Хроматография по площади пятен

Количественный анализ тонкослойных хроматограмм можно осуществлять, исходя из размера пятен, так как площадь пятна зависит от количества элемента, нанесенного на слой носителя. Площадь пятна зависит также от активности сорбента-носителя, толщины его слоя и объема наносимого раствора. Для сравнения на ту же пластинку наносят контрольные количества этого вещества с известной концентрацией. Площадь пятна определяют так же, как в хроматографии на бумаге (стр. 182). [c.187]

Параметры о н оу представляют собой характеристики стандартного отклонения, отмечаемого при увеличении площади пятна. (Как отмечают Б.Г.Беленький и Л.З.Виленчик (в кн. "Хроматография полимеров" М. Химия. 1978. с. 260), когда хроматографический процесс приближается к равновесному, 0 .хг 0 у 0 . Прим. ред. перевода.] [c.77]

Бумажная хроматография позволяет делать и некоторые количественные выводы. Так, зависимость между концентрацией, например смол в исходном растворе, и площадью пятна на бумажной хро- [c.62]

Количественная хроматография на бумаге и в тонком слое весьма перспективна ввиду ее простоты и в принципе должна быть точным методом анализа, поскольку в идентичных условиях количество вещества в зоне всегда будет определяться количеством вещества, нанесенным в точку на линии старта. Кроме того, распределение в зоне должно быть постоянным, для того чтобы метод конечного измерения (по площади пятна, по показаниям денситометра или путем измерения оптической плотности после элюирования) обеспечивал количественное определение первоначально нанесенного вещества. Однако на практике исключительно трудно создать идентичные условия развития каждой хроматограммы. Цель настоящей работы — обсуждение факторов, вызывающих изменения в распределении вещества в зонах, и способов их преодоления. [c.9]

Рядом авторов обращалось внимание на важность начальной величины площади пятна нанесенного вещества в количественной хроматографии на бумаге [4] и в тонком слое [66], когда в расчетах учитывалась площадь пятна зоны. Эта проблема обсуждалась и в работах [13, 67]. Даллас наносил раствор объемом В 2 мкл на линию старта [c.277]

Обработка результатов анализа. Количественное определение методом тонкослойной хроматографии проводят путем сравнения площади пятна пробы № того стандарта, площадь которого наиболее близка к площади пятна пробы. [c.120]

Количественные определения в распределительной, так же как и в тонкослойной хроматографии, выполняются или по хроматографическим характеристикам (площади пятна на хроматограмме и интенсивности его окраски), или по методу вымывания. Нередко хроматограмму разрезают на отдельные части по числу пятен, каждое пятно обрабатывают соответствующим экстрагентом и определяют количество экстрагированного вещества любым подходящим методом фотометрическим, полярографическим и т. д. [c.350]

Более точным является метод, основанный на применении градуировочного графика S —Ig , где S — площадь пятна, с — концентрация. В указанных координатах график линеен. Используется также измерение интенсивности окраски пятна, которая пропорциональна концентрации. Методами распределительной жидкостной хроматографии успешно анализируют смеси катионов в неорганическом качественном анализе, смеси аминокислот и других органических кислот, смеси красителей и т. д. [c.350]

Принцип метода. Предлагаемый метод основан на экстракции фосфамида из воды хлороформом и последующем определении методом тонкослойной хроматографии (ТСХ). Количество фосфамида вычисляют по площади пятна. [c.33]

Метод основан на экстракции ХФ из воды хлороформом с последующим определением его методом хроматографии на бумаге. Количество ХФ вычисляют по площади пятна. [c.79]

Количественный анализ непосредственно на слое сорбента можно осуществлять по размеру пятна, так как площадь пятна зависит от количества определяемого вещества. Площадь пятна зависит от активности сорбента, от толщины его слоя и объема наносимого раствора. Поэтому для сравнения на эту же пластинку наносят известные количества определяемого вещества. Площадь пятна определяют как и в хроматографии на бумаге. Метод прост в исполнении и не требует специального оборудования. Однако его скорее можно считать полуколичественным методом вследствие недостаточной точности измерения площади пятна и нарушения линейности соотношения 5 = а пС+ , если концентрация вещества больше 80 мкг. [c.124]

В количественном анализе используется зависимость длины зоны или площади пятна от концентрации раствора. Методом осадочной хроматографии исследуются главным образом, неорганические вещества. В качестве осадителей применяют обычные реагенты качественного анализа. При определении, например, кобальта, никеля и меди применяют рубеановодородную кислоту, алюминий и железо осаждают ферроцианидом и т. д. [c.168]

Можно использовать и другие прямые (измерение площади пятна, флуориметрия) и косвенные (флуориметрия, полярография, ИК-спект-роскопия, газовая хроматография) методы количественного определения вещества в пятне, однако вплоть до настоящего времени они не нашли применения в химии углеводов. [c.48]

Тонкослойная хроматография [20— 22]. Разделение проводят на стеклянных пластинках, равномерно покрытых слоем активированного твердого адсорбента. На нижнюю (стартовую) линию пластины наносят капли исследуемой смеси, после чего пластину под определенным углом погружают в ванну с десорбентом так, чтобы уровень его был ниже стартовой линии. При движении фронта растворителя происходит разделение компонентов смеси. Для идентифицирования образовавшихся пятен хроматограмму проявляют с помощью тех или иных реагентов или рассматривают пластину в ультрафиолетовых лучах. Затем измеряют площадь образовавшегося пятна и Л/. Обычно величина характерна для индивидуальных соединений или групп однотипных соединений. [c.83]

Бумажная хроматография обычно применяется для идентификации веществ в смеси, но может быть использована и для грубого количественного определения, например фотометрически — по цвету или по площади пятен или вырезыванием пятна до обработки цветным реактивом (его положение может быть определено по положению соседнего пятна, подвергнутого действию реагента) и элюированием из него подходящим растворителем исследуемого вещества. Эту пробу можно затем подвергнуть любому виду количественного микроанализа. Для препаративных целей получаемые таким способом количества вещества слишком малы. [c.41]

Для определения положения неокрашенного вещества на полученной хроматограмме обычно необходимо обрабатывать хроматограмму реактивом, который либо обугливает разделенные вещества, либо переводит их в окрашенные или флуоресцирующие производные. Часто применяют и другой удобный метод проводят хроматографию на пластинке, пропитанной веществом, сильно флуоресцирующим под воздействием коротковолнового ультрафиолетового света. Площади на пластинке, занятые веществами, поглощающими при той же длине волны, выглядят как темные пятна на флуоресцирую- [c.93]

В двухмерном варианте тонкослойной хроматографии образец наносят (в виде единственного пятна) в "нижний правый" угол пластинки (рис. 98). после чего проводят обычное элюирование растворителем А. Пятно смещается вдоль правого ребра пластинки. После этого элюирование повторяют (обычно пользуясь другим растворителем) в перпендикулярном направлении. Компоненты образца располагаются не вдоль линии гг-го, а идеально распределяется по всей площади (гг-а) . Пространство, на котором распределяются разделенные вещества, оказывается увеличенным возведением в квадрат. Это дает возможность иногда прибегать к сокращенному обозначению метода (ТСХ) , поскольку число разделений тоже возрастает, примерно до (SN) . [c.274]

Как и в случае хроматографии на бумаге, при ХТС можно локализовать разделенные вещества с помощью так называемой направляющей хроматограммы. При этом рядом с пятном анализируемой смеси наносят пятно эталонной смеси анализируемых веществ. После разделения закрывают анализируемую хроматограмму, а направляющую хроматограмму окрашивают. На высоте пятен окрашенных эталонных веществ в анализируемой хроматограмме отмечают соответствующие площади и после экстракции проводят количественное определение. Этот метод может быть использован только в том случае, когда качественный состав анализируемого раствора и эталонной смеси одинаков, поскольку находящиеся в анализируемом растворе сопутствующие и балластные вещества могут при определенных условиях значительно изменить значения Rf определяемых веществ. [c.64]

При тонкослойной хроматографии на стекла, покрытые порошком силикагеля или другого тонкодисперсного адсорбента, наносят пятна раствора полимера. Стекла ставят вертикально в чашки с растворителем (концом, на который нанесены пятна). При движении растворителя вверх по стеклу происходит вымывание полимера из пятна и распределение макромолекул по площади подложки в зависимости от адсорбционной способности макромолекул, являющейся функцией молекулярной массы. По окончании процесса размытые пятна проявляют соответствующим проявителем. [c.26]

