Нингидрин, реакции с пептидами

Идентификация аминокислот и пептидов во фракциях. А. Нингидриновая реакция. Нингидрин реагирует со всеми аминокислотами, имеющими а-МНа-группу, давая фиолетовое окрашивание, за исключением пролина или оксипролина, в реакции с которыми нингидрин дает желтое окрашивание.Некоторые примеси (медь, кадмий и др.) могут влиять на цвет пятен. Для проявления хрома- [c.192]

Нингидриновая реакция. Цветная реакция на аминокислоты и пептиды, протекающая при их нагревании с нингидрином эта реакция широко применяется для выявления аминокислот и пептидов и количественной оценки их содержания. [c.1014]

Анализ. Обычно анализ а-А. основан на взаимод. с нин-гидрином, в результате к-рого А. расщепляется до альдегида, СО2 и NH3, а NH3 образует с нингидрином фиолетовый краситель. Для количеств, определения измеряют объем выделившегося Oj или, чаще, фотометрируют образующийся краситель. Последний метод используется в автоматич. хроматографах, позволяющих разделять на сульфокатионитах и количественно анализировать сложные смеси аминокислот и пептидов. Еще более чувствителен флуоресцентный анализ продуктов реакции А. с о-фта-левым диальдегидом. Быстро развивается лигандообменный хроматографический анализ А. и пептидов на си-ликагельных сорбентах в присутствии ионов меди. Бумажная и тонкослойная хроматография чаще используются для качественного анализа. Измерение объема N3, выделяющегося при дезаминировании А. азотистой к-той, а также титрование А. щелочью в избытке формалина (методы Ван Слайка и Сёренсена) сохранили лишь историческое значение. [c.138]

Нингидриновая реакция — качественная реакция на а-аминокислоты и пептиды, основанная на образовании окрашенных продуктов при их нагревании с нингидрином. [c.202]

Существенные экспериментальные трудности, которые до последнего времени ограничивали исследования в области белковой химии, в значительной степени обусловливались отсутствием простых и надежных способов анализа аминокислот. Лишь благодаря развитию за последние два десятилетия ионообменной и распределительной хроматографии удалось разработать автоматический метод количественного анализа аминокислот с использованием окисления аминокислот нингидрином и фотометрирования продуктов реакции [9]. Однако стремительное развитие химии белков и пептидов, среди которых обнаружены важнейшие биорегуляторы и антибиотики, уже сейчас предъявляет новые требования по чувствительности и быстроте анализа. Сложность аппаратурного оформления и дороговизна эксплуатации, безусловно, ограничивают применение автоматического анализатора Мура и Штейна и в значительной степени обусловливают интерес к разработке новых методов аналитического определения аминокислот, свободных от указанных недостатков. [c.252]

Образование продуктов, обладающих флуоресценцией (сами реагенты не флуоресцируют), позволило значительно увеличить чувствительность метода. С флуорескамином открывается 10 —10 " молей аминокислот. В отличие от нингидрина реакции не мешает присутствие аммиака. Реакция протекает при комнатной температуре при pH 7,0— 9,0. Поскольку флуорескамин в водной среде разрушается (в течение нескольких секунд), для приготовления раствора используют безводные жидкости (ацетон, ацетонитрил, диметилсульфоксид и др.). Продукт реакции стабилен в течение нескольких часов. Пептиды и белки, проявленные флуорескамином, могут использоваться для определения аминокислотного состава и аминокислотной последовательности. [c.130]

Пептиды дают нингидринную реакцию, но в отличие от аминокислот, при этом не выделяется СО2. [c.504]

Анализ элюируемых фракций. Содержание пептидов в элюатах можно определять количественно посредством реакции с нингидрином или по Фолину — Лоури, а также одним из реактивов на специфические аминокислотные остатки (см. стр. 129—131). Метод Фолина — Лоури является более чувствительным, особенно в случае длинноцепочечных пептидов. Чувствительность нингидринной реакции на пептиды может быть значительно увеличена путем предварительного проведения быстрого щелочного гидролиза [35]. Если нингидринную реакцию предполагается использовать при анализе фракций с колонок, для элюирования которых будут применяться пиридиновые или коллиди-новые буферы, то соответствующие растворители необходимо предварительно перегнать над нингидрином для удаления взаимодействующих с ним примесей. Если же при анализе фракций, содержащих пиридиновые или коллидиновые буферы, необходимо использовать реакцию Фолина — Лоури, то пробы упомянутых фракций следует предварительно упарить досуха для удаления из них пиридина и коллидина, которые мешают этому определению. Это упаривание удобно проводить путем отбора аликвотных проб соответствующих фракций в аналитические пробирки [c.119]

Практически в любом биохимическом исследовании очень важно уметь обнаруживать и точно определять ничтожные количества специфических соединений. Чаще всего для этого используют особые реагенты— индикаторы, которые при взаимодействии со специфическими соединениями определенным образом окрашиваются. Например, для выявления на хроматограмме аминокислот или пептидов, присутствующих в очень малых количествах (доли микромоля), хроматограмму опрыскивают нингидрином (дополнение 8-Е). Если выявляемое соединение находится в растворе, то по интенсивности окрашивания можно определить его количество. Фенолы и концентрированная серная кислота окрашивают сахара (в растворе или на хроматографической бумаге) в красный цвет. Эта реакция лежит в основе колориметрического анализа углеводов. Восстанавливающие сахара выявляют на хроматограммах, опрыскивая последние раствором нитрата серебра. [c.179]

Сущность метода. Положительную реакцию на нингидрин (образование с этим реактивом соединения, окрашивающего раствор в фиолетовый цвет) показывают в основном алифатические азотсодержащие вещества (амины и имины), аминосахара, амино- и иминокислоты, пептиды, содержащие в молекуле менее 10 аминокислотных групп, и др. Такие вещества, как п-фенилендиамин, п-аминофенол, аминотиолы, дают эту реакцию лишь в очень слабой мере (примерно в 10 раз слабее, чем основные вещества, перечисленные выше). Совсем слабо реагируют полипептиды и некоторые соединения, не содержащие азот (оксальдегиды, окси-кетоны, катокислоты). [c.67]

Нингидринная реакция применима для количественного определения простых пептидов, пептидов с высоким содержанием лизиновых остатков или длинноцепочечных пептидов после их предварительного быстрого щелочного гидролиза [35]. Для проведения этого гидролиза аликвотные части пептидов в специальных полипропиленовых ампулах упаривают досуха в сушильном шкафу. В каждую ампулу добавляют по 0,15 мл 13,5 и. раствора едкого натра и нагревают ампулы в автоклаве в течение 20 мин нод давлением примерно 1 кг см . После охлаждения щелочь нейтрализуют, добавляя в каждую ампулу по 0,25 мл уксусной кислоты. [c.133]

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Для количественного определения аминокислот и пептидов по приведенным выше реакциям требуется колориметр или фотометр, с помощью которых обнаруживают изменения в свето-поглощении, связанные с протеканием реакций. Поскольку нингидрин наиболее широко используется для обнаружения аминокислот и белков, он послужит основой для дальнейшего обсуждения колориметра. [c.26]

Кроме детекторов, предназначенных для количественного анализа аминокислот и пептидов по реакции с нингидрином или другими реагентами, дающими цветную реакцию, были описаны Также и другие детекторы. Полярографическое определение аминокислот в виде их медного комплекса основано на образовании из двух молекул аминокислоты и одного иона меди темно-синего комплекса. Этот комплекс пропускают через ячейку поляро-графа, где определяется количество меди [122]. Аминокислоты можно также определять путем использования динитрофторбен-зола с последующим фотометрическим определением ДНФ-ами-нокислот при 420 нм [123]. [c.27]

Этот вариант предусматривает стадию гидролиза. Анализы проводят в трех магистралях, в двух из которых качественно определяют гидролизованные и негидролизованные пептиды с помощью реакции с нингидрином, а третья используется для анализов углеводов. Схема движения жидкостей по разветвленному трубопроводу представлена на рис. 24.6. Так как система довольно сложная и размеры труб имеют решающее значение, в табл. 24.3 приведены эти размеры [22]. [c.148]

Указанные недостатки удалось преодолеть благодаря щелочному гидролизу [4]. Эта методика основана на полном гидролизе всех пептидных связей и последующем определении концентрации свободных аминокислот по реакции с нингидрином. Кроме того, при нагревании полностью удаляется аммиак, присутствующий в образце, что очень сильно снижает фон. Щелочной гидролиз позволяет детектировать пептиды, дающие слабое [c.391]

Чувствительный метод обнаружения пептидов основан на интенсивной флуоресценции продукта конденсации первичной аминогруппы с нингидрином и фенилацетальдегидом [12]. Флуоресцентный метод в 10—100 раз чувствительнее по сравнению с колориметрическим. Важным преимуществом является также отсутствие реакции с аммиаком и более интенсивная флуоресценция пептидов по сравнению с аминокислотами при разных значениях pH. [c.395]

Широко изучена реакция между -аминокислотами и нингидрином. Установлено, что окрашенные соединения образуются с аминокислотами, пептидами, белками и другими соединениями, имеющими свободные аминогруппы. [c.24]

Анализ а-А. обычно основывается на их взаимодей-ствии с нингидрином (тракетогидринденгидрат), в результате к-рого А. расщепляется до альдегида, СО и NHз, а нингидрин образует с NHs фиолетовый краситель. Для количественного определения измеряют объем выделившейся СО2 или, чаще, фотометрируют образующийся краситель. Этот метод используется в автоматич. анализаторах, позволяющих разделять на сульфокатионитах и количественно анализировать сложные смеси А. и пептидов. Ароматич. амины и А. также дают цветную реакцию с нингидрином. [c.51]

Шредер [33] решил проблему автоматического контроля в хроматографии пептидов следующим образом после частичного гидролиза пептидов под действием гидроксида проводится известная реакция с нингидрином. Часть образца отбирается из [c.81]

В книге достаточно детально рассмотрены основные преимущества и недостатки классического метода определения аминокислотного состава белков с помощью ионообменной хроматографии по Муру и Стейну даны указания относительно выбора ионообменников, подготовки реактивов и численной интерпретации результатов. Значительное место также уделено изложению принципов анализа аминокислот методом газожидкостной хроматографии. Применение этого метода, обладающего на 2—3 порядка большей чувствительностью по сравнению с нингидринной реакцией по Муру и Стейну, позволяет значительно снизить количества белка, требуемые для определения его состава. Анализ аминокислот с помощью газожидкостной хроматографии пока еще не находит широкого применения, однако имеющиеся в ли-Фературе данные позволяют считать этот метод весьма перспективным. Кроме того, обсуждаются возможности использования газожидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектромет-рией для определения состава и аминокислотной последовательности в пептидах. [c.4]

В их состав часто входит малое количество фосфора в виде Н3РО4 (протеиды), галоидов, металлов. Белки обладают свободными карбоксильными и (или) аминогруппами, в результате чего они амфотерны (обычно с преобладанием кислотного или основного характера, в зависимости от преобладания групп СООН или МНг в молекуле). Поэтому белки растворимы также в кислотах и щелочах. Постепенно был открыт ряд цветных реакций на белки, исторически сыгравших большую роль. Некоторые из этих реакций были общими для всех белков (или пептидов), например биуретовая реакция (фиолетовое окрашивание с щелочным раствором двухвалентной меди), нингидринная реакция (свойспюнная аминокислотам и заключающаяся в возникновении фиолетовой окраски при обработке смеси, содержащей а-аминокислоты, нингидрином — гидратом трикетогидриндена). Другие цветные реакции характерны для отдельных аминокислот, входящих в состав белка (например, ксантопротеиновая реакция — появление желтой окраски при нитровании азотной кислотой тирозина и т. д.). [c.690]

Цветная реакция Фолина—Лоури очень удобна для обнаружения пептидов. Она наиболее чувствительна в случае длинноцеиочечных пептидов, содержащих фенольные группы, однако с ее помощью можно определять и простые пептиды неароматического характера. В отличие от нингидринной реакции реакция Фолина — Лоури не требует нагревания и ее проведению не мешает присутствие аммиака. Пиридин и коллидин затрудняют проведение реакции, поэтому указанные соединения должны быть удалены из образца путем его высушивания. Значение pH образца должно быть близко к нейтральному. Кривая зависимости интенсивности окраски от концентрации не линейна, поэтому для точного измерения концентрации необходимо строить стандартную калибровочную кривую (см. табл. 5). [c.131]

Реакцию с нингидрином дают не только а-, но и р- и у-аминокислоты, и т. д. пептиды, белки, амины и аммиак. Пролин дает с нингидрино.м Желтую окраску, которая при продолжительном нагревании переходит в красно-фиолетовую. Реакцию нингидрина с пролином изображают следующей гипотетической схемой [c.468]

Нингидринный 1 мл Т + 1—2 капли 0,03%-ного нингидрина нагреть до кипения От желтой или пурпурной до синей 246,269м Цветные реакции для индивидуальных аминокислот см. Шмидт [272] Мартин и Синдж [273] см. также Файгль [198], стр. 281—284 Полож. аминокислоты со своб. КНг и СООН-грунпами белки, пептиды, перв. амины, аммиак [c.59]

Общепринято определять пептиды с помощью нингидриновой реакции. Добавление Сс1 к раствору нингидрина не только увеличивает ее чувствительность, но и повышает стабильность окрашивания. Ы-ацильные пептиды можно выявлять в реакции с хлором [67]. Некоторые аминокислоты выявляются реакциями специфического окрашивания, например гистидин — реакцией Паули, аргинин — реакцией Сакагуши. С помощью этих же реакций можно обнаруживать и пептиды, содержащие гистидин и аргинин. [c.38]

Нагрузка полимера растущими пептидными цепями, как правило, невелика и составляет 0,1 — 0,3 ммоля пептида на 1 г полимера. Полнота реакции ацилирования оценивается на основании реакции с нингидрином и.аи флуорескамином (см. с. 35 и 36) и.аи физико-химическими мето 1ами. [c.146]

Разделение на фильтрах из геля сефадекса позволяет использовать различие в молекулярном весе [21, 24, 126, 127]. Этот метод по своей эффективности приблизительно соответствует диализу, но может быть осуществлен гораздо быстрее. Линднер и др. [128] экстрагировали сухой препарат задней доли гипофиза свиньи (активность окситоцина и вазопрессина 2—3 Е /мг) пиридиноацетагным буфером. После нейтралит зации раствор пропускали через колонку с сефадексом G-25, элюировали этим же буфером и получили две фракции, дающие положительную реакцию с нингидрином. Первая, более подвижная фракция содержит окситоцин и вазопрессин в виде комплексов пептид — белок вторую фракцию, состоящую из низкомолекулярных неактивных соединений, отбрасывали. Десятиминутная обработка первой фракции 1 М муравьиной кислотой при 70 приводит к диссоциации комплекса и при повторном пропускании через сефадекс G-25 и элюировании 1 М муравьиной кислотой получили медленно передвигающуюся фракцию вазопрессина и окситоцина с активностью приблизительно 100 Е мг. [c.409]

Основы метода. Сайндж [10] показал, что сырой картофельный крахмал может быть употреблен в качестве неподвижной водной фазы. Если подвижной фазой служит водонасыщенный н-бутиловый спирт, то аминокислоты и пептиды двигаются на такой крахмальной колонке в виде резко очерченных полос в порядке, определяемом нх коэфициентами распределения между водой и н-бутиловым спиртом. Разделение аминокислот и пептидов на фракции может быть прослежено, если пропускать 0,5 д эфирный раствор нингидрина через проявленную /т -бутило-вым спиртом колонку. Эта реакция, как указывает Сайндж, позволяет различать аминокислоты от пептидов, так как окрашиваются только аминокислоты пептиды не дают окраски до нагревания. Хроматограмма на крахмале оказалась пригодной для разделения частичных гидролизатов белка, что очень важно для решения вопросов о структуре белка. [c.389]

Обычно пептиды при реакции с нингидриновым реагентом дают слабое окрашивание, так как они реагируют только свободной аминогруппой. Если же пептид подвергнуть щелочному гидролизу, то все освобождающиеся аминокислоты будут реагировать с нингидрином, давая интенсивное окрашивание. Метод [c.38]

Применение метода газовой хроматографии альдегидов, образующихся из аминокислот при реакции с нингидрином, ограничивается определением нейтральных аминокислот (Хантер, 1956 Златкис, 1960). Метод газожидкостной хроматографии н- и изоамиловых эфиров N-аце-тиламинокислот при сравнительно низких температурах (95—148 °С) был применен при анализе гидролизатов коротких пептидов, элюированных с бумажных хроматограмм (Мейстер, 1961). Этот метод является чрезвычайно перспективным. [c.642]

При проявлении пептидов используется реакция с нингидрином, которая, однако, не является чувствительной для высших пептидов. Более разумно применение реакции N-галогенирова-ния в следующей модификации [34] пластину увлажняют, а затем помещают в атмосферу хлора (эксикатор, на дно которого налита смесь равных объемов 1,5%-го раствора КМнО и 10%-й НС1) на 15—20 мин. Затем избыток хлора удаляют, помещая пластину в хорошо вентилируемом месте, и опрыскивают толидиновым реактивом, который приготовляют из 160 мг о-толидина, 30 мл уксусной кислоты, 1 г KJ и добавляют дистиллированную воду до объема 500 мл. [c.315]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология