Белки гидролиз ферментативный

Как было уже указано, для расщепления белков применяют большей частью кислотный гидролиз (концентрированной соляной и серной кислотами), реже щелочной гидролиз, причем в обоих случаях образуются аминокислоты. Очень действенным является ферментативное расщепление белков. Ферменты животного организма, способные гидролизовать белки, подразделяются на три группы [c.398]

Анализ белков. — Белки обычно гидролизуют кипячением с 20,%-ной соляной кислотой или 35%-ной серной кислотой. Щелочной гидролиз сопровождается глубокой рацемизацией и применяется толыко лри определении триптофана и тирозина, чувствительных к минеральным кислотам. Ферментативный гидролиз протекает медленно и, вероятно, не полностью, однако он не осложняется деструкцией лабильных продуктов, образующихся ири гидролизе. Если аспарагиновая и глутаминовая кислоты присутствуют в белке в виде амидов,, то кислотный гидролиз превра1цает амидный азот в соответствующие аммонийные соли. Методом Кьельдаля определяют количество общего- [c.654]

Единственная химическая реакция, которая здесь будет рассматриваться, —это гидролиз. Он может осуществляться как ферментативным, так и химическим путем. Горячая разбавленная минеральная кислота медленно расщепляет амидные связи с образованием с учайных фрагментов, в конечном итоге приводя к простым аминокислотам. Контролируемый кислотный гидролиз разрушает белок с образованием смеси пептидов. Возможен также ферментативный гидролиз протеолитические ферменты очень разнообразны по своему специфическому действию. Некоторые из них, такие, как папаин или фицин, фактически неспецифичны и расщепляют белки до свободных аминокислот, в то время как другие — трипсин, химотрипсин и пепсин— гидролизуют только особые связи в белковых молекулах (ср. мальтаза, эмульсин и т. д., разд. 17.6 и 17.7). Так, пепсин расщепляет амидную связь между карбоксильной группой ди-карбоновой ь-аминокислоты и аминогруппой ароматической ь-аминокислоты при условии, что вторая карбоксильная кислотная группа дикарбоновой аминокислоты не связана. Химотрипсин менее специфичен и расщепляет амидную связь с карбонильной стороны ароматической ь-аминокислоты. Трипсин гидролизует амидные связи, включающие карбоксильные груп- [c.296]

Триптофан входит в состав многих белков, но обычно лишь в незначительных количествах. Определение его облегчается применением различных цветных реакций, характерных для этой аминокислоты. При кислом гидролизе протеинов он разлагается, но при ферментативном расщеплении белка может быть выделен в лсвовращающей форме. [c.990]

БЕЛКОВ И ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ ГИДРОЛИЗ БЕЛКОВ И ПОЛИПЕПТИДОВ [c.184]

Полипептидные цепи при ферментативном гидролизе расщепляются на большое число сравнительно мелких пептидов, что затрудняет их разделение и идентификацию. Поэтому за последнее время все более широкое распространение приобретают методы химического расщепления пептидных связей, образованных аминокислотами, редко встречающимися в белках. Это позволяет получать ограниченное число крупных пептидов. [c.141]

Гидролиз белков ЗМ /г-толуолсульфокислотой или АМ метан-сульфокислотой [7,8], содержащей 0,2% триптамина, в вакууме при 110°С, в течение 3 суток с хорощим выходом приводит к аминокислотам, включая триптофан, однако углеводы могут мешать. Триптофан можно определять также после щелочного гидролиза, но при этом разрушаются полностью аргинин, цист(е)ин, серин и треонин. Общее содержание амидов, обусловленное наличием аспарагина и глутамина, можно определить после гидролиза 10 М НС1 при 37°С в течение 10 суток и последующего анализа на аммиак с помощью микродиффузионной техники. Раздельное определение аспарагина и глутамина можно провести с помощью предварительной этерификации (метанол-уксусный ангидрид) свободных карбоксильных групп, последующего восстановления (борогидрид лития) образовавшихся сложноэфирных групп и определения аспарагиновой и глутаминовой кислоты после кислотного гидролиза соответственно в виде v-гидрокси-а-аминомасляной кислоты и б-гидрокси-а-аминовалериановой кислоты. Содержание аспарагина и глутамина получают путем вычитания этих величин из содержания аспарагиновой и глутаминовой кислот после полного гидролиза немодифицированного белка. Полный ферментативный гидролиз белков без деструкции аминокислот можно осуществить, используя смешанные конъюгаты Сефарозы с трипсином, химотрипсином, пролидазой и аминопептидазой М [9] [c.260]