Сущность метода. Нефтепродукты экстрагируют тетрахлоридом углерода. Порцию экстракта 20—100 мкл вносят в нижнюю расширенную часть канала , выделенного на пластинке для тонкослойной хроматографии (рис. 15). Пластинку обрабатывают хлороформом в закрытой камере, высушивают на воздухе и подвергают действию паров иода. В границах канала углеводороды обнаруживаются в виде прямоугольного коричневого пятна. Площадь этого пятна измеряют. [c.319]

В случае распределительной хроматографии на бумаге полученное пятно вырезают или исследуют непосредственно на бумаге, или элюируют из пятна анализируемое вещество и затем определяют его любым методом количественного анализа. Применяют также измерения диаметра пятен и их площади, ошибка составляет 2—5%. Для измерения концентрации определяемого вещества по интенсивности окраски пятен применяют фотоэлементы, денситометрию, люминесценцию, спектрофотометрию, фотографические методы и радиохроматографические методы с применением меченых атомов. В адсорбционной ионообменной хроматографии катионов и анионов на колонках окиси алюминия или [c.619]

Техника нанесения раствора на поверхность адсорбента, описанная в работе [66], предохраняет его поверхность от повреждения, и начальное пятно имеет при этом круглую форму. Диаметр пятен в точках на линии старта будет изменяться в зависимости от количества наносимого вещества, причем при малых загрузках (до 40 мкг) площади пиков, полученные из начальных пятен с достаточно близкими диаметрами, сильно различаются, а при больших нагрузках (свыще 40 мкг) слабо. При этом результаты, полученные методами отражения и пропускания, почти одинаковы. Следует учитывать, что при использовании различных растворителей одинаковому количеству одного и того же вещества после отделения с помощью хроматографии в тонком слое соответствуют разные показания денситометра. [c.278]

Сущность метода. Метод основан на реакции стирола с ацетатом ртути в среде этанола. Полученное ртутьорганическое соединение выделяют нисходящей хроматографией на бумаге в системе бутанол—диэтиламин—вода (5 1 4). Детекцию в виде фиолетовых пятен проводят путем взаимодействия с дифенилкарбазидом. Визуальным сравнением площадей и интенсивностей окраски пятен с пятнами свидетелей получают количественные данные о содержании стирола. [c.310]

Сущность метода. Нефтепродукты экстрагируют ССЦ порции экстракта объемом 20—100 мкл наносят в нижнюю расширенную часть канала, выделенного на пластине для ТСХ. Последнюю обрабатывают хлороформом в камере для хроматографии, высушивают на воздухе и проявляют в парах йода. В границах канала углеводороды обнаруживаются в виде прямоугольного пятна коричневого цвета, площадь которого измеряют (см. рис. 103). [c.314]

Таким образом, 8 линейно зависит от lg q. Однако для тонкослойной хроматографии это правило, по-видимому из-за несовершенного детектирования границ пятна, не всегда выполняется. Поэтому количественная оценка может быть проведена только прямым сравнением с серией стандартных растворов. Для этого Зеер [18] предложил следующий метод стандартный объем определяемой смеси веществ наносится в виде точек через определенные интервалы на слой силикагеля. Между этими точками наносятся стандартные объемы ряда эталонных растворов различной концентрации. После развития и проявления хроматограмм приготовляют контактную фотографию пластинок. На ней измеряют площади соответствующих пятен и строят по эталонным растворам графическую зависимость измеренных площадей от количеств вещества. Из полученного графика находят содержание вещества в определяемой смеси. [c.303]

В бумажной распределительной хроматографии полученное пятно вырезают или исследуют непосредственно на бумаге, или элюируют из пятна анализируемое вещество и затем определяют его любым методом количественного анализа. Измеряют диаметр пятна и его площадь ошибка 2—5%. Для измерения концентрации определяемого вещества по интенсивности окраски пятен применяют денситометрию , люминесценцию, спектрофотометрию, фотографические методы и радиохроматографию (метод меченых атомов). В адсорбционной ионообменной хроматографии катионов и анионов на колонках окиси алюминия или желатины ширина гюлосы пропорциональна концентрации определяемого иона. Как показали работы О. Флуда, Ф. М. Шемякина, И. П. Харламова, В. Л. Золотавина и др., бумага, импрегнированная гидратированной окисью алюминия, позволяет разделять и количественно определять ионы. [c.516]

Количественшй анализ в ТСХ. Первый метод содержание анализируемых веществ устанавливжт с помощью замеров площадей пятен на пластинках. Зависимость между площадью пятна и логарифмом количества определяемого компонента связ(ана известным из бумажной хроматографу уравнением [c.73]

В табл. 6.1 сравниваются различные объел1ы растворов проб, наносимых на пластинку, и плош,ади образую-ш,ихся при этом зон в зависимости от толщины слоя. Для упрощения при расчете не учитывались сферическое расширение пятна и дополнительные адсорбционные эффекты. В то время как в классической тонкослойной хроматографии объем наносимой пробы обычно составляет несколько микролитров, в высокоэффективной тонкослойной хроматографии он должен быть значительно ниже и измеряться в нанолитрах. Объем 100 нл соответствует кубу с длиной ребра 464 мкм, таким образом, объемы 20, 10 и 5 нл соответствуют кубу с длиной ребра 271, 215 и 171 мкм. Из таблицы следует, что площадь пятна расширяется с уменьшением толщины слоя. При толщине слоя 10 мкм проба объемом 10 нл должна занять площадь 1 мм , что означает крайне нежелательное размывание стартовой точки. В соответствии с таблицей до сих пор используемую в ТСХ толщину слоя, равную приблизительно 200 мкм, можно считать оптимальной и для ВЭТСХ. [c.121]

Важной характеристикой адсорбента является его адсорбционная емкость, т. е. количественное выражение способности адсорбента связывать адсорбируемое вещество. При разделении веществ методом адсорбционной хроматографии игирипа полосы или площадь пятна зависят от длины пути и количества разделяемого вещества. [c.19]

Парди и Тратер [3] установили, что в пределах величин, обычно встречающихся в тонкослойной хроматографии, существует линейная зависимость между квадратным корнем из площади пятна 8 ТА логарифмом веса вещества [c.303]

Слои на полиэфирной пленке много тоньше, чем на стеклянных пластинках. Они быстро просыхают менсду двумя пробегами в двумерной хроматографии (5 мин вместо 15 в случае стеклянных пластинок). Этот момент важен при работе со свето-и теплочувствительными соединениями. Качество разделения на полиамидных слоях, нанесенных на полиэфирную пленку, значительно лучше, чем нанесенных на стеклянные пластинки. Площадь пятна получается меньшей, пятно компактное, нерастянутое. Для разделеш1я ДНФ-аминокислот достаточно подъема растворителя на 8 см вместо 10 см на стеклянных пластинках. В количественных целях не трудно элюировать разделенные вещества, так как пятна для эи стракцип можно вырезать. Обе стороны пленки не зависят друг от друга. При одномерной хроматографии на двух сторонах пленки размером 15x15 см можно хроматографировать до 30 образцов. [c.142]

Количественный анализ можно вести фотометрическим методом путем измерения интенсивности окраски пятен фотометром в отраженном свете. Полученные данные наносят на график и сравнивают с данными комбинированной кривой, построенной по стандартным препаратам [211]. Как и в бумажной хроматографии, определяют концентрацию веществ по площади пятна (полуколичественный метод, который может быть переведен в количественный при получении воспроизводимости окраски) и измерением интенсивности окраски рефлектометри-ческим методом [172]. [c.44]

Количественный анализ хроматограмм можно осуществлять, исходя из размера пятна, так как площадь пятна зависит от количества элемента, нанесенного на слой сорбента. Площадь пятна будет зависеть от активности сорбента, толщины его слоя и объема наносимого раствора. Для сравнения на эту же пластинку наносят контрольные количества этого вещества с известной концентрацией. Площадь пятна определяют, как в хроматографии на бумаге (стр. 90). Этот метод анализа хроматограмм скорее можно считать полуко-личественным методом ввиду недостаточной точности измерения площади пятна и нарушения линейности соотношения 8 = а пС + Ь, если концентрация вещества будет > 80 мкг. [c.101]

Методики, основанные на использовании хроматографических характерик, довольно многообразны. Количество вещества можно определить, например, методом шкалы, когда на одной и той же хроматограмме получают пятно раствора с неизвестной концентрацией и пятна нескольких стандартов. Концентрацию неизвестного раствора находят прямым сравнением площади пятна и интенсивности его окраски у исследуемого и у стандартного растворов. Более точным является метод, основанный на измерении площади пятна или интенсивности его окраски. Методами распределительной жидкостной хроматографии успешно анализируют смеси катионов в неорганическом качественном анализе, смеси аминокислот и других органических кислот, смеси красителей и т. д. [c.167]

Основа количпсщвениого анализа в колоночной хроматографии — определение высоты илн площади пика. В случае внутренних хроматограмм может быть измерена полная интенсивность пятна вещества, например в тонкослойной хроматографии (ТСХ). Хроматографические методы являются методами относительными, т. е. можно сказать, что градуировка проводится путем определения стандартных веществ. При этом можно использовать как внутренние, так и внешние стандарты. [c.244]

По сравнению с вариантами линейного элюирования, центробежная ТСХ дает возможность (при той же длине разделяющего участка) добиться лучшей разрешающей способности (особенно при низких значениях Кг, если старт оказывается близким к точке подачи растворителя). Однако при переходе к более высоким значениям Кг разрешающая способность снижается. Это наглядно иллюстрируют рис. 56-58 (на которых значения Кг, получаемые при линейном проявлении и при работе в режиме круговой хроматографии, сравниваются схематически), рис. 110 (случаи 6 и 8) и рис. 113 (на этих двух последних рисунках приведены реальные хроматограммы). Такая зависимость объясняется просто после завершения элюирования в случае круговой тонкослойной хроматографии большее количество растворителя проходит через любую точку слоя (чем чфез пятна, удаленные на то же расстояние от старта в случае линейного элюирования), поскольку каждая точка хроматограммы вынуждена "питать" растворптеле.м гораздо большую плошадь. находяшуюся впереди (по сравнению с площадью, находящейся [c.286]

При своеобразном способе нанесения исследуемого материала на хроматографическую бумагу с помощью полиэтиленовой пленки дном нагретой на пламени стеклянной пробирки в пленке делают несколько углублений, в которые вносят примерно по 0,05 мл исследуемого материала, например кислотного гидролизата белка. На одной пленке можно разместить 3—5 проб (фиг. 39). Очень осторожно, остерегаясь размазать капли, пленку переносят для высушивания в вакуумный эксикатор. Примерно через 10—15 мин, когда капли подсохнут, пленку извлекают и на край каждого высохшего пятна наносят маленькую каплю воды заостренным концом стеклянной палочки, с помощью которой растворяют весь материал в этой капле. Лист хроматографической бумаги кладут на чистое стекло и отмечают карандашом места нанесения материала.Затем к этому участку бумаги прикладывают полиэтиленовую пленку с исследуемым материалом и с обратной стороны прижимают ее к бумаге пальцем. Если при этом площадь смоченной бумаги будет не больше 1 см , то в результате хроматографии исследуемый материал распределится небольшими пяхнами правильной формы. Этот метод нанесения обладает большими преимуществами в течение нескольких минут можно без потерь нанести 20—30 образцов. При этом отпадает необходимость готовить и мыть капилляры, применять при нанесении высушивание горячим воздухом и т. д. [c.190]

Для разделения сложных смесей иногда трудно подобрать общий дифференциальный растворитель или условия разделения. В этом случае применяют двухмерную хроматографию. Анализируемую смесь наносят в углу квадратного листа бумаги. Применяя описанную выше технику, получают на одной из боковых сторон несколько пятен, каждое из которых, однаки, может содержать неоколько компонентов. Затем бумагу просушивают и опускают в другой растворитель, так, чтобы баковая сторона с пятнами оказалась теперь виизу. Тогда на площади бумаги каждое из сложных пятен снова может быть разделено. [c.166]