капсулообразующих организмов, приводящие к появлению стабильных, образующих слизи бак терий, а также получение устойчивых к фагам мутантов, что уменьшает риск заражения фагом в процессе производства. [c.233]

Значительные трудности возникают при необходимости удаления высокомолекулярных примесей, например, нуклеиновых кислот и полисахаридов. Вообще говоря, все описанные ниже приемы фракционирования белков используются и для отделения их от этих биополимеров. Кроме того, нуклеиновые кислоты и полисахариды могут быть разрушены с помощью соответствующих гидролитических энзимов. Лилиды при выделении и очистке водорастворимых белков обычно не следуют за ними, особенно при многостадийной очистке. Однако их удаление в тех случаях, когда они образуют с белком прочный комплекс, чрезвычайно затруднительно, ибо экстрагенты липидов — органические растворители — могут денатурировать белок. [c.14]

Размеры некоторых вирусов столь велики, а их седимента-ционные константы имеют столь высокие значения (от 150 S и, по крайней мере, до 275—350 S), что седиментация даже при относительно слабых гравитационных полях заканчивается довольно быстро. Например, при ускорении, равном 60 000 X ё, в течение 1 часа был получен вирус папилломы кролика 99,9%-ной чистоты [285]. Белки с размерами молекул, не превышающими размеры молекул гемоглобина, удается сконцентрировать в небольшом пространстве на дне пробирки в течение примерно 4 час. при относительной центробежной силе, соответствующей 100 000 — 200000X5 [21]- В благоприятных случаях можно достигнуть значительного разделения двух белков, седиментационные константы которых различаются в 2—3 раза. Для веществ, которые по скорости оседания мало отличаются друг от друга, может оказаться необходимым многократное ультрацентрифугирование однако следует помнить о том, что если можно изменить соотношение обоих компонентов, то часто увеличивается возможность успешного их разделения с помощью какого-либо иного метода, например химического фракционирования. Методы ультрацентрифугирования полезно применять для удаления смол, гликогена или других полисахаридов, которые часто имеют тенденцию соосаждаться с белками и затрудняют их кристаллизацию. [c.67]

В настоящее время ферментативные процессы широко используются в различных отраслях промышленности. В хлебопекарном производстве для ускорения гидролиза крахмала и улучшения качества теста используют амилазы. При приготовлении детской пищи с целью облегчения переваривания углеводов и белков исходные продукты обрабатывают амилазой и протеиназами. Протеиназы и пектиновые ферменты используются в виноделии и при приготовлении соков. Они способствуют ускорению сокоотделения и осветлению сока. В сыроварении используют ренин или химозин, образующийся в сычуге — четвертом отделе желудка телят и ягнят молочного возраста. Амилазы используются в текстильном производстве для расшлихтовки хлопчатобумажного волокна (удаление примесей крахмала) перед отбеливанием и крашением. Для придания любимым всеми джинсам благородного потертого вида деним (джинсовую ткань) подвергают биохимической обработке амилазой и целлюлазой. Механизм ферментативной обработки денима аналогичен тому, который имеет место при ферментативном гидролизе крахмала, ведь целлюлоза (основная составляющая хлопкового волокна), как и крахмал, относится к классу полисахаридов. Причем ферменты начинают действовать с поверхностных волокон, которые окрашены индиго, в результате связь этих волокон с поверхностью ткани ослабевает, и постепенно на ткани образуются белые участки. Специфические протеиназы применяются в кожевенной промышленности с целью мягкого удаления волос с кожи, в технике — при регенерации кинопленки. Щелочные протеазы наряду с липазами используют при производстве синтетических моющих средств. [c.122]

Простое механическое повреждение растений может вызвать синтез белков, ингибирующих протеазы как насекомых, так и микроорганизмов (ингибиторы протеаз). Полагают, что подобная нормальная защитная реакпия может локально индупироваться небольшими фрагментами полисахаридов, входящих в состав пектина, и высвобождающихся при повреждении. Но-видимому, существуют и пока не идентифицированные сигнальные механизмы, действующие на расстоянии, поскольку листья, удаленные от поврежденного листа, также начинают продуцировать ингиторы протеаз. [c.410]

Второй класс тимуснезависимых антигенов представлен молекулами, имеющими часто повторяющиеся идентичные эпитопы. К этому классу относятся полисахариды бактериальной стенки, сильно полимеризованные высокомолекулярные белки (например, гемоцианин). Механизм активации В-клеток связан с перекрестным сцеплением между повторяющимися антигенными эпитопами и поверхностным иммуноглобулином. Является ли ответ к TI-i-антигенам полностью независимым от хелперных Т-клеток, не ясно. С одной стороны, гуморальный иммунный ответ регистрируется у дефицитных по Т-клеткам мышей nude. С другой — удаление из культуры in vitro всех Т-клеток приводит к подавлению ответа на Tl-2-антиген. Введение незначительного количества Т-клеток иммунодефицитным мышам значительно усиливает иммунный ответ к данным антигенам. Вероятно, наиболее ранний ответ в виде синтеза IgM формируется без помощи Т-клеток. Более поздний гуморальный ответ, характеризующийся доминантным синтезом IgG, требует включения хелперных Т-клеток. [c.243]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология