Определение глюкозо-6-фосфата

К безбелковому раствору добавляют равный объем 2 н. соляной кислоты, перемешивают и ставят в кипящую водяную баню на 10 мин. Затем пробы охлаждают, добавляют 2 н. раствор щелочи в количестве, равном добавленной кислоте, и проводят определение неорганического фосфата. Параллельно проводят определение неорганического фосфата б (с. 35). По разности а—б) рассчитывают количество фосфата глюкозо-1-фосфата в исследуемой пробе. [c.39]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗО-6-ФОСФАТА [c.40]

Реактивы для определения глюкозо-6-фосфата энзиматическим методом с глюкозо-6-фосфатдегидрогеназой (с. 41). [c.65]

Для определения глюкозо-6-фосфата энзиматическим методом при осаждении белков используют 0,5 н. раствор хлорной кислоты. Из безбелкового раствора хлорную кислоту удаляют в виде перхлората калия (с. 29). Надосадочную жидкость используют для определения глюкозо-б-фосфата (с. 40). [c.66]

В клинической диагностике комплексометрия ограничена главным образом определением кальция или магния в сыворотке крови. Об этих определениях и богатой литературе по этому вопросу уже указывалось на стр. 461. Здесь остается еще описать определение фосфатов в сыворотке крови и определение глюкозы. Следует упомянуть также об определении общего содержания железа в крови. [c.518]

Первый раздел Практикума должен помочь студентам освоить методические приемы и основы аналитической биохимии. Он содержит описание основных принципов и методов концентрационного анализа, принятых в биохимии (спектрофотометрического, колориметрического, манометрического), в частности, для количественного определения гликогена, глюкозы, неорганического фосфата, фосфорных эфиров углеводов, молочной и пировиноградной кислот. В раздел включены работы, посвященные анаэробному превращению углеводов. Каждая задача, выполняемая студентом, предусматривает анализ чистоты исходного препарата углевода или его фосфорного эфира, получение ферментного препарата (гомогената или экстракта ткани), постановку биохимического эксперимента, количественную оценку результатов. Количественное определение веществ проводится несколькими методами, результаты сопоставляются. Так, выполняя задание по теме Превращение фруктозо-1,6-дифосфата в молочную кислоту , студент анализирует фруктозо-1,6-дифосфат по фруктозе и по фосфату, молочную кислоту определяет спектрофотометрическим и колориметрическим методами. Подобным образом выполняются работы, связанные с превращением других фосфорных эфиров углеводов, гликогена, глюкозы. [c.5]

Пробы 5 и 6 ставят для учета нарастания неорганического фосфата в процессе инкубации за счет возможного фосфатазного расщепления глюкозо-1-фосфата. Количество неорганического фосфата, определенное в этих пробах, вычитают из 1—4 проб. На основании полученных данных можно рассчитать процент превращения глюкозо-1-фосфата в гликоген под влиянием фосфорилазы а и фосфорилазы Ь в исследуемых мышцах, выражая прирост неорганического фосфата в микромолях в минуту на 1 г сырого веса ткани. [c.59]

Аналогичная внутримолекулярная конденсация лежит, видимо, в основе синтеза миоинозита — широко распространенного циклита, входящего в состав липидов, фитина и являющегося витамином для многих организмов. Из дрожжей выделена ферментная система, катализирующая превращение глюкозо-6-фосфата в миоинозит для протекания реакции требуется присутствие НАД. Опыты с изотопами показывают, что при реакции не происходит разрыва углеродной цепи глюкозы промежуточным продуктом является фосфат инозита . Гипотетическая схема такого превращения предложена еще в 1945 г. однако сколько-нибудь определенные биохимические данные о механизме превращения пока отсутствуют. [c.403]

Глюкозо-1-фосфат принадлежит к легкогидролизуемьш в кислотах фосфорным соединениям. При нагревании в кипящей водяной бане в течение 10 мин в 1 н. растворе сильной кислоты он полностью расщепляется с образованием неорганического фосфата. Такими же свойствами обладают АТФ (отщепляются две частицы фосфорной кислоты) и АДФ (отщепляется одна частица фосфата). В отсутствие АТФ и АДФ глюкозо-1-фосфат определяют по разности количества неорганического фосфата, определяемого в пробах после 10-минутного кислотного гидролиза айв пробах без гидролиза б. Если в растворе присутствуют АТФ или АДФ, их необходимо предварительно удалить в виде бариевых солей. Определение неорганического фосфата лучше проводить, используя модификацию метода по Херсу (с. 35). [c.39]

Определение глюкозо-6-фосфата может быть проведено по нарастанию неорганического фосфата после щелочного гидролиза. При нагревании в 0,2 н. растворе щелочи в кипящей водяной бане за 10 мин достигается максимум гидролиза. При этом происходит гидролиз и других гексозофосфатов глюкозо-6-фосфат, фруктозо-6-фосфат и фрук-тозодифосфат расщепляются на 65%. Глюкозо-1-фосфаг и глицерофосфат в этих условиях практически не подвергаются гидролизу. [c.40]

Определение активности образующейся фосфорилазы а. Активность фермента измеряют по обратной реакции (синтезу гликогена), сопровождающейся выделением неорганического фосфата. К малеат-ному буферу (0,1 М), pH 6,5, содержащему 0,1 М глюкозо-1-фосфат — 2%-ный гликоген, добавляют равный объем раствора, полученного после киназной реакции. Реакцию проводят 5 мин при 30° С. Останавливают реакцию добавлением реактивов для определения неорганического фосфата. Количество образовавшегося фосфата рассчитывают по калибровочному графику. [c.224]

В качестве сопрягающих ферментов часто используют дегидроге-назы и их коферменты в окисленной или восстановленной форме. Например, активность гексокиназы определяют в системе, содержащей дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата и НАДФ. Скорость восстановления НАДФ соответствует скорости гексокиназной реакции. Иногда используют системы двойного или тройного сопряжения, однако конечным звеном такой системы является соответствующая дегидрогеназа (например, при определении активности фосфофруктокиназы, креатин-киназы). При определении активности в сопряженной системе следует учитывать ряд условий. [c.208]

Активность фосфоглюкомутазы может быть определена двумя ме-т-одами химическим, основанным на определении убыли субстрата реакции, и энзиматическим — в сопряженной системе, содержащей помимо фосфоглюкомутазы и глюкозо-1-фосфата также НАДФ и дегидрогеназу глюкозо-6-фосфата. Последний фермент используется в избытке, и скорость реакции, катализируемой фосфоглюкомутазой, определяют по нарастанию НАДФН. [c.227]

Для определения активности (при любом методе) препарат фермента подготавливают для работы, активируя его в среде, содержащей 1 мМ. Mg ls и 30 мМ. гистидин (или имидазол). Смесь инкубируют 10—20 мин при 0° С. Предварительно растворы фосфоглюкомутазы л сопрягающего фермента (дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата) обессоливают на колонке с сефадексом G-25 (тонкий). [c.227]

Определение активности фруктозо-1,6-дифосфатазы. Активность фермента определяют энзиматическим методом по количеству образовавшегося фруктозо-6-фосфата. Метод основан на использовании системы двойного ферментного сопряжения с участием глюкозо-6-фос-фатизомеразы и дегидрогеназы глюкозо-6-фосфата согласно схеме [c.355]

Определение в супернатанте глюкозо-6-фосфата проводят энзиматическим методом в системе с дегидрогеназой глюкозо-6-фосфата согласно схеме (с. 41). За ходом реакции следят на спектрофотометре по увеличению оптической плотности при 340 нм в результате восстановления НАДФ. Показания прибора регистрируют после доведения реакции до конца. [c.372]

Определив потребление митохондриями неорганического фосфата и кислорода в аппарате Варбурга (с. 10), рассчитывают коэффициент фосфорилирования. Так как для достоверного определения кислорода и неорганического фосфата необходима довольно продолжительная инкубация митохондрий, в реакционную смесь обычно вносят АДФ-реге-нерирующую систему (чаще всего для этой дели используют гексокиназу с глюкозой). Это удобно также потому, что гексокиназа успешно конкурирует с митохондриальными АТФ-азными реакциями, которые могут сильно искажать результаты опытов, гидролизуя образующийся в ходе фосфорилирования АТФ. [c.467]

Важные метаболические пути, в которых участвуют пятиуглеродные пентозные сахара, называют либо пентозофосфатным и путями, либо фосфоглюконатным путем, либо гексозомонофосфатным шунтом. Исторически первые данные о существовании таких путей были получены в экспериментах Варбурга по окислению глюкозо-6-фосфата в 6-фосфоглюконат. Напомним, что при изучении именно этой реакции был открыт NADP+ (гл. 2, разд. 3). Многие годы это окисление считали ферментативной реакцией, лежащей вне каких-либо определенных метаболических путей. Вместе с тем существовало предположение, что эта реакция является частью альтернативного пути распада глюкозы. Это предположение укрепилось после того, как было обнаружено, что процесс дыхания в тканях продолжается в присутствии высоких концентраций ионов фтора — известных ингиби торов енолазной реакции, — способных почти полностью блокировать процесс гликолиза. В некоторых тканях (в частности, в печени) этот альтернативный путь дыхания оказы вается особенно активным. Теперь мы знаем, что пентозофосфатные пути многообразны и многоплановы. Они не только занимают существенное место в процессах катаболизма,, но при функционировании в обратном направлении восстановительный пентозофосфатный путь) являются ключевыми реакциями фотосинтеза, приводящими к образованию сахара [c.339]

Около 90% ГЛЮКОЗЫ, усваиваемой эритроцитами, превращается в процессе гликолиза в лактат, но - 10% окисляется (через образование глюкозо-6-фосфата) в 6-фосфоглюконат. Это окисление (реакция а) катализируется глюкозо-6-фос-фат — дегидрогеназой [уравнение (8-42)] с участием NADP+. Именно эта реакция в основном обеспечивает эритроциты необходимым количеством NADPH, используемым для восстановления глутатиона (дополнение 7-Ж) в ходе реакции б. Глюкозо-6-фосфат—дегидрогеназа имеет очень важное значение, и все же свыше 100 млн. человек, особенно в тропических и средиземноморских странах, имеют наследственный недостаток этого фермента. Как оказалось, генетически эти нарушения весьма разнородны — обнаружено уже по меньшей мере 22 типа такого рода нарушений. Установлено, что отсутствие этого фермента приводит к весьма серьезным последствиям при некоторых заболеваниях, а также в ответ на введение определенных лекарственных препаратов наблюдается разрушение большого количества эритроцитов. Выживаемость дефектных генов, как и в случае серповидноклеточной анемии (дополнение 4-Г), по-видимому, обусловлена повышенной сопротивляемооью людей, имеющих такие гены, к малярии. [c.371]

Для некоторых определенных почвенных бактерий характерно, что поглощение кремния в виде растворимого кремнезема в культуральной среде сопровождается выделением фосфора. Хейнен [31] изучил факторы, которые ускоряли и затормаживали такой обмен. В отсутствие глюкозы кремний маскировался избытком фосфата. Фракции в виде частиц, отделяемые от бактериальных оболочек, включались в метаболизм кремния [32]. За период с 1960 по 1967 г. Хейнен представил 14 статей, в которых изложил детали этого вопроса. [c.1010]

Амилоза и амилопектин являются а-/)-(1->4)-связанными глю-канами [см., например, (1)], однако в амилопектине, имеющем разветвленное строение, в точках ветвления (3) имеются дополнительно а-/)-(1->6)-связи. Это было известно уже много лет назад из результатов анализа методом метилирования и гидролиза. При кислотном гидролизе кукурузного и рисового крахмала, выделенных из зерен в стадии восковой спелости, обнаружено, что в их состав входит заметное количество /)-глюкозо-6-фосфата [84]. Последующий анализ показал, что в амилопектине в среднем один из шести остатков D-глюкозы фосфорилирован. При метилировании амилозы и последующем гидролизе в качестве основного продукта образуется 2,3,6-три-0-метил-0-глюкоза и менее 0,4 % 2,3,4,6-тетра-О-метил-О-глюкозы, происходящей из невосстанавливающего концевого остатка, т. е. молекула амилозы линейна и ее единичная цепь состоит из 200—350 остатков D-глюкозы. Определенная осмотическим методом молекулярная масса соответствует такой длине цепи [85]. Однако анализ неразветвленной структуры достаточно сложен из-за небольшого числа концевых остатков по сравнению с общим числом остатков, образующих цепь, а также из-за деградации разрушение одной связи может вдвое уменьшить длину цепи. Физические методы определения длины цени, при условии использования независимых методов для определения гомогенности препарата, дают большие значения длины молекул амилозы, чем значения, полученные химическими методами. Анализ методом светорассеяния и ультрацентрифугирования показывает, что длина цепи молекулы амилозы часто достигает 6000 моносахаридных звеньев. Обработка амилозы р-амилазой показала, что молекула линейна единственным продуктом расщепления была мальтоза. Изучение действия нуллуланазы и других амилолитических ферментов на различные амилозы показало, что их молекулы содержат некоторое количество разветвлений, присоединенных к основной цепи а-(1->б)-связями [63,64]. Гидродинамическое поведение фракций амилозы также свидетельствует о том, что амилоза в некоторой степени является разветвленной. [c.236]

Для приготовления питательных сред в микробиологической промышленности используют сырье минеральное, животного и растительного происхождения, а также синтезированное химическим путем. Эти веш,ества, входя в состав питательной среды, обеспечивают развитие культуры и биосинтез определенных продуктов. Они не должны содержать вредных примесей. При выборе сырья необходимо учитывать его влияние на себестоимость, так как в микробиологическом синтезе важное значение имеет стоимость исходных веществ и материалов. В качестве источников углерода чаще всего используют углеводы (глюкоза, сахароза, крахмал, лактоза) или богатые углеводами натуральные продукты (меласса, кукурузная мука, гидроль и др.), а также жиры и даже вещества, содержащие углеводороды (нефть, парафин, керосин, природный газ, метан и др.). Источником азота обычно бывают неорганические соли — сульфат аммония, двузамещенный фосфат аммония, аммиак, нитраты, а также мочевина или натуральные продукты — кукурузный экстракт, соевая мука, дрожжевой автолизат и т. д. [c.75]

Крахмал под действием фермента диастазы расщепляется с образованием мальтозы. При определенных условиях могут быть получены циклические олигосахариды, содержащие 6—8 остатков глюкозы, которые называют декстринами, и используют как клеящее средство. Фос-форилазы могут расщеплять крахмал с образованием а-О-глюкопира-нозил-1-фосфата, который легко гидролизуется до Д-глюкозы и фосфорной кислоты. [c.643]

В этой реакции функцию воды выполняет фосфорная кислота. В результате фосфоролиза происходит отщепление от крахмала глюкозо-1-фосфата, который иногда называется эфиром Кори . Этот эфир образуется не только из крахмала, но также из гликогена. Определение фосфоролитической активности растительных продуктов имеет такое же большое значение, как и определение амилолитической активности. [c.103]

Описан метод определения фосфатов в присутствии лабильных фосфатов (натрий- -глицерофосфат, глюкоза-1-фосфат, динатрий-фенилфосфат и др.), заключаюш ийся в экстракции PO4 в виде фосфоромолибдата аммония к-бутанолом и последующем восстановлении его гидрохиноном и смесью NaaSOa и NaHSOg. Чувствительность метода 0,5 мкг Р/л [718]. [c.162]

Первоначально окислительный пентозофосфатный путь возник, вероятно, для обеспечения эубактерий пентозами. В этом случае возникновение только трех новых ферментов (глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы, лактоназы и фосфоглюконатдегидрогеназы) уже приводило к синтезу пентоз. Поскольку к этому времени функционировали изомеразные ферменты гликолитического пути (см. рис. 53), формирование фосфопентозоизомеразы произошло довольно легко. Действительно, при определенных условиях окислительный пентозофосфатный путь на этом завершается. [c.252]

Многие гормоны не проникают внутрь клеток-мишеней, а связываются со специфическими рецепторами на поверхности этих клеток. Это связывание является сигналом, запускающим в клетке определенные физиологические процессы. Например, гормон адреналин, вырабатываемый надпочечниками, включает в клетке-мищени штючевую стадию окисления полисахаридов — превращение полимерного углевода гликогена в мономерное производное глюкозы, глюкозо-1-фосфат, который далее подвергается окнслителыюй деструкции, сопровождающейся фосфорилированием большого числа молекул АДФ. [c.37]

Все чаще в последнее время обнаруживают среди продуктов обмена у микроорганизмов. Среди них тетра- и пентафосфаты, которые выполняют функции регуляторов в многочисленных биохимических реакциях. Они обнаружены у бактерий и в актиномицетах в присутствии глюкозы и Mg +, а также фосфатов при узком интервале pH и определенной температуре. [c.433]

Среда Кларка (для реакции с метиловым красным и определения продукции ацетоина). Пептона 5 г, глюкозы 5 г, фосфата калия двуосновного 5 г, дистиллированной воды 1000 мл. Расплавляют, разливают в пробирки по 5 мл, стерилизуют 15 мин при 112°С. Следить, чтобы общее время воздействия повышенной температуры не превышало 30 мин. [c.233]

Синтетическая среда для определения уреазной активности (цит. по г. П. Калине, 1969). Раствор Л Ь 1 к 2 г мочевины добавить 2 мл этилового спирта и 4 мл стерильной дистиллированной воды. Не стерилизовать. Раствор № 2 фосфата калия одноосновного 0,1 г, фосфата калия двуосновного 0,1 г, хлорида натрия 0,5 г, глюкозы 0,1, 0,2% раствора фенолового красного 0,5 мл, дистиллированной воды 100 мл pH 7,0. Стерилизовать 15 мин при 112°С. Перед употреблением смешать 1 часть раствора ДЬ 1 и 19 частей раствора № 2. [c.233]

Бульон на вытяжке мозга и сердца для определения термоустойчивости (Стандартные методы США, 1975). Вытяжки из мозга теленка 200 г, вытяжки из сердца рогатого скота 250 г, протеозного пептона 10 г, глюкозы 2 г, хлорида натрия 5 г, фосфата натрия двуосновного 2,5 г, дистиллированной воды 1000 мл. Расплавить при нагревании, стерилизовать 15 мин при 112°С. После стерилизации pH 7,4. Среду рекомендуют в качестве питательной основы для определения тестов Шермена. Среда может быть использована в плотном варианте при добавлении 15 г агар-агара. [c.238]

Хотя две описанные выше группы ферментов катализируют реакции переноса, их не называют трансферазами , так как по определению трансферазы это ферменты, которые осуществляют перенос части молекулы донора, за исключением водорода и электронов, на молекулу акцептора, причем ни донором, ни акцептором не является вода . Трансферазы — очень большая группа ферментов. В нее входят фосфотрансферазы, обычно называемые киназами , которые катализируют перенос остатка фосфата от одного соединения на другое. Например, гексокиназа катализирует перенос концевого фосфатного остатка аденозинтрифосфата на глюкозу с образованием глюкозо-6-фосфата. Трансаминазы осуществляют перенос аминогруппы от а-аминокислоты на а-кетокислоту. Обзор, посвященный трансферазам, опубликован Гоффманн-Остенгофом [17] в 1960 г. [c.12]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология