Нуклеотиды светом

Свет и особенно его коротковолновая область оказывают большое влияние на развитие микроорганизмов. Действие лучистой энергии на микроорганизмы зависит от дозы и их физиолого-биохимического состояния. Полагают [33], что воздействие связано в первую очередь с изменением структуры ДНК. Во многих случаях спектр действия ультрафиолетовых лучей соответствует спектру поглощения их нуклеиновыми кислотами. Обнаружено, что при денатурации ДНК, облученной высокими дозами ультрафиолетового света (10-2 возникают разрывы между нуклеотидами, а также образуются поперечные сшивки между комплементарными нитями молекулы ДНК. [c.189]

Представляет интерес экспериментальное использование хрома при образовании комплексов Сг(1П) с нуклеотидами, например с АТР". Хром вытесняет ионы магния, образуя с нуклеотидами очень прочные хелатные комплексы. Характерные для таких комплексов полосы поглощения света и парамагнитные свойства ядер хрома делают эти комплексы интересным орудием при исследовании механизмов действия фосфотрансфераз. [c.506]

Как на бумажной хроматограмме [10, 38], так и на слое целлюлозы пурин-и пиримидин-основания, нуклеозиды и нуклеотиды можно обнаружить в свете коротковолновой УФ-лампы [70]. Так еще можно обнаружить около [c.443]

Из наиболее трудных задач, решаемых в настоящее время, можно упомянуть анализ вирусной РНК с длиной цепи порядка 4500 звеньев и рибосомальной РНК кишечной палочки. Наибольшим достижением явилась расшифровка последовательности нуклеотидов в пределах целого гена (387 звеньев) в вирусной РНК. Для анализа ДНК эта программа еще практически не осуществлялась. Та часть цепи, к-рая кодирует белки, нам известна, т. к. можно определить структурные ф-лы белков (это сделать гораздо легче), а генетич. код изучен. Но в полинуклеотидной цепи имеются дополнительные участки, служащие целям регуляции — запускающие редупликацию и транскрипцию, помогающие управлять этими процессами, а также и другими не менее важными генетич. процессами (напр., рекомбинацией — образованием смешанного потомства). Изучение структурных формул Н. к. обещает пролить свет на многие неизвестные стороны биологич. явлений. [c.196]

Гипохромизм. Качественно охарактеризовать способность нуклеиновой кислоты поглощать свет можно исходя из спектров поглощения входящих в нее нуклеотидов. Важное значение, однако, имеет тот факт, что истинное поглощение нуклеиновой кислоты в ультрафиолетовой области спектра всегда меньше, чем можно было бы ожидать на основе простого суммирования поглощения отдельных нуклеотидных хромофоров. Это явление носит название гипохромизма. Ниже указаны некоторые общие оптические свойства нуклеиновых кислот. [c.144]

Избирательное разрушение пуриновых оснований как в составе нуклеозидов и нуклеотидов, так и в нуклеиновых кислотах наблюдается при так называемых фотодинамических реакциях — облучении моно- или полинуклеотидов видимым светом в присутствии ряда акридиновых или тиазиновых красителей (подробнее — [c.506]

При облучении водных растворов оснований нуклеиновых кислот видимым светом в присутствии ионов двух- и трехвалентного железа в нейтральной или слабокислой среде гетероциклические основания полностью или частично расщепляются, о чем свидетельствуют изменения УФ-сиектров растворов. Пиримидины расщепляются при этом быстрее пуринов В аналогичных условиях нуклеозиды и нуклеотиды наряду с частичной деградацией составляющих оснований претерпевают расщепление N-гликозидной связи с выделением свободного основания. При облучении полинуклеотидов наблюдаются те же процессы, сопровождающиеся, кроме того, частичным гидролизом фосфодиэфирных связей и потерей биологической активности [c.685]

Максимум поглощения ДНК в ультрафиолетовой области лежит около 260 ммк, т. е. в области, где поглощают основания нуклеиновых кислот. Но наблюдаемое поглощение нативной ДНК приблизительно на 40% меньше, чем рассчитанное поглощение суммы составляющих ее нуклеотидов. Этот так называемый гипохромный эффект является следствием индуцированного светом диполь-дипольного взаимодействия между параллельно расположенными хромофорами. Гипохромный эффект наблюдается даже в случае небольшого числа пар оснований, если только они соответствующим образом ориентированы. [c.318]

Переход ДНК в денатурированное состояние сопровождается значительными изменениями свойств ее раствора. Одним из таких изменений является сильное уменьшение вязкости. Течение в растворе денатурированной ДНК приобретает ньютоновский характер, тогда как течение в растворе нативной ДНК является неньютоновским даже при низких градиентах скоростей. Наблюдаются также изменения светорассеяния. При денатурации исчезает оптическая активность раствора, обусловленная спиральной структурой нативной ДНК, и снижается трансформирующая способность. Как правило, денатурация ДНК сопровождается увеличением поглощения света в области 260 ммк приблизительно на 40% аналогичный эффект наблюдается при гидролизе ДНК на составляющие ее нуклеотиды. Имеются данные о том, что величина гипохромного эффекта является линейной функцией содержания спиральных структур в молекуле ДНК, если в каждой спирализованной области содержится не менее восьми нуклеотидных остатков. [c.320]

Мономерные нуклеотиды и- нуклеозиды имеют полосу поглощения в близкой ультрафиолетовой области, объясняющуюся поглощением света пуриновыми и пиримидиновыми основаниями. Центр полосы поглощения всех нуклеозидов, кроме цитидина, находится вблизи 260 т х, только у цитидина центр полосы по- [c.211]

Пантелеева [55] сообщила о разделении 16 нуклеотидов при элюировании соляной кислотой с концентрацией от 0,01 до 0,07 н. Как и в большинстве случаев, полученные пятна она наблюдала в УФ-свете. [c.125]

К числу таких веществ относятся нуклеиновые основания, нуклеотиды и олигонуклеотиды, а также фенилтиогидантоиновые производные аминокислот (ФТГ-АК). Удобно наблюдать не само поглощение, а ослабление флюоресценции добавленного в сорбент флюорогена в местах расположения пятен вещества, пр исходящее в результате поглощения ими коротковолнового УФ-света, которым освещают пластинку. При визуальном наблюдении или на фотографии в лучах видимого света вещества обнаруживаются в виде темных пятен на светлом флюоресцирующем фоне. Метод позволяет обнаруживать до 0,5 мкг олигонуклеотидов в пятне и широко исполь- [c.480]

Теперь задача сводилась к концевому анализу каждого пятна. Фрагменты гидролизовали РНКазой Т1 прямо на пластинке (2— 4 мкл раствора фермента прикапывали в центр пятна, закрывали парафильмом, прижимали его стеклом и инкубировали в течение ночи). Затем пятно вырезали, материал переносили в угол нластпнки силикагеля (прижимали двумя магнитиками) и вместе со свидетелями — смесью холодных нуклеозидтриспиртов — фракционировали двумерной распределительной ТСХ. Элюцию вели в первом направлении смесью ацетонитрил—трет-амиловый спирт—аммиак (2 1 1), во втором —mjDem-амиловый спирт—метилэтилкетои—вода (3 6 1,2). Пятна свидетелей вырезали под УФ-светом и просчитывали в них радиоактивность. Таким образом идентифицировали один за другим все нуклеотиды с 5 -конца, начиная со второго 5 -концевой нуклеотид определяли отдельно известными методами. [c.506]

Нуклеотиды, как и многие другие поглощающие свет соединения, определяют количественно по их спектрам поглощения (рис. 13-11 и 13-12) 146]. Еще более чувствительным методом является флуоресцентный анализ. Например, он позволяет обнаружить на тонкослойной хроматограмме рибофлавин в количестве 3 пикомоль (1 нг) (рис. 2-34) [147]. Один из новых реагентов, флуорескамин, взаимодействует с любым первичным амином, образуя интенсивно флуоресцирующие продукты. С его помощью можно обнаружить очень малые количества аминокислот— менее 50 пикомолей (рис. 2-36) [148]. [c.180]

Распространение в природе. Пурины аденин (6.4) и гуанин (6.5) встречаются у всех организмов, будучи компонентами нуклеиновых кислот и нуклеотидов. Гуанин является также одним из пуринов, участвующих в формировании и распределении окраски у животных, мочевая кислота (6.6) также чрезвычайно широко распространена, тогда как ксантин (6.7) и изогуанин (6.8) встречаются реже. Эти пурины не поглощают видимый свет, но для них характерно сильное поглощение в УФ-свете, и поэтому некоторые животные, главным образом насекомые, могут их видеть. Пурины вносят важный вклад в окрашивание животных благодаря своему участию в формировании структурной окраски, особенно белого и сереб- [c.225]

В ФМН группой R является водород, в ФАД — нуклеотид аденин. Флавиновые коферменты окрашены, они имеют желтооранжевый цвет, так как рибофлавин, содержащий сопряженную трехкольцевую систему, поглощает свет в видимой области спектра. [c.96]

Однако Р является короткоживущим изотопом, испускающим высокоэнергетическое излучение при работе с ним необходимо использовать специальное оборудование и обеспечивать безопасную утилизацию отходов. Чтобы обойти эти трудности, были созданы нерадиоактивные системы детекции. Для усиления гибридизационного сигнала в этом случае используется ферментативное превращение хромогенного или хе-милюминесцентного субстрата первый из них под действием фермента изменяет окраску, а второй испускает свет. В больщинстве подобных систем применяются ДНК-зонды, содержащие биотинилированные нуклеотиды. Гибридизация и детекция сигнала проводятся более или менее стандартным образом. [c.190]

Общие методы разделения включают хроматографию в смесях водных и органических растворителей или электрофорез, или и то и другое на бумаге. Из двух методов более медленным является хроматография, в то время как высоковольтный электрофорез может быть проведен в течение 30 мин. Способы обнаружения фосфатов на бумаге варьируют в зависимости от исследуемых соединений наличие в молекуле нефосфатного фрагмента может позволить применить быстрый недеструктивный метод анализа, например нуклеотиды можно определять по поглощению в УФ-свете. [c.411]

Для исследования химической модификации ДИК в составе хроматина используют меченый [ Р]-олигонуклеотид, содержащий на концевом фосфате алкилирующую группу. Какова должна быть удельная активность меченого одигоцуклеотида, чтобы можно было детектировать модификацию 0,1 o.e. ДНК (f = 10 М см нуклеотид), если известно, что степень модификации (отношение количества [эеагеита к количеству ] уклеотидов в ДНК) не ниже 10 Для модификации использовали производное гексндекатимидилата (pdT)i6 (f = 155 Ю М см ). Эффективность света <10%, фон счетчика 20 импульсов в минуту. Счет образца должен превышать фон не меньше чем в 10 раз. [c.336]

Метод фотокопий [57] для локализации и регистрации производных нуклеиновых кислот непригоден в случае пластинок с нанесенными на них слоями [72]. Цветные реактивы, употребляемые в хроматографии на бумаге-продуктов гидролиза нуклеиновых кислот, до настоящего времени не применялись для тонкослойных хроматограмм. Все реактивы, служащие для обнаружения пентоз в нуклеозидах и 5-нуклеотидах, а также реактивы, реагирующие с эфирами фосфорной кислоты, являются весьма ценным дополнением к методу обнаружения в УФ-свете. Реактив тетраацетата свинца [9] должен быть пригоден для обнаружения нуклеозидов и нуклеотидов на тонкослойных хроматограммах для обнаружения нуклеотидов должна быть пригодна также реакция Хейнса и Ишервуда [37]. [c.444]

Обнаружение. На слое целлюлозы нуклеиновые основания, нуклеотиды и нуклеозиды обнаруживают в УФ-свете (260 ммк). Чувствительность метода для производных адашша — около 10 мкмол, для производных цитозина — несколько выше. С целью обнаружения пятен на слое силикагель — гипс пластинку предварительно опрыскивали 0,2 6-иым раствором флуоресцопна в этаноле, а затем нятна обнаруживали в УФ-свете. [c.102]

Важнейшие биохимические реакции связаны с превращениями энергии в живой клетке. Энергия накапливается и передается в молекулах аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) — нуклеотида, состоящего из азотистого (пуринового) основания аденина, сахара (рибозы) и трех остатков фосфорной кислоты, которые связаны между собой богатыми свободной энергией (макроэргическими) химическими связями. Исходным источником энерги1Г является солнечный свет, энергия которого в зеленых листьях растений при участии красящего вещества—хлорофилла расходуется на синтез АТФ (фотосинтетическое фосфорилирование). В дал1.нейшем АТФ расходует накопленную энергию в последующих стадиях фотосинтеза, приводящих к образованию из двуокиси углерода и воды крахмала — полимерного сахаристого вещества в котором на длительное время запасается [c.491]

По современным представлениям (Бассем, Калвин, 1961), основное количество углекислоты, поглош аемой растением в процессе фотосинтеза, поступает в цикл восстановления углерода путем присоединения к молекуле рибулезодифосфата. Дополнительное количество углекислоты усваивается путем карбоксилирования в цикле трикарбоновых кислот. Таким образом, усваиваемый растениями углерод внедряется прежде всего в состав продуктов углеводного обмена (сахара и их фосфорные эфиры, нуклеотиды типа уридиндифосфата глюкозы), некоторых органических кислот (входящих в цикл трикарбоновых кислот) и аминокислот (серии, аланин, аспарагиновая и глютаминовая кислоты), а также аце-тил-кофермента А. В то же время Ничипорович и сотрудники (см. Ничипорович, 1962) обращают внимание на разнообразие продуктов фотосинтеза в зависимости от спектрального состава света и других условий. [c.108]

Таким образом, было установлено, что на свету в присутствии С Юг даже при небольших экспозициях С включается в различные соединения — сахара и их фосфорные эфиры, полисахариды, аминокислоты и даже в нуклеотиды. Однако при очень кратких экспозициях (от 0,1 до 5 секунд) радиоактивный углерод включался только в одно соединение — ф о с ф о г л и-цериновую кислоту таким путем было установле- [c.125]

Реакция протекает довольно медленно при pH 7,4 время полупревращения дезоксиаденозин-5 -фосфата в 0,05 М растворе перекиси водорода составляет около 50 ч. Выход 7-Ы-окиси дезоксиаде-нозин-5 -фосфата невелик, так как идут многочисленные побочные процессы (расщепление N-гликозидной связи, окисление по С-2 и С-8 аденинового ядра). Стабильность 7-N-okh h дезоксиаденозин-5 -фосфата по отношению к кислотному и щелочному гидролизу не отличается заметно от устойчивости исходного нуклеотида при облучении УФ-светом 7-М-окись аденина переходит в 8-оксиаде- [c.391]

Другой метод исследования заключается в использовании оптически неактивных катионных красителей, при связывании которых со спиралью поли-Ь-глутаминовой кислоты появляется сильный эффект Коттона. При этом кривая дисперсии пересекает линию нулевого вращения вблизи полосы поглощения красителя (фиг. I). Для поли-О-глутаминовой кислоты также можно получить подобный, но противоположный по знаку, эффект Коттона, который исчезает при переходе от спирали к хаотической конформации, несмотря на то что краситель остается связанным с макромолекулой. Белки, в состав которых входят гемогруппы, содержащие железо (миоглобин, гемоглобин, ката-лаза, пероксидаза), обладают своим собственным красителем , и в их спектрах наблюдается эффект Коттона в видимой области, т. е. в области поглощения гема. При денатурации этот эффект исчезает, но поглощение в видимой области при этом сохраняется. При добавлении оптически неактивного восстановленного никотинадениндинуклеотида к алкогольдегидрогеназе из печени (ферменту, содержащему цинк) наблюдается эффект Коттона в области поглощения нуклеотида. Однако в этом случае эффект Коттона обусловлен, по-видимому, асимметрией связывающей поверхности фермента, а не асимметрией спирали. Аналогичным примером могут служить комплексы оптически активных аминокислот (не поглощающих видимого света) с медью. В полосе поглощения медных комплексов, уже находящейся в видимой области, наблюдается эффект Коттона, индуцируемый аминокислотами. [c.294]

Другие механизмы образования АТФ непосредственно связаны с использованием кислорода цитохромными системами, которые осуществляют перенос электронов или водорода (окислительное фосфорилирование), а также с системами фотосинтеза, в которых необходимая энергия поставляется за счет света (фотофосфорилирование). И в этом случае оказалось, что наиболее существенной стадией синтеза АТФ является фосфорилирование АДФ, а не аде-нозпп-5 -фосфата (АМФ). Однако известна реакция миокиназного типа, в которой эти три нуклеотида связаны между собой таким образом, что АМФ обратимо фосфорилируется АТФ с образованием двух молекул АДФ [c.312]

Количественная теория эффекта была создана Тиноко. Поглощение света хромофорными группами (в пашем случае основаниями) зависит от дипольных моментов перехода, в частности от их взаимодействия, если они помещаются близко друг от друга и ориентации их коррелированы, как это имеет место в двойной спирали ДНК. В случае, когда дипольные моменты перехода расположены хаотически, как в случае раствора из мономерных нуклеотидов, взаимодействия их взаимно нейтрализуются и эффект будет нулевой. В случае параллельного расположения дипольных моментов перехода легко показать, что будет именно гипохромный эффект, т. е. уменьшение оптической плотности. Количественный расчет, учитывающий электростатическое взаимодействие дипольных моментов перехода, приводит к правильному порядку величины эффекта. Следовательно, гипохромный эффект связан с правильным взаимным расположением боковых групп ДНК сами по себе водородные связи важны только как фактор, стабилизирующий регулярную структуру. [c.212]

Смит и Метцлер [107] изучали фотохимическое разложение рибофлавина на пластинках с силикагелем G с двумя следующими системами растворителей бутанол—этанол—вода (7 2 1) и вода, насыщенная нзоамиловым спиртом. Разделенные соединения обнаруживали благодаря их флуоресценции синего или желто-зеленого цвета в УФ-свете. Тредуэлл и Метцлер [108] разработали методику обнаружения флавина в тканях растений в количествах до 0,2 нг. Пробу ткани экстрагируют раствором сульфата аммония, отделяют осадок центрифугированием и вводят его в колонку с резорцинформальдегидной смолой, чтобы отделить флавины от солей, остаточных белков и некоторых пигментов промывкой водой при введении экстракта в колонку и последующей промывке флавиновые нуклеотиды проходят через смолу [109]. Элюированные смесью ацетона с водой флавины вводят затем в водном растворе в сухую колонку с тальком с тем, чтобы извлечь большую часть нефла-виновых пигментов смесью ацетон—вода (1 9). Из этой колонки флавины элюируют смесью ацетон—вода (1 1) и наносят на слой силикагеля. Авторы работы [108] использовали для разделения флавинов на силикагеле 10 растворителей. [c.423]

Смотреть страницы где упоминается термин Нуклеотиды светом: [c.75] [c.491] [c.144] [c.75] [c.192] [c.149] [c.173] [c.445] [c.192] [c.198] [c.447] [c.259] [c.287] [c.181] [c.384] [c.537] [c.113] [c.203] [c.41] [c.164] [c.135]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология