Денситометрия точность

Значительно более совершенным является метод, основанный на денситометрии и флуориметрии пятен. Хотя метод требует применения специальных приборов — денситометров и флуориметров, его достоинствами являются высокая скорость измерений, отсутствие дополнительных операций и относительно высокая точность. Следует, однако, иметь в виду, что на воспроизводимость резуль-тов измерений сильно влияют характер и интенсивность окраски пятен. Относительная ошибка определения лежит где-то в пределах 5—8%. В существенной степени точность определения зависит от толщины слоя сорбента (табл. IV.2). Поэтому измерения при калибровке должны проводиться на тех же толщинах слоя, что и в последующих опытах. [c.150]

Использование соответствующих светофильтров повышает точность работы денситометра. Следует применять красный светофильтр для денситометрии электрофореграмм, окрашенных синими красителями, и зеленый для электрофореграмм, окрашенных красными красителями. (Соответствующие рекомендации и другие сведения по эксплуатации обычно содержатся в руководстве к прибору.) [c.65]

Ошибки при денситометрии могут возникнуть также в процессе самой хроматографии в тонких слоях, например при измерении объемов опытного вещества при нанесении его на пластинку. Точность определения зависит и от толщины слоя адсорбента на пластинке, влажности слоя, присутствия посторонних веществ, характера растворителей и ряда других факторов. [c.41]

Следует упомянуть и о четвертом способе количественного определения веществ в зонах, осуществляемом путем визуального сравнения интенсивности окраски зон с интенсивностью окраски зон на стандартных хроматограммах. До некоторой степени это приближенный метод, однако при оптимальных условиях, но-видимому, можно добиться точности 25%. Визуальную денситометрию можно использовать в со-метании с методом, основанным на измерении площади зоны. [c.42]

При использовании денситометрии необходимо рассмотреть две серии параметров, влияющих на точность и воспроизводимость результатов. К первой серии относятся постоянные факторы, связанные с используемым прибором, а ко второй — переменные факторы, обусловленные хроматограммой. [c.80]

Денситометрия - быстрый и надежный метод определения количества вещества непосредственно па хроматограмме после его отделения из смеси. Однако, если используется хроматография в тонком слое, необходимо соблюдать некоторые предосторожности при подготовке хроматограмм и их проявлении, так как воспроизводимость и точность результатов зависят почти полностью от природы и распределения окрашенного комплекса в момент его сканирования на денситометре. [c.104]

Фотографический метод регистрации наименее точен, но зато значительно более удобен и прост, чем остальные, так как он не нуждается в дополнительной аппаратуре, если не считать денситометров — приборов для измерения степени почернения фотопленки. Точность измерения интенсивности с по мощью счетчиков почти на порядок выше, чем фотографическим методом, но достигается она за счет использования сложной и дорогостоящей электронной аппаратуры, при выполнении жестких требований в отношении стабильности ее работы и при условии квалифицированного технического обслуживания. Наиболее простую электронную схему имеет счетчик Гейгера. Однако счетчики Гейгера уступают пропорциональным и особенно сцинтилляционным счетчикам по ряду параметров, существенных при измерении интенсивности. [c.159]

Приготовление радиоавтографов значительно замедляет измерение концентрации С вдоль полос бумажной хроматограммы при помощи фотоэлектрического денситометра. К тому же при высоких концентрациях С , приводящих к образованию площадей максимального почернения на радиоавтографе, относительное почернение не может быть измерено с большой точностью. Следовательно, более удобно измерять радиоактивность вдоль бумажной полосы путем непосредственного счета, используя счетчик Гейгера — Мюллера с тонким окном, помещенный в свинцовый домик для уменьшения фона. Чтобы избежать трудоемкой и требующей затраты времени операции разрезания бумаги на эквивалентные полосы и индивидуального счета полос, был разработан полностью автоматический регистратор. Он включает недорогую приставку к стандартной счетной аппаратуре. [c.204]

Для определения разделенных соединений непосредственно на пластинке ее опрыскивают реагентом (см. раздел 10.3), который через некоторое время образует с определяемым соединением окрашенные или флуоресцирующие вещества, концентрации которых количественно определяют денситометром. Этот метод включает сканирование пятна (хроматограммы) в проходящем или отраженном свете, который затем попадает в фотоумножитель. Разность в интенсивности падающего и проходящего или отраженного света в виде электрического сигнала регистрируется на графике. Высота пика является мерой интенсивности пятна. Градуировочный график строят в координатах масса вещества — площадь пика, причем точность измерения площади пятна денситометром не менее 2—5% [2]. [c.195]

Логарифмический сектор. В исследованиях, не требующих очень высокой точности, для фотометрического измерения вместо денситометра можно использовать вращающийся диск (рис. 119), [c.156]

Хроматографические методы анализа применяют в основном к экстрактам полимеров. Для разделения экстрактов широко используют все виды жидкостной хроматографии. Доминирующим хроматографическим методом определения стабилизаторов до настоящего времени остается тонкослойная хроматография (ТСХ), благодаря малой продолжительности анализа, высокой чувствительности метода, несложности оборудования и возможности одновременного анализа многих компонентов, которые могут быть разделены в одном хроматографическом процессе. Распространению метода способствовал промышленный выпуск готовых пластинок. Хотя основную ценность этот метод имеет для идентификации добавок, он позволяет получать и количественные результаты, причем не с меньшей точностью, чем другие хроматографические методы. Количественное определение можно проводить после снятия пятен с пластинки и экстракции их полярным растворителем или непосредственно на пластинке с использованием сканирующих денситометров. [c.245]

Модификацией этого метода является не визуальное сравнение интенсивности окраски пятен, а измерение плотности окраски пятен в проходящем свете специальными приборами — денситометрами. В этом случае точность метода повышается до 10—15%. [c.33]

Преимущества масс-спектральных данных высокого разрешения и их интерпретация кратко обсуждались в разд. II, В. К сожалению, в масс-спектрометрии высокого разрешения как сами приборы, так и работа с ними требуют больших денежных затрат [12]. При стоимости самого прибора в 150 тыс. долл. его эксплуатация может обходиться до 5 тыс. долл. в год. Стоимость обработки данных (при непрерывной и эффективной эксплуатации прибора) может доходить до 30 тыс. долл. в год. (Эта оценка получена в предположении, что к элементной таблице сводят 15 полных спектров высокого разрешения в неделю, на спектр требуется около 5 мин машинного времени, а 1 ч машинного времени обходится в 500 долл.) Если для регистрации масс-спектров применяется фотографирование, то для измерения с высокой точностью положения линий на фотопластинке необходим микроденситометр. При точности 0,5 мкм только необходимое дополнительное оборудование стоит не менее 12—15 тыс.. долл., а полная стоимость системы доходит до 50 тыс. долл. Недавно в продаже появился денситометр с ручным управлением стоимостью около 3 тыс. долл., но эта относительная дешевизна сказалась на его точности. [c.211]

При постоянном отношении полезного сигнала к шуму уменьшение площади зоны дает положительный эффект для однолучевой денситометрии. Для двухлучевой денситометрии и флуориметрии при этих условиях предел определения уменьшается с увеличением площади зоны за счет повышения точности интегрирования. Уменьшение толщины слоя сорбента по-разному сказывается па изменении предела определения веществ методами денситометрии и флуориметрии. [c.87]

Однако для потребителей структурных данных электронографического метода важнее оценки возможных ошибок в молекулярных параметрах. Можно считать, что в благоприятных случаях (невысокие температуры, простые молекулы) точность измерения межъядерных расстояний электронографическим методом при использовании современной фотографической техники и прецизионной денситометрии может быть доведена до [c.242]

Хара и др. [257] разработали двумерный сканирующий денситометр с самозаписывающим интегратором для анализа тонкослойных хроматографических пластинок. Этим прибором, в частности, было с точностью 5 % определено содержание стероидов. Выявлен ряд источников погрешностей (см. т. 1, гл. XI, разд. 2). [c.335]

Для оценки содержания изотактических структур в полипропилене было использовано несколько методов рентгеновский [805], денситометрия [806], ИК-спектроскопия [809] и экстракция растворителями [806—808]. Ни один из этих методов не был принят в качестве стандартного, а результаты, полученные по различным методикам, не очень хорошо согласуются между собой. Точность денситометрического и рентгеновского методов зависит от степени кристалличности изотактического материала в образце, что приводит к ухудшению воспроизводимости даже при тщательном отжиге. [c.207]

Для повышения точности определения целесообразно проводить трехкратную съемку спектрограмм эталонов и анализируемых образцов, а для построения градуировочных графиков применять не менее трех стандартных эталонов. Проявленную, отфиксиро-ванную и высушенную пластинку со спектрограммами эталонов и образцов фотометрируют с помощью денситометра или микрофотометра, измеряя оптическую плотность почернения линий аналитических пар определяемых элементов. Спектрограмму устанавливают эмульсией вверх на предметном столике микрофотометра МФ-2 (рис. 30.17) так, чтобы на экране прибора деления шкалы читались слева направо. На экран выводят ту часть спектра, где расположена ана- [c.682]

Количественная оценка 1,4-бенздиазепинов, извлеченных из биосубстратов и подвергнутых тонкослойной хроматографии, включает в себя различные по сложности и точности приемы хроматографию [2581, флуоресценцию [2711, спектрофотометрию, полярографию, спектрофлуориметрию и радиоиндикацию. Для уменьшения потерь при количественном определении бенздиазепинов используется денситометрия пятен непосредственно на пластинках [2891. [c.226]

На пластинке Фиксион 50x8 изомеры-трипептиды Гли-L-Ала-Ь-Лей и Гли-О-Ала-Ь-Лей разделяются довольно хорошо. По интенсивности пятен разделенных пептидов можно оценить степень рацемизации препарата. Хроматографию проводят на уравновешенных пластинках в буферном растворе Е (табл. 10), т. е. во втором буферном растворе одноколоночной системы анализатора. Для получения оптимального разделения на пластинку наносят 10 мкл раствора образца в 0,01 н. НС1 (концентрация пептида 10 мг/мл). Хроматографируют при комнатной температуре до высоты 12—15 см. Если требуется количественно определить степень рацемизации (с точностью 5—10%), применяют денситометрию тонкослойных хроматограмм. Для получения более точных результатов целесообразно воспользоваться автоматическим анализатором. [c.261]

Полученную калибровочную кривую используют для определения количества аминокислоты в исследуемом продукте. Точность фото-электроколориметрического определения количества аминокислот составляет 5—10%. Количество аминокислот можно также определить денситометром с последующим измерением площади кривых планиметром. [c.30]

Деиситометрический метод применен в приборе ОД-ЮМ, основное назначение которого — контроль загрязнения масел и других жидких продуктов. Денситометр ОД-ЮМ работает по прошедшему излучению. Световой поток в нем создается световодом, излучающим инфракрасный свет (А, 1 мкм), слабо затухающий в маслах. В качестве первичного фотоэлектрического преобраозвателя применен кремниевый фотодиод. Проверяемая жидкость заливается в пробирку или ампулу, помещается в измерительную зону между излучателем и фотопреобразователем. Сигня.лы, полученные от фотопреобразователя, после простейшей обработки подаются на стрелочный прибор. Денситометр ОД-ЮМ не позволяет получить высокую точность измерений из-за недостаточной стабильности излучателя и приемника света, но является незаменимым прибором для экспресс-контроля загрязнения масел и создает большой экономический эффект. [c.254]

Логарифмический сектор. В исследованиях, не требующих большо) точности, для фотометрического из мерения вместо денситометра можно использовать вращающийся диск (рис. 5.25), вырезанный по формг логарифмической спирали (рис. 5.25,а) или ступенчатой кривой, приближающейся к спирали (рис. 5.25,6). Диск вращается перед щелью спектрографа таким образом, что экспозиция от одного конца щели к другому изменяется логарифмически, В результате оптическая плотность спектральных линий постепенно уменьшается по их дЛ Ине, и вследствие этого чем интенсивнее излучение, тем длиннее линия. На [c.102]

Легко показать, что используемый в большинстве зарубежных денситометров метод однокоордянатного сканирования высокой щелью значительно уступает но точности методу двухкоординатного сканирования точечным световым зондом, для которого линейное соотношение между площадью денситограммы и количеством вещества в хроматографическом пятне сохраняется в несравненно большем диапазоне концентраций. Помимо этого, метод двухкоординатного сканирования точечным световым зондом незаменим при количественном анализе двумерных хроматограмм с недостаточно разделяющимися пятнами. [c.144]

Один из наиболе удобных и чувствительных методов количественного определения веществ в зонах хроматограмм — метод денситометрии. Он позволяет сравнительно просто определить наномолярные количества вещества с точностью 1—2°/о- Это прямое определение концентрации производного в зоне хроматограммы является одним из видов абсорбциометрии. Хроматограмму сканируют лучом или пятном монохроматического света и измеряют фотоэлектрическим методом долю отраженного бумагой или проходящего через [c.45]

Вследствие многих изменений в характере сканируемых пятен, некоторые из которых уже обсуждались, калибровочные кривые нужно строить по результатам нескольких разделений и измерений площадей пиков. Существуют, однако, дополнительные изменения, которые должны приниматься во внимание. Они связаны с точностью и воспроизводимостью определения площади пика. В работах [6, 7] эти изменения были изучены при использовании денситометра Хромоскан . [c.99]

Усовершенствованный метод оценки. При обычных измерениях оптических плотностей потемнений на быстродействующей рентгеновской пленке плотность на 0,6 выше плотности вуали является примерно той величиной, которая принимается во впимание для обеспечения точности в несколько процентов. В настоящее время сконструированы денситометры, обладающие высокой чувствительностью [3]. Это позволит достигнуть нужной плотности при соответственно меньших экспозициях, а эффективность может быть повышена в пять илп десять раз. Однако такой метод, по-видимому, потребует более тщательно отработанной и усовершенствованной техники эксперимента. [c.246]

Количественные сравнения с разно11 степенью точности осуществляют многими способами. Во-первых, образцы могут быть просто рассортированы в порядке улели-чепия активности путем визуального сравнения. Этим методом можно осуществить и нолуколичественное определение, если серию источников известной активности экспонировать одновременно или если со всех образцов спять несколько радиоавтографов за различное время. Ранее уже было показано, что У 2 серий шкал времени экспозиции со стандартным отклонением между 3 и 5% получены визуальным подбором [6]. При помощи такой серии пленок было найдено, что денситометр дает стандартное отклонение 1%, т. е. такое значение, которое обычно получают при использовании счетчика. [c.249]

Метод денситометрии — один из высокочувствительных и удобных, позволяющий быстро определить наномолярные количества вещества с точностью 1—2%. [c.266]

Хартел и Плеймикерс [112] использовали бумагу с четвертичными азотными группами для количественного определения цистеиновой кислоты в гидролизате белков. В восходящем методе хроматографии проявляли 0,34 М хлоруксусной кислотой. После проявления высушенную бумагу обрабатывали нингидрином для обнаружения красных пятен и с помощью денситометра определяли количество цистеиновой кислоты в пятне. По мнению авторов, ни одна из аминокислот, найденных в белке, не перекрывалась с цистеиновой кислотой. Точность метода была проверена авторами на шестнадцати определениях этой кислоты в гидролизате 1 г шерсти. Средние значения составили 1,25% при относительной средней ошибке 3%. [c.323]

Если в лаборатории не имеется денситометра, количество вещества в зоне можно определить, сравнивая ее с зонами стандартных проб. Площадь пятен оценивают визуально (полуко-личественно), измеряют планиметром или накладывая на пятно миллиметровую бумагу, а если пятна большие, используют диаграммы в виде квадрата, покрытого беспорядочно расположенными точками, нанесенными на лист прозрачной бумаги [131]. Можно также скопировать эти пятна на лист однородной %маги, вырезать и взвесить. Визуальное сравнение размеров пятен можно провести более точно, если пробу наносят на стартовую линию в виде нечетного числа точек в нескольких известных концентрациях, уменьшающихся, например, слева направо, а раствор стандартного вещества наносят на стартовую линию в возрастающих концентрациях в виде четного числа точек. Шанда усовершенствовал этот метод, повысив его точность [50]. Указанным способом удается достигнуть хорошей точности (погрешность около 3%), особенно при негативном обнару- [c.99]

ТСХ и ТЖХ являются очень ценными дополнениями друг к другу. Разделение можно много быстрее и легче опробировать методом ТСХ. Все соединения, имеющиеся в анализируемом образце (при отсутствии летучих соединений), на пластинке доступны для обозрения. В ТСХ обычно можно обнаружить и те соединения, которые могут не элюироваться из колонки при ТЖХ. Кроме того, при ТСХ с помощью спектро-денситометра и (или) множества обнаруживающих агентов можно увидеть все соединения и тем самым предоставить ценные исходные данные для осуществления ТЖХ с соответствующим детектором. С другой стороны, методом ТЖХ лучще и быстрее выполняются текущие контрольные анализы, с большей точностью и лучшим разделением. ТЖХ более приспособлена для препара- [c.117]

Методы, используемые для количественного определения веществ в зонах, могут быть различными и зависят от природы анализируемых веществ элюирование (с последующим весовым, спектрофотометрическим, флуориметрическим, полярографическим, радиометрическим измерением), измерение площади пятна, денсито-метрирование. Считается, что наиболее точным является метод элюирования (ошибки 1 %), но для его осуществления необходимо сравнительно большое количество материала. Точность денситометри-ческих методов несколько ниже (1—2%), но для анализа требуется гораздо меньше материала. Определения по измерению площади зон дают среднюю точность 5—10%. [c.107]

В количественной ТСХ с успехом используют небольшие ЭВМ. Поллак [240] обсудил различные аспекты применения ЭВМ, сравнил аналоговые машины с цифровыми при определении площади под кривой путем подгонки истинного распределения концентрации к идеальному распределению. Эта последняя методика позволяет рассчитать малые концентрации с повышенной точностью и провести расчеты при перекрывании пиков. Опубликован ряд работ [241—251], показывающих полезность этой методики в денситометрии. Эбел и Хокке [252] описали систему автоматического сканирования пластинок в ТСХ, согласно которой численные значения площадей пиков, измеренные электронным интегратором, подавали на включенный последовательно настольный калькулятор, который сразу же выдавал данные. [c.346]

Гарсайд и Рили [56] использовали отражательную денситометрию для определения содержания пигментов фитопланктона после разделения на силикагеле О смесью легкий петролейный эфир —этилацетат—диметилформамид (55 32 13). Хлорофилл С, который оставался в начальном положении, элюировали смесью легкий петролейный эфир—этилацетат—диметилформамид (1 1 2). Точность определения большинства пигментов составляла 5 % или не превышала 0,5 мкг. [c.264]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология