Аспарагиновая смола

Аспарагиновую кислоту легко можно очистить через ее медную соль. Наиболее эффективная очистка достигается, вероятно, при использовании ионообменных смол, однако процесс вымывания вещества из колонки требует большой затраты времени. [c.274]

При адсорбции из нейтрального раствора основные, нейтральные и часть кислых аминокислот сорбируются катионитом, аспарагиновая и глютаминовая кислоты — анионитом. При сорбции из раствора с pH = 3, где подавляется кислотная диссоциация, все аминокислоты извлекаются катионитом. Катионит КУ-2 кроме солей частично поглощает красители. Для отделения солей раствор мелассы обрабатывали слабокислотным катионитом КБ4-П2, имеющим сродство к ионам кальция и плохо сорбирующим аминокислоты. Аминокислоты из ионитов извлекали 5-кратным количеством 1 н. соляной кислоты по отношению к обменной емкости смолы. Кислоту из элюата выпаривали, и полученные водные растворы аминокислот хроматографировали на бумаге. [c.215]

Хроматографическое определение глютаминовой, аспарагиновой и цистеиновой кислот с помощью анионообменных смол [380]. [c.226]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола UR-30, натрий-цитратные буферы. Увеличение pH буфера со значения 3,20 (0,20 н.) до 3,26 (0,20 н.) улучшает разделение аспарагиновой кислоты и треонина приблизительно до 0,10 (отношение высоты впадины к высоте пика). Цистин элюируется быстрее, а глутаминовая кислота перемещается ближе к пролину. Разделение глицина и аланина ухудшается. Увеличение pH буфера оказывает общее влияние на элюирование аминокислот они элюируются из колонки быстрее. [c.42]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола иЯ-ЗО, литий-цитратные буферы. При постоянных значениях pH буфера (2,80), температуры колонки (38,8 °С) и скорости течения буфера (70 мл/ч) изменение концентрации цитрата с 0,033 до 0,166 М оказывает такое же общее влияние, что и увеличение pH буфера. При концентрации цитрата 0,033 М оксипролин и аспарагиновая кислота не разделяются, но по мере увеличения концентрации цитрата аспарагиновая кислота элюируется, опережая оксипролин. При концентрации цитрата 0,166 М цистатионин и метионин не разделяются. [c.45]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола иЯ-ЗО, натрий-цитратные буферы. По мере повышения температуры улучшается разделение а-аминоадипиновой и а-амино-н-масляной кислот, но ухудшается разделение валина и цистина. Повышение температуры способствует также более полному разделению следующих пар аминокислот аспарагиновая кислота — треонин и тирозин— фенилаланин. При повышении температуры цистин, как и глутаминовая кислота, элюируется из колонки значительно быстрее. Триплет пиков пролин — глутаминовая кислота — цитруллин сжимается, в результате чего ухудшается разделение этих аминокислот. [c.46]

Аминокислоты вымываются растворами цитрата натрия при выбранных концентрациях ионов натрия, значениях pH и температурах. Первыми должны выходить кислые аминокислоты с двумя карбоксильными группами в молекуле, чаще всего аспарагиновая и глутаминовая кислоты (табл. 30). Затем следует большая группа нейтральных аминокислот с одной карбоксильной группой и одной аминогруппой в молекуле. Некоторые из них, такие, как тирозин и фенилаланин, содержащие ароматические кольца, удерживаются дольше других в этом случае ясно проявляется растворяющее действие смолы. Последними вымываются щелочные аминокислоты, к которым относятся лизин, триптофан и аргинин. Так как эта группа аминов удерживается [c.220]

Вариантами кислотного гидролиза являются гидролиз муравьиной или уксусной кислотой, а также ионообменными смолами, Гидролиз органическими кислотами идет медленно и неполно, но более мягко, чем с 6 н. соляной кислотой. Гидролиз белка ионообменной смолой осуществляется благодаря наличию активной сульфогруппы ЗОзН у некоторых катионообмен-ников, которая действует как слабая кислота. Гидролиз протекает в мягких условиях, идет не до конца и удобен в том отношении, что отщепляющиеся аминокислоты сразу связываются смолой. Неполный гидролиз белка можно осуществить и соляной кислотой с целью получения коротких пептидов и исследования в них последовательности расположения аминокислот. Для этого применяют концентрированную (12 н.) соляную кислоту и гидролиз ведут при 37° в течение 2—6 суток. Характерные недостатки кислотного гидролиза сохраняются и в этом случае. Частичные гидролизаты содержат, как правило, пептидные фрагменты с остатками серина, треонина и аспарагиновой кцслоты в концевом положении, что говорит о различной чувствительности пептидных связей между различными парами аминокислот к кислотному гидролизу. [c.39]

Смола ТН адсорбирует только дикарбоновые аминокислоты и не задерживает глицина. Уже 0,01 н. уксусная кислота вытесняет как аспарагиновую, так и глутаминовую аминокислоты. Аналогично ведет себя и амберлит Ш-4, имеющий емкость значительно больще, чем ТН. Свойства смол ПЭ-9, ЭДЭ-10 и амберлита Ш-4 очень близки. [c.137]

Мокк, Калкинс и Маршалл [169а] синтезировали аспарагиновую смолу в виде гранул (ср. разд. 3.2.6) и использовали ее для отделения в аммиачном растворе меди и никеля от кобальта. Теорию этого разделения см. в гл. 7. На основании текста патента мало что можно сказать о химии комплексов этой смолы. [c.177]

В ЭТОЙ форме они связываются с анионной группой сульфированной смолы. Элюция аминокислоты достигается либо повышением pH и, таким образом, смещением равновесия (2) влево, либо увеличением ионной силы, что приводит к конкурентному связыванию со смолой аминокислот и катионов элюата. Аспарагиновая, глутаминовая и цистеиновая кислоты [последняя образуется в результате окисления цист(е)иновых остатков (см. разд. 23.3.3)] элюируются легче всего, ибо это двухосновные кислоты. Лизин и аргинин, напротив, элюируются с трудом в силу того, что каждый из них несет в боковой группе протонированную группу. М.ежду этими крайними случаями располагаются остальные аминокислоты по мере того как увеличивается гидрофобное взаимодействие их боковых групп с ароматической структурой ионообменной смолы. Не удивительно, что ароматические аминокислоты обладают наибольшим гидрофобным связыванием и выходят лишь перед лизином и аргинином. С другой стороны, присутствие нейтральной полярной группы, такой как гидроксильная или амидная, уменьшает силу гидрофобного взаимодействия, так что серин, треонин, аспа--рагин и глутамин элюируются раньше лейцина, изолейцина и валина. [c.261]

Другие аминокислоты основного типа хорошо десорбируются с активированного угля 10%-ным раствором уксусной кислоты при температуре 40—45 °С. Перед их выделением осветленный гидролизат освобождается от ионов хлора на среднеосновном анионите ЭДЭ-10П в ОН-форме. При этом на смоле анионита сорбируются в большом количестве глютаминовая и аспарагиновая кислоты, которые легко снимаются с ионита при регенерации его щелочью. [c.180]

Рис. 5-14. Различные ионные формы катионообменной смолы. Отрицательно заряженные сульфогруппы —80з) притягивают и связывают катионы, например Н, Ка , или катионные группы аминокислот. При pH 3 большинство аминокислот находятся в форме катионов, хотя и различаются по величине суммарного положительного заряда и, следовательно, по способности вытеснять ионы Ка , связанные с фиксированными анионными группами. Особенно прочно связывается лизин, содержащий две—КИз-группы, а наименее, прочно-глутаминовая и аспарагиновая кислоты, которые при pH 3 несут наименьший положительный заряд. На связывание аминокислот ионообменными смолами влияет также их способность адсорбироваться на частицах смолы и растворяться внутри этих частиц.

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола UR-40. При постоянных значениях температуры колонки, концентрации ионов натрия и цитрат-ионов и постоянной скорости течения буфера увеличение pH первого натрийцитратного буфера (pH 3,175 0,18 и. Na+, 0,133 М цитрат) на 0,010 единиц pH улучшает разделение аспарагиновой кислоты и треонина до величины 0,045 (отношение высоты впадины к высоте пика). В результате увеличения pH буфера на 0,011 цистин выходит быстрее на 1 мин, раньше элюируется глутаминовая кислота, но, кроме того, сжимаются пики трех аминокислот — пролина, глутаминовой кислоты и цитруллина. При увеличении pH буфера ухудшается разделение глицина и аланина. [c.42]

Кислые и нейтральные аминокислоты, смола UR-40. Повышение температуры колонки приблизительно на 1,5 °С при неизменных значениях pH буфера, концентрации ионов натрия и цитрат-ионов, а также скорости подачи буфера приводит в основном к ускорению элюирования аминокислот. Разделение аспарагиновой кислоты и треонина улучшается приблизительно до 0,12. Однако глутаминовая кислота элюируется настолько быстро, что не полностью разделяется с пролином. Цистин вымьшается быстрее на 2 мин, а пролин — глутаминовая кислота — цитруллин выходят более узкой зоной и поэтому разделяются хуже. При повышении температуры значительно улучшается разделение тирозина и фенилаланина, но несколько ухудшается разделение изолейцина и лейцина. [c.47]

После полного гидролиза белка производится количественное онределе-ние каждой из аминокислот, присутствующих в гидролизате. Для разделения аминокислот чаще всего применяется метод ионообменной хроматографии. В качестве ионообменника обычно используют сульфополистирольный катионит. Смесь аминокислот вносится в верхнюю часть колонки при pH 3 в этих условиях индивидуальные аминокислоты полонштельно заряжены. Аминокислоты в форме катионов сорбируются на сульфополистирольной смоле (содержащей группы — SOg Na ), замещая часть ионов натрия, и удернги-ваются на материале колонки электростатическими силами. Очевидно, что прочность сорбции аминокислоты возрастает с увеличением ее основности. После внесения смеси начинается элюция аминокислот при постепенном увеличении pH и 1тонной силы буферных растворов, пропускаемых через колонку. В этих условиях положительный заряд на аминокислотах постепенно нейтрализуется и ионные взаимодействия ослабляются. Первыми с колонки снимаются кислые аминокислоты (глутаминовая и аспарагиновая кислота), затем нейтральные и, наконец, основные. С помощью этого метода можно разделять все аминокислоты, обычно встречающиеся в белках, поскольку прочность сорбции аминокислоты смолой зависит как от ионных, так и от неионных взаимодействий. Сульфополистирольный катион адсорбирует аминокислоты достаточно избирательно, так что все нейтральные аминокислоты, которые нельзя разделить с помощью ионного обмена, тем не менее элюируются с колонки в разных фракциях. Индивидуальные аминокислоты, элюируемые с колонки, собираются автоматическим коллектором фракций. Затем их количественно определяют путем измерения интенсивности окраски, возникающей при действии нингидрина. В настоящее время промышленность выпускает несколько типов автоматических амино- [c.57]

Анализ проводят при температуре 50°. В верхнюю часть колонки вносят пробу, содержащую 0,1—2,5 мкмолей аминокислот (гидролизат 1—2 мг белка) и растворенную в 2 лелО,1 н. НС1 или буферного раствора pH 2,2 (при этом стараются не возмутить поверхностный слой смолы и не оставить его сухим). Объем наносимой пробы имеет существенное значение, так как при элютивной хроматографии разделяемая смесь должна занимать перед началом опыта минимальный слой сорбента в колонке. Через колонку пропускают деаэрированный буферный раствор pH 3,25 со скоростью 30 мл/час в количестве, в 2,15 раз превышающем удерживаемый объем аспарагиновой кислоты (около 260—280 мл). После этого производят смену буферных растворов, начиная пропускать буфер 4,25, с тем чтобы валин вышел с новым [c.133]

В 50 мл воды растворяют по 0,1 г аспарагиновой кислоты, а-аланина и хлористоводородного гистидина. Оставляют 0,5 мл этого раствора, остальное выливают в колонку, а затем пропускают через колонку 10 мл воды. Нельзя оставлять верхнюю часть колонки без жидкости небольшие боковые отводы позволяют поддерживать необходимый уровень жидкости в секциях колонки. Меняют приемник и элюирую г содержимое колонки раствором едкого натра (около 0,075 н.). Когда смола в нижней колонке начнет менять цвет, уменьшают скорость протекания до 1 мл1мин. Первые 610 мл элюата отбрасывают. Продолжают собирать элюат порциями по 4 мл до тех пор, пока реакция по универсальной индикаторной бумажке остается кислой, а затем собирают элюат порциями по 2 мл. В качестве приемников удобны пробирки (7,5X1 см), которые помещены в деревянные штативы по 12 штук. Пробирки нумеруют и, когда одна из пробирок наполнится наполовину (2 мл), сдвигают штатив так, чтобы элюат поступал в следующую, и т. д. (можно применять автоматический коллектор фракций). Отбор фракций прекращают примерно после отбора 8 фракций по 4 жл и 28 фракций по 2 мл, когда элюат перестает давать положительную реакцию с пингидрином. Пробу проводят следующим образом. Каплю фракции помещают на бумажный фильтр диаметром 12,5 см, высушивают бумагу горячем воздухом из фена, опрыскивают фильтр раствором [c.38]

Среди индивидуальных органических соединений определены органические кислоты (муравьиная, уксусная, фумаровая, щавелевая, молочная, бензойная и др.), жиры, белки, аминокислоты (глицин, аланин, гистидин, аргинин, фенилаланин, тирозин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты и др.), углеводы (полисахариды, в частности, полиуроновые кислоты и их производные — полисахара), полифенолы, альдегиды, сложные эфиры, воска, смолы, лигнин и др. Многие из них растворимы в воде и могут образовывать комплексные соединения с ионами металлов. Способность гумусовых веществ к образованию внутрикомплексных соединений (хела-тов) с рядом катионов объясняется наличием в структуре гумуса гидрофильных групп. Наивысшей склонностью к образованию же-лезо-гумусовых комплексов типа хелатов обладают фульвокислоты и близкие к ним по природе гуминовые кислоты иэ. сильноподзолистой почвы, характеризующиеся высоким содержанием гидрофильных групп. [c.25]

Раствор, содержащий дикарбоповые аминокислоты, при pH 3—4 пропускается через анионообменпую колонку амберлита IR-4. При указанном pH дикарбоновые аминокислоты достаточно прочно адсорбируются анионообменной смолой. Для вытеснения их из колонки применяют раствор 1 н. НС1. Глютаминовая кислота вытесняется первой (нри pH 2,5), за ней следует аспарагиновая кислота. Если в исходном растворе присутствовала цистеиновая кислота, то ее можно вытеснить раствором 1 н. HG1 после вытеснения дикарбоновых аминокислот. [c.125]

Ионнообменная хроматография. Процесс ионного обмена широко известен в связи с его применением для умягчения воды. Впервые он был использован для разделения неорганических катионов и анионов. Позже были сделаны попытки применить хроматографическую теорию к ионнообменной адсорбции. В хроматографическом анализе диссоциирующих органических соединений в последнее время все более широкое применение получают синтетические смолы, способные к избирательной адсорбции и обладающие ионнообменными свойствами (Адамс и Холмс, 1935). Получены смолы с кислыми свойствами для катионного обмена и смолы с основными свойствами для анионного обмена. Адсорбция этими смолами в значительной мере определяется зарядом растворенного вещества (при этом надо отметить, что обменная адсорбция представляет собой очень сложный процесс), а для элюирования применяются растворы кислоты, щелочи или соли. Синтетические анионнообменные смолы (например, Амберлит IR4) применялись для хроматографического разделения аминокислот (например, глутаминовой и аспарагиновой кислот в продуктах гидролиза шерсти). Другими примерами применения ионного обмена могут служить анализ нуклеиновой кислоты, адсорбция алкалоидов и отделение свободных сульфокислот от азокрасителеЙ с ЗОзМа-группами в молекуле. Ричардсон наблюдал, что свободные сульфокислоты Небесно-голубого FF и других высокомолекулярных красителей быстро адсорбируются ионнообменной смолой Деацидит В. С уменьшением величины молекулы может быть достигнут такой предел, при котором начинается медленная диффузия в структуру смолы, юз Ионнообменная хроматография может применяться для разделения, очистки и анализа ионизирующихся красителей (кислотные красители и прямые красители для хлопка с сульфогруппами в молекуле и оспов- [c.1514]

За последние несколько лет разработаны новые методы фракционирования белковых гидролизатов. Среди этих методов самое большое значение имеет метод хроматографического анализа, основанный на неодинаковой способности аминокислот адсорбироваться на поверхности того или иного адсорбента. Так амино-дикарбоновые кислоты (аспарагиновая и глутаминовая) адсорбируются основными адсорбентами, например окисью алюминия [33, 34] или амберлитом Ш-4 [35]. Глутаминовую кислоту можно затем извлечь из адсорбента разбавленной уксусной кислотой, причем аспарагиновая кислота при этих условиях не переходит в раствор. Эту последнюю аминокислоту можно, однако, легко извлечь 0,5 н. раствором едкого натрия [33]. Основные диаминокислоты адсорбируются на поверхности кислых адсорбентов, например кислой окиси алюминия [34], амберлита Щ 100-Н, фенол-формальдегидной смолы [36] или сульфонированных фенольных амберлитов [37]. В процессе извлечения оснований из адсорбентов кислотами происходит реактивирование смолы, которую снова можно использовать для адсорбции [38]. Из фильтрата, содержащего моноаминокислоты, можно удалитв тирозин и фенилаланин, используя их способность адсорбироваться на животном угле [39]. Глицин, серин, треонин и цистеин адсорбируются кислой окисью алюминия после добавления к раствору формальдегида [40]. [c.28]

Максимальная степень разделения рацемических глутаминовой, аспарагиновой кислот, лизина, орнипша и валина достигала, соответственно, 53 33,4 50 37 и 49%. Разделение DL-аминокислот наблюдалось и при применении ионообменной смолы с D-глюко-зой, D-галактозой. [c.131]

Для газохроматографического анализа аминокислот предложено несколько других методов, но их практическая ценность не установлена столь определенно, как у изложенных выше методов. Согласно Либерти (см. [6]), аминокислоты дезаминируют до оксикислот с помощью раствора нитрата натрия в уксусной кислоте и ион натрия удаляют на колонке с катионообменной смолой. Затем оксикислоты метилируют диазометаном и полученные эфиры подвергают хроматографическому анализу. Колонка имеет длину м я заполнена стерхамолом, на который нанесено 30 % силикона D. С. 550. Скорость потока газа-носителя (природа не указана) составляет 60 мл мин, а температуру программируют от 80 до 140°. В этих условиях метиловые эфиры оксикислот, полученных из глицина, валина, аланина, лейцина, серина, аспарагиновой кислоты и глутаминовой кислоты, элюируются Б указанном порядке, причем последний выходит спустя [c.540]

По литературным данным [1, 5], при помощи амберлита 1В-4 возможно разделение аспарагиновой и глутаминовой кислот. Нам не удалось повторить разделение при помощи этой смолы. При выполнении рекомендуемых условий наблюдалось лищь фракционирование смеси. Разделение этой смеси не имело места также и со смолой ТН. [c.137]

Растворяют в 60 мл воды по О,Г г аспарагиновой кислоты, аланина и хлюргидрата гистидина. Пропускают через колонку почти весь раствор (сохраняют только 0,5 мл), а затем 10 мл воды. Верх колонки не должен оставаться без слоя жидкости (при помощи боковых отводов аможно, в случае необходимости, регулировать уровень жидкости в колонках). Меняют приемник и элюирование проводят 0,075 н. раствором едкого натра. Когда смола в нижней колонке начинает менять цвет, устанавдаивают скорость прохождения жидкости приблизительно 1 мл мин. Весь собранный элюат ( —610 мл) отбрасывают. Продолжают собирать злюат отдельными фракциями по 4 мл до тех пор, пока среда будет оставаться кислой по универсальной индикаторной бумаге, а после этого собирают фракции по 2 мл. [c.453]

Кеннан [218] для выделения глютаминовой и аспарагиновой кислот из гидролизатов белков применял полиамино-формальдегидную смолу амберлит IR4. Довольно неожиданно он применял ее не хроматографически, а вместо этого смешивал кислотный (НС ) гидролизат с достаточным количеством смолы (в форме свободного основания) для получения pH 7. После фильтрования добавлялись повторно смола и кислота (всего три раза), после чего оставалось не адсорбированным лишь незначительное количество дикарбоновой кислоты. Смола промывалась водой и дпкарбоновая кислота выделялась [c.68]