Белки реакция с нингидрином

Белки, их химические и физико-химические свойства. Методы выделения и очистки белков классические —диализ, высаживание из растворов современные — распределительное и ионообменное хроматографирование, хроматографирование па молекулярных ситах, электрофорез. Индивидуальность белков. Цветные реакции белков биуретовая, ксантопротеиновая, нингидринная, реакция Миллона. Первичная, вторичная, третичная и четвертичная структуры белков, факторы, опре- [c.248]

Rf может принимать значения от О до 1, чаще всего 0,90—0,25. Rf зависит от различных факторов стадии проявления хроматограммы сорта бумаги, направления волокон в куске бумаги реакции, применяемой для проявления концентрации разделяемых веществ, температуры, времени проявления и др. Чтобы получить наиболее надежные значения Rf, необходим надлежащий выбор цветной реакции для проявления пятен например, при разделении белков, полипептидов, аминокислот часто употребляют нингидринную реакцию. [c.520]

Существенные экспериментальные трудности, которые до последнего времени ограничивали исследования в области белковой химии, в значительной степени обусловливались отсутствием простых и надежных способов анализа аминокислот. Лишь благодаря развитию за последние два десятилетия ионообменной и распределительной хроматографии удалось разработать автоматический метод количественного анализа аминокислот с использованием окисления аминокислот нингидрином и фотометрирования продуктов реакции [9]. Однако стремительное развитие химии белков и пептидов, среди которых обнаружены важнейшие биорегуляторы и антибиотики, уже сейчас предъявляет новые требования по чувствительности и быстроте анализа. Сложность аппаратурного оформления и дороговизна эксплуатации, безусловно, ограничивают применение автоматического анализатора Мура и Штейна и в значительной степени обусловливают интерес к разработке новых методов аналитического определения аминокислот, свободных от указанных недостатков. [c.252]

Образование продуктов, обладающих флуоресценцией (сами реагенты не флуоресцируют), позволило значительно увеличить чувствительность метода. С флуорескамином открывается 10 —10 " молей аминокислот. В отличие от нингидрина реакции не мешает присутствие аммиака. Реакция протекает при комнатной температуре при pH 7,0— 9,0. Поскольку флуорескамин в водной среде разрушается (в течение нескольких секунд), для приготовления раствора используют безводные жидкости (ацетон, ацетонитрил, диметилсульфоксид и др.). Продукт реакции стабилен в течение нескольких часов. Пептиды и белки, проявленные флуорескамином, могут использоваться для определения аминокислотного состава и аминокислотной последовательности. [c.130]

При нагревании с нингидрином (трикетогидринденгидрат) растворов аминокислот, продуктов распада белков, первичных или вторичных аминов возникает темно-синее окрашивание. Химизм этих цветных реакций довольно сложен вследствие возникновения различных побочных реакций. При взаимодействии а-аминокислот с нингидрином вначале происходит окисление аминокислоты, сопровождающееся восстановлением нингидрина (I) СООН [c.370]

Реакция обусловлена наличием в белке остатков а-амино-кислот. При взаимодействии с нингидрином а-аминокислоты окисляются и распадаются с образованием аммиака, альдегида и угольной кислоты. Нингидрин восстанавливается и конденсируется с другой частицей нингидрина и аммиаком. В результате образуется сложное соединение мурексидного строения, окрашенное в синий цвет. Реакция может быть представлена в следующем виде [c.11]

Вопрос. Какие реакции протекают при взаимодействии нингидрина с белком [c.356]

Для количественного определения аминокислот и пептидов по приведенным выше реакциям требуется колориметр или фотометр, с помощью которых обнаруживают изменения в свето-поглощении, связанные с протеканием реакций. Поскольку нингидрин наиболее широко используется для обнаружения аминокислот и белков, он послужит основой для дальнейшего обсуждения колориметра. [c.26]

Обычно эту реакцию ставят в двух вариантах с предобработкой материала трихлоруксусной кислотой в течение 10—15 мин и последующей промывкой водой и без предобработки. Сохранение окраски объекта после обработки кислотой указывает на выявление аминогрупп белка. Реакция без,предобработки выявляет все аминогруппы как белка, так и свободных аминокислот. Окрашенное соединение возникает после присоединения азота аминокислоты к нингидрину. [c.109]

Продукты реакции аминокислот с нингидрином экстрагируются органическими растворителями [128]. Это свойство используют для определения пролина в гидролизатах белков. Гидролизуют 1 г исследуемого белка кипячением с 1 мл 4 н. хлористоводородной кислоты в течение 15 ч, после чего раствор выпаривают досуха. Сухой остаток обрабатывают одновременно 4 мл 3%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл 10%-ного раствора фосфорномолибденовой кислоты (для удаления пептонов) и фильтруют. Отбирают 0,5 мл фильтрата, вводят 0,5 мл 2%-ного водного раствора нингидрина и нагревают 10 мин при 100 °С. После охлаждения добавляют 50 мл воды и экстрагируют продукт реакции 10 мл изобутилового спирта в течение 3 мин. Верхний слой отделяют и измеряют оптическую плотность при 533 нм. [c.169]

Количественное определение аминокислот методом элюции и последующим фотоколориметрированием [105, 106]. С помощью этого метода можно определять в растворе или гидролизате белка 0,05—0,15 мкг аминокислоты. Метод основан на реакции аминокислот с нингидрином в слабокислой среде с последующим превращением полученного в результате реакции синего производного — дикетогидринделидендикетогидриндиамина (ДИДА) в стабильное производное меди оранжево-красного цвета, имеющее максимум поглощения при 530 ммк. [c.117]

Весьма ценной разновидностью обычной тонкослойной или бумажной хроматографии является диагональная хроматография. Сначала нанесенный материал хроматографируют в одном направлении, затем в тонком слое на пластинке или бумаге проводят определенную химическую реакцию, после чего осуществляют разделение в другом направлении. Немодифицированные соединения располагаются по диагонали пластинки, тогда как продукты реакции оказываются смещенными по отношению к ней. Этим методом исследовали фотохимические [149] и другие [147] реакции флавинов. Аналогичный диагональный электрофорез применялся для идентификации пар —8Н-групп, образующих в белках дисульфидные мостики [150]. Пептидные фрагменты, содержащие 8—8-мостики, разделяли с помощью электрофореза на бумаге, затем обрабатывали бумагу парами надмуравьиной кислоты, разрывающей мостики [уравнение (2-20)], и после электрофореза в перпендикулярном направлении опрыскивали бумагу нингидрином. Пятна, расположенные вне диагонали, соответствовали фрагментам, которые участвовали в образовании 8—8-мостиков. По положению пятен подбирали [c.180]

В современной химии аминокислот и белков важную роль играет цветная реакция на аминокислоты с нингидрином (синее окрашивание) [c.313]

Белки также дают эту реакцию. При добавлении к раствору белка нингидрина и нагревании его до кипения получается синее окрашивание. Растворы белка дают, однако, менее интенсивную окраску, чем растворы аминокислот в той же концентрации. [c.279]

Как уже указывалось, степень гидролиза или деструкции белков может контролироваться несколькими методами [41]. Вероятно, наиболее общей является реакция, основанная на взаимодействии а-аминокислоты с нингидрином с выделением аммиака, углекислого газа и альдегида и конечным образованием соединения, известного под названием фиолетовая Руэмана , и гидриндантина. Механизм этого превращения одинаков для аминов и иминокислот. При реакции с аминокислотами сначала ибра уется компглекс, характерный для первой ступени расщепления по Штреккеру. Последующий электронный сдвиг делает возможным протекание реакции декарбоксилирования и дегидратации с образованием цвиттернона. Гидролиз цвиттериона и реакция с избытком нингидрина приводят к образованию фиолетовой Руэмана П [c.400]

Широко изучена реакция между -аминокислотами и нингидрином. Установлено, что окрашенные соединения образуются с аминокислотами, пептидами, белками и другими соединениями, имеющими свободные аминогруппы. [c.24]

Реакция дезаминирования азотистой кислотой лежит в основе общеизвестного метода определения аминогрупп по Ван-Сляйку он описан выше. Если соответствующим образом учитывать ограничения этого стандартного метода и тщательно контролировать условия реакции, то он окажется наиболее удобным способом определения количества свободных аминогрупп в белках. Легче всего реагируют концевые, а-аминогруппы, несколько медленнее—е. -аминогруппы и уже весьма постепенно выделяют азот гуанидинные группы. Тот факт, что количество свободных аминогрупп, определенных по методу Ван-Сляйка, превосходит содержание лизина, рассчитанное на основании аналитических данных, является первым доказательством наличия М-концевых групп в белках. Реакция с азотистой кислотой протекает быстро и количественно она нашла широкое применение для определения степени замещения аминогрупп в модифицированных белках. В последнее время предпочтение стали отдавать нингидринному методу. [c.313]

Нингидриновая реакция. Реакция эта была нами описана уже выше в главе, посвященной аминокислотам. Белки также дают эту реакцию. При добавлении к раствору белка нингидрина и нагревании его до кипения получается синее окрашивание. Растворы белка дают, однако, менее интенсивную окраску, чем растворы аминокислот в той же концентрации. [c.282]

Фиг. 1 наглядно иллюстрирует поразительно высокие темпы открытия новых аминокислот в последние годы. Резкий подъем кривой после 1940 г. в большой степени был обусловлен широким распространением хроматографических методов в сочетании с высокочувствительной цветной реакцией с нингидрином. Можно не сомневаться, что к тому времени, когда эта книга будет издана, число известных аминокислот превысит то, которое указано на фиг. 1. В настоящем разделе рассматриваются аминокислоты, обнаруживаемые в белках не регулярно, а также те, которые входят в состав других соединений или встречаются [c.44]

Все а-аминокислоты, взаимодействуя с нингидрином, образуют продукты, окрашенные в синий или фиолетовый цвет. Эту реакцию дают также и белки. Взаимодействие аминокислот с нингидрином может быть рассмотрено на примере гликокола [c.32]

Реакцию с нингидрином дают не только а-, но и р- и у-аминокислоты, и т. д. пептиды, белки, амины и аммиак. Пролин дает с нингидрино.м Желтую окраску, которая при продолжительном нагревании переходит в красно-фиолетовую. Реакцию нингидрина с пролином изображают следующей гипотетической схемой [c.468]

Агарозу помещают на стеклянный фильтр и промывают сначала бидистиллированной водой, а затем 0,1 М На-фосфатным буфером, pH 7,4. К суспензии агарозы, количество которой эквивалентно 1 г сухого веса носителя, добавляют 1 мл раствора альдолазы, содержащего фермент в концентрации 1 мг/мл. Предварительно альдолазу обессоливают на колонке с сефадексом 0-50 в указанном буфере, содержащем 5 мМ ЭДТА. Инкубацию проводят 10 мин при комнатной температуре и постоянном осторожном перемешивании на магнитной мешалке. Добавляют глицин до конечной концентрации 70 мМ и инкубируют смесь в течение 2 ч при комнатной температуре и перемешивании. Агарозу промывают указанным буфером с ЭДТА до полного исчезновения в элюате глицина и белка. Отсутствие глицина контролируют по реакции с нингидрином (с. 131). Белок определяют по поглощению при 280 нм. Полученный препарат хранят в холодильнике. [c.390]

Весьма характерна для белковых веществ ппнгидриновая реакция. Если к раствору белка прибавить нингидрин (трикетогидрнн-денгидрат) и нагреть раствор до кипения, получается соединение синего цвета. [c.32]

Нингидрнновая реакция. Нингидрин реагирует со свободными аминокислотами, пептидами и белками, вызывая синее окрашивание. Это широко применяющаяся реакция на белки она характерна для любого белка, содержащего но меньшей мере одну свободную аминогруппу и одну свободную карбоксильную группу. Происходящая при этом химическая реакция очень сложна, поэтому здесь приводятся только формулы ее исходных соединений и окрашенного в синий цвет продукта реакции промежуточные реакции не приводятся. [c.322]

Найдено, что кальций-связывающие участки некоторых белков относительно богаты остатками у-карбоксиглутаминовой кислоты. Она встречается, например, 10 раз в первых 33-х остатках последовательности из 582-х остатков протромбина, причем каждый раз в виде близко расположенных дублетов. Карбоксилирование остатков глутаминовой кислоты в этом белке, по-видимому, осуществ ляется в присутствии витамина К [15]. Как производное малоновой кислоты, она декарбоксилируется в процессе кислотного гидролиза, но может быть выделена после щелочного гидролиза [16], однако она дает крайне слабую реакцию с нингидрином. Установлено, что цитруллин (7), который долгое время считали промежуточным продуктом щелочной деградации аргинина в орнитин, входит в состав белка клеток сердцевины волос млекопитающих и игл дикобраза [17]. [c.232]

Нингидринный 1 мл Т + 1—2 капли 0,03%-ного нингидрина нагреть до кипения От желтой или пурпурной до синей 246,269м Цветные реакции для индивидуальных аминокислот см. Шмидт [272] Мартин и Синдж [273] см. также Файгль [198], стр. 281—284 Полож. аминокислоты со своб. КНг и СООН-грунпами белки, пептиды, перв. амины, аммиак [c.59]

Если реакция Миллона или ксантопротеиновая реакция характерны только для тех белков, которые содержат соответственные аминокислоты, то нингидриповая реакция более универсальна и получается со всеми без исключения белками. Объясняется это тем, что нингидрин дает окрашивание (обычно сине-фиолетовое) с любой -аминокислотой, а любой белок содержит именно а-аминокислотпые остатки. На основе нингидриновой реакции разработан метод количественного определения белков и аминокислот. [c.32]

Принцип метода. Нингидрин дает цветную реакцию с концевыми a-NH2-rpynnaMH белков, а также с e-NH2-группами остатков лизина. [c.69]

При хроматографическом анализе аминокислот (см. стр. 35) большое применение нашла реакция с нингидрином. Нингидрин дает окрашивание (обычно сине-фиолетовое) со всеми аминокислотами. На основе нингидриновой реакции разработаны методы количественного определения аминокислот, входящих в состав белков. [c.32]

Обычный метод определения аминокислот заключается в их реакции с нингидрином, которая дает интенсивно окрашенное голубое соединение, поглощение которого можно измерять при 575 нм. Этот метод используется в некоторых серийных анализаторах аминокислот, в которых исследуемые белки гидролизуются с образованием аминокислот, которые в свою очередь разделяются и измеряются спектрофотометрически. [c.653]

Новый метод анализа аминокислот быстро развивался. Появилась возможность с его помощью приступить к решению ряда сложных, казавшихся неразрешимыми проблем, и прежде всего проблёмы определения первичной структуры белков. Вскоре стало очевидным, что анализ аминокислот в его первоначальном варианте слишком трудоемок и недостаточно эффективен. Ввиду этого был поставлен ряд исследований по механизации трудоемких операций и совершенствованию организации эксперимента. Основной вклад в решение этих задач вновь внесла группа исследователей под руководством Мура и Стайна [4]. Благодаря проведению реакции аминокислот с нингидрином в проточном капиллярном реакторе и измерению интенсивности окраски на регистрирующем проточном фотометре трудоемкая обработка фракции была преобразована в непрерывный процесс. Таким образом, на основе аналитического метода был создан новый прибор — аминокислотный анализатор. Выпуск и дальнейшее усовершенствование этого прибора были предприняты промышленными фирмами. Последующие усилия были направлены на повышение эффективности и чувствительности анализа. Первое время причиной низкой эффективности прибора служила длительность элюирования. Основой для дальнейшей оптимизации процесса послужила теоретическая работа Гамильтона [5], в которой было показано, что повышения эффективности можно достигнуть путем увеличения скорости подачи элюента и уменьшения размеров зерен ионита. В результате многочисленных модификаций ионитов (а эта работа все еще продолжается) удалось более чем в 10 раз сократить время элюирования без снижения разрешения. Сокращение продолжительности анализа [c.306]

Основы метода. Сайндж [10] показал, что сырой картофельный крахмал может быть употреблен в качестве неподвижной водной фазы. Если подвижной фазой служит водонасыщенный н-бутиловый спирт, то аминокислоты и пептиды двигаются на такой крахмальной колонке в виде резко очерченных полос в порядке, определяемом нх коэфициентами распределения между водой и н-бутиловым спиртом. Разделение аминокислот и пептидов на фракции может быть прослежено, если пропускать 0,5 д эфирный раствор нингидрина через проявленную /т -бутило-вым спиртом колонку. Эта реакция, как указывает Сайндж, позволяет различать аминокислоты от пептидов, так как окрашиваются только аминокислоты пептиды не дают окраски до нагревания. Хроматограмма на крахмале оказалась пригодной для разделения частичных гидролизатов белка, что очень важно для решения вопросов о структуре белка. [c.389]

При нагревании растворов белков и полипептидов с трикето-гидринденгидратом (нингидрином) образуется синее окрашивание. Эта реакция обусловлена присутствием а-аминокислот со свободной а-аминогруппой, которые реагируют с нингидрином по уравнению [c.159]

Белки, а в еще более сильной степени аминокислоты и полипептиды дают синее или фиолетовое окрашивание с нингидрином (трикетогидринден-гидратом). Нингидриновая реакция характерна для аминогруппы в а-п сложении. [c.12]

Так же производят нингидрйновую реакцию б 1—2 мл раствора белка, взяв 0,3—0,5 мл раствора нингидрина. Получается фиолетовое (иногда фиолетово-розовое) окрашивание с течением времени раствор синеет. [c.13]

В книге достаточно детально рассмотрены основные преимущества и недостатки классического метода определения аминокислотного состава белков с помощью ионообменной хроматографии по Муру и Стейну даны указания относительно выбора ионообменников, подготовки реактивов и численной интерпретации результатов. Значительное место также уделено изложению принципов анализа аминокислот методом газожидкостной хроматографии. Применение этого метода, обладающего на 2—3 порядка большей чувствительностью по сравнению с нингидринной реакцией по Муру и Стейну, позволяет значительно снизить количества белка, требуемые для определения его состава. Анализ аминокислот с помощью газожидкостной хроматографии пока еще не находит широкого применения, однако имеющиеся в ли-Фературе данные позволяют считать этот метод весьма перспективным. Кроме того, обсуждаются возможности использования газожидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектромет-рией для определения состава и аминокислотной последовательности в пептидах. [c.4]

О больших возможностях применения автоанализаторов в хроматографическом лабораторном анализе свидетельствует также сообщение фирмы Техникон [49], описывающее автоанализатор, который может применяться для определения 1) общего азота, по Кьельдалю 2) общего белка с помощью биуретовой реакции 3) общего белка, по Фолину (Лоури) 4) аминогрупп с нингидрином 5) тирозина, по Фолину 6) гистидина, по Паули [c.179]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология