Антитела активный центр

Антитела, вырабатываемые организмом против антигенных детерминант, представляют неоднородную популяцию. Поэтому в случае поликлональных антител определяемое значение константы связывания является эффективной величиной, характеризующей образование иммунного комплекса с антителами, активные центры которых обладают различным сродством к антигену (см. гл. [c.219]

Очень высокой избирательностью обладают иммунные белки (антитела), соединяющиеся только со строго определенными для каждого антитела чужеродными белками (антигенами). Изучение при помощи электронного микроскопа показало, что антитела адсорбируются, например, на поверхности брюшно-тифозных бактерий не равномерно, а участками, как бы по активным центрам . [c.142]

Для данного антитела на связывание антигена влияет наличие активного центра и его конформационная целостность. Связывание большее, чем ожидаемое, может также являться результатом неспецифического взаимодействия с определимым веществом. В случае систем твердофазного анализа использование поверхностно-активных веществ, чтобы сделать поверхность менее гидрофобной, может уменьшить вторую проблему, ио высокая концентрадия поверхностно-активного вещества может привести также к потере антител, если оии связаны нековалентно. [c.602]

Низкомолекулярные вещества (моно- и олигосахариды), идентичные или сходные по структуре с детерминантными группами антигена, конкурируют с ним за активные центры молекулы антитела и поэтому препятствуют иммунологической реакции, причем чем больше сходство этих низкомолекулярных веществ с детерминантной группой антигена, тем сильнее ингибирующее действие. Поэтому, если только доступен соответствующий набор олигосахаридов, изучение ингибирования иммунологических реакций может дать весьма ценную информацию о структуре антигенных детерминантных групп, а именно об их величине, о последовательности в них моносахаридных остатков и о конфигурациях их гликозидных связей. [c.518]

Поскольку индольная флуоресценция триптофана наиболее интенсивна среди природных аминокислот, она в основном ответственна за флуоресценцию большинства белков и находит различные применения в биологии и медицине, например в качестве пробы для выяснения структурных и конформационных изменений в белках, оценки совместимости антител в иммунологии и выяснения механизма действия ферментов [136, в, 15]. Примером, в частности, может служить гидролаза — лизоцим, содержащий шесть остатков триптофана, в том числе три, по-видимому, ассоциированы с активным участком. Присоединение субстрата приводит к голубому смещению в эмиссионном спектре на 10 нм, от 335 к 325 нм, сопровождающемуся повышением квантового выхода. Такое поведение интерпретируется как указание на взаимодействие между карбоксильными и индольными группами активного центра, которое исчезает при присоединении к субстрату [16]. [c.494]

Учитывая работы по определению поверхности активных центров антигенов, реагирующих с антителами, можно рассмотреть иммунохимические реакции пневмококковых и некоторых других полисахаридов. [c.674]

Аллергенность же гаптена будет зависеть от жесткости его конформации, способности образовывать с белком-носителем комплексный антиген и интенсивности взаимодействия последнего с активным центром антитела или рецептором эффекторных Т-клеток. Немаловажное значение имеет и размер молекулы гаптена чем она меньше, тем большее значение имеет участие носителя в построении антигенной детерминанты, тем легче будут возникать перекрестные реакции на сходные гаптены и тем существеннее будет осложнение сенсибилизации аутоаллергическими реакциями. [c.49]

Эти иммунохимические методы могут оказаться полезными при определении степени очистки и получении сведений о гетерогенности полисахаридных препаратов при фракционировании смесей при обнаружении потери биологической активности или расщепления в процессе очистки при установлении идентичности неизвестных составных частей сложных полисахаридов при обнаружении структурного сходства или различий между полисахаридами при получении информации о последовательности моносахаридов и типах связей в участках структуры, реагирующих с антителом, а также при определении стереохимических требований и размеров активных центров молекул антител. [c.431]

Специ )ич. способность антител вступать в реакции с антигенами обусловлена двумя относительно небольшими участками молекулы антитела — активными центрами размером в 3—5 аминокислотных остатков полипептидной цепи. При действии протеолитич. ферментов на антитела удается получить иммунохимически активные фрагменты с мол. весом ок. 50 ООО. Активные фрагменты с мол. в. 50 ООО и даже 13 ООО, выделенные из ферментативного гидролизата кроличьих антител, содержат повышенное количество триптофана. Эти, а также нек-рые другие данные дают основание для предположений о важной роли остатков триптофана в активном центре антител. [c.112]

Принцип стерического исключения субстрата был использован также для разработки метода определения макромолекулярных антигенов, таких, как альбумин, иммуноглобулины G и М. В анализе используют конъюгат антигена с р-/)-галактозидазой Е. соИ. После образования комплекса с антителами активный центр фермента становится недоступным для взаимодействия с искусственно синтезированным макромолекулярным субстратом о-Нитрофенил-Р-/)-гатактозидом, ковалентно связанным с водорастворимым полимерным декстраном. В присутствии антигена степень ингибирования фермента уменьшается пропорционально концентрации исследуемого соединения. Метод позволяет измерять IgG в микро-граммовых количествах в течение нескольких минут. [c.116]

Область, контактнрчтощая с антигеном (паратоп, или активный, антигенсвязывающий центр), располагается на N-конце РаЬ-фрагментов она представляет собой более или менее гл ок то полость, стенки к-рой сформированы ами-нокислотньгчш остатками гипервариабельных участков легкой и тяжелой пепей. У антител, связывающих белки и полисахариды, в полость может входить до 6-7 остатков аминокислот или моносахаров. У молекул IgG, IgD, IgE и IgA (молекула IgA построена подобно молекуле IgG) 2 активные центра, j молекул IgM -10. [c.217]

В конкурентном иммунном анализе устанавливают число центров, не занятых пробой он может иметь различные варианты, но суть в том, что определяемое вещество пробы смешивают с меченым определяемым веществом, и они конкурируют за активные центры (рис. 7.9-4). Метсд требует разделения связанного и свободного антигена или антитела с целью определения их относительных количеств. Если определяют антиген, присутствие меченого антигена позволяет оценить относительное разделение. Как можно заключить из кривых иа рис. 7.9-3, оптимальная чувствительность достигается при уменьшении концентраций меченого антигена и антитела. [c.569]

В геноме имеется множество У-генов, некоторое количество J- и D-генов и по одному гену каждого субкласса тяжелых ц пей. Как следствие такого не совсем обычного способа кодирования иммуноглобулиновых молекул возникает возможность появления громадного разнообразия антител с различающимся строением и свойствами. Действительно, в результате перестройки генома получаются всевозможные комбинации указанных генов, что приводит к созданию молекул, каждая из которых обладает уникальной структурой. Строение (и значит, специфичность) активного центра варьируется в зависимости от строения образующих его У - и У -обла-стей, а также сочетания их с разными J- и D-участками. [c.217]

Попытки выделить небольшой пептид, моделирующий активный центр молекулы, не увенчались успехом. Использование метода направленного точечного мутагенеза и моноклональных антител к определенным участкам молекулы IL2 показало, что активный центр формируется аминокислотными остатками, находящимися на N- и С-концах молекулы, сближенных в пространственной структуре молекулы за счет дисульфидной связи. [c.229]

А. X. применяют гл. обр. в науч. исследованиях для выделения ферментов, антител, антигенов, гормонов, вирусов, клеток. Особенно важно, что этим методом можно выделять следовые кол-ва (до песк. мкг) биологически активных п-в. А. X. примен. также для изучения четвертичной структуры ферментов, их активного центра, механизма действия и структуры нуклеиновых к-т, влияния гормонов иа клеточные рецепторы. [c.60]

Области применения аффинной хроматографии расширяются, поокольку метод основан на специфических взаимодействиях биологически активных веществ. Как видно из табл. 11.1, этот метод успешно используется при выделении самых разных соединений. Наряду с этим он полезен при изучении различных систем на аффинных сорбентах можно разделять низкомолекулярные энан-тиомеры и удалять нежелательные вещества из живых организмов. -Например, аффинной хроматографией можно разделить на оптические антиподы 0,Ь-триптофан. Используя специфическое выделение меченых пептидов, можно определить пептиды активного центра фермента, связывающего участка антител или участка пептидных цепей на поверхности молекулы. Аффинная хроматография может быть использована для изучения возможности замены природных пептидных цепей ферментов различными модифицированными синтетическими пептидами. Активные центры ферментов или антител, связывающие свойства субъединиц, специфичность ферментов по отношению к различным ингибиторам, комплементарность нуклеиновых кислот, взаимодействие нуклеотидов с пептидами, влияние присутствия различных соединений на образование специфических комплексов и т. д. могут быть исследованы с помощью аффинной хроматографии. [c.282]

Если остаток определенной аминокислоты маскирован или каким-либо иным образом защищен от действия реагента, можно пометить все остальные остатки этого типа, т. е. ввести негативную метку. Коэн и Варинга [226] обрабатывали холин-зстеразу с помощью ДФФ в присутствии бутирилхолина, маскирующего активный центр. Затем модифицированный белок обрабатывали меченым ДФФ ( Р) в отсутствие бутирилхолина. Аналогичный метод был применен Кошландом с сотр. [227] при исследовании антител вначале антитела к га-азобензоларсенату иодировали в присутствии гаптена, а затем в модифицированный белок вводили [c.371]

Химические исследования, проведенные в последние 20 лет, показали, что пространственные структуры белков необычайно сложны, а формы их молекул имеют решающее значение для осуществления каждым белком его специфической биологической функции. Полипептидная цепь, состоящая из сотен связанных друг с другом аминокислот, принимает такую пространственную форму (называемую конформацией), которая определяется его аминокислотной последовательностью. Например, молекула коллагена — белка, придающего прочность коже и костям, — имеет форму стержня. Антитела представляют собой молекулы -образной формы с выемками, которые служат для распознавания чужеродных веществ и запуска реакций, обеспечивающих их эффективное обезвреживание. Ценная информация об их архитектуре была получена в рентгеноструктурных исследованиях. Молекулы ферментов имеют щели, называемые активными центрами , в которых связывание реагентов осуществляется таким образом, что становится возможным образование новых химических связей между ними. Таким образом, определенной биологической функции белка соответствует определенная конформация. Основные успехи в исследовании конформации белков были получены с помощью рентгеновских лучей, а также нейтронных и электронных пучков и других методов, которые позволяют нам как бы увидеть белок под увеличением в миллион раз и более. Выяснение конформаций белка показывает, как он выполняет свою биологргаескую функцию. [c.173]

Как известно, вещества, продуцируемые микроорганизмалп и вызывающие образование антител, называются антигенами. Основная функция антител заключается в связывании антигенов. Согласно представлениям Эрлиха, Лаидштаннера и Полинга, антигенный детерминант (активный центр) и специфический участок антитела комбинируются, поскольку они стереохимически соответствуют друг другу. Иными словами, антигенный детерминант является информационной матрицей для построения специфического участка антитела [51]. [c.172]

Действительно, заведомо исключая расположение спин-меток в активном центре антитела, можно прийти к выводу, что относительно подвижное состояние спин-меток в преципитате антиген — антитело может сохраняться лишь при отсутствии сильной дегидратации антител за счет межмолекулярных взаимодействий. Следовательно, в отличие от у-глобулина, осажденного сульфатом аммония, специфический преципитат антиген — антитело в соответствии с альтернационной теорией имеет микроячеистую структуру. [c.173]

Если принять во внимание возможность спонтанного гидролиза мальтотетрозы, она оказывается лучшим ингибирующим агентом, поэтому три- и тетрасахариды имеют наивысшее сродство к антителам. Кабат сделал вывод, чТо активный центр каждого типа антитела должен совмещаться по крайней мере с тремя (а возможно и с четырьмя) (i-D-глюкопиранозными единицами полисахаридной цепи гомологичной структуры (16 или 1-ч-4). [c.674]

В заключение остановимся на реакции химических гаптенов и комплексных антигенов с химической детерминантой с антителами. Известно, что взаимодействие антигена с антителом обусловливается силами, действующими только на очень близком расстоянии. Так, например, активный центр антитела превосходит по своим размерам гаптенную детерминанту всего на 0,3—0,5 нм. На таком расстоянии связь мож т быть обусловлена гидрофобным взаимодействием, электростатическими силами, силами ван дер Ваальса, водородными связями или диполь-дипольным взаимодействием. Каждому гаптену в зависимости от его структуры свойственны те или иные типы связей (табл. 8). При взаимодействии антител против р-азобензойной кислоты со специфичными антителами константа связывания равна 1,0. Если уменьшить (замена гексилом) или полностью исключить (замена ме-тильной группой) гидрофобные взаимодействия, обусловленные бензольным кольцом, то константа связывания уменьшается в 500—1000 раз. Если ослабить электростатические силы, связанные с отрицательным зарядом карбоксильной группы, введением добавочных радикалов в бензольное кольцо или заменой карбоксила на АзОз, то константа связывания также уменьшается в 7—1000 раз. [c.47]

Участие различных видов сил взаимодействия подтверждает и изучение химического строения активного центра антигаптенных антител. Так, связывание отрицательно заряженного гаотена 3-нитро-4-окси-5-йодофенил-ацетата происходит за счет включения в комбинационный участок антитела положительно заряженного аргинина [102], а связывание гидрофобной динитрофенильной группы — за счет гидрофобного тирозина [139]. Более [c.47]

Роль отдельных групп молекулы гаптена в энергии связывания с активным центром антител (по данным Pressman, Grossberg, [c.48]

ТОГО, как показали исследования Ri hards с соавт. [126], различным группам молекулы гаптена в активном центре антитела соответствуют строго определенные структуры. В свете этих данных становится понятным, почему при [c.48]

В настоящее время нет сомнений в том, что специфичность антител зависит от их химической структуры. Однако еще неясно, чем именно обусловлена эта специфичность — аминокислотным составом, последовательностью аминокислот или характером свертывания полипептидной цепи при образовании глобулярных молекул, показанных на фиг. 3. Полинг [9] счит-ает правильным последнее предположение. Действительно, при анализе антител не обнаружено каких-либо четких различий в аминокислотном составе между разными антителами или между антителами и нормальным глобулином [1,15,16]. Если различия в основном заключаются в последовательности аминокислот и ограничиваются активным центром антитела ( entral differential segment ) [6], то они слишком незначительны, чтобы их можно было обнаружить существующими аналитическими методами. [c.16]

Установлено, что на поверхности антитела имеются чаш е всего две чрезвычайно специфические группы — активные центры, жадно соединяющиеся с некоторыми группами на поверхности антигенных белков. Специфичность соединения антитела с антигеном, т. е. бе.ттком, к которому выработаны антитела, очень велика. Антигеном может служить почти каждый белок организма чуждого вида. Антигенами служат белки, составляющие поверхностную оболочку бактерий или вирусов. В последнее время показано, что антигеном может явиться ДПК, подвергнутая тепловой денатурации,некоторые синтетические полипептиды, содержащие основные аминокислоты, в особенности гистидин. Однако в последних случаях нет уверенности, что ДПК или полипептид не соединяются предварительно с одним из белков крови животного, подвергнутого иммунизации, и уже в таком виде становятся антигенами. [c.501]

Если комплемептарность между активным центром и переходным состоянием является существенной для ферментативного катализа, то нельзя исключить возможность синтеза искусственного фермента за счет конструирования подходящего активного центра. Один из возмо кных путей заключается в получении антитела к гантеновой группе, которая адекватна переходному состоянию данной реакции. Связывающие центры таких антител долишы быть комплементарны переходному состоянию и должны вызывать ускорения за счет переведения связанных субстратов в положение, похожее на переходное состояние. [c.227]

Межмолекулярные взаимодействия зарял енных и полярных и некоторых нейтральных молекул в растворах, как правило, обеспечиваются электростатическими силами, водородной связью или переносом заряда. Однако-в водном растворе эти типы взаимодействий малоэффективны (гл. 6, 7 и 9) ввиду высокой сольватирующей способности молекул воды, прочности образуемых ими водородных связей и слабости обычных взаимодействий с переносом заряда в основном состоянии. Чтобы объяснить большие энергии связывания, обнаруживаемые для фермент-субстратного взаимодействия, и связывания малых молекул с белками часто необходимо учитывать еще один тип взаимодействия, который за неимением точного термина условно назовем гидрофобной связью . Гидрофобные силы , вероятно, являются наиболее важным фактором, обеспечивающим нековалентное межмолекулярное взаимодействие в водном растворе. Свободные энергии связывания субстратов и ингибиторов с активными центрами ферментов часто равны примерно —10 ккал/моль (—42-10 Дж/моль) и менее, причем лишь небольшую долю-этой величины можно отнести за счет других типов взаимодействия. Сила и специфичность связывания малых молекул белками видны особенно четко при взаимодействии гаптенов с антителами, движущей силой которого обычно является гидрофобное взаимодействие. Свободная энергия связывания е-дини-трофениллизина специфическим для него антителом, которая почти полностью обусловлена взаимодействием с динитрофенильной группой, приблизительно равна —12 ккал/моль (—50-10 Дж/моль), а энергии связывания малых слабополярных гаптенов обычно лежат в интервале от —5 до —10 ккал/моль (от —21 до —42-10 Диг/моль) [1, 2]. [c.303]

Вероятно, комплексы с переносом заряда (КПЗ) играют весьма ограниченную роль в катализе и во взаимодействиях биологически важных макромолекул, хотя в ряде случаев было показано существование таких комплексов. Связывание 2,4-динитротолуола с антителами на динитрофенильную группу приводит к уменьшению коэффициента экстинкции в полосе поглощения динитротолуола и появлению новой полосы поглощения динитротолуола при 300 нм, которая указывает на образование КПЗ [2]. КПЗ с участиел пиридиновых и флавиновых групп, являющихся активными центрами коферментов, участвующих в биологических окислительно-восстановительных процессах, существуют, как было показано, в довольно специфических условиях и могут принимать участие в окислительно-восстановительных реакциях [c.332]