Нуклеиновые кислоты нагревание

Важнейший метод получения рекомбинантных ДНК основан на способности нуклеиновых кислот быстро восстанавливать свою структуру после нагревания до 100 °С в сильно щелочной среде (pH 13). При нагревании до 100 С комплементарные пары оснований разрушаются и ДНК диссоциирует на две раздельные цепи. Этот процесс назван денатурацией ДНК ( плавлением ). Выдерживание комплементарных цепей при температуре 65 °С приводит [c.109]

При нагревании водородные связи разрываются — вторичная структура белка при 60—70° С разрушается, происходит его денатурация. Нуклеиновые кислоты выдерживают нагревание до 100° С и действие разбавленных щелочей и кислоты. Отсюда видно, что их строение более прочное, что характерно для структур, играющих роль матриц. [c.41]

Действительно, первым этапом исследования нуклеиновых кислот явилось изучение продуктов, образующихся ири их гидролизе. При мягком щелочном гидролизе под действием 1 N едкого натра нри 37 , 0,1 /V едкого натра при 100° или под действием 2%-ного водного раствора аммиака полимерная молекулы РНК распадается на мононуклеотиды, содержащие гетероциклическое ядро, моносахарид и остаток фосфорной кислоты, которые и могут быть выделены при жесткой деструкции самого мононуклеотида. Изучение частичного гидролиза мононуклеотидов позволило выяснить ту последовательность, в которой связаны между собою эти три структурные единицы. При нагревании мононуклеотида с разбавленным аммиаком нри 145 от него отщепляется остаток фосфорной кислоты и образуется нуклеозид, при гидролизе которого в кислой среде получается гетероциклическое основание и моносахарид. С другой стороны, при гидролизе мононуклеотида в кис- [c.175]

Нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК) относятся к сложным высокомолекулярным соединениям, состоят из небольшого числа индивидуальных химических компонентов более простого строения. Так, при полном гидролизе нуклеиновых кислот (нагревание в присутствии хлорной кислоты) в гидролизате обнаруживают пуриновые и пиримидиновые основания, углеводы (рибоза и дезоксирибоза) и фосфорную кислоту [c.97]

Еще одну группу вирусов, содержащих несколько белков, составляют реовирусы. Их вирионы имеют двойной слой капсомеров. Более стабильный внутренний капсид (с диаметром 45 нм) состоит из двух молекул белка и 10 молекул нуклеиновой кислоты нагреванием можно получить инфекционную, но нестабильную форму капсида [321]. Наружная оболочка вирусов этой группы построена из 92 полых призм, образованных белковым матриксом, чувствительным к химотрипсину (фиг. 42). Частичное расщепление этого матрикса сопровождается активацией вируса вероятно, при этом облегчается процесс сбрасывания белковой оболочки [248, 322, 340], а следовательно, и высвобождения РНК-полимеразы вируса [439]. [c.162]

Обычно нуклеиновые кислоты в клетках растительных, животных и бактериальных организмов связаны с белками. Для выделения нуклеиновых кислот эта связь разрушается обработкой измельченной ткани ш-процентным раствором хлорида натрия при нагревании или насыщенным раствором фенола при охлаждении. Нуклеиновые кислоты, молекулярная масса которых весьма высока и колеблется [c.612]

Пространственная структура нуклеиновых кислот соответствует ансамблю двух полинуклеотидных цепей, закрученных в двойную спираль, при этом остаток гуанина одной цепи находится напротив остатка цитозина другой цепи, и одновременно напротив друг друга располагаются остатки аденина и тимина (или урацила). При нагревании раствора нуклеиновой кислоты спираль разворачивается и цепи разъединяются. [c.552]

Коагуляция играет важную роль во многих технологических процессах. Так, при нагревании биополимеров (белков, нуклеиновых кислот), изменении pH наблюдается их коагуляция. Характерными примерами применения коагуляции являются очистка природных и сточных вод от высокодисперсных механических примесей, борьба с загрязнениями воздушного пространства аэрозолями, выделение каучука из латексов, получение сливочного масла и других пищевых продуктов. [c.260]

После получения нуклеиновых кислот в чистом виде их подвергают гидролизу для изучения химического состава. Для этих целей используют ферментативные методы (экзо- и эндонуклеазы), а также чисто химические методы гидролиза, в частности нагревание нуклеиновых кислот с хлорной кислотой. [c.97]

Нуклеиновые кислоты являются многоосновными кислотами, которые при мягком гидролизе щелочами распадаются на мононуклеотиды. Мононуклеотиды при нагревании до 145 °С с водным аммиаком теряют остаток фос- [c.171]

Концентрированные растворы солей разрушают нуклеиновые кислоты, вредно также нагревание. Разбавленные кислоты также разрушают нуклеиновые кислоты, разбавленные щелочи быстро гидролизуют рибонуклеиновые кислоты. [c.439]

Одним из самых важных применений электрофореза является использование его в анализе естественных смесей коллоидов, например белков, полисахаридов и нуклеиновых кислот, а также продуктов, полученных фракционной перегонкой. При электрофорезе между раствором белка и буфером в специальной У-образной трубке, снабженной электродами, образуется резкая граница, за движением которой можно проследить с помощью оптической шлирен-системы (разд. 11.10). Эти опыты обычно проводят при температуре 4° С, т. е. при максимальной плотности воды, так что температурный градиент в электрофоретической кювете, вызванный нагреванием током, сопровождается наименьшим градиентом плотности. Градиенты плотности горизонтально поперек кюветы стремятся вызвать конвекцию. На рис. 20.1 [1] показана электрофоретическая картина плазмы крови человека в буферном растворе (pH 8,6) диэтилбарбитурата натрия с ионной силой 0,10 (после 150 мин при 6,0 В/см и 1°С). Строится график зависимости градиента показателя преломления от расстояния в кювете (горизонтальная ось). Одна картина получена для той части кюветы, в которой белки опускаются вниз, а другая — для той части, где белки поднимаются вверх. Начальные положения границ указаны на рисунке тупыми концами стрелок. Различные виды белков представлены альбумином, аг, аг-, р-, у-глобу-линами и фибриногеном ф. Площадь под определенным пиком почти точно пропорциональна концентрации белка, дающего эту границу. Так, например, процент альбумина может быть получен делением площади пика альбумина на суммарную площадь всех пиков белков. е-Граница в спускающейся части и б-граница в поднимающейся части картины обусловлены не белковыми компонентами, а изменениями концентрации соли, которые возникают в опытах с обычным переносом вблизи начального положения границы. [c.603]

Гистоны, также обладающие основным характером, имеют более сложный состав и больший молекулярный вес, чем протамины, приближаясь тем самым к обычным белкам. И у этих белков основность обусловлена высоким содержанием аргинина. Они растворимы в воде и осаждаются аммиаком при нагревании они свертываются только в присутствии электролитов и то частично. Гистоны гидролизуются пепсином. Они находятся в ядрах клеток, связанные, как и протамины, с нуклеиновыми кислотами в виде нуклеопротеидов (они получаются легче всего из богатых ядрами органов, например щитовидной железы), [c.446]

Гидролиз нуклеиновых кислот до составляющих их оснований можно производить также путем нагревания их в течение 1 час при 100° в 12 п. хлорной кислоте. Для разделения и выделения оснований удобнее пользоваться колонкой из ионообменной смолы, нанример дауэкс-50. [c.26]

Денатурация нуклеиновых кислот сводится к разрушению двойной спирали (ДНК) илп двуспиральных участков (РНК). Нагревание раствора нативной ДНК вызывает разделение двойной спиралп па две цени, сворачивающиеся в статистические клубки, Нри этом значительно уменьшаются вязкость и оптическая активность, исчезает гипохромизм, т. е. возрастает интенсивность поглощения в области 260 нлг. Разделение на две цепи непосредственно доказывается центрифугированием ДНК, содержащей N, в градиенте плотности s l (ср. с. 82). Клетки Е. сой, выращенные в среде, содержащей i, переносились в среду с обычным N. При делении клеток образовывались редуплицированные двойные спирали, в которых одна цепь содержала N, другая — N. До денатурации наблюдался один пик плотности 1,717 г/см отвечающий двойным спиралям N — N. После денатурации появляются два пика — 1,740 и 1,724 г/см , отвечающие одноиптчатым клубкам соответственно с и., с 4, Плотность повышается, так как клубки более компактны, чем спираль. М. м. ДНК уменьшается при денатурации вдвое. Образование клубков наблюдается в электронном микроскопе. [c.233]

Другие исследователи [38, 40] также использовали регистрацию оптической плотности в ультрафиолете вместо проведения цветных реакций или определения содержания фосфора. Они усиленно рекомендуют этот метод, ссылаясь на его быстроту, простоту и специфичность. Однако при применении рассматриваемого метода допускается произвольная величина для е (Р), которая пригодна не для всех нуклеиновых кислот любой данной ткани. Поглощение нуклеиновых кислот изменяется также при нагревании их с кислотой. Вместе с тем Логан и его сотрудники [21] нашли, что кривые поглощения для РНК и ДНК, взятых в одинаковых концентрациях, пересекаются в области 268,5 ммк допускается, что при этой длине волны обе нуклеиновые кислоты характеризуются величиной е (Р), равной 9850. [c.105]

Денатурация — нарушение вторичной структуры — характерна и для нуклеиновых кислот. Эго явление вызывается аналогичными воздействиями — нагреванием, [c.673]

Отщепление гетероциклических оснований при нагревании нуклеиновых кислот с минеральными кислотами было описано уже в первых исследованиях, посвященных этому классу соединений 2. Общую схему реакции- можно представить в следующем виде [c.485]

Нуклеиновые кислоты тоже гидролизуют сильной кислотой. Например, нагревания в течение 1 ч при 100 °С в 12 н. хлорной кислоте достаточно для расщепления молекулы до составляющих ее оснований. В ДНК Ы-гликозидные связи более лабильны, чем в РНК, связи с пуринами более лабильны, чем с пиримидинами. Последнее обстоятельство позволяет провести весьма полезную операцию если оставить ДНК на ночь на холоду при pH 2, произойдет полная ее апуринизация. Образующийся полимер известен как апуриновая кислота (табл. 2-11). [c.166]

Одной из наиболее применимых в химии нуклеиновых кислот реакций присоединения по двойной связи ядра оснований является реакция галоидирования в водной среде. Наиболее исследованным, по-видимому, является бромирование. При действии водных растворов брома на урацил и его нуклеозиды и нуклеотиды а также на соответствующие производные цитозина на первой стадии реакции образуются 5-бром-6-окси-5,6-дигидропиримидиновые производные XXII, которые при нагревании или под действием кислоты [c.330]

Следующий этап очистки — удаление балластных белков и других загрязняющих веществ главным образом смещением pH среды и фракционной денатурацией нагреванием. Небелковые примеси (липидов, полисахаридов, нуклеиновых кислот) удаляются многими специфическими методами. [c.142]

В общем пребиотическая конденсация небольших молекул, таких, как К Н,, Н2О, НСЫ, НСНО и НС = С—СК, приводила к образованию строительных блоков для синтеза полиаминокислот, или белков, а также полинуклеотидов, или нуклеиновых кислот. Оргел считает, что современное состоянис живых о паниз-мов определено непрерывностью процесса синтеза блоков, который проходил на первобытной Земле. Ему удалось показать, что полифосфаты, необходимые для синтеза полинуклеотидов, могут образоваться ири простом нагревании ортофосфатов с мочевиной и ионами аммония [44]. С помощью современных радиотелескопов большинство этих небольших молекул обнаружено также в межзвездных облаках, что делает такне предположения более вероятными. [c.185]

Денатурат я — наруиление ьторнчной структуры — характерна и для нуклеиновых кислот. Это явление вызывается аналогичным воздействиями — нагреванием, действием мочевины и т. д,— Прим. ред. [c.688]

Выделение дезоксирибонуклеопротеида и определение дезоксирибо нуклеиновой кислоты. Дезоксирибонуклеопротеид с дифениламином при нагревании дает синее окрашивание в результате гидролиза и освобождения дезоксирибозы, которая и реагирует с дифениламином. Рибоза с дифениламином образует продукты реакции, окрашенные е зеленый цвет. [c.60]

При нагревании с формамидом мочевая кислота превращается в ксантин (2,6-диоксипурин), который, наряду с гипоксантином (6-оксипурином) и мочевой кислотой, возникает в организме как продукт метаболизма пуриновых оснований аденина (6-аминопурина) и гуанина (2-амино-б-оксипурина), входящих в состав нуклеиновых кислот. [c.33]

Аденин (6-аминопурин), входящий в состав нуклеиновых кислот, может быть получен с выходом до 22% путем нагревания 120° С) в автоклаве раствора цианистого водорода в жидком аммиаке. Одновременно в результате поликонденсации пяти молекул цианистого водорода (с выделением одной молекулы аммиака) приблизительно с таким же выходом образуется 4,5-дициан-имидазол Исследование механизма полимеризации цианистого водорода в жидком аммиаке показало, что промежуточными продуктами реакции, по-видимому, являются формамидин, образующийся из эквивалентных количеств цианистого водорода и аммиака, димер цианистого водорода, его тример (аминомалононитрил) и тетрамер (диаминомалеонитрил). Некоторые стадии реакции-образование формамидина, димеров и тримеров цианистого водорода, катализируются анионом N0 , который образуется в реакционной смеси вследствие диссоциации цианистого водорода в жидком аммиаке. Синтезы аденина и 4,5-дицианймидазола можно схематически изобразить следующим образом [c.386]

Нагревание и титрование кислотами помогают завершить разрушение Н-связей. Эту процедуру описали Кавальери и Розенберг [358]. Они показали, что такое поведение находится в соответствии со структурой нуклеиновых кислот, предложенной Уотсоном и Криком. Они установили далее, что температура этого перехода в растворителях, молекулы которых могут образовывать Н-связь, ниже, чем в инертных растворителях, так что эти два фактора действуют в одном и том же направлении. Денатурация может происходить также вследствие ионизации аминогрупп [23], влияние радиации на ДНК объясняют разрывом Н-связей [454, 2147а]. Механические напряжения также могут повести к разрыву Н-связей и к денатурации белков [1105]. [c.276]

Протамины и. гистоны. Отличаются высоким содержанием диаминокислот, отсутствием серусодержащих ампнокнслот и ограниченным числом аминокислот, входящих в их состав. Белки основного характера с небольшим, сравнительно с другими белками, молекулярным весом. Они растворимы в воде и разбавленных кислотах и осаждаются из растворов при добавлении аммиака, щелочей или белков. К протаминам относятся белки, выделенные из спермы рыб (клупеин, сальмин, стурнн и др.), где они находятся в соединении с нуклеиновыми кислотами. Протамины, растворяясь в воде, дают щелочные растворы, не коагулирующие при нагревании они содержат до 87% аргинина. Основной характер у них более резко выражен, чем у гистонов. Гистоны содержат около 20—30% диаминокислот, обладают ясно выраженным основным характером, в клетках животных находятся в виде соединений с нуклеиновыми кислотами или пигментами (в составе нуклеопротеидов и хромопротеидов). [c.175]

Небольшое количество нуклеопротеида (лучше чистой нуклеиновой кислоты) смешать с 4 жл ледяной уксусной кислоты и нагревать непродолжительное время. Затем постепенно добавить ]0—15 капель концентрированной серной кислоты, содержащей 0,01 % закисного сернокислого железа. При наличии дезо-, ксисахара после осторожного нагревания раствор дает зеленоватое переходящее в пурпурно-синее окрашивание. [c.182]

Определению нуклеотидного состава нуклеиновой кислоты тем или иным методом должен предшествовать ее гидролиз. РНК и ДНК можно гидролизовать до входящих в них оснований обработкой 98%-ной муравьиной кислотой при 175° в течение 30 мин или 12 н. хлорной кислотой при 100° в течение 1 час [8, 9]. Ни один из этих методов не является строго количественным, поскольку в первом случае наблюдается низкий выход урацила, а во втором — разрушение части тимина. ДНК можно гидролизовать также обработкой 6 н. НС1 при 120° в течение 2 час, однако при этом теряется часть пуринов [25]. Удовлетворительный гидролиз РНК до смеси пуриновых оснований и пиримидиновых нуклеотидов достигается в результате нагревания с 1 н. соляной кислотой при 100° в течешге 1 час [5]. Количественный гидролиз РНК до нуклеозид-З -фосфатов легко вызвать обработкой 0,3 н. NaOH при 37° в течение 16 час. Следует избегать употребления слишком крепкой щелочи, чтобы не вызвать дезаминирования цитидиловой [c.29]

По методу Огура и Розен [38], предназначенному первоначально для работы с растительными тканями, прежде всего удаляют кислоторастворимые вещества и липиды. Затем выделяют РНК, обрабатывая остаток ткани 1 н. хлорной кислотой в течение 18 час нри 4°. Для выделения ДНК полученный остаток обрабатывают 0,5 н. хлорной кислотой при 70° в течение 20 мин. При работе с животными тканями нагревание рекомендуется проводить до 80° в течение 30 мин в присутствии 1 н. хлорной кислоты. Содержание нуклеиновой кислоты в каждом из экстрактов определяют затем по содержанию фосфора, пентозы (или дезоксипентозы) или пуринов и ниримидинов. Недостаток этого метода заключается в том, что некоторое количество ДНК может экстрагироваться холодной хлорной кислотой и переходить во фракцию РНК [35]. [c.102]

Часть промежуточных продуктов, образующихся при действии рибонуклеазы на рибонуклеиновые кислоты, составляют пиримидиновые нуклеозид-2, 3 -циклофосфаты, которые при дальнейшей обработке рибонуклеазой дают исключительно З -фосфаты [68, 69]. При гидролизе рибонуклеиновой кислоты под действием карбоната бария [68] или лучше трет-бугклата калия [70] были выделены пуриновые и пиримидиновые нуклеозид-2, 3 -циклофосфаты. Они образуются также при нагревании раствора нуклеиновой кислоты в формамиде с аммиаком [7П- На основании данных титрования этих веществ, их поведения при хроматографировании на бумаге и электрофорезе, кислотного и щелочного гидролиза их до 2 - и З -фосфатов, а также из сравнения их с синтетическими образцами этим соединениям было приписано строение 2, 3 -циклофосфатов [52, 53]. [c.133]

Описаны [518—520] искусственные комплексы дезоксинуклеиновых кислот с протаминами 1515], гистонами [516], полилизином, поливиниламином [517] и разнообразными белками. Образование комплекса с альбумином сыворотки крови быка, вызванное нагреванием, происходит в результате термической денатурации обеих компонентов, причем связывание осуществляется главным образом водородными связями [521]. Одна молекула ДНК может связать до 1800 альбуминовых молекул [521, 522], и защитное действие дезоксирибонуклеиновой кислоты из зобной железы на тепловую коагуляцию растворов альбумина [520] может быть приписано этому связыванию, которое предотвращает самоагрегацию. Подобным образом можно объяснить тормозящее действие ДНК на расщепление белков трипсином, т. е. действие направлено на субстрат, а не фермент [523]. Однако изучение подавления ДНК активности химотрипсина с применением синтетических субстратов позволяет предположить, что между ферментом и нуклеиновой кислотой также образуются стехиометрические комплексы. Максимальное торможение происходит при отношении белка к ДНК, равном 20 1, соответствующем приблизительно четырем нуклеотидным звеньям на молекулу химотрипсина [524]. Для трипсина это отношение равно 7 1. [c.449]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология