Функциональные группы выбор пробы

Важное значение белков и составляющих их аминокислот обусловило большой интерес к определениям аминокислот методом ГХ. Существуют различные методы автоматического анализа с использованием хроматографии на колонке, однако ГХ обеспечивает более быстрый анализ и позволяет уменьшить величину анализируемой пробы, Было предложено большое число различных по типу производных, чтобы осуществить количественное определение двадцати аминокислот, обычно обнаруживаемых в белках. Выбор наилучшего производного осложняется большей частью тем, что эти аминокислоты содержат 12 различных функциональных групп, а желательно получить метод, применимый для анализа все>с [c.137]

Основная забота химика, занимающегося исследованием веществ, определяющих вкус и запах, состоит в правильном выборе типа хроматографической колонки и рабочих параметров процесса разделения. Почти во всех случаях в этой области исследователь встречается с настолько сложными смесями, что идентификация входящих в их состав разделенных компонентов невозможна без использования вспомогательных методов. Поэтому для таких смесей требуется высокая степень разделения. Концентрации компонентов смеси могут изменяться в широких пределах, поэтому используемые хроматографические детекторы должны быть чувствительными к следовым количествам вещества, а колонки должны обеспечивать разделения относительно больших проб. Более того, компонентами разделяемой смеси могут быть соединения самых разных типов, от полярных до неполярных, содержащие любые функциональные группы. В связи с этим попытки связать селективность неподвижной фазы с ее разделительной способностью обычно оказываются безуспешными. К сожалению, часто более успешным бывает выбор колонки на основе опыта исследователя, а не на основе каких-либо теоретических рассмотрений. [c.262]

Ясно, что число потоков, на которые делится основной исходный поток из хроматографа, и число используемых специфических реактивов определяются числом ожидаемых в смеси соединений с различными функциональными группами. Считается, что наиболее удобно делить исходный поток на пять частей. При делении на большее число частей труднее обеспечить равномерный и непрерывный поток газа во все пробирки со специфическими реактивами, и процедура анализа усложняется. При необходимости использования большого числа специфических реактивов гораздо удобнее повторить анализ с другой пробой образца и другим набором специфических реактивов. Другим фактором, который определяет выбор числа специфических реактивов, используемых в одном анализе, является чувствительность реактивов. При делении исходного потока более чем на пять частей в пробирки с реактивами может попадать слишком малое количество разделенных компонентов. [c.353]

Химические реагенты, или, как их еще называют по способу нанесения, опрыскивающие (проявляющие) реагенты, распыляют с помощью пульверизатора (или специального сосуда с насадкой для получения аэрозоля. Определяемые вещества образуют окрашенные соединения с реагентом за счет взаимодействия с одной или несколькими функциональными группами. При соответствующем выборе реагента таким способом можно локализовать практически любое соединение, перемещая струю в горизонтальном и вертикальном направлениях. Однако большинство реагентов являются специфическими и использование нескольких реагентов для проявления разных компонентов одной и той же пробы представляет трудоемкую операцию. В большинстве случаев после опрыскивания для появления окраски требуются дополнительные операции, например нагревание. Некоторые наиболее часто используемые реагенты и области их применения перечислены ниже [c.76]

II. ВЫБОР ПРОБ НА ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ГРУППЫ [c.380]

В исследовании взаимодействий полифункциональных гормонов и рецепторов с привлечением синтетических аналогов не исключены ситуации (они не предсказуемы, поскольку выбор аналогов, как правило, случаен), когда наиболее предпочтительная конформация синтетического пептида стерически комплементарна активному центру рецептора, но необходимый комплекс тем не менее не образуется, так как модифицированная последовательность не содержит остатков, необходимых для образования эффективных контактов с функциональными группами рецептора. Возможен, конечно, и прямо противоположный случай, приводящий к тому же результату. Принципиально слабым местом в используемом в настоящее время подходе к установлению зависимости между структурой и функцией пептидов и, в частности, гормонов является то, что он базируется на случайном поиске синтетических аналогов методом проб и ошибок Поэтому, отдавая должное усилиям в экспериментальном и теоретическом изучении искусственно модифицированных последовательностей энкефалинов, следует сказать, что при существующем интуитивном выборе модельных соединений можно рассчитывать лишь на частный успех. Качественный прогресс здесь можно ожидать только при строго научном, а не случайном подборе аналогов, иными словами, при отходе от метода проб и ошибок к методу, обладающему предсказательными возможностями и доказательной силой. Первая попытка в этом направлении [28, 29] основывается на решении обратной структурной задачи, т.е. на сознательном, целенаправленном конструировании химического строения немногочисленных искусственных аналогов, пространственное строение которых в своей совокупности отвечает набору низкоэнергетических, физиологических активных состояний природного гормона (см. гл. 17). Детально структурнофункциональная организация природных пептидов будет обсуждена в следующем томе издания "Проблема белка". О первых успехах рентгеноструктурного анализа в изучении трехмерных структур рецепторов рассказывается во втором томе издания [98. Гл. 3, 4]. [c.353]

Большое количество полученных в последние годы экспериментальных данных свидетельствует в пользу гетерогенности рецепторов АТ II, и в дальнейшем изложении будем исходить именно из этого предположения [379-382]. Полифункциональность АТ II и гетерогенность его рецепторов можно связать с молекулярной структурной организацией гормона, изученной теоретически. Его предрасположенность к реализации ряда функций проявляется в существовании в нативных условиях нескольких близких по энергии и легко переходящих друг в друга пространственных форм. Высокая эффективность и строгая избирательность взаимодействий АТ II с различными рецепторами связаны с тем, что каждая его функция реализуется посредством актуальной только для данного рецептора конформации из состава самых предпочтительных структур свободной молекулы. Таким образом, поиск структурно-функциональной организации АТ II сводится к выяснению для каждой биологической активности пептида актуальной конформации. Для решения задачи в условиях отсутствия необходимых данных о потенциальных поверхностях мест связывания требуется использование дополнительной информации. В качестве такой информации, как правило, привлекаются данные по биологической активности синтетических аналогов природных пептидов. Однако при формировании серии аналогов без предварительного изучения конформационных возможностей как природного пептида, так и его искусственных аналогов в ходе исследования по существу случайным образом ищется прямая зависимость между отдельными остатками аминокислотной последовательности гормона и его функциями. Поскольку стимулированные гормоном аллостери-ческие эффекты возникают в результате не точечных, а множественных контактов между комплементарными друг другу потенциальными поверхностями лиганда и рецептора (иначе отсутствовала бы избирательность гормональных действий), нарушение функции при замене даже одного остатка может быть следствием ряда причин. К ним относятся исчезновение нужной функциональной группы, потеря необходимых динамических свойств актуальной конформации, запрещение последней из-за возникающих при замене остатков стерических напряжений, смещение конформационного равновесия из-за изменившихся условий взаимодействия с окружением и т.д. Следовательно, случайная замена отдельных остатков не приводит к решению задачи структурно-функциональной организации гормонов. Об этом свидетельствует отсутствие в течение нескольких десятков лет заметного прогресса в ведущихся с привлечением множества синтетических аналогов исследованиях зависимости между структурой и функцией АТ II, энкефалинов и эндорфинов, брадикининпотенцирующих пептидов, а также ряда других. Отсюда следует неизбежный вывод о необходимости привлечения к изучению структурно-функциональных отношений у пептидных гормонов специального подхода, который позволил бы отойти от метода проб и ошибок и при поиске синтетических аналогов делать сознательный выбор для их синтеза и биологических испытаний. [c.567]

Структура каждой главы следующая. Методы определения каждой функциональной группы дифференцируются в зависимости от реакций, лежащих в основе определения. Затем дается теоретическое обоснование применения каждой реакции и приводится методика (или ряд методик) на ее основе. Рабочие методики воспроизводятся с достаточной полнотой, и ими можно пользоваться, не прибегая к оригинальным источникам. Выбранные методики являются, по нашему мнению, наиболее современными и эффективными. При отборе методик руководствовались такими крр1териями, как возможно более универсальная применимость метода, простота и точность определения. В отдельные методики были введены незначительные изменения, касающиеся главным образом размеров пробы, времени реакции, выбора растворителя и т. д., что позволило упростить процесс анализа, сократить его продолжительность, и повысить точность определения. Внесенные в методики изменения отмечены в тексте. [c.10]

Решение первой задачи может производиться всеми известными в настоящее время методами исследования функциональных групп — с помощью методов химического и физико-химического анализа. В то же время после точки гелеобразования из-за перехода системы в твердое агрегатное состояние целый ряд методов становится неприменимым (например, полярография, ЯМР, ГЖХ), а использование других методов требует постановки специальных исследований для выбора условий анализа. Так, например, определение непрореагировавших или образовавшихся функциональных. групп методами химического анализа [115] требует предварительной тщательной работы по выбору метода дробления анализируемой пробы, установлению необходимой дисперсности частиц, анализу и учету возможных механо-эсимических процессов в ходе диспергирования, подбору растворителя. [c.30]

В настояшсе время для основных функциональных групп (карбоксильной, гидроксильной и др.) разработано по несколько методов получения стабильных производных для последующего газохроматографического анализа. При разработке метода ХОП для конкретной системы выбор того или иного химического метода определяется часто не только свойствами того илп иного метода, но и такими характеристиками, как состав анализируемой пробы, хроматографические зоны нереагирующих компонентов, которые могут налагаться на хроматографические зоны производных. Доступность тех или других производных также влияет на выбор метода ХОП. В связи с этим целесообразно рассмотреть основные методы получения производных для газохроматографического анализа. [c.37]

Решение задачи оптимизации использования молекулярных взаимодействий компонентов смеси путем выбора соответствующей неподвижной фазы (адсорбента или жидкости, молекулярного сита) может быть найдено лишь на основе теории межмолекулярных взаимодействий в газах и жидкостях и между газами и жидкостями и твердым адсорбентом. Эта теория основывается на результатах изучения геометрии и химической природы молекул газа, молекул жидкости и поверхности твердого тела. Она представляет собою молекулярную теорию, поскольку ее задачей в области хроматографии является объяснение связи с молекулярными параметрами и вычисление термодинамических констант адсорбционного или распределительного равновесия (например, констант Генри для нулевых проб), определяющих селективность. Отсюда ясно значение молекулярно-статистических расчетов для развития молекулярных теорий адсорбции или растворения п их приложений к хроматографии, поскольку именно статистическая термодинамика указывает правильную количественную связь констант термодинамического равновесия с нотенциальпыми функциями межмолекуляриого взаимодействия. Однако по мере усложнения адсорбционной системы использование статистической термодинамики для количественных расчетов удерн иваемых объемов встречает затруднения, особенно в случае специфических взаимодействий и неоднородных поверхностей. Вместе с тем увеличение энергии и характеристичности взаимодействия влечет за собой возможность получения новой важной информации о специфическом молекулярном взаимодействии при использовании комплекса спектроскопических методов. Это помогает наполнить даваемые хроматографическими и термодинамическими исследованиями полуэмпи-рические и феноменологические связи между различными параметрами эвристическим содер/канием в смысле возможного приближения к молекулярным основам взаимодействия и селективности. Сюда относится,, в частности, использование регулирования специфхмеских взаимодействий, в частности электростатических взаимодействий динольных и квад-рупольных молекул с поверхностями ионных кристаллов и с поверхностными функциональными группами, использование и регулирование водородной связи и вообще взаимодействий донорно-акценторного типа и процессов комплексообразования. [c.34]

Разложение хелатов и их необратимая адсорбция могут быть также следствием взаимодействия анализируемого вещества с насадкой хроматографической колонки. Мошьер и Сивере [2] рекомендуют избегать жидких фаз, в состав которых входят функциональные группы, являющиеся хорошими комплексообразователями, так как это приводит к сольволизу комплексов. Существенное влияние на стабильность хелатов в колонке могут оказать реакции компонентов анализируемой пробы друг с другом и с применяемым сорбентом. Это тем более вероятно, что часто анализируемое вещество является сложной системой, содержащей комплексы и органические лиганды, принадлежащие к разным классам органических соединений и содержащие различные функциональные группы. В таких системах могут протекать реакции полимеризации, например, за счет образования связей между гидр-0КС0-, OK O-, хлор- и другими группами. Кроме того, следует избегать одновременного присутствия в анализируемой пробе окислителей и восстановителей. В ряде случаев выбор жидкой фазы ограничивается недостаточной термостойкостью некоторых хелатов. [c.157]

Хроматографическое разделение низших спиртов затрудняется обычно присутствием в пробе воды, часто в виде основного компонента. Это затруднение связано с тем, что спирты труднее отделить от воды, чем соединения,, содержащие другие функциональные группы, из-за близости упругостей их паров, расторимостей и реакционной способности. В некоторых случаях спирты концентрируют путем перегонки с паром и экстракции или выделяют в виде 3,5-динитробензоатов, но, как правило, их приходится хроматографически разделять в присутствии воды, а иногда требуется также определять количество воды. При хроматографическом разделении водных растворов низших спиртов используют три основные методики. По первой из них применяют неполярную жидкую фазу, так что вода элюируется первой, а затем элюируются спирты в порядке увеличения числа атомов углерода в молекуле. Трудность, связанная с использованием этой методики, состоит в том, что вода на большинстве хроматограмм выходит в виде большого асимметричного пика с размытым хвостом. Это весьма усложняет количественный анализ соединений, пики которых следуют непосредственно за пиком воды, поскольку они могут оказаться на хвосте пика воды. По второй методике применяют высокополярную неподвижную жидкость, например глицерин или полиэтиленгликоль такие жидкости удерживают воду втечение длительного времени, так что низшие спирты элюируются до нее. Здесь, следовательно, устраняются осложнения, связанные с размытием хвоста пика воды. Третья методика, используемая в ряде случаев, связана с выбором детектора,, не чувствительного к воде. Например, пламенный водородный детектор дает небольшой положительный сигнал по отношению к воде, тогда как сигнал по отношению к спирту бывает значительно выше (фиг. 95). Следовательно, относительно небольшое Количество спирта можно увидеть на хвосте пика воды. Можно также применять термический детектор и сжигать пробу в трубке с СиО, расположенной после колонки [55]. Воду, введенную с пробой, и воду, полученную при сгорании, улавливают в осушительной колонке с перхлоратом магния до входа газа-носителя в детектор. Таким образом, измеряют только углекислый газ, полученный из спирта. При использова- [c.284]

При выборе количества вещества для анализа, т. е. концентрации раствора вещества, нужно учитывать различную чувствительность отдельных реакций. Если чувствительная реакция проводится в СЛИН1К0М концентрированном растворе, то может образоваться слишком много осадка либо в осадок выпадет реагент или анализируемое вещество. В свою очередь, когда в реакции образуется окрашенный комплекс, его окраска может оказаться СЛИН1К0М интенсивной и затруднит четкое определение. Очень чувствительные реакции иногда дают положительную пробу из-за присутствия примесей в вегцестве. Если предварительная проба оказывается отрицательной, но присутствие данной группы вероятно, то пробу необходимо повторить в растворе большей концентрации. Поскольку данную функциональную группу можно обычно определить с помощью нескольких реакций, то любой результат, положительный или отрицательный, необходимо подтвердить другой пробой. Если чувствительность [c.148]