ИФА сэндвич-анализ

А — сэндвич >-анализ с поликлональными антителами стадия 1 — инкубация антигена с иммобилизованными антителами с последующей отмывкой несвязавшихся компонентов стадия II — добавление меченных ферментом антител, инкубация и отмывка несвязавшихся компонентов стадия III — детекция ферментативной активности Б — сэндвич>-ана-лиз с моноклональными антителами стадия 1 — инкубация антигена с моноклональными иммобилизованными антителами и конъюгатом антител с ферментом с последующей отмывкой всех несвязавшихся компо- [c.119]

Иногда в литературе эта схема Называется одностадийным сэндвич -анализом. Как и в предыдущем случае, на носителе образуется тройной комплекс с участием меченых- антител, концентрация которого пропорциональна начальной концентрации определяемого антигена. [c.88]

Метод является усложненным вариантом обычного двухцентрового или сэндвич -анализа, в котором образование комплекса детектируется не непосредственно введением в него меченного ферментом антитела, а с помощью содержащих ферментативную метку антивидовых антител. В качестве антивидовых (или вторичных) используют антитела, специфичные к глобулинам тех видов животных или птиц, которых иммунизировали антигеном для получения антисыворотки. Примером наиболее распространенных антивидовых конъюгатов являются меченные ферментом антитела кролика против иммуноглобулинов человека, меченые антитела козы (осла, барана и т. д.) против иммуноглобулинов кролика и т. д. [c.89]

В методе сочетаются принципы конкурентного и сэндвича-анализа, количественные закономерности которых рассмотрены ранее. В связи с этим, не останавливаясь на математических расчетах,. кратко суммируем основные рекомендации для оптимизации первой и второй стадий анализа. [c.251]

Сэндвич-анализ. Образец наносят на фильтр и затем добавляют аликвоту раствора конъюгата [антитело—фермент]. [c.299]

Сэндвич-анализ ферритин [c.311]

Сэндвич-анализ по способу проведения аналогичен последовательному анализу. Образцы вносят в соответствующие пробирки и помещают в прибор. В зоне нанесения конъюгата производится обработка антителами против ферритина, меченными ферментом, а в зоне нанесения субстрата — субстратом. На рис. 20-9 показаны типичные калибровочные кривые для анализа образцов с содержанием ферритина до 600 нг/мл, а также влияние продолжительности периода инкубации на ход калибровочной кривой. Для получения таких данных перемещение фильтров в приборе осуществляли с интервалами 50, 60 и 70 с. Интервалам 50 с соответствуют инкубационный [c.311]

При рутинном использовании сэндвич-анализ, судя по всему, обладает более высокой точностью определения, чем последовательный или конкурентный. В табл. 20-7 представлены данные, характеризующие точность и стабильность определения ферритина в трех контрольных образцах за 8-дневный период. Для каждого контроля в каждом цикле осуществляли измерения с четырьмя повторами при этом коэффициент вариации составлял примерно 3%. Повышенная точность сэндвич-анализа, по-видимому, связана с тем, что каждый анализируемый фильтр покрывают значительным избытком антител, так что небольшие изменения в самом процессе создания покрытия практически не сказываются на конечном результате. В то же время для последовательного и конкурентного вариантов анализа количество материала при первичной обработке фильтра должно быть строго одинаковым. Для этих двух видов анализа даже небольшие колебания в количестве нанесенных на фильтр антител будут приводить к ощутимому проигрышу в точности определения. [c.314]

Кроме всего прочего для осуществления первой стадии в последовательном и сэндвич-анализе не требуется дополнительного разведения образцов. Процесс вымывания на соответствующем этапе анализа является весьма эффективным и позволяет практически полностью удалить несвязавшиеся компоненты тестируемой смеси. Это обеспечивает низкий уровень фоновой, активности и в сочетании с весьма незначительным неспецифическим связыванием с фильтрами, покрытыми антителами, позволяет достичь высокой чувствительности определения. Дополнительным фактором, обеспечивающим высокую чувствительность метода, является использование флуориметрического способа определения активности индикаторного фермента. [c.316]

Были изучены многочисленные варианты как медленного, так и быстрого ввода пробы шприцем. Использовали ввод пробы заполненной, горячей, холодной иглой, промывали иглу растворителем или продували воздухом, применяли так называемый сэндвич-метод. В этой главе мы рассмотрим быстрый ввод пробы горячей иглой. Использование этого варианта обеспечивает минимальную дискриминацию пробы, обусловленную шприцем, хотя полностью избежать ее при анализе проб, содержащих компоненты разной летучести, невозможно. [c.34]

Профиль, показанный на рис. 17, был определен благодаря анализу, проводившемуся с помощью газовой хроматографии. Исследовалось содержание растворителя на полосках фольги, покрытых слоем силикагеля. Элюирование с таких тонкослойных пластинок проводили в ненасыщенных сэндвич-камерах без предварительного насыщения сухого слоя, если не считать нескольких миллиметров в области видимого фронта (такая область отчетливо обозначена на рисунке). При пользовании данными пластинками, изготовленными с употреблением фольги, не наблюдаются различия профилей градиента при элюировании в горизонтальной и вертикальной плоскостях. Когда элюирование проводили с двухчасовой передержкой, кривизна, обусловленная фронтальным градиентом, устранялась, слой сорбента оказывался равномерно насыщенным и отмечалось общее увеличение концентрации растворителя в слое на 6%. Последствием такой выдержки пластинки являлось то, что (если даже не учитывать повышенное насыщение всей поверхности) большее количество растворителя (в 1.8 раза) проникало в слой для сглаживания фронтального градиента (4й=1-08 см. уравнение 41а). [c.69]

АНАЛИЗ ОЛОВООРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ НА НАСАДОЧНЫХ И СЭНДВИЧ-КАПИЛЛЯРНЫХ КОЛОНКАХ [c.65]

Ниже рассмотрено изменение свойств многокомпонентных многослойных систем лишь на примере наиболее простых в геометрическом смысле, удобных при феноменологическом описании процессов переноса, а главное, определенных в интерпретации кинетических закономерностей, системах типа сэндвич . Такое ограничение в выборе объектов обусловлено двумя причинами. Во-первых, нет принципиального различия, с точки зрения протекающих физико-химических процессов в поведении систем с различными геометрическими формами элементов и их взаимным расположением, тогда как сложность в интерпретации результатов, например, при переходе от сэндвичевых структур к стеклопластикам, существенно возрастает во-вторых, на современном уровне развития наших представлений об изменении свойств многослойных систем, контактирующих с агрессивными средами, определенность в выборе модели и ее идентичность реальным системам играет решающую роль. К этому следует добавить, что несмотря на большое количество экспериментальных данных о кинетике изменения свойств многослойных систем, для их количественного анализа может быть использована лишь небольшая часть (только те работы, для которых в литературных источниках оговорены начальные и граничные условия проведения процессов и дано описание геометрических параметров исследованных систем). [c.267]

Симметричное относительно центра двухплоскостное строение ферроцена (строение тина сэндвич ) (предложенное Р. Б. Вудвордом, 1952 г.) было подтверждено рентгеноструктурным анализом, дифракцией электронов и исследованием инфракрасных спектров и спектров комбинационного рассеяния. Атом железа расположен в центре меноду двумя параллельными циклопентадиеновыми кольцами на равном расстоянии от всех десяти атомов углерода. Межатомные расстояния С—С каждого цикла равны друг другу (1,41 А) (рис. 57). [c.318]

Щ Общий вывод, который следует из многочисленных теперь уже исследований методом рентгеноструктурного анализа представителей я-аллильных комплексов, состоит в следующем с переходным металлом действительно связан (по типу сэндвича) плоский аллильный остаток, расстояния внутри которого одинаковы и усреднены. Приведенные на рис. 22 данные для аллилпалладийхлорида, обследованного несколько раз 151—154] на разном [c.225]

Иммунометрическне. Вторая группа методов — иммунометрические, основана на принципе сэндвич -анализа. Особенность этих методов заключается в том, что на твердой фазе иммобилизован избыток антител, с которыми проводят инкубацию антигена. После удаления несвязавшихся компонентов в систему добавляют избыток меченых антител, которые взаимодействуют с антигеном. Очевидно, этот метод применим только к поливалентным антигенам (рис. 24, а). Чувствительность и точность иммунометри-ческих методов принципиально существенно выше конкурентных, так как используя избыток антител на твердой фазе, можно адсорбировать из раствора сколь угодно малое количество антигена, а затем избытком меченых антител определить его содержание. Кроме того, в этом случае гораздо менее строгие требования к количеству добавляемых компонентов. Чувствительность иммунометрических методов в большей степени зависит от нижнего предела детекции маркера. Однако на практике предельной чувствительности достигнуть трудно в силу того, что при большом избытке первичных и вторичных антител наблюдается значительная иеспецифическая сорбция, которая фактически и лимитирует чувствительность этих методов. Использование моноклональных антител в иммунометрическом анализе очень эффективно, так как, сорбируя на твердой фазе антитела одной специфичности, а проявляя связавшийся с ними антиген мечеными антителами другой специфичности, удается не только повысить избирательность детекции антигена, но и сократить время анализа (рис. 24,6). [c.118]

Схема непрямого конкурентного анализа. Вариант ИФА,. предложенный в работе (Yorde et al., 1976), представляет собой непрямой конкурентный метод количественной оценки содержания антигена. Согласно определению непрямого конкурентного метода (Yorde et al., 1976), он основан на количественном измерении избытка свободных антител, остающихся в системе после добавления образца, содержащего неизвестное количество антигена, и этим отличается от прямых методов, которые основаны на непосредственном измерении содержания антигена (Engvall et al., 1971). Непрямые методы анализа выгодно использовать, когда а) антигены одновалентны, как в случае гаптенов, и не удается применить обычный сэндвич-анализ,, [c.241]

Иммунометрическим анализом называют такой вариант иммунологического анализа, при котором роль количественно определяемого компонента играют меченые антитела. Это отличает его от конкурентных радиоиммунологического или иммуноферментного вариантов анализа, проведение которых основано на использовании меченых антигенов, конкурирующих с тестируемым антигеном за ограниченное число центров связывания антител. Антитела метят с помощью радиоизотопов, ферментов, флуорофоров, люминофоров или каким-либо иным способом, позволяющим в конечном итоге зарегистрировать сигнал, хотя бы и опосредованно, через некую сложную систему промежуточных звеньев. Описаны две существенно различающиеся схемы проведения иммунометрического анализа — одноцентровый анализ и двухцентровый (или сэндвич-анализ). [c.244]

Третий вариант представляет собой иммунометрический метод, или сэндвич-ша.лт, для которого используют антитела, содержащие ферментную метку. По способу проведения этот вариант анализа напоминает последовательный анализ. Сэндвич-анализ удобен для определения крупных антигенов, таких, как ферритин, тиреотропин или вирус гепатита. Поскольку отношение площади поверхности к объему для стекловолокнистой фильтровальной бумаги весьма велико, на фильтре может быть адсорбировано довольно большое количество антител. Благодаря этому анализ на фильтре может проходить с достаточно высокой скоростью. [c.300]

В данной главе на конкретных примерах рассмотрены особенности проведения каждого из трех вышеназванных вариантов анализа. В качестве примеров разбираются методики определения дигоксина в сыворотке (последовательный анализ), тироксина в сыворотке (конкурентный анализ) и ферритина в сыворотке (сэндвич-анализ). Анализ одного обраца в каждом из этих вариантов занимает менее 10 мин. [c.300]

Уравнение (46) оказывается правомерным независимо от вида соединений и типа распределения между фазами. Оно может использоваться как в случае адсорбционного распределения, так и в случае ионообменного равновесия. На рис. 118 приведен пример, иллюстрирующий уместность подобной последовательной аддитивности в случае гомологического ряда м-олигофениленов. Очевидно, что определения величины Rr в целях проведения структурного анализа должны быть точными и воспроизводимыми, из-за чего настоятельно необходимо пользоваться сэндвич-камерой. Кроме того, если подвижная фаза представляет собой с. (есь растворителей, приходится работать с камера.ми, позволяющими вводить образец уже после начала элюирования (для того, чтобы распределение двух фаз по поверхности пластинки оказывалось однородным). [Ка.мера BN (фирма Desaga) камера V ario-KS (фирма amag).] [c.176]

Структуры подобного типа получили название сэндвичеобразных (англ. сэндвич — бутерброд), в данном случае атом железа прикрыт сверху и снизу циклопентадиенильными циклами. Такое строение ферроцена подтверждено рентгеноструктурным анализом, на него указывают и спектральные данные. [c.338]

Три варианта камер с принудительным потоком растворителя, используемые в 1985 г., представляют собой ненасыщенные сэндвич-камеры, в которых неизбежно расслоение подвижной фазы в слое во время элюирования. Единственным способом устранения этого вредного эффекта является продувка слоя потоком газа, содержащего пары многокомпонентной подвижной фазы, непосредственно перед началом элюирования (когда пластинка уже установлена в камеру и подготовлена к работе). Кроме того, влияния разложения подвижной фазы можно избежать, если вводить образец уже после начала элюирования (когда все образующиеся фронты уже прошли ми.мо стартовой линии). Центробежный плоскостной хроматограф с вращающейся пластинкой (Rota hrom, фирма Petazon Ltd, Цюрих, Швейцария) начал выпускаться в 1987 г. Прибор пригоден для обеспечения аналитических и препаративных разделений обеспечивает постоянство скорости потока через разделяющий участок длиной 10 см может использоваться в круговом режиме и (за счет прорезания соответствующих борозд в слое) в "антикруговом" или линейном режимах [298]. Метод плоскостной жидкостной хроматографии с принудительным потоком растворителя еще является новшеством. Разрабатываются удобные детекторы, дающие возможность регистрации разделения в реальном масштабе времени. Однако даже на данно.м этапе развития этот метод дает возможность сочетать (при сопоставимой продолжительности анализа) высокую разрешающую способность, свойственную для колоночной [c.273]

Структуры подобного типа получили название сэндвичеобразных (англ. сэндвич — бутерброд), в данном случае атом железа прикрыт сверху и снизу циклопентадиенильными циклами. Такое строение ферроцена подтверждено рентгеноструктурным анализом, на него указывают и спектральные данные. В изучение ферроцена И его производных большой вклад внесен А. Н. Несмеяновым и его учениками. [c.310]

Камера имеет круглую форму. В плоских камерах, таких, как Р-камеры (прототип ИС-камеры), предусмотрена возможность контроля объемной скорости подвижной фазы, хотя это и приводит к усложнению электронного оборудования для программи1)овапия во времени, при использовании нескольких насосов и обводного трубопровода. Но при разделении в таких камерах реализуются преимущества линейной ТСХ, такие, как двумерное и многомерное разделение, а также анализ значительно большего числа образцов. Величины Rf получают лучшими, чем в проточных камерах и сэндвич-камерах. Детальное описание П- и Р-камер можно найти в инструкциях, прилагаемых к этим камерам. Содержание зтого раздела целесообразно ограничить описанием методических принципов работы на П-камере и некоторыми основными практическими примерами. [c.95]

Как видно из табл. 3.2, молярное соотношение краун-эфир - соль в комплексе не всегда равно 1 1. Известны некоторые комплексы состава 2 1 или 3 2. В этом случае предполагается, что комплекс может иметь структуру сэндвича, как изображено на рис. 3.3, при условии, что диамётр катиона больше, чем величина полости краун-эфира. Это предположение позднее было доказано с помощью рентгеноструктурного анализа, а также другими методами (разд. 3.2.2). [c.103]

Для использования сэндвич-гибридизации в зонд нужно ввести спехщальные группы, обладающие высоким сродством к вспомогательному белку, несущему метку. Как и в иммуноферментном анализе, с этой целью часто используют биотин. Его легко присоединить к олигонуклеотидам или ввести в молекулу ДНК мягкой обработкой зонда. Например, небольшое число цитозиновых остатков можно превратить в производные, несущие алифатическую аминогруппу. С этой целью зонд обрабатывается этилендиамином или гексаметилен диамином в присутствии бисульфита натрия в соответствии с реакцией [c.262]

На основании рентгеноструктурного анализа выяснено пространственное строение как целой молекулы IgG, так и ее фрагментов (А. Эдмонсон, 1973). Установлено, что все домены иммуноглобулинов имеют очень похожую трехмерную структуру, получившую название иммуноглобулиновой упаковки (рис. 121). Каждый домен похож на сэндвич , образованный двумя слоями белка один слой содержит три витка полипептидной цепи, а другой — четыре. В каждом слое соседние витки являются антипараллельными и образуют ( -структур) (рис. 118). Два слоя располагаются примерно параллельно друг другу и соединяются одной внутрицепочечной S—S-связью. [c.218]

Подтверждение теории образования трехмерных структур со вторичной модуляцией, изложенной в 32, можно найти на электронномикроскопических изображениях, полученных от сплавов типа тикональ, находящихся на более поздних стадиях распада. На рис. 70, а [133] видна периодическая структура в сечении плоскостью (100). Стержни, вытянутые вдоль направления [001], подвергнуты вторичной модуляции. Они представляют собой сэндвичи , состоящие из приблизительно равнотолщинных пластинок двух равновесных фаз. Для сравнения на рис. 70, б приведено соответствующее сечение комплекса, полученного в результате теоретического анализа и изображенного на рис. 58. В 32 было показано, что толщины пластинок двух равновесных фаз, имеющих габитус (001), равны между собой. Этот вывод также согласуется с электронномикроскопическим изображением на рис. 70, а. [c.311]

Многие ненасыщенные органические соединения образуют с переходными металлами я-комплексы некоторые нз этих комплексов обладают поразительной устойчивостью. Одним из наиболее интересных и важных представителей такого рода комплексов является ферроцен, в основе структуры которого лежат два цикло-пентадиенильных аниона (1, разд. 9-6,Д) и ион двухвалентного железа. Его структура с несомненностью установлена путем рентгеноструктурного анализа. Он представляет собой структуру типа сэндвича , в которой железо связано с двумя расположенными в параллельных плоскостях циклоиентадиеновыми кольцами [c.231]

В ферроцендисульфохлориде найдено [46, 47], что заместители (сульфохлоридные группы) расположены в позициях 1,Г. Расстояния углерод — углерод (1,43 0,03 А) и углерод — железо (2,07 0,02 А) в этой молекуле практически не отличаются от соответствующих расстояний в самом ферроцене. Интересно, что атом серы сульфохлоридной группы выведен из плоскости углеродного цикла на 0,16 А в сторону второго лятичленного кольца того же сэндвича, так что связь сера — углерод составляет с плоскостью углеродного цикла угол 5,5°, а сама сульфохлоридная группа расположена не вполне симметрично по отношению к связанному с ним пятичленному циклу плоскость, проведенная через атомы серы и углерода, связанного с серой, образует с плоскостью углеродного цикла угол 85°. Анализ межмолекулярных расстояний в структуре ферроцендисульфохлорида позволяет сделать вывод, что такое расположение сульфохлоридной группы является следствием взаимодействия молекул в кристалле. [c.123]

Частным случаем импедансометрии является емкостно-омический метод, основанный на определении емкости С и сопротивления R сэндвича - металл - покрытие - электролит, который стал применяться в исследовательской практике более четверти века назад. Возможности этого метода расширились за счет анализа кинетики изменения частотной дисперсии и С в ходе воздействия на покрытие агрессивных жидких сред [153, 158]. В качестве примера ниже приведены результаты оценки защитных свойств лаковых эпоксидно-уретановых покрытий на основе олигомера Э-49 и ДГУ [c.125]

Показаны [248] преимущества новой конструкции проточного мембранного электрода типа сэндвич для определения NO в проточно-инжекционном анализе. Электрод состоит из двух блоков, соединенных винтами, на внутренней поверхности I блока имеется цилиндрическая камера (диаметр 1 см, глубина 0,3 см), в которую заливают электропроводящую эпоксидную смолу и на ее поверхность затем наносят ионочувствительную мембрану. Вдоль плотно прилегающей к мембране поверхности [c.171]

Если, однако, на циклопентадиенилмагнийбромид подействовать хлористым железом (можно взять и хлорное железо — оно восстановится до хлористого), то образуется интереснейшая ароматическая система — дициклопентадиенилжелезо, или ферроцен, построенная, как показал рентгеноструктурный анализ, сэндвиче образно (Посон, Вудворд, Уилкинсон) [c.495]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология