ВИЧ митохондриальные тканей

Получение митохондриальной фракции. Тканевый гомогенат центрифугируют при 600 в течение 10 мин для удаления ядер и обломков клеток. Полученный супернатант фильтруют через 4 слоя марли и центрифугируют при 10 ООО в течение 10 мин. Полученный осадок Митохондрий промывают средой выделения от примеси растворимой клеточной фракции. С этой целью осадок осторожно суспендируют с помощью пипетки в небольшом объеме среды выделения (митохондрии из 1 г ткани в 0,2 мл среды). Затем суспензию разводят средой выделения в 10 раз и центрифугируют при 10 ООО в течение 10 мин. Полученную фракцию промытых нативных митохондрий окончательно суспендируют в нужной среде из расчета митохондрии из 1 г ткани в 5 мл среды Фракцию нативных митохондрий (в 0,25 М сахарозе, pH 7,5) хранят при 0°С и используют в день выделения. [c.352]

В качестве объекта исследования во всех задачах используются либо митохондрии из различных тканей, либо их фрагменты, обладающие соответствующим набором ферментативных активностей. Получение интактных митохондрий или их фрагментов, а также выделение некоторых митохондриальных ферментов само по себе представляет небольшое, но требующее тщательности и опыта самостоятельное препаративное исследование. Поэтому получение этих препаратов приведено в Практикуме в виде отдельных работ. [c.403]

Несопряженное дыхание (свободное окисление) выполняет важные биологические функции. Оно обеспечивает поддержание температуры тела на более высоком уровне, чем температура окружающей среды. В процессе эволюции у гомойотермных животных и человека сформировались специальные ткани (бурый жир), функцией которых является поддержание постоянной высокой температуры тела за счет регулируемого разобщения окисления и фосфорилирования в митохондриальной дыхательной цепи. Процесс разобщения контролируется гормонами. [c.313]

Сообщается [326] о наличии метилированных пуринов в клеточных фракциях печени мышей и опухолевых тканей установлено, что растворимая фракция цитоплазмы печени мышей и грудной аденокарциномы мышей содержат значительно больше этих оснований, чем митохондриальная или микро- сомная фракции. Были идентифицированы следующие пуриновые основания [c.141]

КоР является производным бензохинона с длинной боковой цепью, которая в большинстве тканей млекопитающих состоит из 10 изопреноидных единиц (КоР о). Установлено, что убихинон играет роль промежуточного переносчика водородных атомов, т. е. электронов и протонов в митохондриальной мембране, окисляя восстановленную форму флавиновых ферментов. Как всякий хинон, Кор может существовать как в окисленной, так и восстановленной форме (гидрохинон) [c.195]

Пероксидаза жирных кислот обнаружена в бесклеточных экстрактах, полученных из семядолей арахиса и сафлора. Были активны также экстракты ацетонового порошка прорастающего гороха. Никакая активность не выявлялась в люпине, сое, подсолнечнике, клещевине и в тканях животных. Когда дифференциальному центрифугированию подвергли бесклеточные экстракты семядолей арахиса, пероксидаза жирных кислот была найдена в митохондриальной и микросомной фракциях, а также в надосадочной жидкости. Фермент был выделен в частично очищенном виде при обработке экстракта ацетонового порошка семядолей арахиса сернокислым аммонием (СА-фермент). [c.310]

Ацетил-СоА—карбоксилаза - регуляторный фермент катализируемая этим ферментом реакция является лимитирующим этапом, определяющим скорость всего процесса биосинтеза жирных кислот в животных тканях. Главным положительным модулятором этого фермента служит цитрат, инициирующий переход фермента в высокоактивный нитевидный полимер. Как только содержание цитрата в митохондриях увеличивается, что наблюдается при высокой скорости образования митохондриального ацетил-СоА и АТР, цитрат выходит из митохондрий и выступает одновременно в роли предшественника цитозольного ацетил-СоА и аллостерического активатора ацетил-СоА—карбоксила-зы. [c.626]

Методы усиления генетической изменчивости многообразны для этой цели используют культуру тканей, слияние протопластов, перенос одиночных генов, гаплоиды, опыление облученной пыльцой, химический мутагенез, замену митохондриальных и хлоропластных геномов и т. д. Направленный перенос распознаваемых признаков может быть осуществлен методами генетической инженерии. Здесь стоят проблемы выбора вектора, -включение гена в геном и экспрессии нового признака в условиях сложной системы регуляции у растений как на генетическом, так и на метаболическом уровне. [c.50]

В клетках или тканях, обладающих в норме аэробным типом обмена, скорость потребления глюкозы в процессе гликолиза возрастает в отсутствие кислорода и снижается в его присутствии. Это явление известно под названием эффекта Пастера. Влияние кислорода на скорость гликолиза осуществляется через сопряженное окислительное фосфорилирование в митохондриях, так как разобщение поглощения кислорода и фосфорилирования с помощью динитрофенола приводит к увеличению скорости гликолиза [25, 33]. В качестве одной из возможных причин конкурентного взаимодействия митохондриального окисления и гликолиза можно предположить их общую зависимость от АДФ как акцептора фосфата. Тогда ингибирование митохондриального фосфорилирования АДФ может приводить к повышению концентрации этого соединения и тем самым к активации стадий гликолиза, зависящих от АДФ. Аналогичные аргументы можно использовать и для объяснения конкуренции между этими двумя процессами за неорганический фосфат. [c.117]

Эти исследователи считают, что, судя по содержанию кислот в некоторых из обменных фондов, эти последние сосредоточены не в митохондриях. Они также не обнаружили постоянного соотношения между количествами кислот, присутствующих в обменных фондах разных тканей между тем именно этого, по-видимому, следовало бы ожидать в том случае, если бы обменные фонды были представлены исключительно митохондриальными фондами. Обменные фонды, возможно, правильнее рассматривать как цитоплазматические фонды. [c.307]

Митохондриальную среду добавляли всюду поровну в количестве 500 жг-жв ткани. Концентрация РФ (сердце) во всех пробах 3,1 мг белка на пробу. Условия гликолиза — см. табл. 1 [c.111]

Окислительное фосфорилирование может прекращаться под действием особых ингибиторов без нарушения основной дыхательной цепи. Одним из таких специфических ингибиторов окислительного фосфорилирования является 2,4-динитрофенол, который резко нарушает процессы образования АТФ и тем самым разобщает процессы окисления и фосфорилирования. Это разобщение может быть также результатом различного воздействия фермента АТФ-азы митохондрий на субстрат (АТФ) в связи с изменением физиологической функции ткани, к которой принадлежит клетка, что зависит от изменения структуры и проницаемости митохондриальных мембран. Разобщение процессов окисления и фосфорилирования может быть также вызвано действием ультразвука, различным облучением, некоторыми антибиотиками и т. п. Вполне возможно, что разобщающее действие рентгеновских лучей заключается в повреждении митохондриальных мембран. [c.274]

Наконец, третий путь повышения энергетического выхода ткани — увеличение в ткани митохондриального белка, осуществляющего процесс окислительного фосфорилирования, что соответствующим образом может увеличивать выход энергии в расчете на вес ткани. [c.68]

Фермент широко распространен в тканях млекопитающих и представлен двумя изозимами, пространственно разобщенными в клетке. Один изозим локализован в цитозоле, другой связан с митохондриальной фракцией. Изозимы существенно различаются по аминокислотному составу, физико-химическим свойствам, зависимости активности от pH среды и, что особенно важно с физиологической точки зрения, по кинетическим свойствам. Различное сродство к субстратам реакции ставит изозимы фермента в разные условия в отношении доступности субстратов прямой и обратной реакций. Этим определяется бифункциональность поведения аспартатаминотрансферазы в печени реакция, катализируемая митохондриальным изозимом, может быть сдвинута от состояния равновесия в сторону образования а-кетоглутарата, и поэтому может быть связана с функционированием цикла Кребса и цикла мочевины. Наоборот, цитоплазматический изозим способствует образованию щавелевоуксусной кислоты, т. е. связан с функционированием глюконеогенеза. [c.351]

С. присутствуют во всех тканях аэробионтов (обитатели суши и воздуха). В клетках млекопитающих С. в осн. локализованы в цитозоле ок. 10% фермента (nOtMa e) находится в митохондриальных мембранах. [c.474]

В последнее время появились данные, доказывающие, что креатинфосфат в мышечной ткани (в частности, в сердечной мышце) способен выполнять не только роль как бы депо легкомобилизуемых макроэргических фосфатных групп, но также роль транспортной формы макроэргических фосфатных связей, образующихся в процессе тканевого дыхания и связанного с ним окислительного фосфорилирования. Предложена схема переноса энергии из митохондрий в цитоплазму клетки миокарда (рис. 20.7). АТФ, синтезированный в матриксе митохондрий, переносится через внутреннюю мембрану с участием специфической АТФ—АДФ-транслоказы на активный центр митохондриального изофермента креатинкиназы, который расположен на внешней стороне внутренней мембраны в меж-мембранном пространстве (в присутствии ионов Mg ) при наличии в среде креатина образуется равновесный тройной фермент-субстратный комплекс креатин—креатинкиназа—АТФ—Mg , который затем распадается с образованием креатинфосфата и АДФ —Mg . Креатинфосфат диффундирует в цитоплазму, где используется в миофибриллярной креатинкиназной реакции для рефосфорилирования АДФ, образовавшегося при сокращении. Высказываются предположения, что не только в сердечной мышце, но и в скелетной мускулатуре имеется подобный путь транспорта энергии из митохондрий в миофибриллы. [c.655]

Фракционирование клеток легких крыс показало [239], что амин практически равномерно распределен во всех фракциях. Максимальная концентрация ацетамида сосредоточена в раотвори-мой и митохондриальной фракциях, где гетероциклические амины подвергаются действию ароматических N-ацетилтрансфераз. В клетках сердца нитразепам содержится в основном в обломках клеток и растворимой фракции, в то время как его метаболиты равномерно распределены во всех изучаемых органах. По-видимому, метаболиты нитразепама поступают в сердце из других органов и тканей, в которых возможны процессы восстановления и ацетилирования. Аналогично объясняется наличие амина в микросомах мозга. [c.207]

Для обеспечения экспрессии чужеродньгх генов, введенных в растительные клетки, использовали растительные промоторы. Различные промоторы, функционирующие только в определенньгх растительных тканях или на определенной стадии развития растения, идентифицировали по экспрессии репортерного гена без промотора после его интеграции в хромосомную ДНК растения. Были разработаны методы встраивания чужеродных генов непосредственно в хлоропластную или митохондриальную ДНК так, чтобы кодируемый белок синтезировался прямо в этих органеллах. И наконец, для того чтобы успокоить общественность, были разработаны методы удаления маркерных генов из трансгенных растений. [c.387]

Первая стадия ацетилхолинового цикла — синтез ацетилхолина из ацетилкофермента А (ацетил-СоЛ) и холина (рис. 8.2). Аце-тил-СоА является конечным продуктом гликолиза. Он образуется в митохондриях при окислительном декарбоксилировании пирувата, катализируемом мультиферментным комплексом пи-руватдегидрогеназы. Поскольку ацетил-СоА не может проникать через. митохондриальную мембрану, необходим его непрямой перенос в цитоплазму, где будет синтезироваться ацетилхолин. Пока неясно, происходит ли в нервной ткани такой же самый процесс, как, например, в жировых тканях, где ацетил-СоА реагирует с оксалилацетатом, образуя цитрат последний транспортируется из митохондрий и в цитоплазме расщепляется АТР-цитратлиазой, вновь образуя ацетил-СоА и оксалилацетат. Эксперименты с С-меченным цитратом показали, однако, что в нервной ткани ни цитрат, ни ацетат не используются в качестве источников ацетилхолина, и вопрос об его источнике остается открытым. По-видимому, в любом случае нервная ткань должна содержать отдельный пул ацетил-СоА [5]. [c.195]

Впоследствии многие ученые показали, что срезы растительных тканей превращают меченные жирные кислоты в С Ог. Только в 1956 г. было однозначно показано Р-окисление жирных кислот в бесклеточных системах [25]. Штумф и Барбер [25] установили, что митохондриальные частицы, полученные из семядолей арахиса, при добавлении ряда кофакторов легко окисляют алифатические жирные кислоты до СОг. [c.307]

Приведены реакции, катализируемые митохондриальными ферментами из разнообразных животных тканей (сердце, печень млекопитающих, грудные мышцы птиц, летательные мышцы насекомых и т, д.). Внемитохондриальныо ферменты из этих источников, а также ферменты из микроорганизмов часто имеют характерисгики, отличные от приведенных здесь. [c.352]

Любой процесс, состоящий из последовательных реакций, можно регулировать путем изменения концентрации исходных субстратов. Метаболическую активность удобно характеризовать концентрацией субстратов в стационарном состоянии или же временем их полупревращения. В тканях печени и ночки крысы время полупревращения всех метаболических субстратов имеет порядок нескольких секунд. Исключение составляет лишь оксалоацетат, у которого время полупревращения но крайней мере на порядок меньше. Для Е. oli все эти величины следует уменьшить приблизительно в 10 раз. Эти данные указывают на высокую потребность в оксалоацетате и на то, что это соединение играет ваншую роль в регулировании митохондриального метаболизма (см. фиг. 101 и 102). [c.365]

Выделенные мягкими способами митохондриальные фракции из ряда тканей, в частности из печени, в определенных условиях сохраняют способность к окислительному фосфорилированию. Способность к синтезу АТФ можно легко ликвидировать, так как она зависит от целостности липопротеидного матрикса митохондрий, при этом поврежденная митохондрия может сохранять способность к окислению. Разобщение можно вызвать механическими повреждениями, другими физическими способами и химическими агентами. [c.375]

Фиг. 23. Общая схема выделения митохондрий из тканей высших растений. Предварительная обработка растительной ткани сводится к следующему. Сначала ткань измельчают тем или иным способом, после чего ее помещают в среду для растирания (состав среды 0,3 М маннит, 0,1% бычий сывороточный альбумин, 0,05% цистеин, 1 мМ ЭДТА, pH 7,2) отношение ткань среда должно составлять 1 2. Порции суспендированной в среде для растирания ткани растирают вручную в фарфоровой ступке в течение 30 сек и фильтруют через муслин. pH суспензий на всех фазах обработки следует поддерживать между 7,0 и 7,2. Профильтрованный гомогенат обрабатывают так, как описано на фигуре. Температура поддерживается на уровне 0—4°. Следует избегать жестких способов разрушения ткани. Необходимо строго соблюдать указанную на фигуре последовательность центрифугирования. Наконец, следует тщательно отделять митохондриальные фракции от материала, осаждающегося вместе о митохондриями. Обычно митохондрии располагаются поверх слоя крахмала, а над митохондриями часто создается легкий неустойчивый слой других компонентов клетки.

Хьюм и др. [38] показали также, что окислительная активность митохондрий, выделенных из яблок (особенно из ткапи кожицы), повышалась на протяжении климактерического периода, причем это повышение начиналось за несколько дней до того, как усиливалось выделение СО2 в целом плоде. (Митохондриальную активность измеряли по поглощению кислорода и выделению углекислоты при добавлении сукцината и малата.) Это наблюдение наряду с тем фактом, что во время климактерического периода несколько возрастало содержание белка, привело Хьюма и его сотрудников к предположению, что в этот период происходит синтез ферментов (пируватдекарбоксилазы и малик-фермента), причем энергия, необходимая для этого синтеза, поступает за счет повышенной митохондриальной активности. Исследователи предположили, далее, что причиной конечного падения интенсивности дыхания до величины, которая остается затем почти постоянной (пока не наступит полный распад ткани), является недостаток кислотного субстрата, необходимого как для цикла Кребса, так и для малик-фермента. Нил и Хьюм [64] показали, что дыхательный коэффициент у дисков из сильно перезревших [c.488]

Митохондриальные факторы, усиливающие гликолиз, не могли образоваться в момент препаративной обработки тканей, так как они были получены нами без повреждения структуры митохондрий и без применения каких-либо химических агентов, способных к денатурирующему воздействию. Эти усиливающие вещества выделяются самими митохондриями, секретируются ими и могут быть изолированы из секрета митохондрий в нативном состоянии. [c.116]

Для выяснения этого вопроса свеженарезанная п прираневая ткани клубня картофеля гомогенизировались в присутствии 0,5 М сахарозы п 0,2 М аскорбиновой кислоты Гомогенат центрифугировался в течение 10 мии. при 1000 g. Образовавшийся осадок отбрасывался, а надосадочиая жидкость центрифугировалась вторично в течение 30 мин. прп 16 000 g. Полученный осадок митохондрий промывался при той же скорости центрифугирования, суспендировался и осаждался трихлоруксусной кислотой до конечной концентрации 5 %. После часового стояния па холоде осадок митохондриального белка последовательно промывался сначала 50%-ным, а затем 96%-ным этиловым спиртом п серным эфиром для удаления липидов. Затем проводился гидролиз в течение 10 мпн. в 1н. КОП [c.65]

Пересчитав получеппые данные на образовавшийся адеио-зинтрпфосфат, получим, что 15 г сырой ткани, удаленной от места повреждения на 4 мм, образует на 1,55 мкМ АТФ больше, чем соответствующее количество свеженарезанной контрольной ткани. Если предположить, что такой же активностью обладает митохондриальный белок прираневой зоны клубня (обнаружить се мешают фенолы, присутствующие в тканях этой зоны), то можно допустить, что выход энергии в этих тканях повышен болое чем наполовину. [c.70]

На проницаемость мембраны могут влиять различные факторы. Так, инсулин повышает проницаемость плазматической мембраны мышечных клеток для глюкозы, стимулируя транспорт глюкозы из крови и межклеточных пространств внутрь клеток скелетной и сердечной мышцы и жировой ткани. При интенсивном течении процессов окислительного фосфорилирования, приводящих к накоплению больших количеств АТФ, внутри митохондрий происходит взаимодействие АТФ с актомиозинподобным белком мембран, сопровождающееся конформационными изменениями белка. А это в свою очередь приводит к сокращению митохондриальных мембран и уменьшению их проницаемости, т. е. к снижению скорости транспорта веществ через мембрану митохондрий. С уменьшением концентрации АТФ внутри митохондрий проницаемость мембран увеличивается. По-видимому, митохондриальная мембрана участвует в регуляции энергетического обмена клетки. [c.439]

Организация организма как единой целостной системы а — организм б — мышцы в — мышечная ткань г — мышечное волокно д — миофибрилла е — органелла (митохондрия) ж — субмолекулярный комплекс (митохондриальная мембрана) [c.9]

Нашими исследованиями (Курский, Зряков, 1969, 1970) также установлено, что под влиянием интрацистернально введенного 5-ОТ в ткани мозга повышалось содержание пуриновых нуклеотидов за счет увеличения количества АТФ, АДФ, АМФ и уменьшения уровня неорганического фосфата в митохондриальной фракции. В растворимой фракции мозга содержание АМФ уменьшалось. При этом возрастала интенсивность включения метки 1- С-глицина и 8- С-аденина, а также Р в АТФ, [c.182]

Авторадиографически установлено, что под влиянием 5-ОТ интенсивность включения Са в гипоталамус повышалась в 6 раз, в кору больших полушарий — в 5, в мозжечок — в 3.8, в продолговатый мозг — в 2.7 и таламус — в 2.5 раза. При этом было отмечено несколько иное изменение содержания радиоактивного изотопа в отдельных субклеточных фракциях мозга, чем нерадиоактивного кальция увеличивалось его содержание в митохондриальной, микросомной и растворимой фракциях, но снижалось во фракции синаптосом. Это вызвало необходимость изучить динамику поступления Са в различные субклеточные фракции ткани мозга. Установлено, что под влиянием интрацистернально и внутривенно введенного 5-ОТ интенсивность внедрения Са в ткань мозга достигла максимума не через 30 мин., как у контрольных животных, а уже на 15-й минуте после внутривенного введения a lj. [c.184]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология