Определение скоростей синтеза ДНК

Определение скорости синтеза ДНК в популяции клеток или в индивидуальных клетках может потребоваться в качестве меры скорости роста клеток или при изучении клеточного цикла, или при непосредственном изучении метаболизма ДНК. Однако при добавлении тритированного тимидина к культивируемым клеткам возникает ряд проблем. [c.163]

Количество определенного фермента в клетке может регулироваться на нескольких уровнях на этапе транскрипции, трансляции, а также в процессе сборки и разрушения ферментного белка (см. рис. 28). В иерархии регуляторных воздействий наиболее сложный механизм, контролирующий количество ферментов в клетке, связан с процессом транскрипции. Специфические химические сигналы могут инициировать или блокировать транскрипцию определенного участка ДНК в иРНК. В случае индукции образованная иРНК участвует в определенной последовательности реакций, называемой трансляцией и заканчивающейся синтезом полипеп-тидных цепей. Регуляция белкового синтеза на уровне трансляции может осуществляться на любом из ее этапов, например на этапе инициации, элонгации и др. Не исключена также возможность изменения времени жизни иРНК под воздействием разных эффекторов, в том числе конечных продуктов метаболических путей. Хотя механизмы регуляции синтеза белка на уровне трансляции еще точно не установлены, ясно, что на этом этапе имеются широкие возможности для регуляции скорости синтеза различных белков. [c.117]

В таблице 1 приведены результаты определения скорости синтеза мочевины, парных соединений фенола и окисления тирозина в срезах печени белых крыс, подвергнутых затравке кре- инг-газом и получавших глютаминовую кислоту и витамин Вь [c.457]

Было установлено - что в случае использования растворителей появляется еще одна возможность уменьшения расхода кислоты — путем повышения ее концентрации. Если обычно в синтезе используют 73%-ную кислоту, то в присутствии растворителей применение даже 85%-ной кислоты не приводит к увеличению доли нежелательных побочных реакций. При работе с такой концентрированной кислотой очень важно соблюдать порядок добавления реагентов, а именно, к смеси фенола, толуола и тиогликолевой кислоты добавлять раздельно (но одновременно) с определенной скоростью серную кислоту и ацетон. Способ позволяет снизить расход кислоты еще вдвое. Например, используя толуол и промотор — тиогликолевую кислоту — при указанном выше соотношении компонентов (кроме количества кислоты, которое берется примерно вдвое меньше), расход серной кислоты составил всего 0,9 моль на 1 моль ацетона (0,4 тяа т дифенилолпропана), а количество отработанной 25%-ной кислоты снизилось до 1,6 m на 1 m дифенилолпропана. Соответственно уменьшению расхода воды на промывку снижается количество фенол содержащих сточных вод — до 1,34 m на 1 т дифенилолпропана. [c.115]

Определение скоростей синтеза ДНК [c.163]

Для определения скорости синтеза белков определяют включение в НИХ аминокислот. Ход эксперимента осуществляется согласно [c.91]

Решение. Из рис. У1-9 следует, что снижение давления, согласно принципу Ле Шателье, сдвигает равновесие реакций вправо (выделение водорода) процесс при этом проходит при более низкой температуре. Выбор оптимальных условий зависит от того, какой из продуктов будет целевым, нужно ли уменьшить содержание побочного продукта до минимума (например, иногда побочный продукт используется в другом синтезе), можно ли применить рециркуляцию, необходимо ли добиться определенной скорости реакции (кинетический фактор). Приняв, что реакция проходит достаточно быстро, рассмотрим указанные в условиях примера случаи. [c.179]

Обычно в промышленных условиях полимеризацию проводят в присутствии смеси ионных и неионных эмульгаторов. Это, как правило, увеличивает скорость процесса и повышает устойчивость латексов по сравнению с латексами, синтез которых проводят в присутствии одних только НПАВ. Таким путем можно получать бутадиен-стирольные, бутадиен-нитрильные и некоторые другие латексы. С увеличением доли НПАВ в смеси эмульгаторов наблюдалось возрастание среднего размера частиц. При этом суммарное количество эмульгатора, необходимое для достижения определенной скорости процесса полимеризации, уменьшается. Процесс полимеризации в системах с НПАВ можно проводить в широком диапазоне значений pH, но в нейтральной среде скорость полимеризации обычно невелика. [c.601]

Здесь Р — безразмерный коэффициент пересчета к рабочим условиям. При Я = 3-10 Па и / = 470—550°С р ж 0,8. Энергия активации для промышленного железного катализатора Е — = 170 кДж/моль. Для оптимальных температур, определенных ранее, константа скорости синтеза, рассчитанная по уравнению (VI. 80), имеет следующие значения [c.149]

Представления об энергетической неоднородности поверхности катализатора были использованы М. И. Темкиным при изучении кинетики многих каталитических реакций и особенно синтеза аммиака. Разработанная им теория объясняет наблюдаемые на опыте дробные порядки реакций. Для процесса синтеза аммиака М. И. Темкин вывел общепринятое в настоящее время кинетическое уравнение, при помощи которого можно объяснить результаты более ранних исследований, а также и поздних исследований, не получивших до этого определенного истолкования. М. И. Темкин установил, что при синтезе аммиака на железном катализаторе единственным адсорбирующимся газом является азот и скорость реакции определяется скоростью его адсорбции. При выводе уравнения было учтено, что активные центры отличаются своими энергетическими характеристиками и на разных активных центрах адсорбция идет с различной скоростью. Упомянутое выше уравнение для скорости синтеза аммиака, находящееся в прекрасном согласии с опытом, имеет вид [c.278]

Мн. репрессоры могут существовать как в активной, так и в неактивной форме в зависимости от того, связаны они или нет с индукторами шш корепрессорами (соотв. субстраты, в присут. к-рых специфически повышается шш понижается скорость синтеза определенного фермента см. Регуляторы ферментов)-, эти взаимод. имеют нековалентную природу. [c.217]

Кажущаяся стабильность химического состава целостного организма является результатом существования определенного равновесия между скоростями синтеза и распада его составляющих. Внедрение в биохимическую и клиническую практику метода меченых атомов позволило доказать, что белки нужны не только растущему, но и сформировавшемуся организму, когда его рост прекратился, т.е. имеются доказательства существования в организме механизма постоянного обновления химических составных частей тела. При нормальных физиологических условиях, как и при патологических состояниях, скорости синтеза и распада специфических веществ определяются, помимо нервно-гормонального влияния, химической природой веществ и внутриклеточной их локализацией. В растущем организме скорость синтеза многих компонентов органов и тканей преобладает над скоростью их распада. Тяжелые изнуряющие болезни, а также голодание, напротив, характеризуются преобладанием скорости катаболизма над скоростью синтеза. Почти все белки тела, включая структурные белки, гемоглобин, белки плазмы и других биологических жидкостей организма, также подвергаются постепенному распаду и синтезу. Например, более половины белков печени, сыворотки крови и слизистой оболочки кишечника подвергается распаду и ресинтезу в течение 10 дней. Медленнее обновляются белки мышц, кожи и мозга. [c.410]

Возможны различные варианты температурного режима синтеза фторфлогопита с использованием донного холодильника. Рассмотрим некоторые из этих вариантов с целью определения скорости снижения температуры печи й1 йх при условии, что фронт кристаллизации перемещается с постоянной скоростью с. [c.33]

На основании всех приведенных кинетических уравнений мол<но сделать заключение, что скорость синтеза углеводородов и выход продуктов с единицы объема катализатора за единицу времени повышаются с увеличением давления и температуры (температурные коэффициенты, определенные для скорости синтеза на кобальтовых и железных катализаторах, равны 1,6— 1,8 на 10 °С). Данные о влиянии некоторых факторов на синтез углеводородов приведены в табл. 8,4. [c.274]

В процессе синтеза газ пропускается с определенной скоростью через слой катализатора. [c.430]

Интенсивность метаболизма, или метаболическая активность, вещества складывается из двух процессов — из синтеза, или новообразования, и распада молекул данного вещества. Наиболее точным способом оценки новообразования вещества является определение скорости, или активности, включения радиоактивной метки. Распад вещества можно оценить по скорости выведения, или потери метки, этим веществом. В совокупности включение и выведение радиоактивной метки дают представление о скорости обновления молекул и метаболической активности исследуемого вещества. Сочетая введение в НК различных меток (например, Рзг и азотистые основания, меченные тритием), можно составить представление о скорости обновления всей молекулы НК и ее отдельных структурных элементов. [c.123]

Третий тип механизмов, регулирующих метаболизм, связан с изменением концентрации данного фермента в клетке. Концентрация всякого фермента в любой данный момент определяется соотношением скоростей его синтеза и распада. Скорость синтеза некоторых ферментов при определенных условиях резко возрастает соответственно увеличивается и концентрация данного фермента в клетке. Если, например, животное получает рацион, богатый углеводами, но бедный белком, то в печени у него оказывается крайне низким содержание ферментов, катализирующих в обычных условиях распад аминокислот до ацетил-СоА. Поскольку при таком рационе эти ферменты практически не нужны, они и не вырабатываются в больщих количествах. Стоит, однако, перевести животное на рацион, богатый белком, и уже через сутки в его печени заметно повысится содержание ферментов, которые потребуются теперь для расщепления перевариваемых аминокислот. Клетки печени, следовательно, обладают способностью включать или выключать биосинтез спе- [c.390]

Все полярные липиды в мембранах постоянно обновляются в процессе метаболизма при нормальных условиях в клетке устанавливается динамическое стационарное состояние, при котором скорость синтеза липидов равна скорости их распада. Расщепление липидов катализируется гидролитическими ферментами, способными расщеплять строго определенные ковалентные связи. Например, расщепление фосфатидилхолина, главного мембранного липида, происходит при помощи нескольких разных фосфолипаз. Способ их действия показан на рис. 21-20. [c.642]

Синтез крахмала нефосфоролитическим путем может быть обнаружен в условиях, исключающих фосфорилирование. А. Н. Петрова [16] показала этот путь синтеза полисахарида из глюкозы в ломтиках клубней. Пользуясь разработанной ею методикой, мы провели сравнительное определение скорости синтеза полисахарида в контрольных и облученных клубнях. Оказалось, что в облученных клубнях синтез происходит намного медленнее. Кроме того, прямые определения синтезирующей активности фосфорилазы показали, что она в полтора-два раза слабее у облученных клубней [12]. [c.233]

Определение скорости синтеза РНК по включению Р или других меченых шредщественников (например, С" -оротовой кислоты). [c.6]

Наиболее медленной стадией синтеза аммиака на железном и некоторых других катализаторах является химическая адсорбция азота на поверхности катализатора. Это доказывается, в частности, тем, что экспериментально определенные скорости синтеза аммиака и химической адсорбции азота на одном и том же образце катализатора имеют приблизительно одинаковые значения. Следствием этого является некоторое увеличение скорости синтеза при избытке азота в азотоводородной смеси. [c.167]

Включение меченых соединений в бактериальные клетки применяется для определения скорости синтеза и количества синтезированных веществ, а также фракционирования низко- и высокомолекулярных соединений, содержащихся в клетках [2]. После инкубации клеток с меченым субстратом и фракционирования метабо- литов в каждой фракции можно определить радиоактивность. [c.283]

При определении скорости синтеза различных веществ учитывают и другие факторы. Прежде всего это разбавление добавляемых извне субстратов немечеными предшественниками, имеющимися в клеточных пулах. В кинетических экспериментах необходимо определить скорость насыщения пула радиоактивными предшественниками. В описанных выше методиках при использовании для оценки распределения радиоактивности С-соединений некоторые клеточные компоненты не учитываются. Например, во фракции РНК оказываются продукты гидролиза тейхоевых кислот и полифосфатов а вместе с белком осаждается пептидогликан. [c.291]

Поскольку удельная радиоактивность H-dTTP является одним из факторов, определяющих количество включающейся в ДНК радиоактивности (либо в общем количестве импульсов в минуту, либо в числе зерен серебра на радиоавтографах), и поскольку эта удельная радиоактивность может меняться в зависимости от концентрации тимидина в среде и от состояния клеток, то количественное определение скорости синтеза ДНК по включению Н-тимидина таит в себе множество подводных камней. [c.167]

При расчете количества АХ следует учитывать, что для равномерно меченой глюкозы берется только 1/3 ее УР, так как только 2 из б меченых атомов идет на формирование ацетильной группы АХ. Для 1- С-глюкозы и б- С-глюкозы УР делят пополам, так как из двух образующихся триоз лишь одна, меченая, идет на синтез АХ. Принимается, что радиоактивные субстраты не разбавляются нерадиоактивными тканевыми субстратами. Для этого существуют следующие основания 1) сравнение количества АХ, синтезированного из С-предшественников, с количеством, определенным другими методами, дает сходные результаты 2) включение ацетильной и холиновой группы в АХ примерно эквивалентно (Browning, S hulman, 1968). Для определения скорости синтеза измеренное количество АХ необходимо разделить на время инкубации с радиоактивным предшественником (нмоль г мин ). [c.89]

Из рис. 108 видно, что для каждого выхода аммиака скорость синтеза достигает своего максимального значения при определенной температуре, причем эта температура тем выше, чем меньше выход аммиака. Поскольку при этих температурах двстигается наибольшая скорость реакции, они наиболее выгодны для ведения процесса, т. е. являются оптимальными температурами. Точки, соответству-юш ие максимальным скоростям синтеза для различных выходов [c.212]

Механизм и кинетику образования высокополимерных соединений изучают различными методами, в том числе путем определения скорости процесса при разных условиях реакции, определения химического состава продуктов реакц.ии, а также физических свойств и химического строения полимера в процессе его образования. Полученные данные используют для усовершенствования промышленных процессов синтеза полимеров и для установления влияния условий синтеза на свойства получаемых полимеров. [c.86]

В процессе исследования скорость окисления графита определяли по количеству окисленного графита за единицу времени. С этой целью пробы выделенных из плава алмазов, содержащих остаточный графит, промывались дистиллированной водой, высушивались и взвешивались. Неалмазный углерод (графит) удаляли хр.о-мовой смесью. Количество графита в пробе алмазов устанавливали по разности. Сопоставление скорости окисления графита при различных параметрах осуществлялось по убыли в массе графита, содержащегося в спеках после синтеза алмазов. Результаты исследований по определению скорости окисления графита приведены в табл. 38. По представленным данным получены кинетические кривые окисления графита, не перешедшего при синтезе в алмаз, отображающие суммарный процесс окисления углерода по основным и побочным реакциям в диапазоне температур 590— 820 К. [c.479]

В клетках выработались механизмы не только регуляции скорости синтеза отдельных аминокислот, но и координирование их синтеза, поскольку для белкового синтеза аминокислоты нужны в определенных соотношениях. Так, у Е. соН синтез четырех аминокислот, образующихся из аспартата — лизина, метионина, треонина и изолейцина, регулируется на первом этапе перехода аспартата в аспартилфосфат. Регуляторный фермент аспартилкиназа имеет три изофермента, регулируемых независимо друг от друга как по аллостерическому механизму, так и путем изменения скорости их синтеза в клетке. [c.407]

Исключение в этом случае могут составить такие мономеры, которые способны наращивать эластичные блоки. Они либо существенно тормозят процесс, либо требуют весьма медленного, постепенного введения млномера для поддержания в каждый данный момент концентрации, обеспечивающей определенную скорость процесса механосинтеза. Так, при сополимеризации метилмета кри-лата с натуральным каучуком в лабораторном пластикаторе в те--чение 1 ч прн содержании мономера 128% его заполимеризовалось 94%, а при 161% (более мягкая смесь) — только 2%. В этом случае полезно понизить температуру переработки до обеспечивающей оптимальный механокрекинг и снижать ее в соответствии с увеличением содержания эластичного компонента по ходу синтеза. [c.186]

Переработка жидких каменноугольных смол, метанирование, синтез Фишера — Тропша Термическая и химическая стабилизация катализаторов и носителей Разработка катализаторов для процесса ожижения угля, переработка жидких каменноугольных смол, определение удельной каталитической активности Создание новых каталитических композиций, контролируемое изменение каталитических свойств, обеспечение более развитой поверхности катализаторов Выявление влияния серы на каталитическую переработку угля, защита от отложения углерода, удаление углерода Углубление понимания основных стадий переработки угля, определение скорости, лимитирующей процессы, выявление направления разработки процесса Разработка эффективных методик испытания катализаторов, интерпретация экспериментальных данных [c.17]

Примером последнего эффекта служит промышленная эксплуатация завода в Сасолбурге (Южная Африка), где в качестве катализатора используют промотированное железо, которое почти всегда заменяют приблизительно через 50 сут [15]. Синтез-газ очищают от серы до ее содержания не более 0,01 млн-, что достаточно для нормальной работы. Однако при использовании сильно отработанного катализатора температуру повышают, чтобы сохранить постоянную скорость синтеза. Высокие рабочие температуры приводят к изменению распределения продуктов в сторону более низких углеродных чисел. При определении продолжительности службы катализатора приходится принимать компромиссные решения либо идут на повышение стоимости катализатора в результате его относительно частой замены, либо соглашаются с ухудшением продукционной селективности. Пихлер изучал подобное явление на кобальтовых катализаторах, для которых наблюдается медленное ухудшение работы во времени [5]. Старение катализатора отчасти происходит вследствие образования сульфида н сульфата или отложения углерода и спекания в результате недостаточного контроля за температурой. [c.262]

Исследуемая реакция проводилась в жидкой фазе в лабораторном реакторе периодического действия нри атмосферном давлении. В реактор загружали исходные о-аминофенол, о-Н1ггрофснол и минеральную кислоту. Акролеин (или глицерин) дозировали с определенной скоростью. По окончаншг синтеза реакционную массу нейтра- [c.102]