Аналогичная ситуация реализуется, по-видимому, также и в ферментативных реакциях. Взаимодействие с субстратом одной функциональной группы белка может быть усилено за счет участия в реакции какой-либо другой, рядом расположенной группы нуклеофильного или электрофильного характера. Так, например, при гидролизе пептидной связи на активном центре карбоксипептидазы А см. схему на стр. 19) нуклеофильная атака молекулой воды усилена за счет общеосновного катализа со стороны карбоксильной группы остатка 01и-270 (а возможно и под действием гидроксильной группы остатка Туг-248). Общекислотный катализ осуществляет, по-видимому, Туг-248. Кроме того, расщепление пептидной связи субстрата может быть существенно облегчено в результате электрофильной атаки атомом 2п. [c.65]

Рибонуклеаза. — Одна из рибонуклеаз была выделена в кристаллическом виде из бычьей поджелудочной железы Купит-цем (1940). Панкреатическая рибонуклеаза гидролизует рибонуклео-тидные связи, в которых пиримидиновый нуклеозид этерифицирован по З -положению сахара. Этот фермент содержит 124 остатка аминокислот и четыре дисульфидные связи. Установление первичной структуры этого фермента Муром и Штейном (1960) явилось важной вехой в химии белка. Последовательность частично была определена на окисленной рибонуклеазе, которая при энзиматическом расщеплении дает 24 пептида. Их размеры позволяют непосредственно определить последовательность химическими и ферментативными методами. Наконец, ферментативный гидролиз нативного белка, разделение содержащих цистин пептидов, окисление их до цистеиновых пептидов и аминокислотный анализ последних позволили выяснить, каким образом восемь по-луци1стинооых о статков связаны друг с другом (рис. 27, стр. 740). [c.739]

Для того чтобы расшифровать природу активного центра, возможны различные пути а) исследование поведения всей молекулы белка-фермента, в частности, изменений каталитического эффекта при различных воздействиях на нее б) исследование свойств отдельных фрагментов ферментной молекулы, ее осколков , т. е. активных продуктов распада, образующихся при частичном гидролизе ферментативного белка в) создание и изучение ферментных моделей, низкомолекулярных веществ, простых по своему строению и обладающих каталитическим действием, подобным ферментному. Важным путем является также изучение кинетики ферментных реакций. Выясняя влияние различных факторов на скорость данной реакции, мы всегда можем сделать [c.327]

Распад белков в семенах начинается почти сразу же после начала набухания и осуществляется несколькими группами протеаз. Различают три стадии протеолиза запасных белков при прорастании. На первой стадии идет лишь ограниченный протеолиз основной массы запасных белков. Распадаются альбумины и глобулины, локализованные в осевых органах зародыша, в алейроновых зернах алейронового слоя. Повышаются подвижность и растворимость белков. Гидролиз белков на этой стадии поставляет аминокислоты, необходимые для синтеза новых ферментативных белков. На второй стадии, которая длится 5—10 дней, белки в запасающих органах быстро распадаются до аминокислот, которые транспортируются к растущему зародышу, обеспечивая его гетеротрофное питание. На заключительном этапе в запасающих органах полностью деградируют структурные и ферментативные белки, которые обеспечивали процесс пищеварения. [c.286]

Для изучения состава п строения белковых молекул пользуются гидролизом, который можно осуществить двояко а) ферментативный гидролиз, или расщепление белков, и б) химический 1 ид-ролиз. [c.541]

Однако, несмотря на отмеченные здесь трудности, некоторые олигонуклеотиды и их мономеры все же были успешно разделены (см. литературу, приложение XV). Дело обстоит гораздо проще, когда речь идет о полимерах одного нуклеотида. При исследовании влияния длины цепи олигонуклеотидов на биосинтез белка потребовались олигонуклеотиды определенных размеров. Для этого синтетический полинуклеотид (применявшийся в качестве искусственной информационной РНК) частично гидролизовали ферментативным путем, а затем хроматографировали [81]. Например, из полиуридиловой кислоты на сефадексе 0-200 удалось получить фракцию со средней степенью полимеризации от 42 до 132, а на 0-75 —фракции со степенью полимеризации от 5,8 до 42. [c.223]

ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ МЕТОДЫ ГИДРОЛИЗА БЕЛКОВ [c.297]

К 1910 г. развитие химии белка приостановилось. Метод анализа белковых гидролизатов по Э. Фишеру оказался в ряде случаев бессильным, ибо не давал возможности расшифровать до 40% азотного состава некоторых белков, поскольку ферменты не гидролизовали их нацело. Николай Дмитриевич применил вместо ферментов неорганизованные катализаторы и нашёл условия, в которых гидролиз каталитический приближается к гидролизу ферментативному катализ слабыми кислотами и щелочами, но в условиях более высокой температуры, чем это обычно применялось, и значительно повышен-94 [c.94]

В 1923 году Николай Дмитриевич опубликовал результаты более чем десятилетней работы по исследованию белков 230] и отметил, что гидролиз слабыми кислотами (1%-ная НС1) в автоклаве при ISO является гидролизом каталитическим, направляющим разрыв молекулы белка главным образом по полипептидным связям и что такой гидролиз очень напоминает гидролиз ферментативный. [c.96]

Большинство известных способов получения микробного белка из целлюлозосодержащих субстратов базируется на их кислотном пли щелочном гидролизе и высвобождении при этом простых сахаров. Гидролиз, особенно кислотный, имеет ряд недостатков, связанных с большим расходом кислоты, потребностью в кислотоустойчивой аппаратуре, образованием нежелательных продуктов гидролиза и т. п. Все это оказывает известное отрицательное влияние на стоимость производства продуктов микробного спн-теза и их качество. Поэтому перспективным представляется замена кислотного гидролиза ферментативным. В основе биологической утилизации целлюлозы лежит ее ферментативное расщепление до глюкозы. [c.4]

При активировании химотрипсиногена трипсином, в ходе которого наблюдается также аутолиз или действие химотрипсина на. химотрипсиноген, помимд ожидаемого гидролиза связи —Тир.Тре— происходит разрыв связей —Лей.Сер— и —Асп(ЫН2).Ала—, т. е. связей, образованных остатками, не содержащими боковых цепей ароматического характера. Таким образом, связь —Тир.Тре— представляет собой единственную связь, в которой участвует аминокислота с ароматическим заместителем в боковой цепи, хотя белок содержит четыре остатка тирозина, шесть остатков фенилаланина и шесть остатков триптофана. Это является еще одним доказательством устойчивости нативного белка к ферментативному гидролизу. [c.203]

Гидролиз крови при производстве пенообразователя необходим, так как сами белки образуют небольшое количество малоустойчивой пены, а продукты их распада обладают значительно лучшей пенообразующей способностью. При проведении гидролиза следует ь збегать полного разложения белков, так как продукты их конечного распада аминокислоты — вновь теряют способность образовывать устойчивую пену. Для расщепления белков применяют различные виды гидролиза ферментативный, кислотный, щелочной и в нейтральной среде. Наиболее распространен щелочной гщдро-лпз, который можно проводить едки-М калием и едким натром, шд-роокисямя кальция, бария, аммиака и солями, реашрующими как основания. [c.51]

Для очистки стоков по второму варианту (с высокой концентрацией органических веществ) применяют анаэробное разложение нх, состоящее из двух основных стадий 1) ферментативный гидролиз углеводов, белков и жиров, содержащихся в сточных водах 2) превращение образовавшихся продуктов гидролиза органических соединений в углекислый газ и метан. На второй стадии анаэробной очистки сточных вод могут образовываться минеральные соли и гумусоподобные вещества. [c.408]

В процессе пищеварения в желудочно-кишечном тракте млекопитающих три основных компонента пищи-углеводы, жиры и белки-подвергаются ферментативному гидролизу, распадаясь при этом на составляющие строительные блоки, из которых они образованы. Этот процесс необходим для утилизации пищевьк продуктов, поскольку клетки, выстилающие кишечник, способны всасывать в кровоток только относительно небольшие молекулы. Например, усвоение полисахари- [c.744]

Среди наиболее прочных фибриллярных белков, подвергающихся ферментативному гидролизу в тканях организма, следует отметить коллаген. Последний благодаря этому свойству находит широкое применение в медицинской практике как рассасываюпщйся материал [50, 164, 165]. Отдельные его волокна, взятые из кожного покрова, достигают прочности 800 МН/м . [c.86]

Среди белков, наделенных ферментативными свойствами, можно обнаружить не только простые белки, не имеющие обособленных простетических групп (к числу которых принадлежат, например, различные гидролизы), но и типичные сложные белки (протеиды), состоящие из белкового компонента и небелковой простетической группы. К числу таких ферментов — протеидов — относится, в частности, ряд ферментов, катализирующих различные окислительно-восстановительные процессы. [c.68]

Ферментативный гидролиз проходит обычно ступенчато. Высокомолекулярные белки расщепляются под действием пепсина до пептонов (смесь соединений с молекулярным весом 700—2000). Пептоны и не подвергшиеся расщеплению белки гидролизуются в кишечнике трипсином до пептидов, аминокислот и дикетопиперазинов, Пептиды расщепляются пептидазами до аминокислот. [c.703]

Обычно фосфопротеины или крупные фрагменты, полученные после ферментативного расщепления белков, гидролизуют длительным кипячением (10—24 часов) с 2 н. соляной КИСЛ0Т011 или обрабатывают концентрированной соляной кислотой при 37° в течение нескольких дней. В связи с этим в первую очередь гидролиз ме-тиламида М-бепзоил-О-фосфосе-рина был изучен в сильно кислой среде. Гидролиз в присутствии 1, 3, 6 мол. хлорной кислоты и 2 н. соляной кислоты (рис. 1 pH О, -0.5, -0.8, [c.231]

Из всех использованных методов пептидного картирования наиболее элегантным является метод диагонального электрофореза (ЭФ), основанный на отсутствии свободной карбоксиль-ной группы в амидированных белках. Перед ферментативным расщеплением амидируют карбоксильные группы боковых цепей и С-концевой аминокислоты. После гидролиза С-концевой фрагмент оказывается единственным, не имеющим свободного карбоксила. Его можно селективно идентифицировать, так как его ионный заряд, а следовательно, и электрофоретическая подвижность почти одинаковы при изменении pH в любую сто рону от pH 3,5 (р/С а-карбоксильной группы). Подвижности пептидов, содержащих свободную карбоксильную группу, увеличатся при подкислении раствора (рН<3,5). После двумерного ЭФ на диагонали электрофореграммы обнаруживается только С-концевой пептид. [c.485]

Из высокоспецифичных протеиназ бактерий хорошо изучены свойства и функции продукта гена гее А Е. соИ. Re А-белок обладает одновременно несколькими ферментативными активностями. Он связывается с одно- и двуните-выми ДНК и обеспечивает взаимодействие их молекул, необходимое для процессов рекомбинации, расщепляет АТФ. т. е. является АТФазой, а также проявляет протеолитическую активность, очень специфичную к белкам-субстратам. Ферментативные активности Re А-белка стимулируются АТФ и однонитевыми олиго- и полинуклеотидами. АТФ выступает в роли аллостерического эффектора, поскольку для активации гидролиз АТФ не нужен. [c.55]

Некоторые оксопроизводные пиперазина, 2,5-д и о к с о п и п е р-азины, или 2,5-д и к е т о п и п е р а 3 и н ы, были обнаружены среди продуктов кислотного и ферментативного гидролиза белков (Э. Фпшер, Абдергальден) и в связи с этим подверглись тщательному изучению. По-видимому, они как таковые в яичном белке не содержатся, но очень легко образуются нз аминокислот и дипептидов. [c.1036]

Энергия, необходимая для работы мышцы, выделяется в результате ферментативного гидролиза АТФ под действием мышечного белка миозина. Удельный вес мышцы, содержащей 10% миозина (мол. вес 2-10 ), приблизительно равен единице, коэффициент диффузии АТФ в мышце равен 10 см /сек. Реакция гидролиза АТФ под действием миозина характеризуется значениями кат=100 сек-, /(т(каж)= 10- М. Оцбнить, (при какой толщине мышечного волокна (моделируя его пластинкой) работа мышцы начнет лимитироваться диффузией, если начальная концентрация АТФ равна 1 10 3 М. [c.275]

Такое планирование оправдано в тех случаях, когда потенциальное исходное соединение является бросовым товаром (например, является отходом того или иного производства и желательна его рациональная утилизация, либо когда в целевой молекуле легко распознать структурные фрагменты, отвечающие доступным соединениям. Наиболее выразите.льньш примером второй ситуации может служить синтез биополимеров (белков, полисахаридов, нуклеиновых кислот). Все они построены из небольших мономерных блоков, соединенных через гетероатомы. Такими мономерами для полипептидов и белков являются аминокислоты, для полисахаридов — моносахариды, а для нуклеиновых кислот — нуклеотиды. В биополимерах эти мономеры соединены амидной, 0-гли-козидной и фосфодиэфирной связями соответственно. Такие связи легко расщепляются при химическом или ферментативном гидролизе. Обратное превращение — сборка межмономерных связей — представляет собой обыч- [c.295]

Реже используются другие варианты ферментативного гидролиза хпмотринсином, протеазой из Staphylo o us aureus (по Asp и Glu), термолизином (по Val, Leu, Пе и Phe). Главные их недостатки — множественность п неравноценность точек разрыва. При гидролизе исходного белка это дает высокий фон, однако для дополнительного гидролиза уже очищенных пептидов указанные методы вполне пригодны. [c.298]

Сводную таблицу и описание ориентировочных условий для десяти вариантов химического и ферментативного гидролиза белков можно найти в работе [Heiland, Wittmann-Liebold, 1979]. [c.298]

В 1977 г. было опубликовано подробное онисапие такого фрак-щюпирования [Сгасу, 1977]. Прежде всего проводили подготовку и ферментативный гидролиз белка. Подготовка состояла в карбокси-ыетилированпи остатков цистеина во избежание образования побочных S—S-связей между пептидами в результате их окисления в ходе эксперимента. [c.486]

Определение неорганического фосфата. К 1 мл фильтра добавляют 1,0 мл воды, 0,4 мл молибденового реактива и 0,1 мл.рабочего раствора эйконогена, хорошо перемешивают и оставляют на 10 мин в термостате при 37 °С. Раствор быстро охлаждают и тотчас же колориметрируют на ФЭКе. Одновременно строят калибровочный график по стандартным растворам фосфата, содержащим от 0,2 до 2 мкмоль фосфата в пробе (с. 34). По разности содержания неорганического фосфата в пробах после ферментативного гидролиза и в контрольной пробе рассчитывают количество фосфата, образовавшегося в процессе ферментативного расщепления АТФ. Затем рассчитывают активность миозина — в мкмолях превращенного субстрата за 1 мин на 1 мг белка. [c.394]

Выделяют митохондрии из печени крысы. В кювету рН-метра наливают 4,5 мл среды измерения активности (п. 2) и погружают отмытый рН-электрод. Через 2—3 мин в кювету вносят 20—50 мкл суспензии митохондрий (2—4 мг) белка. Убеждаются в том, что нативные митохондрии не катализируют реакцию гидролиза АТФ в отсутствие разобщителя. Через 1 мин после внесения митохондрий в кювету добавляют динитрофенол до конечной концентрации, равной 0,1 мМ. Внесение разобщителя приводит к снятию трансмембранного электрохимического потенциала ионов водорода и активации реакции гидролиза АТФ. Измерение повторяют, в кювету после добавления митохондрий вместо динитрофенола вносят детергент тритон Х-100 до конечной концентрации 0,1%- Наблюдают, как и в случае динитрофенола, стимуляцию реакции. Выбирают концентрацию тритона (в интервале от 0,02 до 2%) дегя проявления максимальной ферментативной активности. [c.460]

Другим интересным примером использования рибосом для защиты нуклеиновой кислоты от ферментативного гидролиза могут служить опыты с одноцепочечной ДНК бактериофага ФХ174 [121]. В этом случае рибосомы защищали последовательность нуклеотидов, в состав которой входил инициаторный кодон ATG. Этот кодон и следующие за ним семь других кодонов соответствовали известной N-концевой ам1и-нокислотной последовательности детерминируемого геном G белка шипов этого бактериофага. [c.244]