Липиды фиксация

Выявляемый липид Фиксация" Тип среза Реакция [c.152]

Выявляемый липид Фиксация Тип среза Реакция Результаты (окрашивание) Специфичность Примечание [c.155]

Функция неизвестна возможно, участвует в липоид-иом -обмене, может препятствовать кариесу зубов Действует совместно с инсулином при усвоении углеводов. Соединяется с фосфатами нуклеиновых кислот влияет на синтезы нуклеиновой кислоты, липида и холестерина Осадитель в реакциях окисления — восстановления. (Участвует в фиксации азота в растениях) [c.277]

Таким образом, при работе с основными красителями источниками ошибок количественной цитохимии могут быть 1) неполнота извлекаемости НК экстрагентами и неполнота удаления РНК рибонуклеазой при выявлении неспецифического связывания красителя 2) недоступность части НК красителям вследствие блокирования их фосфатных групп аминогруппами белка или вследствие упаковки молекул НК белками и белково-липид-ными структурами (РНК в рибосомах, РНК и ДНК в компактном хроматине и т, д.) 3) неудачный подбор pH раствора красителя 4) неполная фиксация. [c.151]

На рис. I показан вид плазматической мембраны эритроцита сбоку. Эта фотография, на которой видны две темные линии ( железнодорожные пути ) получена после фиксации клеток четырех-окисью осмия. Линии соответствуют наружному и внутреннему полярным слоям, состоящим из полярных голов мембранных липидов. Светлая зона между линиями соответствует гидрофобной части липидного бислоя, в которой находятся неполярные углеводород- [c.343]

Общие признаки. У архебактерий есть целый ряд общих особенностей. Это касается состава клеточной стенки, липидов, аппарата транскрипции и трансляции, простетических групп и коферментов, механизма автотрофной фиксации СОз, а также способа получения энергии. Хотя результаты исследований еще весьма фрагментарны, мы попытаемся сделать общий обзор этой группы. [c.108]

После удаления воды ферментативные процессы совершаться не могут, поэтому лиофильную сушку считают одним из самых удачных способов биохимической фиксации клеток и тканей. Для того, чтобы получить информацию о распределении в клетках меченых по продуктов фотосинтеза, высушенную ткань гомогенизируют в органическом растворителе и затем образовавшуюся смесь подвергают разделению с помощью дробного центрифугирования. Этот способ позволяет отделить хлоропласты от остальных частей клеток таким образом, что меченые по углероду гидрофильные продукты фотосинтеза (органические фосфаты, сахара, аминокислоты, окси- и кетокислоты) остаются в тех участках клетки, где они находились в момент замораживания. Естественно, этот метод неприменим для определения локализации гидрофобных продуктов фотосинтеза (липидов), растворимых в неводных растворителях. [c.260]

По мере накопления знаний о количественном распределении различных липидов в мембранах становится возможным создание более точных моделей. Используя такой косвенный подход, удается истолковать те немногочисленные данные о структуре мембраны, которые были получены экспериментальным путем. Этими последними мы обязаны почти исключительно электронной микроскопии. Анализ электронных микрофотографий (фото 3) выявляет некоторые универсальные и характерные черты мембран, которые мы опишем ниже. При использовании таких же и аналогичных способов фиксации мембрана представляется в виде двух слоев вещества, сильно поглощающего электроны, разделенных светлой полосой. Делая некоторую скидку на разбухание вследствие фиксации, можио сказать, что растительные мембраны имеют общую толщину 75—100 А (ширина плотных линий составляет примерно 20 А). Эти измерения хорошо согласуются с данными Робертсона [23, 24], полученными при изучении разнообразных животных мембран. [c.51]

ОТ содержания в них воды и липидов, но и от изменения свойств клеточных мембран. Величины же абсолютного содержания белков и РНК при расчете на одну клетку не зависят от обработки проб ткани при фиксации. [c.32]

В электронном микроскопе все образцы подвергаются действию вакуума высокой степени разрежения и поэтому их невозможно наблюдать в живом влажном состоянии. Ткани обычно сохраняют с помощью фиксации - сначала глутаральдегидом, ковалентно связывающим белковые молекулы между собой, а затем осмиевой кислотой, связывающей и стабилизирующей двойной слой липидов и белки (рис. 4-14). Электроны обладают низкой проникающей способностью, этим вызвана необходимость получения срезов толщиной от 50 до 100 нм (1/200 толщины одной клетки). Только такие срезы можно наблюдать в электронный микроскоп. Для этого потребовалось также предварительное обезвоживание образца и пропитка мономерными смолами, которые после полимеризации создают твердый блок пластмассы, заключающий образец блок затем режут с помощью тонкого стеклянного или алмазного ножа на специальном микротоме. Полученные срезы не содержат воды или иных летучих органических веществ такие срезы помещают на небольшую круглую металлическую сетку для наблюдения под микроскопом (рис. 4-15). [c.183]

Ориентация липидов. Наибольшее количество двойных связей локализовано во второй половине жирных кислот молекул фосфолипидов. Вследствие этого, как предсказывает наша модель, имеющая ориентацию липидов жирными цепями в сторону наружных белков, при фиксации четырехокисью осмия электронноплотными будут наружные слои мембраны. В то же [c.163]

Белки и липиды различаются по многим физическим и биохимическим свойствам, что дает возможность простыми методами определить принадлежность изучаемого антигена к тому или иному классу соединений. Белковые антигены быстро разрушаются при мягкой обработке проназой, в то время как липидные антигены не подвержены действию протеолитических ферментов. В отличие от большинства белковых антигенов антигены липидной природы устойчивы к фиксации формальдегидом с последующим нагреванием до 80 °С. Эту процедуру можно проводить как с суспензиями отдельных клеток, так и со срезами тканей. Экстракция нативных или фиксированных формальдегидом клеток кипящим метанолом в течение 1 мин приводит к растворению части клеточных липидов, и метанольный экстракт в ряде случаев можно использовать без дальнейшей очистки для твердофазного радиоиммунологического анализа (РИА). Использование РИА описано в разд. IV. [c.160]

В книге описаны основные методические приемы, используемые в гистохимии. Приведены наиболее употребительные методы подготовки ткан к исследованию (замораживание, лиофильная сушка, заливка В парафин, химическая фиксация и т.п.), методы определения белков, нуклеиновых кислот, углеводов и липидов. Большое внимание уделено гистохимии ферментов, а также пигментов и биогенных аминов. Описаны методы с использованием радиоавтографии и иммунохимии. [c.4]

В животном организме нативные липиды находятся в жидком состоянии и не обладают двойным лучепреломлением. Двойное лучепреломление характерно для кристаллов, образующихся при охлаждении липидов. Так называемая кристаллизация липидов зависит главным образом от окружающей температуры и от предварительной обработки ткани (фиксация, заливка). Почти все липиды способны переходить в кристаллическое анизотропное состояние, поэтому определение изотропности или анизотропности липидов не имеет большого значения для их идентификации. [c.148]

Действие альдегидов и оксида осмия (VHI) сводится к образованию поперечных связей между молекулами белков. При этом альдегиды вступают в соединения с различными функциональными группами белков (в частности, с аминогруппами), во многих случаях образуя между ними связи типа мостиков. В отличие от белков, ненасыщенные липидные компоненты, по-видимому, не стабилизируются альдегидами. Фиксация этих компонентов осуществляется при помощи оксида осмия (VHI), который взаимодействует с липидами по месту двойных связей, образуя эфиры осмиевой кислоты, которые в дальнейшем легко восстанавливаются (рис. 20). [c.94]

Для фиксации липидов наиболее часто используется формальдегид, который может изменять физические свойства липидов растворимость, дисперсия, первичная флуоресценция и др.). Возможное в процессе фиксации частичное растворение и вымывание липидов, особенно фосфолипидов, можно в значительной мере ограничить добавлением в фиксирующую смесь ионов Са, Со или Сд, поскольку эти электролиты способствуют образованию комплексов между липидами и белками. Поэтому фиксирующая смесь Бейкера, содержащая формальдегид и кальций, щироко используется в гистохимии липидов. Фиксация липидов формальдегидом в значительной мере предотвращает растворение липидов в процессе обезвоживания и заливки тканей в полиэтиленгликоль или карбовакс. Другая возможность предотвращения вымывания липидов, особенно фосфолипидов, в органических растворителях, используемых при заливке в парафин, заключается в добавлении в фиксирующую смесь бихроматов. Длительное хромирование при высоких температурах позволяет обеспечить сохранность нейтральных жиров при заливке в парафин. Хорощим дополнением к фиксации общих липидов формальдегидом служит рекомендуемая Элфтманом (ЕШтап) фиксация тканей (за исключением нервной) в смеси растворов сулемы и бихромата (табл. 7). [c.47]

В течение нескольких последних десятилетий химики и биохимики поделили сферы интересов в области молекулярных аспектов биологии. Сферой биохимиков стала динамика живой клетки, ее отдельные функции и их контроль. Интересы химиков-органиков сфокусировались на изучении аккумулирующихся в клетках метаболитов первичных метаболитов (углеводов, белков, нуклеиновых кислот, липидов, стероидов) и множестве вторичных метаболитов (алкалоидов, терпенов, фенолов, хннонов и разнообразных микробных антибиотиков). Это разделение сфер интересов не должно заслонять общие цели. Поэтому, хотя в последующих главах и в тексте всей книги основное внимание при обсуждении биосинтеза уделяется темам, представляющим особый интерес для химиков, мы считаем необходимым рассматривать результаты исследований прежде всего исходя из наших знаний о промежуточном метаболизме и двух фундаментальных биосинтетических процессах — фотосинтеза и фиксации азота, являющихся исходным пунктом и основой для последующего анализа путей биосинтеза. [c.396]

Наиболее широкое стратиграфическое распространение свойственно синезеленым водорослям. Они относятся к прокариотам, что сближает их с бактериями. Есть и другие признаки, более свойственные бактериям строение клеточной стенки, наличие газовых вакуолей, способность к фиксации азота и др. В настояшее время их чаще называют цианобактериями. Они существуют на Земле более 3 млрд лет. Автотрофные формы при фотосинтезе используют СО2 и выделяют кислород благодаря их жизнедеятельности была создана кислородная атмосфера Земли. В течение всей истории своего развития они не претерпели изменений. В протерозойских бассейнах они были подавляющей формой жизни и поставщиком ОВ. Многими исследователями отмечались консервативность цианобактерий, их экологическая выносливость. Синезеленый цвет определяется наличием синего и бурого пигментов в сочетании с хлорофиллом. Некоторые формы имеют и другие пигменты — от красного до черного. Эти водоросли токсичны, хищны, подавляют развитие других водорослей и зоопланктона, радиорезистентны, приспособлены жить в темноте, в горячих и холодных водах. Очень важным свойством этих водорослей является антибактериальное действие их липидов (циано-фитина и хлороллина). Это предопределило устойчивость ОВ синезеленых (как и некоторых зеленых водорослей) к микробному разрушению. Цианобактерии представлены как одноклеточными, так и многоклеточными формами. [c.111]

Рассмотрены вопросы строения клеточной стенки у различных типов микрооргяниамов, химический состав и строение мембран, а также транспорт веществ через эти структуры с позиции биохимии. Дай раздел, посвященный метаболизму превращений в процессе роста и развития микроорганизмов. Детально освещены пути биосинтеза аминокислот, антибиотиков, витаминов, липидов, токсического начала микробных средств защиты растений, ксенобиотиков, нуклеотидов и нуклеозидов, их производных и флавинов. Рассмотрены некоторые аспекты синтеза биологически активных веществ у микробов, способных к биологической фиксации азота, а также у фотосинтезирующих и метилотрофных микроорганизмов. Кратко показаны взаимосвязи различных биосинтетических путей. [c.2]

Микрофотометрическое исследование проводят как на фиксированных (белки, НК), так и нефикспрованных (липиды и ферменты) препаратах. Для НК более достоверные количественные данные могут быть получены при фиксации растительного материала смесью Карнуа или Беккера. Заливку в парафин, изготовление блоков и получение срезов проводят согласно общепринятой гистологической технике. [c.134]

Применение. В гистологии и гастохимни при исследовании пигментов, в качестве отбеливающего средства по Майеру [1]. и как составная часть фиксатора Суонка и Дэвенпорта для фиксации липидов и липопротеидов [Пирс, 704]. Технические показатели (по ГОСТ 4235—65) [c.172]

I часто применяются фиксирующие смеси с солями хрома, уксусной кислотой, формалином, трихлоруксусной кислотой жидкость суза по Гейденгайну для фиксации белковых веществ и мукополисахаридов жидкость Сент-Джордьи [1] Для фиксации гистологических препарат в сулема — формалин — ацетат натрия по Лилли (этот фиксатор не дает резкого уплотнения материала и максимально сохраняет в нем белковые вещества, углеводы и другие соединения) фиксатор Элфтмана для фиксации липидов фиксатор Альтмана и др. [c.345]

Применение. В микроскопии в качестве осветляющего агента в качестве промежуточной среды для удаления следов воды и спирта из обезвоженных в этиловом спирте объектов перед их заливкой в парафин как растворитель, в частности для выявления липидов методом экстракции по Кейлинг fl и по Бэкеру [2] в качестве составной части жидкости Карнуа для фиксации гистологических препаратов и жидкостей Дженкинса и Лорха для декальцинации как добавка к хранящимсл инкубационным средам для предотвращения бак-, териального гидролиза. [c.433]

Анатомия мембраны. Относительно размеров и общей молекулярной структуры клеточных мембран существует весьма широко распространенное представление, которое, однако, не всеми поддерживается. Толщина растительных мембран находится в пределах от 75 до 100 А. Расположение молекул липидов и белков в мембранах пока еще неизвестно. Выяснение природы светлых и плотных линий, видимых на электронных микрофотографиях, а также решение вопроса о существовании в природе универсальной элементарной мембраны зависят от увеличения разрешающей способности электронного микроскопа. Сомнения, связанные с возможностью артефактов, могут быть рассеяны только при проведепии независимых наблюдений с использованием нескольких различных методов фиксации. Чрезвычайно плодотворным было бы применение для изучения анатомии мембран некоторых новых подходов, например метода дифракции рентгеновских лучей. [c.54]

Споры с тонкой оболочкой, яйцевидные до широкояйцевид-ных, одноядерные, лишь в единичных случаях с двумя ядрами, размером 10—12,5X9—11 мк, чаще всего 11x10 мк. При фиксации или высушивании споры деформируются, принимая форму сдавленного мячика или лодочки. Внутри споры находится ядро размером 4 мк и несколько зернышек, которые окрашиваются Суданом черным как липиды. Ядро дает сильную фульгенову [c.452]

МЫХ из этих экстрактов путем центрифугирования при высоких скоростях. Истинные растворы этого фермента можно получить при помощи солей дезоксихолевой кислоты [131]. ЭтО говорит о том, что в фиксации фермента в гранулах участвуют липиды. [c.300]

Метаболизм далапона- С изучали на органической почве, на смешанных популяциях бактерий Arthroba ter sp.), извлеченных из органических почв, и на чистых культурах [112]. При сравнении метаболизма далапона-1- С и далапона-2- С в названной выше системе обнаружено быстрое выделение СОг из далапона, меченного по карбоксильной группе, тогда как меченый атом углерода, находившийся в положении 2, обнаруживается главным образом в липидах, нуклеиновых кислотах, белках и в растворимых в холодной ТХК фиксациях организма. Изучение растворимых меченых продуктов, извлеченных из инкубированных с далапоном- С микроорганизмов, показало, что метка присутствует в аминокислотах аланине и глутаминовой кислоте [14]. Эти наблюдения согласуются с представлениями о пирувате как одном из первых продуктов метаболизма далапона. Первыми мечеными продуктами метаболического разложения далапона-2- С в присутствии чистых культур Arthroba ter sp., выращенных в аэробных условиях, были пируват и аланин [112]. [c.228]

Величины ТФП были определены методом дифференциальной сканирующей калориметрии. Опыты проводили на плоских бислойных липидных мембранах (БЛМ) в условиях фиксации напряжения. БЛМ фомировались из динасыщенных синтетических и природных фосфолипидов, имеющих температуру фазового перехода указанного типа в области 40—60 С. Регистрировались флуктуации тока, появление которых указывало на рождение пор (рис. 2.16). На рис. 2.16 видно, что исходно флуктуации тока отсутствуют и регистрируется только шум. Достижение температуры, соответствующей температуре основного фазового перехода (ТФП) липида, сопровождается появлением отдельных флуктуаций тока длительностью 1 с. Слева на рисунке представлены реализации флуктуаций тока, справа - соответствующие гистограммы распределения по электрической проводимости. На рисунке показаны характерные записи флуктуаций тока для четырех индивидуальных фосфолипидов с различными температурами фазового перехода. Сопоставление реализаций тока и гистограмм показывает их однотипность для 54 [c.54]

Использование ультраструктурных срезов и специальных методов фиксации позволило установить, что эндоплазматическая сеть представляет собой полости, окруженные мембранами. Компоненты эндоплазматической сети заключены в элементарную пленку, которая во много раз тоньше плазмалеммы и зрелых мембран аппарата Гольджи. При гомогенизации клетки они, округляясь, превращаются в мельчайшие шарики, так называемые микросомы. Анализ этих образований показал, что их мембраны на 2/з состоят из белка и на 7з из липидов (Фрей-Висслинг, 1976). [c.34]

Легкую фазу липидного экстракта, полученного по методу Фолша. можно использовать в качестве антигена при твердофазном РИА без очистки или с дальнейшей очисткой. Его очистка состоит в освобождении от солей и низкомолекулярных примесей диализом или, что быстрее, адсорбцией липидов на патроне для обратнофазовой хроматографии с последующей элюцией их органическим растворителем. Освобождение экстракта от солей и низкомолекулярных примесей является обязательным этапом, если материал будет использован для ТСХ. Фиксированные формальдегидом клетки можно экстрагировать так же, как и нативные. Однако образцы тканей следует гомогенизировать перед экстракцией, поскольку после фиксации эта процедура существенно осложняется. Лучше измельчить ткань в десятикратном объеме воды в небольшом электрическом блендере и перед экстракцией гомогенат лиофилизовать. [c.161]

По данным поляризационной и электронной микроскопии четырехокись осмия обеспечивает хорошую сохранность субмикроскопических структур клетки. Щадящая фиксация объясняется главным образом воздействием на белки, которые не коагулируют, а желатинизируются. При этом определенную роль играет и эффект образования сшивок. Минимальное возд ствие четырехокиси осмия на структуру по сравнению с другими фиксирующими веществами (юъясняется процессом желатинизации, который практически не сопровождается сморщиванием ткани. Четырехокись осмия реагирует с белками или их аминокислотными группами и, что особенно характерно, с липидами. Различные реакции четырехокиси осмия с активными группами различных аминокислот перечислены в табл. 5. [c.39]

Вместо нитро-СТ можно использовать нерастворимый в липидах ТНСТ в той же концентрации. Ингибирование системы цитохромов с помощью K N усиливает реакцию, поскольку на восстановление соли тетразолия остается больше водорода. Непродолжительная фиксация маленьких кусочков ткани формальдегидом или глутаральдегидом способствует локализации фермента она ведет, однако, к частичной инактивации фермента и осложняет суждение об истинной ферментативной активности. Согласно Андерсену и Хойеру (Andersen, Ноуег, 1973), хорошая локализация фермента in situ без потерь достигается с помощью следующей фиксации 1%-ный забуференный, свободный от метанола формальдегид, приготовленный из параформальдегида (pH 7,2 устанавливается 0,2 М фосфатным буфером). Продолжительность фиксации 5 мин при температуре от О до + 4°С. Кусочки ткани следует вырезать быстро толщина их не должна превышать 1—2 мм. Такая фиксация способствует проникновению нитро-СТ в ткань и повышает субстантивность формазана. [c.240]

Проводка материала для заливки в аралдит. Фиксирование исследуемого материала необходимо для того, чтобы свести к минимуму структурные изменения,, которые могут произойти на всех стадиях приготовления препарата. Наиболее широко распространенными фиксаторами в электронной микроскопии являются альдегиды и тетраокись осмия, действие-которых сводится к образованию поперечных связей между молекулами ткани и образованию в ткани прочной сети. Чаще всего применяется двойная фиксация, состоящая из первичной фиксации в глутар альдегиде и последующей фиксации в тетраокиси ОСМИЯ. Этот метод сочетает в себе преимущества обоих фиксаторов, поскольку альдегиды эффективнее связывают белки, а тетраокись осмия — липиды. [c.227]

Уукувирусы имеют внешнюю оболочку, чувствительны к растворителям липидов после фиксации глутаровым альдегидом диаметр частицы составляет примерно 100 нм гликопротеины хорошо различаются на поверхности частиц [184, 210, 211, 250, 252]. [c.390]

Если обратиться к первичному биосинтезу органического вещества, то легко убедиться в том, что первым стабильным соединением, которое образуется в результате фиксации СО2 на рибулозо-1,5-дифосфате, является 3-фосфо-глицериновая кислота. Уже от этого простейшего соединения начинаются цепи реакций, ускоряемых ферментами, в результате которых синтезируются углеводы, аминокислоты, глицерин, высшие жирные кислоты, полиизопреноиды, стеролы и другие соединения. Из аминокислот, СО2 и ЫНз возникают пуриновые и пиримидиновые основания. Следовательно, прямым продолжением первичной фиксации СО2 сразу являются многообразные процессы создания мономеров, из которых далее строятся биополимеры (полисахариды, белки, нуклеиновые кислоты и т. п.), разнообразные липиды и многие другие органические соединения, входящие в состав растений, животных и микробов. [c.468]

Зеленые листья в темноте, а этиолированные листья и в темноте, и на свету фиксируют СОг главным образом в виде органических кислот при этом значительная часть метки включается в малат. Тамас и др. обнаружили, что главными продуктами ассимиляции СОа в выращенных в темноте листьях ячменя (Сз-растение) являются малат, аспартат, глутамат и цитрат. Такое включение метки наблюдалось н в темноте, и иа свету. После освещения ткани листа в течение 2—4 ч синтез малата, аспартата и глутамата в листе резко возрастал, а первичным и основным продуктом ассимиляции был малат. Сгш-тез всех этих органических кислот может быть очень важен для дыхательного метаболизма и для образования белков и липидов в процессе развития хлоропластов. После предварительной экспозиции на свету в течение 6 ч главным продуктом фиксации СО2 в ткани листьев, выращенных в темноте, становится сахароза, точно так же, как и в зрелых листьях Сз-растений. [c.534]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология