Срезы клеток для электронной микроскопии

Рис. 24-2. А. Ворсинки слизистой тонкого кишечника видно, как велика площадь, через которую происходит всасывание продуктов пищеварения. Всасываемые аминокислоты, сахара и соли поступают в кровеносные капилляры, а триацилглицеролы - в расположенные в центре ворсинок лимфатические сосуды. Каждая эпителиальная клетка несет большое число микроворсинок. Б. Микрофотография ворсинок, полученная с помощью сканирующего электронного микроскопа. В, Г. Микрофотографии соответственно продольного и поперечного срезов ворсинок, полученные с помощью трансмиссионного электронного микроскопа видны внутренние микрофиламенты, обеспечивающие волнообразное движение ворсинок.

Рис. 13.23. Схематическое изображение элементов ситовидной трубки и клетки-спутницы, как они выглядят на продольном срезе в электронном микроскопе. Если ситовидная трубка повреждена, например пасущимся животным, то в ней быстро откладывается дополнительное количество каллозы, закрывающей поры в ситовидной пластинке и тем самым предотвращающей утечку из флоэмы ценных растворенных веществ.

Усовершенствование методов получения тонких срезов для электронной микроскопии в течение последних нескольких лет позволило наблюдать полностью сформированные вирусные частицы непосредственно в клетке. Иногда вирусные частицы видны в ядре. Чаще их можно видеть в цитоплазме [c.14]

В настоящее время имеется много надежных биохимических и механических методов, которые дают возможность изолировать отдельные клетки и органеллы. Эти методы не будут обсуждаться, но будет рассмотрено, как такие клетки и фрагменты тканей можно изучать в рентгеновском микроанализаторе. В качестве примера плодотворного исследования одиночной клетки служит рис. 12.2, на котором представлены результаты исследований и анализа клеток спермы человека в электронном микроскопе-микроанализаторе [208]. В некоторых отношениях изолированные клетки и органеллы, толщина которых составляет всего лишь несколько микрон, можно рассматривать как самостоятельный объект исследования, но их чрезвычайная мягкость и высокое содержание воды налагают серьезные ограничения на возможные используемые способы препарирования. В зависимости от их размера изолированные клетки и органеллы, а по этой причине неорганические материалы в виде частиц для аналитических целей могут рассматриваться либо как массивные образцы, либо как срезы. Некоторые примеры препарирования изолированных клеток приведены в недавно опубликованных работах [392, 393]. [c.271]

Первые электронные микроскопы появились в продаже в 1939 г. и с тех пор стали одним из важнейших приборов, применяющихся при изучении биологии клетки. Обладая разрешением 0,4 нм, электронный микроскоп позволяет увидеть молекулы белков и нуклеиновых кислот, а также детали строения клеточных органелл. Еще более широко электронный микроскоп стал использоваться с 1950 г., когда были сконструированы микротомы и ножи, позволяющие делать ультратонкие (20—200 нм) срезы тканей, предварительно залитых в пластмассу. [c.19]

В электронном микроскопе все образцы подвергаются действию вакуума высокой степени разрежения и поэтому их невозможно наблюдать в живом влажном состоянии. Ткани обычно сохраняют с помощью фиксации - сначала глутаральдегидом, ковалентно связывающим белковые молекулы между собой, а затем осмиевой кислотой, связывающей и стабилизирующей двойной слой липидов и белки (рис. 4-14). Электроны обладают низкой проникающей способностью, этим вызвана необходимость получения срезов толщиной от 50 до 100 нм (1/200 толщины одной клетки). Только такие срезы можно наблюдать в электронный микроскоп. Для этого потребовалось также предварительное обезвоживание образца и пропитка мономерными смолами, которые после полимеризации создают твердый блок пластмассы, заключающий образец блок затем режут с помощью тонкого стеклянного или алмазного ножа на специальном микротоме. Полученные срезы не содержат воды или иных летучих органических веществ такие срезы помещают на небольшую круглую металлическую сетку для наблюдения под микроскопом (рис. 4-15). [c.183]

Если поверхность клетки, срез или бактерию покрыть слоем платины или углерода, а затем отделить это покрытие, мы получим негативный слепок — реплику, которую можно исследовать под электронным микроскопом. Изготовляют также тонкие реплики из пластмассы, которые дополнительно напыляют (оттеняют). [c.20]

Улучшенная техника микротомии и электронной микроскопии ультратонких срезов животных клеток привела к выявлению однородных плотных гранул с диаметром около 15 нм непосредственно в клетке. Электронно-микроскопические исследования Дж. Паладе (США), проведенные в 1953—1955 гг., показали, что маленькие плотные гранулы в изобилии содержатся в цитоплазме животных клеток. Они видны либо присоединенными к мембране эндоплазма-тического ретикулума, либо свободно рассеяны в цитоплазме. [c.49]

Уже с начала сороковых годов неоднократно предпринимались попытки применить микротомы для получения достаточно тонких срезов препаратов, пригодных для изучения в электронном микроскопе. Предложенные вначале различные варианты конструкций микротомов, в том числе основанные на быстром вращении ножа, оказались недостаточно эффективными. Удовлетворительные модели ультрамикротомов, позволившие получать срезы толщиной в сотые доли микрона благодаря регулируемой термической подаче объекта, были разработаны в 1953 г. [149—151]. С тех пор метод ультратонких срезов получил широкое распространение в биологии, так как появилась возможность исследовать массивные ткани. В каждом типе ткани были обнаружены сложные мембраны, каналы и частицы в области величин, начиная от макроструктур и вплоть до предела разрешения. Выло показано, что жизненные процессы в клетке зависят от этой сложной структуры. В последнее время ультрамикротомы начинают все чаще при- [c.116]

Малые размеры бактериальной клетки и наличие двух типов нуклеиновых кислот очень затруднили цитохимическое выявление ядерного материала. Тем не менее классические цитологические методы, а затем и техника ультратонких срезов в сочетании с электронной микроскопией позволили в конце концов установить, что бактерии содержат ДНК и что эта ДНК не распределена диффузно в цитоплазме, а локализована в ограниченных участках, которые делятся перед делением клетки. [c.30]

К решению вопроса о структуре бактериального ядра удалось приблизиться только благодаря электронной микроскопии ультратонких срезов через бактериальную клетку. Для получения оптимальной картины нативной тонкой структуры клеточного ядра решающее значение имела надлежащая фиксация (с помощью четырехокиси осмия, уранил-ацетата или фосфорновольфрамовой кислоты) в совершенно определенных условиях. Область ядра (нуклеоплазма) в бактериальной клетке равномерно заполнена очень тонкими нитями (рис. 2.5). В электронном микроскопе она выглядит менее плотной, чем окружающая цитоплазма, содержащая рибосомы. Какой-либо мембранной структуры, отделяющей область ядра от цитоплазмы, выявить не удалось. [c.31]

Рассмотрим еще одну электронную микрофотографию (рис. 91). На ней изображен кусочек среза клетки поджелудочной железы летучей мыши (опять-таки искусственно контрастированный). В центре, почти достигая краев изображения, лежит гигантское, видимое даже в световой микроскоп клеточное ядро. Его окружают все те же цистерны эндоплазматической сети, частью располагающиеся параллельно, частью отклоняющиеся от этого направления, обтекая мелкие яйцевидные включения, которые вскоре будут нам представлены особо, — это митохондрии. Сначала кажется, что эта картина не прибавляет ничего нового к нашим знаниям об эндоплазматической сети. Однако всмотритесь внимательнее. Вы заметите, что клеточное ядро окружено двойной оболочкой, которая не является сплошной наоборот, во многих местах в ней имеются дырки — поры. Создается очень отчетливое впечатление, что эта оболочка или же отдельные ее участки представляют собой часть эндоплазматической сети. На некоторых участках можно даже разглядеть, что цистерны эндоплазматической сети непосредственно продолжаются в оболочку ядра. [c.211]

Приведем два примера. В клетках, фиксированных химически, мембраны эндоплазматической сети кажутся темными на светлом фоне. При лиофильной сушке получается совершенно обратная картина. Вероятно, при действии химических реактивов определенные компоненты плазмы, образующей фон, теряются. Второй пример. На лиофилизированных срезах вообще не видно никаких гранул. Из этого, однако, не следует делать вывод, что рибосомы, видимые на нормально фиксированных срезах,— артефакт. Рибосомы можно выделить и из лиофилизированного материала после гомогенизации и центрифугирования, и они оказываются вполне работоспособными следовательно, они там все же имеются, просто они не видны в электронный микроскоп. В остальном результаты, полученные различными методами фиксации, очень хорошо совпадают. И тем не менее ни в коем случае нельзя забывать, что электронный микроскоп дает только эквивалентные картины [c.216]

Современные методы и средства исследования — усовершенствованная оптическая и электронная микроскопия, рентгеновский анализ, техника ультратонких срезов и другие — показали, что замечательная структурная организация характеризует как внешнюю форму и микроскопически видимые части тканей и клеток, так и более мелкие структурные образования, различаемые при помощи высоко разрешающей способности электронной микроскопии. Поэтому познание структурных элементов живой клетки является одной из важных предпосылок для понимания ее функции и устойчивого существования. [c.288]

Клетки большей частью так малы, что их нельзя увидеть без микроскопа. Микроскопы делятся на два основных вида. В световом микроскопе световые лучи проходят через тонкий, прозрачный слой (срез) ткани и, отклоненные стеклянными линзами, дают увеличенное изображение. Такой прибор хорошо знаком всем изучающим биологию. Он увеличивает изображение приблизительно до 1000 раз. Для более сильного увеличения служит электронный микроскоп. В этом приборе через препарат проходит поток электронов и затем, преломившись в электромагнитных линзах, дает увеличенное изображение. Таким способом можно получать увеличение более чем в 100 000 раз. [c.78]

Исследование нервных клеток в световом микроскопе началось, как мы уже говорили, в тридцатых годах прошлого века. Оно разрасталось на протяжении XIX столетия по мере того, как совершенствовались системы линз и создавались все лучшие методы фиксации, приготовления и окраски тонких срезов ткани. Один из путей исследования привел к методике импрегнации по Гольджи и обнаружению сложной геометрии целых одиночных нейронов, как это описано в первой главе. Другой путь привел к анализу внутреннего строения тела клетки. К концу XIX века в клетке были открыты основные ее органеллы и структурные элементы. Однако размеры этих структур близки к пределу разрешения светового микроскопа, и ясно различить их стало возможно только тогда, когда в 50-х годах нашего века был усовершенствован электронный микроскоп. [c.78]

Недостатком электронной микроскопии является деформация живого объекта в процессе исследования. Перед началом электронномикроскопических исследований клетка проходит через многие стадии предварительной обработки обезвоживание, закрепление, ультратонкий срез, обработка препаратов веществами, хорошо рассеивающими электроны (например, золотом, серебром, осмием, марганцем и т.п.). При этом изучаемый объект значительно изменяется. Несмотря на это, успехи в изучении клетки при помощи электронного микроскопа несомненны. [c.12]

Мембраны. Электронный микроскоп показывает, что цитоплазма пронизана многочисленными мембранами, имеющими на срезе вид двойных темных линий, заключающих светлое промежуточное пространство. Снаружи клетка ограничена такой типичной элементарной, мембраной—плазмалеммой, которая в живой клетке обладает свойством полупроницаемости и выполняет барьерную функцию, Все клеточные органеллы ограничены такой элементарной мембраной. Ядра, пластиды, митохондрии отделены от основной плазмы оболочками, состоящими из двух (в случае плас ид и большего числа) мембран. [c.21]

Если мы рассмотрим живую клетку позвоночного животного в фазово-конграстный микроскоп или в микроскоп с дифференциальным интерференционным контрастом (разд. 4.1.5), мы увидим, что ее цитоплазма находится в непрестанном движении. Митохондрии и более мелкие мембранные органеллы за несколько минут успевают изменить свое местоположение в клетке путем характерных периодических скачков, которые слишком упорядоченны и направленны, чтобы их можно было спутать со столь же безостановочным броуновским движением-результатом случайного теплового движения молекул. Многие из таких внутриклеточных перемещений происходят в тесной связи с микротрубочками Если клетку, в которой движутся органеллы, быстро зафиксировать и приготовить из нее срезы для электронной микроскопии, то можно увидеть, что мембрана таких органелл зачастую соединена с микротрубочками цитоплазмы тонкими нитевидными структурами. Можно предположить поэтому, что микротрубочки играют важную роль в подобном движении, хотя, как мы уже говорили (разд. 11.2.4), некоторые перемещения пузырьков в цитоплазме происходят вдоль актиновых филаментов, а не микротрубочек. Наиболее яркой демонстрацией транспортной роли микротрубочек явилось изучение быстрого аксонного транспорта в нервных клетках, где перемещение мембранных пузырьков в обоих направлениях по аксопу -между телом клетки и нервным окончанием - идет с большой интенсивностью. [c.311]

Рис. 13-54. Опыт, показывающий, что метафазные микротрубочки кинетохора растут с конца, прикрепленного к кинетохору (плюс-конца) В метафазную клетку млекопитающего in vitro инъецировали тубулин, ковалентне связанный с малой органической молекулой (биотипом). Спустя 1 мин клетку фиксировали и окрашивали антителами к биотину, связанными с золотыми шариками, а затем приготовляли срезы для электронной микроскопии. Участки микротрубочек, включавшие биотинилированный тубулин в течение минуты после инъекции, усыпаны темными точками золота (цветные стрелки), а участки, существовавшие ранее, не окрашены (черные стрелки) (Фотография любезно предоставлена

Важно исследовать ряд срезов для того, чтобы убедиться в устойчивости картины окрашивания и в том, что она не связана с загрязнением среза. При подготовке срезов для электронной микроскопии окраска всегда менее интенсивна, чем в других случаях из-за очень тонких срезов и относительной жесткости пластмассы. Тем не менее на срезе можно ясно видеть отложения железа и идентифицировать клетки, содержащие железо. Сориентировав соответствующим образом блок с клетками, можно сделать тонкие срезы для электронной микроскопии. При малом увелр1чении электронного микроскопа сравнивают клетки, имеющие электроноплотньте частицы, с клетками, дающими позитивное окрашивание на железо в световом микроскопе. Это весьма существенно, поскольку не все плотные частицы, видимые в электронный микроскоп, действительно содержат железо. [c.251]

Как и при любом исследовании посредством электронной микроскопии, локализация и описание ультраструктуры белков в процессе фиксирования биологического материала требуют максимальной предосторожности, чтобы избежать изменения структуры (артефакт) вследствие манипуляции необходимо применительно к каждому типу клетки уточнить pH фиксирующей смеси, ее осмолярность, продолжительность фиксации. Когда определены эти параметры, можно изучать структуры на сверхтонких срезах, полученных из материала, который помещен в водорастворимые смолы (ОМА, Оигсирап и др.) или гидрофобные смолы (Ероп, Ага1с111е и др.). Поскольку белки имеют невысокую плотность для электронов, необходимо перед наблюдением увеличить контрастность срезов с помощью тяжелых металлов (свинец, уран и др.), которые отлагаются на клеточных структурах и таким путем усиливают изображение, наблюдаемое на экране микроскопа. [c.127]

Длина взрослой особи С. е1едап5 около 1 мм, и в ее организме можно насчитать всего лишь около тысячи соматических и двух тысяч половых клеток (рис. 15-64). С помощью электронной микроскопии серийш>1х срезов удалось полностью, клетка за клеткой, реконструировать анатомию животного. Общий план строения тела этого примитивного червя в основных чертах тот же, что н у большинства высших животных. Удлиненное тело с билатеральной симметрией развивается из трех зародышевых листков. На переднем конце находится глотка, через которую в кишечник засасываются бактерии, а около заднего конца-анус Наружная стенка тела состоит из двух слоев-защитной гиподермы ( кожи ) и подстилающего ее мышечного слоя. Внутри тела находится простая длинная трубка-кишечник, образованный клетками энтодермы. Между кишечником и стенкой тела расположена вторая трубка-гонада. Эта трубка построена из соматических клеток, а внутри содержит клетки зачаткового пути. Взрослые особи С. екдап5 представлены двумя формами-гермафродитами и самцами. Таким образом, животное может размножаться путем самооплодотворения гермафродитной формы или путем перекрестного оплодотворения гермафродита самцом, что значительно облегчает проведение на этом объекте генетических исследований. [c.114]

Выделяемые подобным способом микросомы (диаметр 16— 150 ммк) настолько малы, что они не видны в световом микроскопе, и первоначально эти частицы были лишь цитохимическим понятием, которое нельзя было отождествить с каким-либо определенным компонентом пптактной клетки . Палад и Сикевиц [235], изучавшие срезы микросом из ткани печени при помош,и электронного микроскопа, обнаружили, что преобладающий структурный элемент этих частиц представлен ограниченными мембранами образованиями. Последние напоминают соответствующие структуры эндоплазматической сети, наблюдаемые на срезах интактной клетки печени. При изучении этих образований в трех измерениях оказалось, что они представляют собой трубочки или пузырьки. Поверхность этих образований может быть и гладкой, однако у большинства из них на поверхности расположены мелкие плотные частицы, сходные с теми, которые видны на электронных микрофотографиях целой клетки (стр. 129). Следовательно, микросомы — это не артефакт, вызванный гомогенизацией ткани, а фрагменты эндоплазматической сети. Они представляют собой цитоплазматические структуры, существование которых в интактной клетке доказано. [c.131]

С помощью электронной микроскопии удается показать, что в растительных клетках некоторые элементы эндоплазматического ретикулума проходят через клеточную оболочку и соединяются с ретикулярными структурами соседней клетки. Типичный подобный случай показан на фото 3. Такая взаимосвязь между клетками через их стенки осуществляется в области плазмодесм. Изучение поперечных срезов мембранных канальцев там, где они пронизывают плазмодесмы, заставляет предположить, что и плазмалемма, и эндоплазматический ретикулум проходят через плазмодесму, нигде не сливаясь друг с другом [12]. Однако какие-либо доказательства наличия межклеточного переноса продуктов метаболизма пока отсутствуют. [c.53]

Но, конечно, так же неверно было бы, руководствуясь только фактом изменчивости структуры эндоплазматической сети, наоборот, рассматривать ее как нечто недостоверное , случайное, возможно даже возникшее в процессе изготовления препарата для исследования в электронном микроскопе (проблемой таких искусственных образований , или артефактов, в ультратонких срезах мы вскоре специально займемся). Слишком часто оказывается и слишком бросается в глаза то, что цистерны связаны между собой в своего рода систему каналов . Как раз наличие системы вложенных один в другой полых шаров, пусть даже эта система и подвержена изменениям, заставляет предположить, что клетка не просто мешок , в котором несколько миллионов ферментов и рибосом перетасованы как попало, но что клеточные компоненты объединены в закономерно организованную структуру. Клеточная архитектура как раз и поражает тем, что при всей своей определенности она способна к непрестанным изменениям, механизм которых пока что непознан. [c.203]

Юрпэн в 1960—1961 гг. обнаружил в окрестностях Сэт в Бретани болезнь личинок хруща, которая характеризуется тем, что в жировом теле зараженных особей было очень мало капелек жира, но зато в жировых клетках содержались веретеновидные или широкояйцевидные белковые включения разной величины — от 2 до 20 мк в длину и от 1 до 18 мк в ширину [138]. Молодые, недавно образовавшиеся, строго веретеновидные включения не имеют какой-либо структуры, но в конечных стадиях на гистологических препаратах в центре таких овальных включений видны густые или более редкие розетки светопреломляющих частиц. Ваго, который провел электронномикроскопическое изучение этого возбудителя, установил, что в начальных стадиях развития включений в них нельзя обнаружить какие-либо заметные вирусные структуры. Вместе с тем в конечных стадиях, когда включения приобретают широкояйцевидную форму, на их ультратонких срезах он смог установить равномерно распределенные шаровидные или яйцевидные частички — тельца вируса. Размер этих частичек 250X370 ммк. В центре их имеются структуры, которые в электронном микроскопе отличаются по своей светопроницаемости. Такая структура очень похожа на структуру вакцинного вируса [290, 294]. Этот вирус отличается от вирусов предшествующего рода Paillotella своей локализацией — его включения расположены не в клетках гемолимфы, а в цитоплазме клеток жирового тела. [c.137]

В мазках из таких гусениц легко обнаружить, что большинство клеток жирового тела, а также большинство лимфоцитов заполнены массой включений разной величины. Однако каждая клетка обычно содержит включения одинакового размера. Вначале длина этих включений едва достигает 1 мк, они широко веретеновидные до шаровидных. Постепенно они превращаются в длинные, веретеновидные образования, которые после нагревания или обработки содой или какой-либо щелочью окрашиваются в синий цвет по Гимза. После обработки щелочами эти включения заметно удлиняются и их концы превращаются в длинные острия. В обработанных щелочами мазках под электронным микроскопом нельзя было рассмотреть какие-либо внутренние структуры в таких включениях. Конечной стадией включений являются широкояйцевидные, несколько сплющенные с боков, очень плохо окрашивающиеся образования, в которых после обработки щелочью можно видеть большое количество шаровидных телец, как при аналогичной обработке полиэдров классического полиэдроза. Размер яйцевидных включений 10—12x6—8 мк. Размеры шаровидных телец внутри включений 0,1—0,4 мк. На срезах, приготовленных из более развитых включений, обнаружены шарообразные или яйцевидные, равномерно рассеянные вирусные частицы размером 260— 300 ммк. В пораженных клетках включения лежат в густой сетке волокон, заполняющих всю цитоплазму. [c.138]

Кончая наш небольщой экскурс в историю создания ультрамикротома — прибора для получения срезов, пригодных для рассматривания в электронном микроскопе, следует сказать, что мы не упомянулн многих ученых и изобретателей, приложивщих свои знания для решения этой проблемы. Только дружные усилия этих энтузиастов электронной микроскопии могли привести к тому, чго ныне биологи имеют возможность порезать отдельную клетку и рассмотреть детали ее строения. [c.152]

Лис. 2.6. А. Строение Es heri hia oli. Е. oli представляет собой палочковидную бактерию, обитающую в кишечнике позвоночных. Б. Окрашенные клетки вид в световом микроскопе при большом увеличении (хЮОО). В. Микрофотография Е. соН, полученная с помощью сканирующего электронного микроскопа. Г. Микрофотография среза клетки Е. соИ в процессе деления, полученная с помощью просвечивающего (трансмиссионного) электронного микроскопа (х50 ООО). В светлых участках находится ДНК. Область, содержащую ДНК, часто называют нуклеоидом. [c.22]

В этой главе мы займемся гистологией на уровне, доступном световому микроскопу. В некоторых случаях для большей ясности придется привлекать и данные, полученные с помощью электронного микроскопа. При вьювлении зависимости между структурой и функцией ткани важно помнить о трехмерности клеточных компонентов и об их связях друг с другом. Информация такого рода собирается по кусочкам , путем изучения тонких срезов ткани, большей частью поперечных и продольных. Ни те, ни другие в отдельности не способны дать все необходимые сведения, но в сочетании они часто позволяют получить интересующую нас картину. Некоторые клетки, например сосуды и трахеи-ды ксилемы, удается наблюдать в целом виде, предварительно подвергнув растительные ткани мацерации при этом мягкие ткани разрушаются, а более прочные, пропитанные лигнином гистологические элементы ксилемы — сосуды, трахеиды и древесинные волокна — остаются. [c.218]

Таким образом, совершенно очевидно, что предшественники фага (белокиДНК) синтезируются в зараженной клетке отдельной лишь позднее объединяются, образуя зрелые инфекционные частицы фага. В процессе созревания происходит агрегация примерно тысячи или более идентичных белковых субъединиц, в результате которой появляется оболочка головки фага и создается четвертичная структура белка. Оболочка головки заполняется длинной и тонкой нитью ДНК - предшественника фага, которая упаковывается в компактное многогранное тело. Наконец, заполненная ДНК головка фага снабжается отростком и после этого достигает состояния инфекционности. Такую последовательность внутриклеточного созревания впервые наблюдал Келленбергер, разработавший в 1958 г. метод приготовления тонких срезов бактерий, проницаемых для пучка электронов в электронном микроскопе. На фиг. 135 представлена серия электронных микрофотографий срезов Е. соН, сделанных Келлен-бергером в разные промежутки времени после заражения клеток фагом Т2. [c.269]

Одна из наиболее важных областей применения радиоактивных изотопов в биологии клетки - )то определение локализации радиоактивных соединений в срезах клеток или живых тканей методом радиоавтографии. При использовании этого метода живые клетки подвергают кратковременному (импульсному) мечению с последующей инкубацией в течение различных промежутков времени в нерадиоактивной среде. Затем клетки фиксируют и обрабатывают для проведения световой или электронной микроскопии. Каждый приготовленный препарат покрывают тонким слоем фотоэмульсии и оставляют на несколько дней в темноте - время, в течение которого происходит распад радиоактивного изотопа. Затем фотоэмульсию проявляют. Местоположение радиоактивных молекул в каждой клетке можно определтгть по расположению темных зерен серебра. Если инкубировать клетки с радиоактивным предшественником ДНК С Н-тимидином), то можно увидеть, что ДНК синтезируется в ядре и там же остается. И наоборот, мечение клеток радиоактивным предшественником РНК СН-уридииом) показывает, что РНК исходно синтезируется в ядре и затем быстро накапливается в цтгтонлазме клеток. [c.223]

Длина взрослой особи С. elegans около 1 мм. Тело червя состоит приблизительно из 1000 соматических клеток и 1000-2000 половых клеток (рис. 16-30). С помощью электронной микроскопии серийных срезов удалось полностью, клетка за клеткой, реконструировать анатомию животного. Общий план строения этого примитивного червя в основных чертах такой же, как и у большинства высших животных. Удлиненное тело обладает билатеральной симметрией и состоит из обычных тканей (нервы, мышцы, кишечник, кожа), организованных обычным способом (рот и мозг на переднем конце гела, анальное отверстие на заднем). Наружная стенка тела состоит из двух слоев - защитной гиподермы ( кожи ) и подстилающего ее мышечного слоя. Простая трубка, образованная клетками энтодермы, формирует кишечник. Между кишечником и стенкой тела расположена вторая трубка (гонада), построенная из соматических клеток и содержащая половые клетки. Взрослые особи С. elegans представлены двумя формами - гер- [c.86]

Прокариотические клетки, которые собираются анализировать с помощью срезов, должны быть химически фиксированы, промыты и обезвожены для заливки в материал, способный прочно затвердевать. После заливки можно нарезать очень тонкие срезы, затем обработать препарат растворами солей тяжелых металлов и исследовать в электронном микроскопе. Хотя применяются многие различные комбинации, мы считаем, что в целом достаточно использовать фиксацию в глута-ральдегиде и четырехокиси осмия или только в четырехокиси осмия с последующей заливкой в среду Спар-ра [43]. Имеется целый набор пластических материалов для заливки, но для обычных целей вполне подходит среда Спарра. [c.108]

Почти все крупные организмы состоят из микроскопических единиц, называемых клетками, в которых содержатся еще более мелкие единицы — органеллы. Исследуя сложное строение клеток, биологи иммобилизуют (фиксируют) их при помощи какого-нибудь химического фиксатора, заливают в соответствующую среду — в парафин или пластмассу, приготовляют с помощью микротома тонкие срезы, окрашивают эти срезы различными красителями, дающими возможность выявить те или иные структуры, и затем изучают их либо в световом микроскопе, обеспечивающем тысячекратное увеличение, либо в электронном микроскопе при увеличении приблизительно в миллион раз. Для того чтобы уяснить себе химическую роль и определить характер биологической активности исследуемых структурных единиц, каждую из таких единиц требуется получить в чистом виде и в достаточно больших количествах. С этой целью обычно разрушают большое число клеток, а затем выделяют каждый тип органелл из полученного гомогената в виде осадка, выпадающего при центрифугировании с постепенно возрастающим числом оборотов. Осажденные таким путем орга-иеллы можно затем собрать и подвергнуть анализу, чтобы изучить их химическую природу и выявить свойственную им биохимическую активность. [c.77]

Наилучшие изображения получаются после экстракции клеток неионным детергентом-при этой процедуре вымываются фосфолипиды и растворимые белки. Обработанные таким способом, а затем быстро замороженные и подвергнутые глубокому травлению клетки дают поразтельно четкую картину цитоскелета (рис. 10-76, Л). Отдельные актиновые и промежуточные филаменты сохраняют свое первоначальное положение, а при особой методике удается сохранить и микротрубочки. Различные типы белковых нитей можно распознать по их толщине, а в некоторых случаях-по расположению составляющих их субъединиц. Аналогичную картину можно получить, используя метод негативного контрастирования тяжелыми металлами после экстрагирования культуральных клеток детергентом край клетки иногда бывает настолько тонким, что его можно исследовать в электронном микроскопе целиком, не делая срезов (рис. 10-76, Б). Относительно толстые слои цитоплазмы можно изучать с помощью высоковольтной электронной микроскопии (рис. 10-76,5). На таких препаратах белковые филаменты всех трех типов выглядят относительно независимыми они связаны между собой (если вообще связаны) лишь редкими поперечными сшивками. [c.126]

Рассматривая с помощью электронного микроскопа пьтратонкий срез клетки, можно увидеть огромное ко-ичество тонких двойных линий толщиной от 7 до 10 нм, оторые представляют собой срез через биологические ембраны. [c.95]

В последние годы, одпако, возникают новые методы изучения изменений зародыша в четырех измерениях. Используются два основных инструмента — электронный микроскоп и ЭВМ. Предположим, что мы хотим изучить одну из 251 нервной клетки нематоды Oxyuris egui. Как уже упоминалось в гл. 9, у нематод эти клетки всегда занимают одно и то же место. Итак, мы выбрали для изучения моторную нервную клетку № 36. Нужно охарактеризовать положение в зародыше не только самой клетки, но и аксона и всех дополнительных волокон и проследить, где эти волокна прикрепляются к другим нервным и мышечным клеткам. Кроме того, мы хотим рассмотреть все изменения этой клетки во времени с момента возникновения до зрелого состояния. Мы начинаем с того, что заключаем взрослое животное в зноксидную смолу и делаем очень тонкие продольные срезы. Срезы должны быть достаточно тонкие, чтобы рассмотреть их в электронном микроскопе. Отмечаем срезы, на которых находятся нервная клетка i№ 36 и все отходящие от нее волокна. Затем просматриваем всю серию, срез за срезом, как показано на рис. 12-9, и составляем программу для ЭВМ, чтобы реконструировать, как это делал Уолт Дисней, пространственную структуру нервной клетки и ее связей. Далее мы просим ЭВМ сохранить полученные данные в узле памяти и показать нам их на телевизионном экране, когда это понадобится. Затем, используя все более молодых животных, а потом и зародышей, мы повторяем весь процесс исследования. В конце концов ЭВМ дает нам последовательность изменений во времени формы клетки № 36 и ее положения в зародыше с момента, когда она впервые появляется в результате деления материнской клетки. В принципе мы можем проделать то же самое с остальными 250 нервными клетками и вообще со всеми клетками взрослого орга- [c.221]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология