Гликопептиды различные

Из альбумина куриного яйца были получены гликопептиды [51, 75, 74, 65, 58, 76, 69]. Метод получения гликопептидов состоял в выделении образовавшихся при протеолизе гликопептидов различными способами фракционирования с помощью растворителей, а также путем хроматографии. Было показано, что аспарагиновая кислота непосредственно связана с углеводной частью (см. том 1, гл. 10), однако возникли затруднения при получении гликопептида, который содержит аспарагиновую кислоту как единственный аминокислотный остаток (см. том 1, гл. 9). Для получения гликопептида (выход 80—90%), содержащего аспарагиновую кислоту как единственный аминокислотный остаток, была использована следующая методика. [c.13]

Методы хроматографического разделения гликопротеинов фактически не отличаются от методов, используемых в химии белков и пептидов. Также имеется ряд белков, которые в обычном смысле не считаются гликопротеинами, хотя они содержат один или несколько гликозидных остатков. Конечно, существует множество методов, с помощью которых могут разделяться различные гликопротеины. С точки зрения хроматографиста, здесь не следует детально их описывать. С другой стороны есть хроматографический метод, специфичный для структурных анализов гликопротеинов и гликопептидов. Специфичность основана на вы-боре подходящей системы детектирования, а не собственно метода разделения. Здесь будет кратко рассмотрен метод, описанный в работе [221- [c.145]

Получение большого числа соединений этого типа позволило детально выяснить свойства соответствующих типов связи углевод — аминокислота, в особенности их устойчивость в различных условиях, и использовать эти данные при изучении таких важнейших гликопептидов, как группоспецифические вещества крови (см. вьппе). [c.530]

Гликопептид, полученный этим методом, был гомогенным, что подтверждается следующими данными а) Гель-фильтрация не приводила к получению различных фракций гликопептида (см. рис. 1). б) Гликопептид был гомогенным при электрофорезе на бумаге и на колонках с целлюлозой ([76] Маршалл, неопубликованные данные), в) Гликопептид давал единственный острый пик при хроматографии на колонке с дауэксом-50 в солевом градиенте [c.14]

Гель-фильтрационный анализ продуктов, полученных после обработки клеточной поверхности трипсином, является быстрым и удобным методом для отбора самых различных клеток и тканей при определении изменений наборов гликопептидов, дающим, однако, очень малую дополнительную информацию о количестве измененных гликопротеидов мембран или о структурной основе наблюдаемых [c.82]

Полисахариды по всему своему химическому облику являются ти-пичными высокомолекулярными веществами, и именно это свойство, очевидно, должно быть принято за критерий, отделяющий типичные полисахариды от моио- и олигосахаридов. Полисахариды имеют исключительно большое значение. Они — один из важнейших типов природных биогенных поли.меров, участвующих в различных процессах жизнедеятельности. Их биологическое значение может быть сравнено со значением белков, хотя пока еще гораздо менее изучено. К полисахаридам ]1 их ближайшим производным относятся, например, такие важнейгиие в биологическом отношении типы соединений, как полисахариды плазмы крови, определяющие ее групповую принадлежность, полисахариды, определяющие специфичность иммунологических реакций, гликоген — полисахарид, являющийся главным углеводным резервом животного организма, гликопептиды, специфические полисахаридн микроорганизмов и т. д. и т. п. [c.151]

Сведения о таких производных углеводов еще крайне скудны, и познание этих сложнейших природных продуктов пока еще лишь начато. Наибольшее внимание привлекают в настоящее время два класса таких производных углеводов. Более интенсивно идет изучение соединений, содержащих одновременно пептидную и углеводную часть, так называемых гликопептидов, входящих в состав углеводнобелковых комплексов и широко представленных в различных тканях организмов. Трудности проблемы установления строения таких веществ связаны с многообразием возможных комбинаций связей аминокислоты и моносахарида, и в настоящее время делаются вполне резонные попытки использовать для решения этого вопроса синтетический метод, т. е. развить синтез упрощенных модельных соединений этого рода. [c.169]

Первые работы по исследованию олигосахаридной части иммуноглобулинов выполнены Портером [210], а также Смитом с сотр. [211]. Показано, что нормальный IgG состоит из трех гликопептидов, содержащих два типа олигосахаридных звеньев [211]. При периодатном окислении этого иммуноглобулина разрушались не все остатки 2-ацетамидо-2-дезокси-Д-глюкозы и D-маннозы с помощью мягкого кислотного гидролиза показано, что остатки -фукозы и сиаловой кислоты находятся на невосстанавливающих концах молекулы и связаны с D-галактозой остатки D-маннозы замещены при С-3 или находятся в точках ветвления, а некоторые остатки 2-ацетамидо-2-дезокси-0-глюкозы (окисляемые перйодатом) связаны по С-6 пли являются терминальными. Эти результаты вместе с данными, полученными при расщеплении IgG гликозидгидролазой, позволили приписать одному из гликопептидов IgG человека структуру (56) [212]. Сходное строение имеют иммуноглобулины Е [213] и А [214] человека, которые содержат разные количества невосстанавливающих концевых остатков сиаловых кислот и D-галактозы, что указывает на различные стадии завершенности биосинтеза внешних цепей или микрогетерогенность. В состав IgG быка [215] входит гликопептид (57), идентичный IgG человека, но не содержащий остатки сиаловой кислоты. [c.270]

Для установления количественного состава входящих в гликопротеин моносахаридов и аминокислот биополимер подвергают полному кислотному гидролизу, и состав гидролизата определяют обычными методами количественного анализа. Пептидные связи устойчивее гликозидных по отношению к кислотам, поэтому для полного расщепления на мономеры гликопротеины приходится гидролизовать в более жестких условиях, чем обычные полисахариды (6 н. НС1, 100—ПО °С, 24 ч) . Нужно иметь в виду, что как сахара, так и аминокислоты могут частично распадаться в условиях кислотного гидролиза, причем в ряде случаев можно с помощью ХОЛОСТЫХ опытов внести соответствующие поправки при анализе. Специфической для гликопептидов побочной реакцией в условиях кислотного гидролиза является возможная конденсация сахаров с аминокислотами, приводящая к окрашенной сложной смеси различных веществ, в том числе простейших карбонильных соединений (так называемая реакция Майяоа). Например, по данным Готшалка , потеря аминокислот при кислотном гидролизе богатых сахарами гликопротеинов может составлять до 30 %. Количественное определение моносахаридов проводят с использованием хроматографии, спектрофотометрической и колориметрической техники (см. гл. 14). Для анализа аминокислот применяют обычно методы, хорошо известные из химии белка. Так, количественный анализ аминокислотного состава проводят в автоматических анализаторах или с помощью газо-жидкостной хроматографии . [c.567]

При обработке овальбумина различными протеиназами выделен ряд гликопептидов, который позволил установить последовательность аминокислот вблизи узловой гликопептидной связи С другой стороны, действием проназы получен гликопептид, содержаш,ий только аспарагиновую кислоту и неизменную олигосахаридиую цепь, полная структура которой была выяснена метилированием и периодатным окислением . На основании всех этих данных фрагмент структуры овальбумина вблизи гликопептидной связи может быть изображен следующим образом [c.576]

Полный гидролиз групповых веществ крови показывает, что в их состав входит около 80—85% углеводов (галактоза, фукоза, N-ацетилглюкозамин и N-ацетилгалактозамин) и около 15—20% аминокислот, из которых пролин, треонин и серин составляют более половины. В некоторых образцах групповых веществ, в частности в групповых веществах из жидкости кисты, содержатся также N-ацетилнейраминовая кислота, которая, очевидно, в этом случае заменяет часть остатков фукозы. Групповые вещества различного типа А, В, Н я т. д.) очень мало отличаются друг от друга по составу, хотя некоторые детали все же можно отметить так, например, в групповом веществе Le содержание фукозы заметно понижено. В настоящее время установлено, что специфичность групповых веществ зависит от находящихся на периферии молекулы олигосахаридных цепей, которые являются иммунологическими детерминантами (см. ниже). Однако в целом структура групповых веществ, несмотря на значительное число исследований, остается неясной. При действии разбавленных кислот и оснований (щелочь, сода, гидроксиламин) групповые вещества отщепляют значительную часть углеводов Пептидная часть биополимера, напротив, отличается стойкостью и только в незначительной степени распадается под действием папаина и фицина . Эти данные позволяют отнести групповые вещества к гликопептидам типа III, в которых центральная пептидная цепь окружена присоединенными к ней олигосахаридными цепями , что было экспериментально подтверждено в самое последнее время полукинетическим методом исследования (см. стр. 569). При изучении хода гидролиза группового вещества А разбавленными кислотами и щелочами оказалось, что отщепляются лишь мелкие углеводные фрагменты, в то время как все аминокислоты остаются в высокомолекулярной части. Лишь в жестких условиях гидролиза, когда распаду подвергаются и пептидные связи, а также при избирательной деструкции пептидных связей высокомолекулярный фрагмент начинает дробиться и в гидролизате появляются аминокислоты. Подобная картина гидролиза может наблюдаться только в том случае, если пептидная часть составляет основу гликопротеина (тип III). [c.581]

Одним из путей создания препаратов, активных в отношении гликопептид-резистентных грам-положительных микроорганизмов, является модификация природных гликопептидов. Разработаны методы модификации гликопептидных антибиотиков, позволяющие вводить различные заместители на периферию молекулы гликопептида. Ниже представлены направления модификации антибиотика эремомицина (получен в НИИНА им. Гаузе). [c.80]

В гл. IV мы показали на двух примерах (см. стр. 148), что с помощью сефадекса G-25 можно определить число центров связывания в молекуле фермента, или сродство ферментов к различным реагентам, а также изучить влияние кофакторов на фермент (см. стр. 142). Аналогичным образом, измеряя способность к связыванию восстановленного ДПН, удалось найти эквивалентный вес семи дегидрогеназ (30 000— 40000) [20]. Иногда образуются стабильные комплексы фермента с реагентом, как, например, при действии свободной от цинка карбоксипептидазы на пептидный субстрат [21]. Этот комплекс, который с помощью гель-хроматографии можно отделить от избытка субстрата, уже не активируется ионами цинка. Очистка гель-фильтрацией на сефадексе G-50 является стандартным приемом при определении металла в карбоксипепти-дазе [22]. Лизоцим образует нерастворимый комплекс с продуктом, получающимся при действии этого фермента на- определенный гликопептид. Растворение этого комплекса (в растворе Na l) и последующий анализ с помощью гель-хроматографии на сефадексе (j-75, а затем на G-25 дает информацию о кинетике ферментативной реакции [23]. При добавлении цито-хромоксидазы к избытку цитохрома с и последующем разделении на сефадексе G-200 в некоторых случаях получают высокомолекулярную фракцию, содержащую эквимолярные количества обоих ферментов эта фракция есть по сути не что иное, как часть дыхательной цепи [24]. В некоторые ферменты цикла лимонной кислоты, для которых кофактором служит биотин, удалось ввести метку (С Ог) в результате реакции с соответствующими субстратами с последующей очисткой на сефадексе G-50 это дало возможность после деградации под действием проназы [c.214]

ТИПОВ основано на использовании их различной аффинности по концевым углеводным остаткам, характеристичным для отдельных гликопротеинов. При разработке подходящего метода очистки данных гликопротеинов или гликопептидов с помощью лектинов Кристиансен [20] рекомендует следующие этапы [c.120]

Гликопептиды, полученные протеоли-тическим гидролизом различных гликопротеинов Конканавалин А L-Валин или L-норлейцин Конканавалин А [c.335]

Гликопептиды, полученные при про-теолитическом гидролизе различных гликопротеинов Конканавалин А То же [c.359]

О-гликозидных связей с участием гидроксилов серина или треонина и М-гликозидных связей, возникших за счет аминогрупп остатков аминокислот. Гликопептиды со связями последнего типа могут претерпевать перегруппировку Амадори. К другому типу соединений относятся производные углеводов, имеющих карбоксильную группу, т. е. глюконил- и глюкурониламинокис-лоты (ср. [1426, 1982]). Для выяснения этих вопросов синтезировали различные модельные соединения, построенные главным образом из остатков р-о-глюкозы или о-глюкозамина и аминокислоты, ди- или трипептида. [c.379]

Со времени появления в третьем издании обзора по хроматографии углеводов [1] в этом направлении произошли кардинальные изменения, обусловленные быстрым развитием ВЭЖХ. Множество классических методик, которым ранее придавалось большое значение в химии углеводов, в настоящее время вытеснены методами ВЭЖХ, и эта тенденция устойчиво сохраняется. Необходимо также отметить все более широкое применение аффинной хроматографии при выделении полисахаридов и гликопептидов, а также открытие в самое последнее время большого числа специфических лектинов. ГЖХ, особенно в сочетании с масс-спектрометрией, представляет собой один из наиболее важных методов структурного изучения углеводов. Продолжение широких исследований в этой области связано прежде всего с модернизацией способов получения летучих производных, повышением эффективности неподвижных фаз и улучшением других параметров, определяющих степень разрешения в такого рода анализах. Существенный прогресс в плоскостной хроматографии связан в последние годы с появлением пластинок для ВЭТСХ, обеспечивающих гораздо большую скорость и эффективность разделения, чем при использовании ТСХ. В настоящей главе в основном обсуждаются новейшие методики разделения и анализа углеводов и их производных и, кроме того, рассмотрены такие не утратившие до настоящего времени своего значения традиционные методы, как ионообменная и гель-хроматография, особенно с точки зрения их сравнения с различными современными автоматическими системами обнаружения, используемыми при хроматографическом анализе углеводов. [c.5]

В ЭТОМ фрагменте углеводная цепь присоединена к остатку аспарагиновой кислоты. Связь Туг — Asp, входящая в состав недеградированного белка, количественно расщепляется проназой-Р. Однако смесь гликопептидов, образующаяся при расщеплении белка папаином [19J, содержит связь Туг — Asp, устойчивую к действию проназы-Р [12]. Выделение гликопептидов из яичного альбумина иллюстрирует упомянутые трудности. Обработка белка проназой-Р или последовательно пепсином и трипсином вместе с химо-трипсином дает продукты, которые еще содержат различные, но относительно большие количества лейцина и меньшие количества серина и треонина. Эти аминокислоты можно удалить действием карбоксипептидазы, однако только после предварительного замещения свободной аминогруппы карбобензоксирадикалом [12, 20]. Аналогичные проблемы возникают при получении гликопептидов из других белков и, по-видимому, могут быть решены аналогичным путем. [c.241]

В ранних работах для выделения углеводов из продуктов щелочного гидролиза гликонротеинов с успехом использовали осаждение гетеросахарида прибавлением ацетата свинца и аммиака [1, 3, 4, 21], Осаждение повторяли несколько раз, чтобы удалить аминокислоты, образующиеся с низкими выходами. Полноту отделения пептидного компонента от углеводного фрагмента в примененных условиях щелочного гидролиза можно контролировать по содержанию азота в получаемых продуктах. Для дифференциального осаждения из водного раствора углеводсодержащего гидролизата (после щелочного или ферментативного гидролиза) часто применяли метанол, этанол или ацетон [12, 21, 22]. Розевеер и Смит [6] подробно исследовали относительные количества гликопептидов и других пептидов, осаждаемых различными объемами спирта из водного раствора продуктов расщепления [c.242]

Из гидролизатов овомукоида, полученных действием Ва(0Н)2, панкреатином или трипсином [45—47], было выделено несколько гликопептидов с различным соотношением гексоз к гексозаминам. Смеси гликопентидов, полученные из овомукоида после воздействия проназой Р [41] или папаином [c.31]

Бурильон и сотрудники также показали, что -кислый гликопротеин может расщепляться протеолитическими ферментами. Изучая действие этих ферментов на препараты, выделенные из плевральной жидкости человека, эти авторы обнаружили, что трипсин наиболее активно расщепляет гликопротеин, а затем в порядке убывания активности идут пепсин, папаин и химотринсин [138]. Смесь, полученная в результате последовательного действия всех трех ферментов, разделялась при зональном электрофорезе на три компонента, а при хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе — на пять компонентов. При определении коэффициентов седиментации этих фракций были обнаружены очень небольшие различия. Найденные коэффициенты седиментации соответствовали молекулярным весам от 3000 до 3500, Содержание углеводных компонентов в них также было очень сходно, за исключением количества гексозамина. Все гликопептиды содержали одни и те же семь аминокислот (кроме валина), но их молярные соотношения сильно варьировали. На ]Ч-концах были обнаружены четыре различные аминокислоты [25]. [c.92]

Из трех упомянутых гипотез, касающихся предлагаемой структуры углеводной части, наиболее обоснованной кажется вторая, согласно которой несколько коротких полисахаридных или олигосахаридных остатков ) присоединены к белковой цепи. Сделанное несколько лет назад предположение о том, что углеводная часть представляет собой один полисахаридный остаток [139, 27], в настоящее время не может считаться правильным, так как оно не согласуется с данными, полученными при последовательном периодатном окислении, а также с большинством работ по исследованию гликопентидов. Содержание остатков ь-фукозы в количестве меньше одной молекулы на каждый полисахаридный остаток показывает, что не все углеводные цепи идентичны. На это также указывает различие в содержании углеводных компонентов в гликопептидах. Окончательное решение вопроса возможно лишь тогда, когда будет найден метод разделения углеводных остатков с различной химической структурой. На основании данных, полученных при определении молекулярного веса гликопептида, а также при определении количества 2-амино-2-дезокси-п-глюкозы, остающегося после последовательного периодатного окисления, можно предположить, что [c.95]

При изучении ИгГ кролика Флейшман и сотр. [2] обнаружили, что содержание гексоз в этом препарате выше, чем содержание гексозаминов. Найденное количество гексоз превышает также указанное ранее Ноланом и Смитом (табл. 10). Это сильно затрудняет сравнение и выяснение корреляции между результатами, полученными в этих двух лабораториях. По мнению Флейшмана [2], наиболее правдоподобное объяснение различий в углеводном составе фрагментов, полученных в результате действия папаина, следуюш,ее. По-видимому, большая часть молекул гликопротеипа содержит олигосахариды с соотношением гексоз к гексозамину около 1,0, а при гидролизе папаином цепь А расщепляется таким образом, что углевод остается ковалентно связанным с фрагментом 1И. Однако некоторые молекулы гликопротеипа содержат несколько иные по составу олигосахариды, в которых отношение гексоз к гексозамину составляет 1,35. Папаин расщепляет эти молекулы с любой стороны углеводной части, образуя при этом один гликопептид. В этих молекулах фрагмент П1, по-видимому, не содержит углевода. ИгГ кролика, полученный различными методами и из разных кроликов, вполне может содержать эти два типа молекул в различном соотношении, и, следовательно, при гидролизе папаином из них образуются различные количества гликопептидных компонентов. [c.113]

Тип связи между дисахаридными остатками и полипептидной цепью, по-видимому, различен в препаратах гликопротеина подчелюстных желез овец из Канберры (Австралия) и овец из континентальной Европы. В Канберре при забое в основном (на 80%) используют ягнят в возрасте четырех месяцев. В Европе же забивают только трехлетних овец (и старше). На основании данных, полученных с помощью различных методов (см. том 1, гл. 10), было показано, что в ПЖО (из ягнят) часть дисахаридных остатков присоединена к пептидной цепи через гликозиднр-эфирные связи с участием ано-мерного углеродного атома N-ацетилгалактозамина и свободных карбоксильных групп остатков аспарагиновой и глутаминовой кислот. Однако наличие такого типа связи строго не доказано. В настоящее время нет достаточно специфического метода, с помощью которого можно было бы доказать присутствие эфирной связи, и, кроме того, из-за лабильности эфирной связи, образованной остатками аспарагиновой и глутаминовой кислот, трудно получить двухкомпонентный гликопептид, удобный для изучения типа связи углеводного и аминокислотного остатков. [c.142]

Антибиотики, продуцируемые актиномицетами, по химическому строению относятся к различным фуппам соединений от относительно простых (саркомицин) до таких сложных структур, как хромопептиды (актиномицины), гликопептиды (блеомицины). [c.215]

Всякий раз при проведении сравнительных исследований клеток, пребывающий в различных физиологических и патологических состояниях, и обнаружении различий их меченых образцов необходимо было бы учитывать, что эти различия могут быть обусловлены метаболизмом сахаров. К сожалению, такого типа анализ не проводился в большинстве исследований, представленных в литературе. Для того чтобы максимально пометить гликопептиды и избежать артефактов, связанных с неустойчивым состоянием процесса включения метки, культуры клеток инкубировали с мечеными сахарами от одного до нескольких дней. Для многих типов культивируемых клеток скорость роста популяции не может оставаться постоянной в течение периода включения метки (Skehan, 1976 Skehan, Friedman, 1979 1980). [c.81]

Смотреть страницы где упоминается термин Гликопептиды различные: [c.212] [c.379] [c.379] [c.379] [c.237] [c.272] [c.161] [c.241] [c.255] [c.12] [c.31] [c.32] [c.68] [c.111] [c.254] [c.289] [c.81] [c.82] [c.84] [c.92] [c.289] [c.180]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология