Элюент линейная

Элюент линейный градиент НС1 (0,4 н., 2 л). [c.187]

Из сравнения результатов табл. 2 и 3 видно, что К неполярных элюентов уменьщается пропорционально росту дисперсионной составляющей сил межмолекулярного взаимодействия ( д), lg К полярных элюентов линейно растет с ростом пол- [c.10]

Адсорбционная ХТС основана на сорбции растворенного вещества поверхностью сорбента. В идеальном равновесном случае функция разделения веществ в сорбенте и элюенте линейна. [c.308]

Основной задачей теории хроматографии является выяснение механизмов разделения и описание движения компонентов смеси вдоль неподвижной фазы. Поскольку при хроматографии происходит непрерывное движение одной фазы относительно другой, между фазами не устанавливается равновесие. Однако при определенных условиях процесс хроматографирования можно рассматривать как равновесный, и тогда скорость перемещения вещества вдоль слоя сорбента имеет простую связь со скоростью потока элюента и градиентом адсорбции по концентрации. Основное уравнение равновесной хроматографии, записанное относительно линейной скорости и перемещения вещества вдоль колонки неподвижной фазы, имеет вид [c.348]

Диаметр колонки, мм. . . 10—12 1—3 Размер частиц сорбента, мкм 100—200 Меньше 40 Линейная скорость элюента, м/с. ......... 10-5—10- 1,5—3,5 [c.80]

Примесь воды в неполярном или слабополярном элюенте приводит к уменьшению удерживания и влияет на селективность разделения на полярных адсорбентах, в частности, на силикагеле с гидроксилированной поверхностью. Для получения воспроизводимых результатов необходимо поддерживать постоянную концентрацию воды в элюенте. Вместе с тем, изменяя концентрацию воды в элюенте, можно регулировать удерживание и селективность, а экранированием особо активных мест поверхности приблизить начальную часть изотермы адсорбции к линейной, т. е. получать симметричные пики при небольших дозах. Однако на практике трудно поддерживать постоянную концентрацию воды в элюенте, так как, во-первых, практически все элюенты, даже алканы, в той или иной мере содержат примесь воды, содержание которой изменяется в зависимости от влажности воздуха и, во-вторых, изменения температуры и состава элюента приводят [c.297]

В табл. 17.3 приведены значения селективности а по отношению к бензолу и толуолу, а также относительные изменения свободных энергий при адсорбции. Уменьшение удерживания алкилфенолов по сравнению с удерживанием алкилбензолов связано с проявлением водородной связи алкилфенолов с полярным элюентом. Значения а в расчете на группу ОН для ряда алкилфенолов примерно одинаковы. Это видно из рис. 17.6, на котором зависимости g R от числа атомов углерода в н-алкильных заместителях пс близки к линейным и параллельны, причем линия для алкилфенолов лежит значительно ниже линии для менее полярных алкилбензолов. [c.317]

Увеличение количества полярных функциональных групп приводит к усилению взаимодействия вещества с ПФ и уменьшению удерживания. Состав элюента оказывает значительное влияние как на удерживание, так и на селективность разделения соединений на неполярных НФ. При увеличении концентрации органического компонента в элюенте время удерживания уменьшается. Как правило, наблюдается линейная зависимость между lgk и концентрацией органического компонента в НФ. Взаимодействие с полярной ПФ при переходе вещества от молекулярной к ионизированной форме резко возрастает, соответственно уменьшается время удерживания. Таким образом, различие в кислотно-основных свойствах соединений может быть основой для их разделения в условиях Оф ВЖХ. [c.602]

Число разделений можно достаточно легко определить даже в том случае, если в анализируемую смесь не входят вещества, необратимо сорбирующиеся на линии старта, или вещества, не сорбирующиеся вообще и продвигающиеся вместе с фронтом элюента. Линейную интерполяцию проводят графическим путем или рассчитывая соответствующие величины с помощью, например, карманного счетного устройства. [c.36]

Колонка 4X50 см. Элюент линейный градиент хлорида натрия в 0,02 М трис—НС1 буферном растворе с 7М мочевиной (pH 7,6). Скорость подачи 100 мл/ч. Объем фракций 20 мл. Номер пика соответствует числу нуклеотидов в цепи полинуклеотида. [c.57]

Колонка 0,6X140 см. Сорбент ОЕАЕ-целлюлоза (DE-32). Элюент линейный градиент концентрации (0,1—0,75 М) формиата аммония с pH 3,7. Скорость подачи 39,6 мл/ч. На колонку нанесена смесь олигонуклеотидов G, U G и ТФ СО (рис. 37.19) [125]. [c.61]

Колонка 0,5X100 см. Элюент линейный градиент концентрации (0,02—0,3 М) хлорида натрия в 0,02 М трис—НС1 буферном растворе (pH 7,8) с 7 М мочевиной (общий объем 500 мл). Скорость подачи 12 мл/ч. На колонку нанесен гидролизат 75 ОЕш тРНК. Обозначения те же, что и на рис. 37.19 и 37.20 [125], [c.61]

Верхний график колонка (3,5X25 см) приготовлена по методике, описанной в работе [53]. Элюент линейный градиент концентрации (0,5— М) хлорида натрия в 0,013 М фосфатном буферном растворе с pH 7. Скорость подачи 40 мл/ч. Объем фракций 7 мл. Образец 20 мг трансформирующей ДНК. [c.76]

Элюент линейный градиент хлорида натрия в 0,05 М натрийфосфатном буферном растворе с pH 6,7. Объем фракций 5 мл. [c.78]

Колонка 3X65 см. Сорбент СМ-сефадекс С-50. Элюент линейный градиент (0,0—0,13 М) раствора бикарбоната аммония, pH 7,8. Объем смесителя 500 мл. Объем фракций 3,8 мл мин. Анализ определение поглощения при 280 нм. Фракции СМ-1, СМ-2 и СМ-3 составляют соответственно 10, 15 н 75% исходной смеси. [c.231]

В работе [62] проводились измерения линейного индекса удерживания ароматических углеводородов на колонке с 25% по.тиэти-ленг.тикольадинината на сферохроме-1 при различных температурах в случае использования азотного и парового элюентов. Линейный индекс удерживания [63] [c.89]

Более подробное описание элютивного процесса может быть дано с помощью теории неравновесной динамики сорбции. В основе всех существующих вариантов теории лежит предположение о линейности изотерм сорбции. Теория, как правило, ограничивается учетом лишь кинетических факторов, таких как диффузия внутри и вне зерна ионита, замедленность акта обмена. Гидродинамические явления (каналообразование, пристеночные эффекты) обычно не учитываются, хотя эти явления безусловно могут оказывать влияние на ход хроматографического процесса. С этой точки зрения представляет интерес тарелочная теория динамики, в которой все неравновесные факторы, включая и гидродинамические, неявно учитываются величиной ВЭТТ (см. 3 настоящей главы) эта величина, будучи определена по данным одного динамического эксперимента, может в дальнейшем использоваться для расчетов других экспериментов, если в последних будут поддерживаться постоянными некоторые стандартные условия — тип ионита и хроматографируемого иона, концентрация и состав элюента, линейная скорость протекания раствора, радиус зерна ионита. Практически единственное, что можно варьировать, не нарушая постоянства ВЭТТ, это размеры колонки (если только вариация последних не сопровождается резким изменением гидродинамических факторов). Очевидно, что рамки применимости тарелочной теории не слишком широки теория лишь облегчает выбор [c.317]

С увеличением концентрации органического компонента электролит сильнее всаливается в фазу ионита. Линейное возрастание концентрации неводного компонента вызывает экспоненциальное возрастание коэффициента распределения, в то время как в элюентной хроматографии увеличение концентрации элюента уменьшает величину коэффициента распределения. [c.78]

Комплект современного оборудования для ВЖХ, как правило, состоит из двух насосов 3, 4 (рис. 28.6), управляемых микропроцессором 5 и подающих элюент по оп[)сделенной программе. Состав и скорость подачи элюента в ходе анализа может изменяться линейно, экспоненциально нлп каким-либо образом в зависимости от условий анализа. Для обеспечения высокой скорости анализа насосы создают давление до 40 МПа. Проба вводится через специальное устройство (инжектор) 7 непосредственно в поток элюента. После прохождения через хроматографическую колонку о вещества детектируются высокочувствительным проточным детектором 9, сигнал которого регистрируется и обрабатывается микро-ЭВМ 11. При необходимости автоматически в момент выхода пика [c.595]

Подвижные фазы в ЖКХ различают по их элюирующей способности. В адсорбционной хроматографии на полярных. сорбентах элюирующая сила тем больше, чем полярнее растворитель. Экспериментально уста ювленную последовательность растворителей с возрастающей элюирующей силой называют элюот-ропным рядом. Элюирующая сила е, как правило, возрастает с увеличением диэлектрической проницаемости растворителя. Чаще всего используют насыщенные углеводороды (гексан, гептан), тетрахлорид углерода, хлороформ, этанол, метанол, воду (растворители расположены в порядке возрастания элюирующей силы). Элюирующую силу можно изменять в необходимых пределах добавлением к растворителю с низкой элюирующей силой более активного растворителя. Элюирующая способность смеси резко возрастает при небольших добавлениях полярного растворителя к неполярному (рис. 28.8). Если различие в элюирующей силе растворителей незначительно, то зависимость близка к линейной. В том случае, если к неполярному элюенту добавляют полярный, способный к образованию водородных связей (спирты, эфиры и др.), удерживание и селективность определяются специфическими взаимодействиями вещество— адсорбент, вещество — элюент и элюент — адсорбент. Эту систему применяют для разделения полярных, сильноудерживаемых соединений. Водородные связи образуются как между сорбентом и веществом, так и между веществом и элюентом, что резко сказывается на хроматографическом поведении соединений. Так, фенол и анилин в элюен-те, не способном к образованию Н-связи, выходят в указанной последовательности, а в подвижной фазе, содержащей спирты, порядок противоположный. Это объясняется тем, что анилин, в состав молекулы которого входит аминогруппа —NH2, обладает большей способностью к образованию водородных связей с молекулами спирта, чем фенол. [c.600]

Из формулы (21) следует, что улучшать разрешение эффективнее не за счет длины колонки, а за счет выбора хроматографической системы, обеспечивающей более выраженное различие сродства двух веществ к неподвижной фазе. Следует подчеркнуть, что если хроматографическая система разделения близких зон отработана на малой колонке, то при переносе ее на колонку большего размера следует увеличивать объем только за счет ее диаметра, оставив подобранную длину колонкп неизменной. Скорость элюции (мл/ч) следует повысить ироиорционально увеличению площади сечентш колонки, с тем чтобы линейная скорость течения подвижной фазы (илп, что то же самое, расход элюента в расчете на 1 см площади сечепия колонки) оставалась неизменной. [c.35]

Обострение зоны в ходе градиентной элюции будет продолжаться, до тех пор, пока изменение силы элюента на длине суженной зоны не окажется уже слишком малым, чтобы воспрепятствовать расширению зоны за счет продольной диффузии и неоднородностей течения подвижной фазы. Следует ясно отдавать себе отчет в том, что (в случае линейной изотермы распределения) градиентная элюция пе дает выигрыша в разреилении близко идущих зон. Одновременно с описанным сужением зоны каждого компонента уменьшаются и расстояния [c.42]

I Выбор между ступенчатым и непрерывным законами изменения силы элюеита диктуется в первую очередь степенью различия ио сродству к неиодвпжной фазе между группами кодгаонентов и внутри них. Если различия между группами очень велики, то предпочтение следует отдать ступенчатому градиенту (рис. 13). Конечно, можно задать столь крутой закон постепенного (наиример, линейного) нарастания силы элюента, что эти группы окажутся достаточно сближенными, но разрешение инков внутри групп при этом может пострадать, так как предел сужению зон внутри груииы кладет диффузия вещества и неоднородность, в то время как уменьшение расстояния мен ду зонами с ростом крутизны градиента ничем не ограничено. Однако, прежде чем в каждом конкретном случае сделать выбор между ступенчатой н непрерывной градиентными элю-циями, следует принять во внимание целый ряд чисто практических соображений, которые изложены нин е в форме сжатого перечисления достоинств и недостатков обоих типов градиентной элюции. [c.43]

Это означает, в частности, что фракционирование макромолекул путем изократической элюции в большинстве случаев имеет мало шансов на успех. Подавляющее большинство макромолекул ири данном выборе элюента либо уже будет находиться в подвижной фазе, либо окажется слишком прочно связанным с неподвижной фазой. Непрерывная линейная градиентная элюция здесь удобнее, так как она для одиого белка за другим создает ситуацию, отвечающую быстрой десорбции. Отметим нонутно, что можно исходно уменьшить среднее число точек сорбции и тем самым улучшить условия разрешения, если уже при внесении вещества на колонку уравновесить ее жидкой средой, которая препятствует многоиози-циопной сорбции вещества в колонке, напрпмер солевым раствором умеренной концентрации. Одиако подобрать такую концентрацию, которая была бы оитимальпои для всех компонентов смеси макромолекул, удастся редко. [c.46]

Матрицей называют твердую основу неподвижной хроматографической фазы. Она имеет вид сплошных или пористых гранул последние часто представляют собой прострапствеииую сетку линейных полимеров. Для придания материалу матрицы необходимых для хроматографии свойств его модифицируют. Модификация люжет представлять собой химическое присоединение ( присадку ) поио-геиных групп, гидрофобных молекул, биологически активных веществ или фиксацию путем адсорбции тонкого слоя растворителя. Хотя особенности хроматографического процесса определяются в основном характером модификации, физико-химические параметры матрицы могут существенно влиять на свойства неподвилчной фазы. К таким параметрам относятся следующие размеры и форма гранул и их нор диапазон разброса этих размеров механическая прочность материала матрицы характер его смачивания и набухания в элюенте химическая стойкость и инертность в условиях хроматографической элюции реакционная способность, обеспечивающая возможность химической модификации матрицы. [c.48]

Программное устройство фирмы Waters (модель 660) предусматривает возможность задания любого из 11 фиксированных профилей градиента (линейного, двух ступенчатых и по четыре — выпуклых и вогнутых). Экспериментатору достаточно задать начальный и конечный состав смеси буферов, сумлгарную скорость подачи элюента п время элюции. Существуют варианты п более сложных систем. Например, в хроматографе фирмы Руе Uni am (модель PU 4800) задание формы градиента с помощью микропроцессора можио осуществить путем разбиения всего времени элюции на девять произвольных интервалов, внутри каждого из которых любую кривую можно аппроксимировать экспоненциальной функцией. Однако необходимость столь сложных (и дорогостоящих) устройств представляется сомнительной, по крайней мере для решения тех задач, которым посвящена эта книга. [c.100]

При разделении относительно крупных бромциановых пептидов ОС-, р- и 7-цепей глобина человека 0,1 %-ный раствор ТФУ, помимо своей роли в осуществлении ион-парной хроматографии, оказался очень полезен как прекрасный растворитель для пептидов, в частности гидрофобных. Кроме того, раствор ТФУ прозрачен вплоть до А, = 216 нм и легко удаляется лиофилизацией. Фракционирование вели на колонке Li lirosorb RP-8 (0,46 X 50 см). Использование сорбента с меньшей, чем в рассмотренных выше примерах, гидрофобностью обусловлено большими размерами пептидов. Колонку уравновешивали 0,1%-ньш водным раствором ТФУ, впрыскивали в нее 100 мкл смеси пептидов и вели элюцию линейным градиентом концентрации изопропанола (от нуля со скоростью нарастания 1,6% в минуту) в течение 1 ч при температуре 28 и скорости подачи элюента 0,7 мл/мин. Профиль элюции показан на рис. 96 (сплошная линия). Пептиды длиной 32, 43 и 64 аминокислотных остатка хорошо отделились друг от друга [Mahoney, Hermod-son, 1980]. [c.204]

Колонкп Оксиапатита обычно предварительно промывают 5 — 10 объемами слабого ( 0,05 М) нейтрального фосфатного буфера. Если стабильность белка требует определенной ионной силы, ее обеспечивают добавлением в буфер для промывки и элюент соли. Элюцию кислых белков ведут ступенчатым или линейным градиентом концентрации фосфатного буфера — вплоть до 0,8 М. Особо прочно сорбированные белки нередко снимают пирофосфатом. Емкость колонки оксиапатита обычно составляет примерно 1—5 мг белка па 1 мл объема колонки, выход белков — 8O —100%. Утрата ферментативной активности наблюдается редко — метод относительно мягок . I По-видимому, механизм сорбции (в частности, [c.228]

Самой замечательной особенностью сорбции нуклеиновых кис-ло1 а оксиапатите является резко различное поведение нативных двунитевых молекул ДНК (или РНК) и однонитевых молекул денатурированных ДНК и РНК. Однонитевые молекулы снимаются с оксиапатита элюцией 0,12—0,15 М фосфатным буфером, тогда как для элюции двунитевых молекул концентрацию фосфатного буфера приходится увеличивать до 0,2—0,25 Ш Можно предположить, что решающую роль здесь играет относительная жесткость линейной конформации двунитевых молекул. Сопоставим мысленно условия десорбции относительно коротких фрагментов нативной и денатурированной ДНК, связанных ио длине фрагмента с оксианатитом, наиример в трех точках. Вытеснение элюентом пз связи с оксиапа-титом гибкой однонитевой ДНК в одной из таких точек может повлечь за собой (в результате тепловых деформаций гибкой нити) удаление прежде участвовавшего в этой связи фосфата ДНК от фиксированного на поверхности сорбента иона кальция. Затем может последовать поочередный разрыв и двух других связей — фраг- [c.229]

Для очистки мембранной D-лактатдегидрогеназы Е. соИ хроматографией на оксиапатите [Pratt et al., 1979] был использован пологий линейный градиент концентрации (0—0,2 М) К-фосфатного буфера, pH 7,2 (500 мл для колонки размером 2,6 X 20 см). Растворимость белка обеспечивали включением в состав буфера детергентов (1% Тритона Х-100 и 0,1% ДДС-Na). Очистке на оксиапатите предшествовали освобождение фермента из ме.мбрин с помощью дезоксихолата натрия, хроматография на DE-52 и гель-фильтрация на сефадексе G-200. На всех хроматографических этапах очистки в составе элюентов тоже присутствовали детергенты. [c.234]

Разделение пептидов на колонке Mi roPak АХ-10 осуществляли с помощью линейного градиента концентрации соли 25—100% 0,01 М триэтиламмонийацетатного буфера (pH 6) в смеси с ацетонитрилом. Очень кислые пептиды элюировали дополнительно 0,04 М НСООН при 60°. Использование летучих элюентов облегчало дальнейший анализ состава пептидов [ Dizdaroglu et aL, 1982]. [c.300]