Растворители в хроматографии липофильность

Для разделения неполярных (гидрофобных) вещ еств применяют распределительную тонкослойную хроматографию с обращенной фазой. В этом случае слой носителя пропитывают липофильными веществами, такими как ун-декан, парафиновое масло, тетрадекан, силиконовые масла различной вязкости и т. д. Подвижной фазой служат полярные растворители, которые обычно насыщают неподвижной липофильной фазой. [c.164]

Адсорбционная хроматография используется главным образом для разделения веществ липофильного характера. Хроматографическое разделение гидрофильных соединений, прежде всего аминокислот, стало возможным после открытия Мартином и Синджем [15] в 1941 г. распределительной хроматографии. Эти авторы использовали в своей работе столбик силикагеля, насыщенного водой. На верхний конец столбика наносили смесь веществ, предназначенную для разделения, и промывали соответствующими органическими растворителями. Подвижной фазой, таким образом, служил органический растворитель, а неподвижной — вода, удерживаемая силикагелем. Разделение аминокислот в этих условиях было возможно лишь после их ацетилирования.. Кроме того, получить силикагель со стандартными свойствами было очень трудно. В связи с этим в качестве материала, способного удерживать на своей поверхности воду, авторы предложили использовать целлюлозу [16]. Целлюлоза оказалась пригодной для разделения свободных аминокислот. От использования целлюлозы как носителя неподвижной фазы оставался всего один шаг к замене порошкообразного носителя полосками бумаги. Так была открыта хроматография на бумаге. В 1944 г. английские авторы опубликовали сообщение [3] об использовании в качестве носителя водной фазы целлюлозы в виде фильтровальной бумаги, в качестве подвижной фазы был испробован ряд растворителей. В 1952 г. Мартин и Синдж были удостоены Нобелевской премии за открытие распределительной хроматографии типа жидкость — жидкость. В том же году Джеймс и Мартин [10], исходя из теоретических положений адсорбционной хроматографии [6], разработали теорию распределительной хроматографии типа жидкость — газ. [c.12]

К преимуществам описанных выше липофильных производных относятся их химическая устойчивость, простота в приготовлении и обращении, а также удобство практического применения. Применяя различные сочетания систем растворителей и гелей с различной степенью замещения, можно добиться разделения самых различных продуктов. Кроме того, колонки, заполненные модифицированным носителем, могут находиться в действии в течение долгого периода. В хроматографии с обращен- [c.220]

Гель-хроматография как бы дополняет другие хроматографические методы разделения стероидов. Низкая химическая активность гелей и, в случае липофильных гелей, возможность применения неполярных растворителей делают эти гели в высшей степени удобными для распределения легко гидролизуемых про- [c.222]

Наконец, следует подчеркнуть, что часто наблюдаемые расхождения между теоретически рассчитанными и экспериментально определенными величинами объясняются невыполнением следующих требований эксперимент должен носить характер чисто распределительной, т. е. жидко-жидкостной, хроматографии, он должен проводиться при фиксированных условиях, состав растворителя должен оставаться практически неизменным вдоль полоски бумаги. Кроме того, не следует забывать, что стерические взаимодействия также влияют на величину Rf. Так, например, внутримолекулярная водородная связь блокируем межмолекулярные взаимодействия функциональных групп (гидроксильных, карбоксильных, карбонильных и др.) с компонентами растворяющих систем, и по -)тому почти всегда соединения с такими водородными связями характеризуются более высокими экспериментальными значениями Rf, чем соответствующие теоретическим расчетам, т. е. такие соединения становятся как бы более липофильными. [c.83]

Некоторые липофильные вещества не удаляются из слоя при промывании его метанолом или другими органическими растворителями. В результате стартовая зона может оказаться слишком гидрофобной и не будет смачиваться при хроматографии. В таком случае непосредственно перед хроматографией ее нужно смочить несколькими микролитрами метанола. Кроме того, образец можно нанести на предварительно уравновешенный буфером слой либо сразу (см. разд. 1П, А), либо после того, как растворитель поднимется на 1 см выше старта ( сырой старт ). Для наилучшего разделения экстракты из биологического материала перед хроматографией следует иногда предварительно очистить с помощью того или иного подходящего метода, например путем адсорбции на угле, однако в большинстве случаев эти экстракты можно хроматографировать без предварительной очистки. Рекомендуем читателю ознакомиться с методом Фостера и др. [24] для хроматографии образцов, содержащих большое количество солей. [c.41]

Нейтральные вещества можно отделить от кислот или оснований, фильтруя пробу через ионообменники. Содержащиеся в водных растительных экстрактах алкалоиды можно концентрировать следующим образом. Подкисляя экстракт, сначала получают их сильно гидрофильные соли, затем экстрагируют липофильные компоненты межклеточного вещества органическим растворителем, например хлороформом, далее переводят свободные основания алкалоидов в щелочную форму и экстрагируют их хлороформом. Подобным образом можно повысить содержание липофильных кислот, но при этом кислотную обработку и перевод в щелочную форму проводят в обратном порядке. Для концентрирования ряда соединений можно использовать большинство видов колоночной хроматографии ( (хроматографической фильтрации). При работе с сухим исходным материалом экстракцию обычно ведут в аппарате Сокслета растворителями различной полярности. Например, в результате фильтрации водных растительных экстрактов в колонке, заполненной порошкообразным полиамидом, удерживаются соединения фенольного типа, а другие растворимые в воде соединения, например сахара, аминокислоты и т. п., проходят через колонку. Оставшиеся в колонке соединения можно элюировать мета- [c.87]

Биологическая активность фермента в ходе хроматографии может измениться (как уменьшиться, так иногда в возрасти) в силу ряда дополнительных причин. Например, кажущееся увеличение активности фермента может быть результатом его отделения от протеаз. Снизиться активность может как в результате истинной денатурации илп окисления 8Н-групп белка, так и при отделении апофермепта от кофакторов. Иногда инактивация обусловлена разъединением двух или нескольких последовательно работающих ферментов. Такого рода кажущиеся инактивации могут быть обнаружены при объединении хроматографических фракций, когда активность фермента восстанавливается. Для сохранения биологической активности липофильных белков мембран в элюент иногда приходится добавлять спирт или ацетон. При этом может возникнуть определенная неравномерность распределения органического растворителя между жидкостью внутри и снаружи гранул — ионы сорбента, гидратируясь, оттягивают на себя воду. Следствие этой неравномерности — наложение на ионный обмен эффекта распределетельной хроматографии. Для сохранения биологической активности ферментов в элюент часто добавляют глицерин (до 25%) или этиленгликоль (до 5%). [c.292]

На приведенных ниже диаграммах сравниваются некоторые хроматографические характеристики линейного и кругового разделения. В качестве основы для сравнения взяты различные величины 2/ элюента. Разделение проводили восходяш,им способом в N-кaмepe с насыщенной атмосферой или в чашке Петри, подавая растворитель к перевернутой пластинке через подводящий фитиль диаметром 2 мм. На рис, 6.1.5 сравнивается разрешение двух пар красителей при разделении линейным и круговым методами с помощью липофильного элюента. В круговом методе пробу наносили в центр пластинки. В обоих случаях величину измеряли от точки подвода растворителя. При разделении двух веществ с высокими значениями например фиолетового и зеленого красителей, разрешение i s (изменяется от 20 до 50 мм) значительно увеличивается в линейном варианте и в меньшей степени в круговом методе. Только при = 20 мм оба метода дают равноценную эффективность разделения. При = = 50 мм соотношение разрешений составляет 5,1 3,4, причем большая величина относится к линейной хроматографии, что соответствует относительному улучшению разделения на 50%.. Этот результат получен при сравнении эффективности разделения двух веществ с меньшими величинами например зеленого и голубого красителей. В последнем случае значительное улучшение разрешения с возрастанием длины пути разде.пения наблюдается в обоих методах. Когда 2/ = 20 мм, разрешение, полученное круговым методом, на 24% выше, чем линейным, но при 2/ -= 50 мм эта величина уменьшается до 3%. Приведенные результаты нодтверн дают хорошо известный факт, что круговую хроматографию лучше использовать для разделения веществ с более низкими значениями [c.140]

Липофильные соединения можно, однако, успешно разделять методом адсорбционной хроматографии на активных слоях. Боймлер и Рипштейн [1] впервые сообщили об анализе инсектицидов методом ХТС. Эфиры тиофос-форной кислоты были разделены стандартным методом на слоях силикагеля растворителем гексан—ацетон (80 + 20) (табл. 87). Обнаружение проводят слабо кислым 0,5%-ным раствором хлорида палладия. [c.361]

Природа пористого материала. Перед использованием в молекулярноситовой хроматографии пористый материал должен набухнуть и впитать жидкую фазу, чтобы образовалась наполненная растворителем губка , в которую молекулы могут диффундировать. Поскольку молекулярно-ситовая хроматография проводится с различными жидкими фазами, начиная от воды и кончая углеводородными растворителями, то необходим большой набор различных пористых материалов — от гидрофильных, которые набухают в воде, до липофильных, которые впитывают неполярные органические растворители. Наиболее широко используемым гидрофильным материалом является искусственно сшитый полисахарид, полученный при обработке декстрана (природного полимера глюкозы) различными количествами эпихлоргидрина для получения определенной степени сшитости между цепями. Существует по крайней мере восемь различных степеней сшитости между цепями самый плотный гель будет исключать соединения с молекулярными массами свыше 700. Для полного исключения соединений на большинстве открытых гелей их молекулярные массы должны быть свыше 200 000. Пределы ситового исключения других пористых материалов, включая полиакриламид (имеющий десять различных степеней пористости) и гели агарозы, достигаются для соединений с молекулярными массами до 150000 000. Могут быть также использованы твердые , жесткие материалы, такие как стеклянные зерна с контролируемой пористостью. Молекулярно-ситовую хроматографию, в которой пример няют водную подвижную фазу, иногда называют гель-фильтрационной хроматографией. [c.597]

При выборе наиболее подходящего метода разделения стероидов в каждом конкретном случае необходимо учитывать следующие факторы а) масштаб, т. е. количество разделяемой смеси б) количество выделяемого или анализируемого стероида в смеси, т. е. компонентный состав смеси в) физико-химическую характеристику стероидов, подвергающихся разделению, т. е. их полярность, растворимость и т. д. г) строение подвергающихся разделению стероидов. Стероиды резко различаются по своей полярности— от стероидов, этерифицированных жирными кислотами, липофильный характер которых аналогичен липофильному характеру жиров и парафинов, до стероидных гликозидов или производных желчных кислот, заметно растворимых в воде. Тем не менее вследствие наличия большого углеродного скелета молекулы большинства стероидов обладают средней полярностью и, как правило, лщюфильны. Вот почему для разделения стероидов в основном применяют адсорбционную хроматографию с растворителями низкой полярности и в гораздо меньших масштабах— гель-проникающую и распределительную хроматографии. Последний из упомянутых факторов (строение стероида) также может сыграть решающую роль при выборе подходящего метода разделения. Например, применение ионообменных смол, по-видимому, целесообразно для разделения способных ионизоваться стероидов, таких, как желчные кислоты или некоторые производные стероидов. Хорошо известно, что соединения, образующие гомологический ряд, плохо делятся на адсорбентах, но хорошо разделимы в системах жидкость—жидкость. В последнем слу- [c.212]

За чрезвычайно короткий даже по современным масштабам период гель-хроматография получила такое развитие и признание, как ни один другой метод. После недолгой экспериментальной проверки этот новый метод разделения стал излюбленным приемом, особенно в тех лабораториях, где работают с высокомолекулярными соединениями, и практически нет таких лабораторий, в которых о нем бы не знали. Естественно, что возникла необходимость дать наглядное и исчерпывающее изложение идей метода, теоретических основ и техники эксперимента. Все эти задачи выполнены в книге Г. Детермана, который, несомненно, является крупным специалистом в данной области. Работы автора внесли существенный вклад в развитие метода он продолжает работать в этом направлении и в настоящее время. Детерман первым осуществил гель-хроматографию полимеров (в том числе беаков) в тонком слое он принимал участие в решении проблемы перехода от воды к органическим растворителям для разделения липофильных соединений разработал ряд теоретических концепций относительно физических явлений в геле, обусловливающих разделение. По моему мнению, написанная им книга пробуждает интерес исследователей к дальнейшему развитию этой интересной области. Читателю помимо точного изложения основ метода нужны также и практические рекомендации. Все это он найдет в данной книге. [c.7]

В гидрофильной фазе системы растворителей, а затем уравновешивали с липофильной фазой [139]. В табл. 29 приводится ряд систем растворителей, которые нашли применение при разделении других веществ методом распределительной хроматографии на гелях сефадекса. Для выделения токсинов (циклических олигопептидов) из Amanita phalloides очень [c.197]

Пропитывание силиконом придает бумаге гидрофобный характер и делает ее пригодной для разделения липофильных веществ методом распределительной хроматографии с обращенными фазами (см. разд. 106 и 127). Силиконизированные бумаги устойчивы к действию минеральных кислот до их концентрации 4 н. и щелочей — до 0,4 н. Термостойкость 90 °С. Органические растворители могут экстрагировать следы силикона, однако это не мешает спектрофотометрическому определению веществ в области 220—700 нм. [c.239]

Использование хроматографии на бумаге в ее первоначальном виде для разделения встречающихся в природе сложных смесей липидов не было возможным вследствие гидрофильной природы применяемого инертного носителя и неподвижной фазы. Хроматографическое разделение липидов могло быть осуществлено лишь после введения Рамсаем и Паттерсоном [1] в 1948 г. принципа обращенных фаз . В этом методе хроматографируемые вещества растворены в неподвижной гидрофобной фазе и разделяются вследствие непрерывного распределения между нею и подвижной гидрофильной фазой. В 1950 г. Болдинг [2] употребил для разделения метиловых эфиров высших жирных кислот обработанную вулканизованным латексом бумагу и смесь равных объемов ацетона и метанола в качестве растворителя однако после погружения хроматограммы в растворы липофильных красителей пятпа были плохо различимы на интенсивно окрашенном фоне. Высшие жирные кислоты этим методом не могли быть разделены. Ранние работы по хроматографии липидов на бумаге приведены в обзоре Хольмана [3]. [c.347]

Хроматография на бумаге. — Этот метод, введенный Мартином и Синджем в 1944 г., используемый теперь iBo всех областях химии, применим, в частности, для идентификации компонентов смеси аминокислот с ди- и трипептидами, получаемой при частичном гидролизе белков и полипептидов. Компоненты гидролизата распределяются между одой, адсорбированной на целлюлозе и являющейся неподвижной фазой, и органическим растворителем, подвижной фазой (например, водный этиловый спирт, бутиловый спирт, фенол), которая движется вдоль листа вверх или вниз, — восходящий или нисходящий способы. Более липофильные аминокислоты сильнее увлекаются органическим растворителем, более гидрофильные —проявляют большую тенденцию связываться с неподвижной водной фазой. Гомологичные соединения, отличающиеся даже на одно метиленовое звено, движутся с различной скоростью и легко могут быть разделены. По окончании хроматографии бумагу высушивают н опрыскивают нин-гидрином для проявления аминокислот в виде окрашенных пятен. Нингидрин (2-гидрат индантриона-1,2,3) окисляет аминокислоты до R HO, NHa и СОг. Образующееся дигидросоединение при взаимодействии с аммиаком образует соответствующий пигмент [c.636]

Силикагель применяют главнььм образом для разделения в-водных растворах, на нем можно проводить также разделение липофильных соединений в органических растворителях. Оба типа силикагеля, выпускаемые для гель-хроматографии, не набухают и обладают отличной проницаемостью даже при повышенных давлениях. Поэтому гелями этого типа, например по-расилом и фрактосилом, заполняют колонки для ЖХВД. Однако на поверхности этих гелей имеются активные центры, на которых может происходить нежелательная в данном случае адсорбция разделяемых соединений. Чтобы исключить вероятность адсорбции, гели дезактивируют, этерифицируя гидроксильные группы. [c.361]

С практической точки зрения важно, что при погружении бумаги в лииофильный растворитель или раствор липофильного вещества можно без труда удержать на бумаге неполярный растворитель, пе склонный к образованию межмолекулярных водородных связей. Молекулы такого растворителя нельзя вытеснить из бумаги действием воды и других полярных растворителей, поэтому образуется устойчивая липофильная неподвижная фаза, что обусловлпвает возможность хроматографии с обращением фаз . [c.102]