Электрофорез электрофорез

Гель-электрофорез. Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ — антигенов — в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [c.364]

Электрофорез. Электрофорез можно определить как движение заряженных частиц в растворе электролита под действием внешнего электрического поля. Скорость движения частиц в электрическом поле зависит от величины, формы и заряда частиц, что позволяет провести их разделение. Скорость движущейся частицы V пропорциональна ее заряду Q и напряженности электрического поля Я, а также (для сферических частиц) посредством выражения для коэффициента трения / [из уравнения (7.1.26)] обратно пропорциональна радиусу частицы [c.335]

Широкое распространение в настоящее время получил так называемый зональный электрофорез — электрофорез на твердом носителе (на бумажных полосах, агаре, крахмале, акриламиде), пропитанном буферным раствором с нужным значением pH. Положение белков на бумаге или геле определяют путем фиксации и последующего окрашивания их тем или иным красителем (обычно бромфеноловым синим, ами-довым черным или кумасси синим). Количество белка в каждой фракции можно ориентировочно определять по интенсивности окраски связанного красителя. Такое определение не дает строго количественного соотношения белковых фракций, так как количество красителя, связываемого различными белками, неодинаково. [c.89]

Экспериментально значение -потенциала определяют методом электрофореза (электрофорезом называется перемещение заряженных коллоидных частиц, находящихся под действием электростатического поля к одному из электродов), используя модифицированное расчетное уравнение Гельмгольца — Смолуховского [c.141]

Зонный электрофорез (электрофорез с использованием среды носителя) [c.115]

Электрофорез. Электрофорез продолжается 2 ч при комнатной температуре и градиенте напряжения 10—12 В/см. [c.72]

Электрофорез. Электрофорез в крахмальном геле продолжается 14—18 ч при градиенте напряжения 6 В/см. [c.80]

Молекулы полиэлектролита могуг иметь заряд, который в пределах туннеля не скомпенсирован зарядом противоионов, если радиус туннеля меньше дебаевско-го радиуса экранирования Гд. В таком случае при действии электрического поля макромолекулы полиэлектролита приобретут направленное движение к противоположно заряженному электроду. Это движение, как и движение коллоидных частиц, называется электрофорезом. Электрофорез макромолекул полиэлектролита внутри каналов неподвижной полимерной сетки (геля) называется гель-электрофорезом и является важнейшим методом разделения полиэлектролитов на фракции по их молекулярным массам. Он используется для выделения нужных фракций белков, при медицинской диагностике, идентификации личности по составу ДНК и т. д. Возможности гель-электрофореза основаны на том, что электрофоретическая подвижность макромолекул зависит от их размера, т. е. от молярной массы, контурной длины или числа элементарных звеньев в цепи. Это принципиально отличает гель-электрофорез от обычного электрофореза, поскольку скорость последнего не зависит существенным образом от размера частиц или размера К заряженных клубков (при К гд) в разбавленном растворе. Причины различия в том, что макромолекулы двигаются по извилистым туннелям в матрице геля и поэтому результирующая движущая сила электрофореза действует только на концы молекулярной цепи, тогда как сила сопротивления — на всю цепь. Поэтому чем длиннее цепь, тем меньше ее подвижность. [c.744]

Дзета-потенциал предопределяет подвижность микробных клеток при наложении внешнего электрического поля — электрофорез. Электрофорез — это движение заряженной частицы в любом электрическом поле. В микробиологии для изучения электрокинетических свойств микроорганизмов принято использовать однородное электрическое поле постоянного тока, однако [c.201]

В 1948 г. Виланд показал [15,16], что электрофорез можно проводить и на фильтровальной бумаге. При этом можно избежать ряда трудностей, которые возникают при обычном электрофорезе. Электрофорез на бумаге в большинстве случаев может быть проведен при помощи очень простых вспомогательных средств, и за последние годы этот метод стал широко применяться для разделения радиоизотопов. О быстром развитии этого [c.276]

Электрофорез. Электрофорез был изучен с целью качественного определения знака заряда микроколичеств (10" м.) золота в растворе Однако в области pH 0—4 не уда- [c.158]

Выше были описаны только основные электрофоретические методы. Кроме них, существует огромное множество их модификаций, приспособленных для специальных целей препаративного разделения в растворе, разделения микроколичеств вещества на ацетат-целлюлозных волокнах, непрерывный электрофорез, электрофорез в сочетании с хроматографией и т. д. Электрофорез является очень щадящим методом на его результаты сравнительно слабо влияют неконтролируемые изменения условий разделения pH, температуры, ионной силы раствора растворы разделяемых веществ практически не разбавляются. Несомненно, что метод находится еще в стадии развития. Особенно это относится к электрофорезу в градиенте плотности и в гелях. [c.106]

Дискретный электрофорез Многофазный зонный электрофорез Электрофорез в градиенте плотности полиакриламидного геля (электрофорез, определяемый размером пор) [c.282]

Для разделения и выделения азотсодержащих ионов электрофоретические методы немногочисленны (табл. 20), однако представлены различными видами электрофореза электрофорезом на бумаге, тонкослойным электрофорезом и вытеснительным электрофорезом в трубке. В качестве примера укажем способ количественного определения роданидов после их электрофоретического выделения [893]. [c.172]

Коллоидные частицы могут адсорбировать присутствующие в жидкой среде ионы, в результате чего они приобретают электрический заряд. Например, коллоидные частицы окиси железа (РегОз) адсорбируют катионы и несут положительный заряд, частицы сернистого мышьяка (АзгЗз) адсорбируют анионы и несут отрицательный заряд. Заряженные коллоидные частицы перемещаются под действием постоянного электрического поля. Это явление называется электрофорезом. Электрофорез широко применяется в биохимических исследованиях, в частности для разделения белков плазмы. [c.119]

В настоящей монографии излагаются теоретические основы электромиграционных методов и приводятся данные по исследованию состояния ионов в растворах и по разделению ряда элементов, принадлежащих к различным группам периодической системы. Дается описание приборов и аппаратов, используемых на практике (приборы для периодического и непрерывного электрофореза, электрофореза на бумаге, для фокусирующего ионного обмена, для определения чисел переноса и подвижности ионов в расплавах и пр.) разбираются специфические особенности и возможные ошибки метода. [c.4]

В нашей монографии приняты следующие термины. Все методы, связанные с переносом простых и сложных ионов при наличии градиента потенциала в свободных растворах, в наполненных колонках и расплавах обозначаются общим термином электромиграционные методы . В качестве синонима применяется термин электрофорез , причем в зависимости от среды используются вспомогательные, уточняющие термины электрофорез в свободном растворе , непрерывный электрофорез , электрофорез на бумаге и пр. В качестве самостоятельного термина применяется термин фокусирующий ионный обмен . [c.5]

ЗОННЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ (ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПОРИСТОЙ СРЕДЕ) [c.25]

На границе двух фаз — коллоидной частицы и среды обычно возникает двойной электрический слой в результате перехода ионов из дисперсной фазы в дисперсионную среду или наоборот. Первое явление имеет место в случае диссоциации поверхностных молекул частицы, когда один из ионов переходит в жидкую фазу, в то время как ион другого знака остается в твердой фазе. Второй случай имеет место, когда двойной электрический слой образуется в результате избирательной адсорбции одного из ионов раствора, большей частью входящего в состав или изоморфного с ионами твердой фазы. В результате процессов диссоциации или адсорбции одна фаза заряжается положительно, другая отрицательно. При наложении внешнего электрического поля происходит движение каждой из фаз к противоположно заряженным электродам. Явления относительного движения фаз вдоль поверхности раздела под влиянием внешнего электрического поля или приводящие к появлению электрического поля называются электрокинетическими явлениями. Движение свободных частиц дисперсной фазы в дисперсионной среде под влиянием внешнего электрического поля называется электрофорезом. Электрофорез можно проводить в золях, эмульсиях, суспензиях. Движение дисперсионной среды жидкости относительно неподвижной твер- [c.254]

Для разделения гликопротеинов используется также метод электрофореза. Электрофорез в растворах, так называемый свободный электрофорез, проводится в ячейке Тизелиуса. Признаком гомогенности служит наличие одиночного пика при двух или трех достаточно дале-тх значениях pH. На подвижность вещества при электрофорезе влияют два независимых фактора заряд вещества и гидродинамическое сопротивление. При взаимной компенсации этих факторов два различных вещества могут иметь одинаковую подвижность, но это не может повторяться при различных pH. [c.74]

Гель-электрофорез, Электрофорез в полиакриламидном меряют колориметрически с реагентом Фолина [22] для построения градуировочного графика используют растворы, приготовленные из кристаллического бычьего сывороточного альбумина. Если белковый образец содержит тритон Х-100 к анализируемой пробе добавляют додецилсульфат натрия [23. [c.152]

Пожалуй, самый существенный вывод из проведенного качественного рассмотрения—заключение об определенной свободе выбора концентрации ПААГ и, особенно, содержания в нем сшивки (С в пределах 2—5). В любом случае выбор значений Т должен быть сделан на основе ряда пробных опытов, в которых, в частности, следует варьировать pH буфера и продолжительность электрофореза (электрофорез белков в присутствии додецилсульфата натрия пока не рассматривается). [c.16]

В последующих разделах будут описаны различные методики электрофореза. Электрофорез с подвижной границей рассматриваться не будет, поскольку он используется крайне редко. Информацию об этом методе можно найти в литературе, список которой приведен в конце главы. [c.225]

Г ль-электрофорез - электрофорез, в котором с месьзаряжснньгх макромолекул разделяется в результате различия в их зараде, ра з- [c.29]

Электрофорез (электрофорез без носителя, электрофорез на носителе гель-электрофорез, диск-электрофорез, изоэлектрическое фокусирование, изотахоэлектрофорез, иммуноэлектрофорез ) Ионообменная хроматография Аффинная хроматография [c.347]

При так называемом свободном электрофорезе (электрофорезе с подвижной Границей), разработанном Тизелиусом, скорость и направление миграции разных белковых компонентов под влиянием электрического поля в 1]-образном сосуде, содержащем буферный раствор, целиком обусловлены зарядом их молекул. Скорость миграции частицы в электрическом поле определяется как расстояние, пройденное ею в единицу времени на единицу градиента напряжения. Следовательно, каждый из компонентов смеси белков можно выделить и охаратеризовать его скорость миграции. [c.9]

Устойчивость золей в основном зависит от заряда коллоидных частиц. Наличие заряда и его знак можно установить опытным путем. Под действием постоянного электрического тока положительно заряженные коллоидные частицы передвигаются к катоду, отрицательно заряженные — к аноду. Процесс, происходящий при пропускании электрического тока через коллоидный раствор, называется электрофорезом. Электрофорез имеет практическое применение. Он используется, например, в производстве фарфора для очистки глины от окислов железа. При взбалтыва- [c.151]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

В середине 60-х годов был разработан модифицированный метод электрофореза - электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПААГ). Этот метод был существенным щагом вперед по сравнению с обычными методами анализа белков, известными к тому времени. При использовании данного метода белки мигрируют в инертном матриксе - полиакриламидном геле с высоким содержанием поперечных сщивок. Обычно гель готовят полимеризацией мономеров непосредственно перед использованием. Размеры пор геля могут быть подобраны произвольно с тем, чтобы гель мог замедлить миграцию определенных молекул. При этом белки находятся в растворе, содержащем мощный, отрицательно заряженный детергент - додецнл-сульфат натрия или ДСН (8В8) (рис. 4-48). [c.215]

Гель-электрофорез. Электрофорез в полиакриламидном геле [на 7%-ном (масс./об.) геле] проводят, как описано в работе 24] гели окрашивают на белок по методике [24] или на GGT-активность с применением флуоресцентного метода, используя в качестве субстрата 7-( у-ь-глутамил)-4-метилкумарил-амид [25]. Готовят флуорогенный субстрат растворением 7-( - [c.152]

Один из способов идентификации нужного фермента среди многих компонентов, разделившихся в процессе электрофореза, состоит в специфическом окрашивании этого фермента. Естественно, такой способ можно применять только в тех случаях, когда электрофорез проводят в неденатурирующих условиях и, следовательно, он не пригоден для выявления ферментов после электрофореза в присутствии мочевины или ДСН. Кроме того, процедуру идентификации фермента следует проводить без предварительной фиксации белковых полос, и тем не менее используемые реагенты должны успеть продиффундировать в гель прежде, чем произойдет диффузия самого фермента. Наиболее удовлетворительные результаты дают те методы, в которых гель разрезается по толщине на тонкие пластины (рис. 9.6), благодаря чему полосы белков оказываются на поверхности и необходимость в длительной диффузии реагентов в гель отпадает. Лучше всего для этого подходят крахмальные или полиакриламидные (толстые) пластины после проведения простого гель-электрофореза, электрофореза в градиентных гелях н изоэлектрического фокусирования. [c.327]