Хроматография на гранулированных гелях

Справочник содержит сведения о различных сорбентах и хроматографических носителях, таких как ионообменные смолы, силикагель, окись алюминия, молекулярные сита, активные угли, целлюлозы, сефадексы и другие гранулированные гели, твердые носители для газо-жидкостной хроматографии. В книге обобщены данные о промышленных образцах материалов, выпускаемых в СССР, США, Англии, Франции, Швейцарии Японии, ФРГ, ГДР, Венгрии, Чехословакии и других странах (отражена продукция примерно 200 фирм). Вместе с перечнем марок сорбентов и носителей приведены основные сведения, необходимые для наиболее рационального использования. [c.2]

Хроматография на гранулированных гелях [c.16]

Для объяснения процессов, происходящих в гранулах геля, был предложен ряд гипотез подробно они будут рассмотрены в гл. 1И. Здесь же мы лишь констатируем следующее смесь веществ можно разделить по молекулярным весам на слое гранулированного геля соответствующей пористости. Не подлежит сомнению, что это хроматографический процесс, поскольку растворенные вещества проникают в неподвижную фазу, в результате чего смесь разделяется на компоненты. В настоящее время существует в основном лишь два способа подобрать термин для нового хроматографического метода для этого используют либо применяющийся носитель (например, хроматография на бумаге), либо процесс, который, как полагают, лежит в основе разделения (например, распределительная хроматография). В соответствии с этим метод разделения ионов на заряженном полимере можно назвать либо хроматографией на ионообменных смолах, либо ионообменной хроматографией. То же относится и к обсуждаемому здесь методу. В табл. 1 приведены все предложенные для него названия, каждое из которых имеет как преимущества, так и недостатки. [c.20]

Любая теория, касающаяся поведения на слое гранулированного геля веществ с различными размерами молекул, должна учитывать эти результаты. При экспериментальной проверке каждой новой теории с помощью стандартов следует иметь в виду, что результаты, не прошедшие статистической обработки, нельзя считать достаточно точными. В следующих разделах коротко рассмотрены различные подходы к созданию теории гель-хроматографии и дана их оценка в свете имеющихся экспериментальных данных. [c.115]

Эккере [33] применил этот принцип к гель-хроматографии и предложил для очень пористых гелей механизм ограниченной диффузии. (В отличие от других типов геля для сефадекса 0-200 коэффициент распределения между фазой геля и элюентом в равновесном состоянии значительно отличался от значения Кв., определенного на колонке.) Согласно новому принципу, объемы выхода макромолекул (белков) с гранулированного геля агара или сефадекса 0-200 определяются скоростью их диффузии в фазу геля. Вследствие медленной диффузии крупные молекулы проникают в гель не столь глубоко, как мелкие, н поэтому вымываются с колонки гораздо раньше. Вновь применив уравнение Ренкина [32], Эккере связал величину /(( , характеризующую поведение макромолекул в геле, с величиной г Я, где г — радиус частиц белка [c.120]

Силикагель — высушенный и измельченный (или гранулированный) гель кремниевых кислот — прекрасный адсорбент с высокоразвитой поверхностью. Твердые стекловидные зерна силикагеля используют для сорбции газов и паров, для очистки органических растворителей и хроматографического разделения веществ. Совместная конденсация водных растворов кремниевой кислоты и гидроокиси алюминия приводит к образованию трехмерного сополимера — алюмосиликагеля, тоже используемого в хроматографии. [c.150]

Разделение веществ путем хроматографии основано на их неодинаковом распределении между двумя несмешивающимися фазами. Различают хроматографию на бумаге, пластинках и колонках. При хроматографии на бумаге или на пластинках одной из несмешивающихся фаз является движущийся растворитель, а другой (неподвижной фазой) служат волокна бумаги или частицы покрывающего пластинку какого-то материала (например, силикагеля). При колоночной хроматографии подвижной фазой является протекающий через колонку растворитель, а неподвижную фазу представляет заполняющий колонку адсорбент (чаще всего это гранулированный гель). Колоночная хроматография допускает масштабирование процесса, в результате чего она довольно широко применяется в промышленных условиях и включает несколько разновидностей [c.71]

Разработана экстракционная измерительная аппаратура для определения газообразующих примесей (углерод, водород, азот и кислород) в кремнии. Нагревание образца производили в высокочастотном поле. Очистку кислорода и гелия осуществляли с помощью гранулированной окиси меди и молекулярными ситами. Измерительной частью установки служил промышленный хроматограф Цвет-4 с измененной схемой потока газа-носителя. Количественный анализ производили методом абсолютной калибровки по высотам пиков. Предельная чувствительность прибора, используемого при обнаружении углерода, водорода, азота и кислорода в кремнии составляла в зависимости от природы газа от 1.10 до 7.10 моль. Табл. 3, рис. 4, библ. 18 назв. [c.235]

В литературе описаны попытки использования сефадексов и биогелей, представляющих собой соответственно сшитый декстран и гранулированный полиакриламидный гель, для разделения компонентов нуклеиновых кислот за счет различного сродства их молекул к сорбенту [32, 33]. Однако в основном гель-хроматографию применяют для фракционирования нуклеиновых кислот и их компонентов в соответствии с размерами молекул этих соединений. Например, на колонке с сефадексом 0-10 нуклеозиды и нуклеотиды отделяются от неорганических солей (выходят со свободным объемом колонки) [34]. Аналогичным образом олигонуклеотиды, содержащие больше 10—15 нуклеотидных остатков, не задерживаются на сефадексе 0-25 или 0-50, а мононуклеотиды проникают в поры геля и поэтому элюируются значительно медленнее [3]. Именно этот метод широко используют для удаления избытка нуклеозидтрифосфатов из смеси биосинтетических олиго- и полинуклеотидов [35]. [c.167]

Гранулированные гели. Разделение на гелях основано на распределении растворенных веществ между растворителем (подвижная фаза) и растворителем, содержащимся в порах геля (стационарная фаза). В отличие от распределительной хроматографии подвижная и стационарная фазы в этом случае одинаковы. Таким образом, распределение происходит на основе способности растворенных частиц проникать в поры разделение частиц определяется различной скоростью их диффузии. Сродство разделяемых веществ к гелю само по себе должно быть наименьшим во избежание побочных процессов. Для разделения гидрофильных веществ применяют гели на основе декстрана, полиакриламида или агаровый гель. Для разделения гидрофобных веществ необходимо применять гели, способные набухать в органических растворителях. Такие гели получают перезтерификацией гидроксильных групп декстранового геля. Этот способ можно применить для получения акриловых и полистироловых гелей, растворимых в жирах. [c.351]

Жидкостная адсорбционная хроматография основана на различной способности веществ сорбироваться на поверхности сорбента и десорбироваться при пропускании растворителя — элюента. В качестве сорбентов применяют оксид алюминия, кремниевую кислоту и диоксид кремния (силикагели), гранулированные полисахариды (например, декстраны) или другие полимеры, которые в растворителе набухают, образуя гранулированный гель (гель-хроматография). [c.16]

Гомогенные гели из полиакриламида широко применяются для электрофоретического разделения белков. Гранулированные гели вполне могут служить носителями для гель-хроматографии в водных средах [11, 12]. Получают гели очень просто. В качестве окислительно-восстановительного катализатора радикальной полимеризации используют главным образом персульфат аммония, а в качестве регулятора — р-диметиламинопропионитрил. Когда слой реакционной массы не слишком велик, полимеризацию можно также инициировать путем облучения видимым светом в присутствии рибофлавина [13]. Готовый гель после лиофильной сушки измельчают в ступке, а затем просеивают или же его продавливают во влажном состоянии через сито с порами соответствующего размера (0,1—0,2 мм). Специальная аппаратура для этой цели описана Хьертеном [14]. Гранулирование можно также проводить, продавливая гель стеклянной пробкой через стальное сито (например, с отверстиями 160 мк) из обычного набора. Величина пор в готовом геле определяется прежде всего общей концентрацией мономера в реакционной массе и во вторую очередь— содержанием бифункционального мономера. Варьируя концентрацию мономера от 4 до 16% при постоянном содержании сшивки 5%, Хьертен [14] получил серию гелей с различной степенью набухания [c.35]

Агарозные гранулированные гели применяют для выделения и фракционирования очень крупных молекул, в том числе вирусов, бактериофагов, субклеточных частиц (например рибосом), белков, нуклеопротеидов, нуклеиновых кислот, полисахаридов, Ог других мягких гелей агарозы отличает болёе широкие интервалы фракционирования. Агарозы используют также в качестве носителей иоспецифических сррбентов для аффинной хроматографии (см. разд. 120), [c.62]

Метод фракционирования веществ по размерам молекул на колонках с гранулированными гелями часто называют гелевой фильтрацией . Этот термин подвергался критике, поскольку филь-трация в самом общем виде означает разделение только двух фаз, например, на фильтровальной бумаге [18, 19]. Поскольку в данном случае имеет место хроматографический процесс, представляется логичным использовать в названии метода слово хроматография . Однако, к сожалению, этот термин непроизвольно ассоциируется с адсорбционной хроматографией на силикагеле и окиси алюминия [20, 21]. Термин эксклюзионная хроматография [22] обладает тем недостатком, что в этом случае постулируется еще недоказанный механизм процесса, заключающийся в различной способности веществ в соответствии с размерами молекул проникать в гранулы геля. Крупные молекулы вообще не проникают в набухшие гранулы. Аналогичные недостатки свойственны терминам диффузионная хроматография [23] и гельпроникающая хроматография [18]. [c.237]

Лид и Сехон [31], а также Хьертен и Мосбах [26] первыми предложили применять в гель-хроматографии гранулированные полиакриламидные гели. Эти полностью синтетические гели получают сополимеризацией акриламида СНг=СН—СОЫНг и Ы,Ы -метиленбис(акриламида) [c.351]

Первым в гель-хроматографии был использован гранулированный гель агар-агара [42]. Однако более широкое распространение получила агароза, изготовленная в виде микрошариков по методу Хьертена [25]. В настояш,ее время агароза приготовляется и выпускается в продажу в различных видах, указанных в табл. 6.4 (см. также разд. 7.2.1). [c.355]

Гранулированный гель, применяемый в ГПХ, должен обладать однородной структурой пор, частицы должны иметь сферическую форму и минимальные размеры. Это позволяет малым молекулам свободно диффундировать внутрь геля и обеспечивает быстрое установление ди узионного равновесия. Крупные молекулы остаются во внешнем объеме (растворителе) и перемеш,аются по колонке, заполненной гелем, с большей скоростью. Этот эффект приводит к тому, что при элюировании колонки растворителем компоненты полимоле-кулярной смеси, введенные в колонку, элюируются в порядке уменьшения молекулярного веса. В жидкостной хроматографии наблюдается обратная картина. [c.121]

За последние десять лет разработан принципиально новый хроматографический метод фракционирования макромолекул, вирусов и компонентов клетки, который широко используется в аналитической и препаративной биохимии, Этот метод основан на способности пористых материалов, работающих по принципу обратных молекулярных СИТ)), разделять смесь веществ по размеру и молекулярному весу компонентов. Эти молекулярные сита почти не обладают сорбционным сродством к фракционируемым веществам. В качестве таких пористых материалов применяют гранулированные гели полисахаридов (сефадексы, агароза), полиакриламида (биогели) и пористое порошковое стекло. Метод подобного фракционирования обычно называют молекулярно-ситевой хроматографией, молекулярной фильтрацией или гельфильтрацией. [c.125]

Принципиальная схема газового хроматографа представлена на рис. 57. Газ-носитель из баллона / поступает в блок подготовки газов 2, где происходит его очистка, устанавливаются объемная скорость и давление. В качестве газа-гюсителя используют гелий, азот, аргон, углекислый газ. В обогреваемый до температуры выше кипения исследуемой смеси испаритель 5, через который протекает поток газа-носителя, микрошприцем 3 через резиновую мембрану вводят пробу вещества. Захватив пары анализируемой пробы, газ-носитель поступает в хроматографическую колонку 6 — металлическую или стеклянную трубку длиной обычно от 0,5 до 4 м и диаметром 2—8 мм, заполненную гранулированной насадкой. Во избе-жение конденсации паров пробы колонка помещена в термостат 7. Выходящий из колонки газовый поток содержит зоны отдельных компонентов, разделенные зонами чистого газа-носителя и отличающиеся от них по электрической проводимости, плотности или другим параметрам. Измерение этих параметров на выходе из колонки позволяет определить относительное содержание компонента в смеси. Устройство, непрерывно регистрирующее значение того или иного параметра газового потока, называется детектором 8. [c.49]

Что касается самого процесса ТСХ, то здесь можно усмотреть далеко идущую аналогию с жидкостной хроматографией на колонках. Неподвижную фазу образует н идкость, связанная со слоем фиксированного на подложке гранулированного сорбента, свойства и характеристики которого близки, а иногда даже идентичны таковым для материалов, используемых в качестве носителей неподвижной фазы в колоночной хроматографии. Здесь используются те же производные целлюлозы или силикагеля, к которым надо добавить только полоски ацетилцеллюлозы. Подвижную фазу образует жидкий элюент с аналогичными, рассмотренным ранее свойствами. Неизменной остается и сущность хроматографического процесса, базирующегося на равновесном распределении вещества между неподвижной и подвижной фазами. Как и в любом хроматографическом процессе (гель-фильтрация в тонком слое была рассмотрена в гл. 4), для целей хроматографического фракционирования это распределение должно быть сильно сдвинуто в пользу неподвижной фазы. Из всех вариантов хроматографпп для разделения компонентов белков и нуклеиновых кислот методом ТСХ (сами биополимеры очень редко выступают здесь в качестве объектов) практически пспользуют только два нормальнофазовую распределительную и ионообменную. [c.458]

Силикагель-обезвоженный гель кремниевой кислоты (ЗЮд иНзО)-используют для адсорбции полярных соединений. Его применяют в процессах осушки газов и жидкостей, при разделении органических веществ в газовой фазе и в хроматографии. Силикагель получают обработкой раствора силиката натрия (растворимое стекло) серной кислотой (иногда хлороводородной) или растворами солей, имеющих кислую реакцию. Образовавшийся гель промывают водой и сушат до конечной влажности 5-7%, так как при такой влажности силикагель обладает наибольшей адсорбционной способностью. Удельная поверхность силикагеля составляет 4- Ю -7,7-10 м кг, насыпная плотность-400-800 кг/м . Размер частиц неправильной формы изменяется в довольно широком интервале-от 0,2 до 7 мм, а гранулированных (сферической или овальной формы)-от 2 до 7 мм. [c.191]

Все применяемые в гель-хроматографии наполнители колонок традиционно делят на мягкие, полужесткие и жесткие гели [101]. Емкость геля может быть охарактеризована отношением У /У , которое лежит в диапазоне от 0,5 для жестких гелей до 2-3 для мягких гелей. Для мягких гелей характерна, с одной стороны, высокая эффективность и емкость при низких скоростях потока, с другой — высокая степень набухаемости в водных средах и увеличение объема пор при набухании. Соответственно повышение скорости подвижной фазы вызывает деформацию мяг-Ю1Х гелей. Они сжимаются, снижается их емкость. Из коммерческих мягких гелей для гель-фильтрации чаще всего применяют декстрановые гели, названные сефадек-сами. Сефадексы — гранулированные поперечно-сшитые декстраны (полисахариды), имеющие в набухшем состоянии гелевую структуру, обладают сильными гидрофильными свойствами. Неионообменные сефадексы содержат все же небольшое количество гидроксильных групп, определяющих адсорбционную емкость сефадексов порядка [c.209]

Метод осуществляется в виде колоночной хроматографии. В качестве гелей применяют гранулированные набухшие полисахариды и другие полимеры. Гель-фильтрацию используют для разделения с.месей биологических объектов (белков и др.). [c.19]

Агароза, согласно Араки [17], является линейным полисахаридом, который построен из О-галактозы и 3,6-ангидро-Ь-галактозы и не содержит ионогенных группировок. Вследствие этого применение суспензии агарозы для гель-хроматографии представляется довольно перспективным [18]. Широкому применению агарозы препятствует в высшей степени трудоемкий процесс выделения ее из агара [17]. Правда, в последнее время предложены два новых метода ее получения. Хьёртен [19] для осаждения кислых примесей из раствора агара применил цетилпиридинийхлорид. Основную трудность при этом представляло удаление избытка осадителя. Рассел, Мид и Полсон [20] предложили выделять агарозу из агара, проводя многократное переосаждение концентрированным раствором полиэтиленгликоля. Полученный обойми способами препарат содержит немного серы, однако в нем совершенно отсутствуют ионогенные группы. В настоящее время суспензия гранулированной агарозы выпускается в продажу (см. табл. 9). [c.38]

При использовании гранулированной поддерживающей среды, обладающей свойствами молекулярного сита, электрофорез накладывается на эффект сита, что приводит к улучшению разделения. Тедеско и др. [1283] приспособили для электрофореза колонку с сефадексом G-200, предназначенную для гель-фильтрации. Хорошее разделение в ней было достигнуто при фракционировании сыворотки крови и очистке галактозо-Ьфосфат-уридилтрансферазы. Был разработан также метод гель-хроматографии в электрическом поле. По этому методу элюирующий раствор течет вниз, а полюс, к которому должны двигаться компоненты смеси в процессе электрофореза, располагается сверху. При этом электрофоретический ток замедляет движение определенных компонентов в дополнение к эффекту молекулярного сита, проявляющемуся в геле в отношении молекул меньшего размера. [c.52]