Аминокислоты проба

Растворитель пропускают через бумагу столько раз, сколько это необходимо для четкого разделения аминокислот исследуемой пробы, Хроматограмму затем высушивают, проявляют, погружая на несколько секунд в 0,5%-ный раствор нингидрина, снова подсушивают в течение нескольких, минут на воздухе и нагревают для развития окраски (15 мин) в сушильном шкафу при 60° С. [c.301]

Для приближения условий построения калибровочных графиков к условиям анализа исследуемой пробы, что значительно повышает точность анализа, поступают следующим образом в 10 мл воды или в 10%-ном изопропиловом спирте, помимо определяемой аминокислоты, растворяют еще несколько аминокислот, последние выбирают с таким расчетом, чтобы их пятна не перекрывались на хроматограмме при однократном пропускании растворителя. [c.116]

Абсолютная величина оптической плотности данной аминокислоты зависит от качества бумаги, числа пропусканий растворителя и чувствительности фотометра, поэтому нельзя пользоваться для расчета содержания той или иной аминокислоты в пробе калибровочными графиками, построенными в других условиях. [c.118]

Для разделения веществ с помощью бумажной хроматографии нарезают полоски бумаги длиной 15— 30 см и шириной несколько сантиметров. На расстоянии 2—3 см одного из концов полоски бумаги наносят каплю исследуемого раствора и место старта отмечают простым карандашом. После испарения растворителя конец бумаги, на который нанесена проба, приводят в соприкосновение с растворителем (ПФ). Затем бумагу и растворитель помещают в закрытый сосуд (обычно цилиндр или стеклянный колпак), чтобы предотвратить потери при испарении. После прохождения растворителя через полоски бумаги ее вынимают, сушат и определяют положение различных компонентов, С этой целью опрыскивают бумагу соответствующими реагентами, которые с компонентами разделенной смеси образуют окрашенные соединения. Для обнаружения аминов или аминокислот, например, действуют раствором нингидрина, который с этими веществами образует соединение голубого или пурпурного цвета. [c.616]

Проведенные эксперименты показали, что все использованные соли аскорбиновой кислоты существенно активизировали процесс образования свободных аминокислот (табл.1). Причем, если в опытах с аскорбинатами кобальта и натрия их конечная концентрация повышалась менее чем в полтора раза по сравнению с данными в контрольной пробе без биостимуляторов, то при добавлении аскорбинатов кальция и калия содержание свободных аминокислот увеличивалось более существенно. [c.245]

Аминокислотный состав белков. — Анализ гидролизата белков, содержащего до двадцати различных аминокислот (см. табл. 39), является чрезвычайно сложной задачей. Риттенберг (1940) разработал метод изотопного разбавления, согласно которому радиоактивную кислоту определенной удельной активности, например меченую глутаминовую кислоту, добавляют в известном количестве к анализируемой смеси, после чего выделяют глутаминовую кислоту обычным образом. Так как химические свойства природной и меченой кислоты одинаковы, то выделяемое вещество является смесью добавленной аминокислоты и первоначально присутствовавшей в пробе. Количество кислоты в гидролизате вычисляют по изотопному составу выделенной кислоты. Если добавляется рацемическая меченая кислота, то аминокислоты гидролизата перед выделением рацемизуют или же из выделенного рацемата отделяют чистую -форму. Точность анализа не зависит от метода выделения, выхода кислоты или концентрации ее в гидролизате. [c.655]

Газовая хроматография имеет в настоящее время широкую область применения, которая не ограничивается разделением простых органических соединений (углеводороды, эфиры, спирты и амины), но включает также разделение ароматических веществ, сахаров, аминокислот, металлоорганических соединений, силанов, высокомолекулярных полимеров и изотопов водорода. Возможность анализа малых проб позволяет использовать газовую хроматографию в биохимии, медицине и физиологической химии. Ряд [c.25]

При рассмотрении проблемы происхождения нефти встает вопрос а что же возникло раньше—нефть или жизнь Сторонники органического происхождения отвечают— жизнь. Их противники считают наоборот—сначала образовались углеводородные газы, давшие исходный материал для образования как нефти, так затем и жизни. Образовавшиеся глубинные углеводороды присоединяли к себе азот, и ближе к поверхности земли в присутствии воды начинали образовываться кирпичики белков — аминокислоты и родственные им соединения (это подтверждается частично тем, что в пробах вулканического пепла содержатся заметные количества аминокислот, составляющих основу белковых молекул). И в конечном итоге это могло привести к появлению белковых соединений, способных к обмену веществ и размножению — т. е. первых живых существ. [c.16]

Подготовка бумаги 2. Вырезают полосу бумаги, размеры которой определяются количеством исследуемых проб и величиной хроматографической камеры. В 5—10 см от конца полосы (зависит от высоты лодочки) проводят простым карандашом стартовую линию и отмечают точки нанесения раствора в 3 см от краев хроматограммы и в 2,5 см одна от другой. Для лучшего разделения образцов с большим набором аминокислот край бумаги, на который наносят гидролизат, вырезают, как это показано на рис. 16. [c.127]

Для идентификации аминокислот в исследуемом гидролизате наряду с опытными пробами (или предварительно, до анализа опытных проб) на хроматограмму наносят растворы аминокислот- свидетелей . После установления местоположения пятен отдельных аминокислот- свидетелей последние в дальнейшем на хроматограмму можно наносить в составе смесей. Смеси должны иметь известный состав и хорошо разделяться при данных условиях хроматографирования. Этим требованиям удовлетворяют смеси аминокислот следующего состава [c.128]

Растворы наносят на пластинку микрошприцами, микропипетками или калиброванными капиллярами (следует избегать повреждения слоя смолы) на стартовую линию, расположенную в 2—3 см от нижнего края пластинки, в виде пятна (диаметр не более 3 мм) или полосы. На пластинку наряду с опытной пробой наносят стандартные растворы аминокислот в том же растворителе, что и гидролизат, в коли- [c.134]

Разделение ДНС-аминокислот. Разделение проводят на пластинках размером 6x6 см, которые предварительно активируют в термостате при 120°С в течение 30 мин. Анализируемые образцы наносят тонким капилляром в угол пластинки на расстоянии 1 см от ее краев. Диаметр наносимых пятен не должен превышать 0,3—0,5 мм. Объем проб — около 0,5 мкл. На первую пластинку наносят 4-часовой гидролизат, на вторую — 16-часовой, на третью пластинку — смесь ДНС-аминокислот- свидетелей . Обычно берут стандартные растворы ДНС-производных тех аминокислот, которые входят в состав данного пептида. Пластинки помещают в камеру и проводят разделение вос- [c.151]

В случае метода изотопного разбавления смешивают анализируемую пробу с определенным количеством меченой аминокислоты и рассчитывают степень разбавления изотопа после выделения определяемой аминокислоты [c.66]

В процессе разделения содержащих аминокислоты проб наименьшее сродство к катионообменной смоле проявляют кислые и оксиаминокислоты. Нейтральные аминокислоты связываются сильнее, а ароматические аминокислоты, в сравнении с нейтральными, имеют еще большее сродство к смоле. Самым большим сродством к смоле обладают основные аминокислоты. [c.16]

Значительная часть исследований в этом направлении была предпринята индийскими учеными [6, 7]. Детальное изучение присутствия аминокислот в сточных водах и сбросах проводили методом круговой хроматографии на бумаге. Для определения свободных аминокислот пробу сточных вод или эффлуента упаривали досуха ( 0,4 г), затем экстрагировали 95%-ным этанолом. Спиртовой раствор обрабатывали хлороформом для извлечения липидов, а затем обесцвечивали активным углем. Экстракт упаривали до 1 мл, и на листы бумаги наносили пробы объемом 100—150 мкл. [c.562]

Реакцию останавливают добавлением 0,2 мл 0,1 М раствора КОН, содержащего 0,1% немеченой аминокислоты, аналогичной меченой, и пробы инкубируют еще 20 мин при 37 °С для гидролиза аминоацил-тРНК. На этом этапе пробы можно оставить на ночь в холодильнике. Затем к пробам добавляют по 2 мл охлажденного 10% раствора ТХУ, содержащего 0,1% немеченой аминокислоты, пробы выдерживают на холоду 10 мин и наносят на миллипоровые фильтры (Rufs, Чехословакия), предварительно смоченные ТХУ с 0,1% немеченой аминокислотой. Пробирки 3 раза промывают 5% раствором ТХУ по 4 мл каждый раз, затем фильтр промывают 10 мл 5% раствора ТХУ и 5 мл этанола. Радиоактивность кислотонерастворимого осадка на фильтрах измеряют в толуоловом сцинтилляторе на сцинтилляционном счетчике. [c.367]

Отгонка аммиака используется в широко известном методе определения азота в органических соединениях по Кьельдалю. В простейшем варианте этого метода пробу обрабатывают при нагревании концентрированной серной кислотой в присутствии солей ртути (катализатор), в результате чего органические соединения окисляются до СО2 и Н2О, а азот переходит в ЫН4Н504. После охлаждения к остатку добавляют раствор щелочи и отгоняют ЫНз в отмеренный объем титрованного раствора кислоты, а затем определяют избыток кислоты, не вошедшей в реакцию с аммиаком, и рассчитывают массу азота в пробе по формуле обратного титрования. Методом Кьельдаля можно определять азот в аминах, аминокислотах, алкалоидах и многих других азотсодержащих соединениях. Некоторые соединения можно проанализировать по методу Кьельдаля только после предварительного разложения или восстановления хлоридом олова (И) или цинковой пылью (азотсоединения, производные гидразина и т. д.) [c.215]

На круг хроматографической бумаги накладывают шаблон с пятью секторами и простым карандашом очерчивают линию фронта (на рис. 3.10 нанесена пунктиром). В четыре сектора с помощью микрошприца в 2—3 приема в одну и ту же точку на линии старта (на рисунке обозначено звездочками) наносят по 4 мкл растворов-свидетелей четырех аминокислот. После каждого нанесения пробы пятну дают подсохнуть. Диаметр пятна не должен превышать 3 мм и ни в коем случае пятно не должно касаться границ секторов. Чем меньше пятно, тем лучше разделение. Последовательность нанесения растворов-свидетелей аминокислот записывают в тетрадь. На стартовую линию пятого сектора микроширицом (объем пробы указывает преподаватель) наносят раствор, содержащий смесь аминокислот неизвестного состава. [c.216]

Для приближе1[ия условий построения калибровочного графика к условиям анализа исследуе мой пробы, что значительно повышает точность анализа, поступают следующим образом в Ш мл воды или 10%-ного изопропилового спиртс) растворяют несколько аминокислот кроме определяемой аминокислоты, кислоты выбирают с таким расчетом, чтобы их пятна не перекрывались на хроматограмме при-однократном пронускаиии растворителя. [c.300]

Экстрагирование и фотометрирование. По электрофореграмме измеряют расстояния, пройденные за время опыта компонентами смеси, и устанавливают число компонентов и знак заряда каждого компонента. Вырезают участки электрофореграммы с синими полосами аминокислот, а также два контрольных участка без аминокислот. Площадь контрольных участков долл<на быть равна площади синей полосы, соответствующей нейтральным компонентам смеси, пе перемещающимся при электрофорезе. Вырезанные участки разрезают ножницами на мелкие кусочки и помещают в отдельные пробирки. В каждую пробирку добавляют по 10мл 0,005%-ного спиртового раствора сульфата меди, нри этом синяя окраска переходит в оранжево-красную. Пробирки оставляют на 1 ч при комнатной температуре в темноте (в шкафу), время от времени взбалтывая. Затем опытные пробы фотометрируют, сравнивая их с контрольными, и приборе ФЭКН-57 с зеленым фильтром в кюветах толщиной 1 см. Определение оптической плотности осуществляется, как это описано п работе 4. По найденному значению оптической плотности каждого компонента определяют их соотношение в смеси аминокислот. Так, если />1, Оз — оптическая плотность соответственно первого, второго и третьего компонента, то содержание первого компонента (в %) находят но формуле [c.151]

Снелл (1946) разработал микробиологический метод количественного определения состава аминокислот. Различные микроорганизмы требуют для своего роста определенные аминокислоты, и скорость роста на среде, содержащей достаточное количество всех аминокислот, кроме одной, может служить показателем количества этого компонента в испытуемой смеси. Так, содержание аргинина в гидролизате может быть определено по влиянию этого гидролизата на рост La toba illus asei количество аргинина определяют, сравнивая исследуемую пробу со стандартными образцами, содержащими различные концентрации аргинина. [c.655]

Из-за бетаиновой структуры аминокислоты относятся к неисиаряющимся соединениям, и поэтому их нельзя непосредственно исследовать методом газовой хроматографии. По аналогии с анализом нгирных кислот за прошедшие годы были поставлены опыты по разрушению бетаиновой структуры при помощи получения летучих производных. Химия проб в применении к аминокислотам имеет гораздо больше возможностей, чем в случае жирных кислот. Так, превращение аминокислот может осуществляться при реакции [c.270]

К реакционной газовой хроматографии (в смысле определения Драверта и сотр.) должен быть отнесен также метод, разработанный Златкисом и сотр. (1958, 1960) для прямого определения алифатических аминокислот в водном растворе при применении двух реакторов (см. разд. 8.1.2). В нагреваемом до 140° реакторе I, заполненном нингидрином, сначала происходит окислительное разложение аминокислот до летучих альдегидов и двуокиси углерода. Продукты реакции разделяются в присоединенной последовательно колонке при комнатной температуре и переводятся в реактор II, заполненный никелем на кизельгуре. Это заполнение обеспечивает при 425° гидрогениза-ционное расщепление всех альдегидов до метана. Присоединяемая к реактору II короткая колонка с молекулярными ситами служит для абсорбции образующейся и захваченной из пробы воды. Отдельные аминокислоты затем определяются в виде пиков метана при помощи катарометра. Применением реактора II решается относительно простая задача газохроматографического анализа веществ, содержащих воду, тем более что метан в отличие от альдегидов легко высушить. Кроме того, превращение альдегидов в метан позволяет более просто количественно определять аминокислоты, так как специфическая для данных веществ теплопроводность остается всегда одинаковой и вследствие этого не нужно вводить поправочных коэффициентов в количественные результаты. Тот факт, что катарометр при обычной температуре может применяться для определения метана, положительно сказывается на чувствительности метода. [c.274]

Общим свойством аминов является их основность, поэтому большинство из них растворяется в кислотах. Амииы жирного ряда к тому же дают основную реакцию иа индикаторы. Помимо указанных иа с. 78 капельных реакций первичные амины можно открывать изонитрильной пробой. Аминокислоты открывают цветной реакцией с нингидрииом. [c.96]

Метод основан на образовании окрашенных продуктов ароматических аминокислот с реактивом Фолина в сочетании с биуретовой реакцией на пептидные связи. Метод характеризуется высокой чувствительностью (10—100 мкг белка в пробе). На развитие окраски влияет большое количество веществ компоненты буферных систем (трис-буфер в концентрации 0,2 мМ, глицилглицин), восстановители (цистеин, дити-отреитол в концентрации 0,01—0,4 мМ, аскорбиновая кислота), комп-лексоны (ЭДТА в концентрации 0,5 мМ), детергенты (тритон Х-100 в концентрации 0,1—0,2% вызывает выпадение осадка), сернокислый аммоний в концентрации 0,15%, сахароза в концентрации 10% и др. [c.81]

Определение качественного и количественного аминокислотного состава белков и пептидов проводят после их гидролиза кислотой или щелочью. Оба вида гидролиза разрушают некоторые аминокислоты. При щелочном гидролизе частично разрушаются цистеин, серии, треонин и происходит частичная рацемизация некоторых аминокислот. При гидролизе соляной кислотой (5,7 н., 105—110° С), которая обычно используется при кислотном гидролизе пептидных связей, практически полностью разрушается триптофан. В связи с этим содержание триптофана в пробах обычно определяют после щелочного гидролиза или спектрофотометрическим методом Кроме того, наблюдаются значительные потери оксиаминокислот (серина, треонина, тирозина), се-русодержащих аминокислот (цистеина, метионина) и частично пролива. При этом степень разрушения аминокислот зависит от чистоты и концентрации НС1, используемой для гидролиза, а также длительности и температуры гидролиза. Следует отметить, что примеси альдегидов при кислотном гидролизе приводят к значительной потере тирозина, а также цистеина, гистидина, глутаминовой кислоты и лизина, а примеси углеводов в больших концентрациях — к разрушению аргинина. [c.123]

В ферментных электродах м. б. использованы не только одноферментные и полиферментные системы, но и клетки микроорганизмов ( бактериальные электроды). Созданы ферментные электроды с ферментным реактором. В таком электроде иммобилизованный (напр., на стеклянных щари-ках) фермент помещен в небольшой реактор, через к-рый пропускают анализируемую пробу. Продукты р-ции - элект-роактивные в-ва, их детектируют с помощью проточных измерительных электродов. Ферментные электроды такого типа применяют для определения мочевины и аминокислот. [c.80]

Аминокислотные анализы водных экстрактов образцов лунного грунта, проведенные в рамках американской программы Аполлон , показали присутствие глицина и аланина. Еще четыре аминокислоты были обнаружены с помощью газовой хроматографии в кислотном гидролизате экстракта. Это Glu, Ser, Asp, Туг. Спектроскопические данные одиозиачио показывают присутствие NH3, НСНО и H N в космическом пространстве. В луниых пробах также обнаружены исходные продукты для абиогенного образования внеземных аминокислот СН , Nj, СО, СО2, H N (20 — 70 нг/г). Возможно, правда, что часть предшественников аминокислот происходит от газов земных ракет. [c.48]

Смотреть страницы где упоминается термин Аминокислоты проба: [c.65] [c.310] [c.37] [c.310] [c.216] [c.366] [c.427] [c.116] [c.295] [c.245] [c.246] [c.144] [c.125] [c.132] [c.149] [c.203] [c.38] [c.112] [c.128] [c.565] [c.647] [c.66]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология