Альбумин сывороточный изоэлектрическая точка

Рис. 84. Данные по рассеянию света для сывороточного альбумина в его изоэлектрической точке в воде, не содержащей ионов. Данные на графике отложены в соответствии с уравнением (17-30) .

Белки с известными изоэлектрическими точками сывороточный альбумин (р1 4,6), овальбумин (р1 4,6), каталаза (р1 5,7), гемоглобин (р1 6,8—7,0), РНКаза (р1 7,8), а-химотрипсин (р18,1), папаин (р1 9,0), лизоцим (р1 10,5), цитохром с (р1 10,0). [c.100]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ ТОЧКИ СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА [c.35]

В качестве примера приведем измерения Вебера , проведенные на сывороточном альбумине. Измерения деполяризации, сделанные вблизи изоэлектрической точки белка, дают коэффициенты вращательной диффузии, которые согласуются с коэффициентами, определенными другими методами (табл. 29). Из этого вытекает, что флюоресцирующее место (в этом случае молекула красителя, соединенная с молекулой белка) является неспособным к независимому движению. Когда pH уменьшается, наблюдается резкое увеличение степени деполяризации, т. е. вращательное движение флюоресцирующего места становится облегченным. В то же самое время, как было показано на рис. 110, наблюдается увеличение поступательного коэффициента трения, которое в отсутствие других данных можно объяснить предположением, что либо сывороточный альбумин принимает новую удлиненную жесткую конформацию или что его структура становится рыхлее (набухает) и приближается к структуре гибкого клубка. В любом случае это должно сопровождаться увеличением вращательного коэффициента трения молекулы в целом. Наблюдаемое увеличение свободы вращения флюоресцирующего места должно, следовательно, соответствовать увеличению свободы внутреннего вращения, т. е. это означает, что новая конформация сывороточного альбумина является рыхлой, гибкой структурой. [c.512]

Работа 7, Определение изоэлектрической точки сывороточного альбумина...................35 [c.150]

В то время как одни белки выпадают из растворов при диализе, другие осаждаются при добавлении нейтральных солей (метод высаливания). Обычная процедура высаливания состоит в предварительном доведении pH раствора до изоэлектрической точки осаждаемого белка, ибо в изоэлектрическом состоянии растворимость белков минимальна. Затем к перемешиваемому белковому раствору добавляют насыщенный раствор соли (или твердую соль) до тех пор, пока не появится легкая опалесценция. После этого раствор оставляют при комнатной температуре или в рефрижераторе. Если концентрация солей очень высока, часто можно работать при комнатной температуре, так как в этих условиях размножение бактерий резко заторможено. Для осаждения белков чаще всего употребляют сернокислый натрий или сернокислый аммоний. Так, например, если доведенные до изоэлектрической точки растворы сывороточного или яичного альбумина обработать сульфатом аммония [9] или сульфатом натрия [10], то происходит медленное образование кристаллов альбумина, которые оседают на дно сосуда. Образование кристаллов обусловлено медленным испарением раствора. При избытке соли образуется аморфный осадок белка. В таких случаях кристаллы белка можно получить путем диализа белкового раствора против насыщенного раствора сернокислого аммония. [c.12]

Белки благодаря своему большому молекулярному весу находятся в коллоидальном состоянии. Белковые молекулы содержат некоторое количество свободных карбоксильных и аминных групп, и поэтому белки относятся к амфотерным электролитам. В щелочной среде белок диссоциирует, как кислота, в кислом растворе — как щелочь. Отсюда следует, что в щелочном растворе молекулы белка заряжены отрицательно, а в кислом — положительно. При прохождении постоянного электрического тока через щелочной раствор белка молекулы его движутся к аноду, а через кислый раствор белка — к катоду. При определенной для каждого белка концентрации водородных ионов количество положительных и отрицательных зарядов в молекуле белка становится одинаковым, и белки перестают передвигаться в электрическом поле. Концентрация водородных ионов реакция среды), при которой в молекуле белка устанавливается равенство положительных и отрицательных ионов, носит название изоэлектрической точки данного белка. Изоэлектрическая точка для различных белков оказывается неодинаковой. Так, например, для казеина изоэлектрическая точка находится при pH 4,7, для яичного альбумина — при pH 4,8, сывороточного глобулина — при pH 5,4, для эдестина из семян конопли — при pH 5,5, для зеина кукурузного зерна — при pH 6,2 и т. д. [c.36]

Так, изоэлектрическая точка (5,4) бычьего сывороточного альбумина в 0,15 М хлористом натрии выше по сравнению с его изоионной точкой (4,9). [c.298]

Изоэлектрическая точка большинства растворимых в воде белков (сывороточных, яичного альбумина и др.) лежит в слабокислой зоне, т. е. многие белки обладают характером амфотерных соединений, у которых степень диссоциации карбоксильных групп несколько превышает степень диссоциации основных групп. [c.22]

Электрофорез сывороточных белков большей частью проводят в буферном растворе при pH 8,6. При этом значении pH белки сыворотки заряжены отрицательно и движутся к аноду. Так как изоэлектрическая точка сывороточного альбумина при рН 5, а -глобулина при рН 7, то при pH 8,6 наибольшей подвижностью обладает альбумин, а наименьшей -глобулин. Остальные белки имеют промежуточную подвижность. Путь, пройденный частицей данного белкового компонента, помимо заряда, зависит от времени, напряженности электрического поля, силы тока, от природы буферного раствора, его pH и ионной силы. [c.122]

Как видно из изложенного, в этих клинических методах использовано свойство альбумина препятствовать образованию осадка или мути. Это свойство присуще только альбуминам, но не глобулинам. Защитное действие альбумина обусловлено наличием на поверхности его молекул большого числа отрицательно заряженных групп, а также способностью альбумина легко соединяться с анионами (см. стр. 221). Молекулы сывороточного альбумина, изоэлектрическая точка которого лежит примерно при pH 4,7, имеют при pH 7,0 большой избыток отрицательно заряженных групп. Число ионных групп в молекуле глобулина при этом значении pH гораздо меньше, так как изоэлектрическая точка этого белка лежит примерно при pH 6,0. [c.180]

В противоположность рибонуклеазе, макромолекулы такого белка, как сывороточный альбумин, разворачиваются очень легко. На рис. 153 приведены данные измерений характеристических вязкостей для этого белка в кислом растворе при температуре 25° С. В области, слегка смещенной в кислую сторону от изоэлектрической точки, макромолекула претерпевает предварительное [c.585]

Однако диссоциация в области pH более щелочных, чем 4,6, аномальна, потому что она происходит при уменьшении суммарного заряда (изоэлектрическая точка находится при рН = =5,2). Возможные объяснения этой аномалии, по существу, те же, что приведенные на стр. 587. Они учитывают отсутствие симметрии относительно изоэлектрической точки, которое наблюдается для стабильности компактной конформации сывороточного альбумина. [c.591]

В литературе имеется множество данных по определению подвижностей и р1 различных белков некоторые из них можно найти в работе [5]. В зависимости от аминокислотного состава и в меньшей степени от структуры изоэлектрическая точка белка обычно лежит в пределах между 10—11 и 4—4,5. Примером кислых белков являются сывороточный альбумин быка, -лакто-глобулин примером основных — лизоцим, цитохром С. [c.63]

Электрофоретическое разделение белков в водной среде основано на способности их заряженных частиц перемещаться относительно растворителя под влиянием внешнего электрического поля. Если концентрация водородных ионов в растворителе не равна изоэлектрической точке, то скорость перемещения частиц зависит от величины их свободного заряда, размера и формы. Поскольку даже близкородственные белки, например, некоторые фракции сывороточного альбумина, имеют весьма различную электрофоретическую подвижность и поскольку их подвижность изменяется неодинаково при изменениях pH и состава буферных растворов, электрофорез может быть с успехом применен для разделения белковых смесей и характеристики отдельных белков. [c.164]

Изучение вирусов имеет большое значение для разрешения проблемы биосинтеза белка. На это указывает тог факт, что все, даже самые простые, вирусы содержат белок и нуклеиновые кислоты [113]. Низшие вирусы содержат только рибонуклеиновую кислоту, в состав же высших вирусов входит и дезоксирибонуклеиновая кислота. Высокое содержание нуклеиновых кислот в вирусах дает основание считать, что значительная часть их белков представляет собой кислые нуклеопротеиды. В области pH, лежащей между изоэлектрическими точками белков и нуклеиновых кислот, они могут соединяться с сывороточным альбумином и другими белками, образуя нерастворимые при низкой ионной силе мезоморфные волокна [114]. [c.398]

При денатурации белка наблюдается смещение изоэлектрической точки его. Например, указанная точка нативного фибриногена лежит при pH 4,7, а денатурированного — при pH 5,2. При денатурации сывороточного альбумина изоэлектрическая точка меняется от pH 4,6 до pH 5,4. Указанное говорит об изменениях нри денатурации количеств поверхностно расположенных ионогенных групп в мицелле белка. Характерно, что изоэлектрическая точка белков при солевой и тепловой денатурация смещается в разные стороны. [c.375]

При помощи электрофоретического исследования было обнаружено, что сывороточный глобулин, который рассматривался как однородный белок, является смесью, по меньшей мере, трех глобулинов, названных а-, р- и Y-глoбyлинaми [76]. Таким же путем было установлено, что кристаллический р-лактоглобулин [77, 78], кристаллический сывороточный альбумин [79] и кристаллический яичный альбумин [80, 81] являются смесями более чем двух белковых компонентов, которые могут быть разделены электрофоретически в их изоэлектрической точке или при других значениях pH [82]. [c.95]

Рассчитайте изоэлектрическую точку сывороточного альбумина, исходя из следующей рН-зависимости [c.452]

Отдельные виды белков. 1. Альбумины. Альбумины имеют нейтральную реакцию, растворимы 15 воде и высаливаются нейтральными солями в изоэлектрической точке, лишь при 70—100%-ном иасыщеиии раствора солью. Обычно они богаты серой и не содержат гликоколя. К альбуминам принадлежат, п частности, сывороточный альбумин, лактальбумин, рицин (из семян клещевины), лейкознн (из различных злаков), легумелин (из гороха, вики), [c.398]

Пример 11-4. В таблице приведены результаты измерения скорости движения молекул сывороточного альбумина быка (САБ) в электрическом поле при различных значениях pH расгвора (отрицательные значения скорости соответствуют изменению направления движения частиц под действием поля). Испо.)1Ь зуя эти данные, опре-деиитге изоэлектрическую точку САБ. [c.117]

Рассмотрим влияние электрических зарядов на кинетику образования и прочность адсорбционных слоев яичного и сывороточного альбуминов и казеина на границах с воздухом и с маслом. В кислых и щелочных областях от изоэлектрической точки наблюдалось замедление нарастания прочности межфазных адсорбционных слоев. В этом сказывается большое влияние зарядов на процесс адсорбции и на взаимодействие отдельных молекул друг с другом. Нарастание прочности адсорбционных слоев япчпого альбумина на границе с воздухом показано на рис. 33 при разных [c.208]

Поскольку размеры молекул белкового адсорбата в исследованных системах сопоставимы с размерами мезопор (так, молекула сывороточного альбумина представляет собой в растворе эллипсоид вращения с размерами 14,0x4,0x4,0 нм), то в этом1 случае, по-видимому, нельзя говорить о миграции молекул адсорбата в адсорбционном слое основным фактором, определяющим скорость адсорбции молекул с большой молекулярной массой в мезопористых сорбентах, является диффузия растворенных молекул в порах. На скорость адсорбции влияют также pH раствора, наличие полярных групп на поверхности адсорбента. При увеличении количества кислотных групп (окисленный уголь СКН) адсорбция замедляется и максимальная величина адсорбции также снижается. При pH раствора, близком к изоэлектрической точке белка, величина адсорбции максимальна. Приведенные закономерности свидетельствуют о преобладающем вкладе дисперсионных сил в адсорбцию белков на углеродных сорбентах. [c.142]

Компактная конформация сывороточного альбумина несколько более устойчива в щелочной области относительно изоэлектрической точки, чем в кислой. Прежде чем молекула развернется, ее заряд в растворе с ионной силой 0,05 может достигнуть —40. Согласно уравнению (26-30), этот случай соответствует величине lFg,=32 ООО кал/моль. Причина большей устойчивости по отношению к действию отрицательных зарядов неизвестна. Возможно это артефакт, являющийся результатом применения уравнения (26-30) для вычисления Wf,. Может быть заряды расположены так, что W быстрее возрастает с ростом заряда в кислой области, чем в щелочной. Другая возможность заключается в том, что процесс разворачивания первоначально связан не со всей макромолекулой, а только с ее частью. В этом случае разворачивание начнется, когда любой такой части цепи превысит энергию внутренних связей, и тогда нет никакой необходимости связывать процесс с величиной 17е1 целой макромолекулы. Наконец, следует иметь в виду, что сама энергия связей, обусловливающих устойчивость компактной структуры, может зависеть от pH. Это будет справедливо, например, если заметный вклад в величину свободной энергии компактной структуры дают водородные связи, в образовании которых принимают участие способные к диссоциации боковые группы. [c.587]

Изоэлектрическое осаждение. Во многих методах очистки так или иначе используется снижение растворимости белков при pH, близком к значению изоэлектрической точки. Так, например, завершающий этап метода очистки по Штраубу одного из мышечных белков — актина — состоит в доведении pH водного экстракта до 4,7, т. е. до значения изоэлектрической точки актина. Этого оказывается достаточно для полного выпадения в осадок актина, практически свободного от примесей. Ряд белков в кристаллическом состоянии, в том числе сывороточный и яичный альбумин, получают, постепенно повышая концентрацию солей в белковых растворах, приведенных к изоточке. [c.18]

Так как нзоэлектрическая точка большинства белков лежит в кислой среде, то водные растворы их обычно заряжены отрицательно. В крови и органах животных среда немного щелочная. Это свойство белков используется при электрофоретическом анализе белкового состава биологических жидкостей. Например, в состав сыворотки крови входит альбумин и глобулин, которые отличаются своими изоэлектрическими точками (табл. 55). Поэтому при электрофоретическом анализе сыворотки крови, имеющей pH выше 7, эти белки, заряжаясь отрицательно, должны передвигаться к аноду с различной скоростью в силу различной величины своих зарядов. Наибольший заряд будет у альбумина сыворотки, так как он при этих условиях наиболее удален от своей изоэлектрической точки. Отсюда сывороточный альбумин наиболее подвижен. Происходит расслоение ранее однородной системы на фракции, движущиеся к аноду с различной скоростью. [c.359]

При pH 7,35, присущем нормальной сыворотке крови, а также при более высоких значениях pH, все белки сыворотки представляют собой анионы и, следовательно, движутся в одном и том же направлении, указанном стрелкой на фиг. 17. Сывороточный альбумин, изоэлектрическая точка которого лежит при pH 4,6, движется к аноду с наибольшей скоростью, в то время как глобулины, изоэлектрические точки которых лежат между pH 5 и 6, перемещаются с меньшими скоростями. Максимумы на кривой, изображенной на фиг. 17, указывают положение отдельных границ в момент, когда был сделан снимок. Высота кривой определяется градиентом преломления, т. е. величиной йп1йк, в то время как площадь, заключенная под каждым из пиков на кривой, отвечает концентрации белка, образовавшего данную границу. [c.93]

Кривая 1 — гипотетический график для растворенного вещества с мол. весом 60 000, которое подчиняется уравнению осмотического давления Вант-Гоффа. Кривая 2—экспериментальный график для сывороточного альбумина (М = бОООО) в его изоэлектрической точке pH 5,4. Различия между кривыми / и 2 обусловлены неидеальностью раствора п )и высоких концентрациях растворенного вещества. Кривая 3 — экспериментальный график для сывороточного альбумина при pH 7,4. Различие между кривыми 3 и 2 вызвано суммарным отрицательным зарядом молекул белка при pH 7,4 и обусловлено эффектом Гиббса —Доннана. Кривая экспериментальный график для плазмы человека п[)и рн 7,4. Кривая 4 по сравнению с кривой 3 соответствует веществу с большим молекулярным весом, однако общая форма обеих кривых одинакова. [c.156]

Выше было уже упомянуто об образовании слабо растворимых солей (например, хлоридов и сульфатов) белковых катионов з кислой по отношению к изоэлектрической точке области [195, 202] и об использовании этого явления, например, для выделёнйя кристаллического сульфата альбумина плазмы [106]. Было получено также несколько кристаллических солей лизоцима [204]. Белковые соли, содержащие тяжелые комплексные анионы, например воль-фрамат-, фосфовольфрамат-, трихлорацетат- или метафосфатионы, а также соли, содержащие катионы тяжелых металлов — цинка, меди или ртути, — известны уже давно и применялись для освобождения раствора от белков перед некоторыми анализами [10, 78]. Предполагалось, что эти реагенты при их применений действуют на белки сильно денатурирующим образом. Вслед з-а кристаллизацией цинковой соли инсулина [205, 206] и метафос-фата яичного альбумина [207] недавно последовало приготовление серии кристаллических производных инсулина [208] и сывороточных альбуминов человека [209, 210]. Последние были получены в присутствии ионов, концентрация которых была недостаточна для высаливания (если не добавлять в количестве 5—30% органического растворителя и во избежание денатурации не вести процесс при низких температурах). В этих условиях многие из указанных солей менее растворимы, чем свободный белок или соли с такими катионами, как натрий или калий, и, следовательно, могут найти применение при выделении белков [51] (4). Были получены также кристаллические додецилсульфатпроизводные Р-лактоглобулина [211]. [c.51]

На основании обстоятельного изучения действия электронов с энергией 2 Мэе на твердый бычий сывороточный альбумин в бескислородных условиях Александер и Гамильтон [376] пришли к выводу, что в этом белке имеют место два типа радиационных повреждений во-первых, рас-кручивание молекулы, связанное с разрывом водородных связей, и, во-вторых, химические изменения, определяемые по исчезновению боковых цепей аминокислот и появлению карбонильных групп и групп, из которых при мягком гидролизе отщепляется аммиак. Раскручивание молекулы альбумина под действием излучения можно изучать, измеряя число дисульфидных связей, способных вступать в реакции. Так, в молекуле природного белка в изоэлектрической точке все семнадцать дисульфидных связей находятся в нереакционноспособном состоянии [377]. Если же облучать этот белок, то при увеличении дозы облучения до 50% дисульфидных связей приобретают реакционноспособность. Однако Александер и Гамильтон нашли, что при этом не происходит исчерпывающего образования межмолекулярных поперечных связей — 3 — 3 — за счет окисления сульфгидрильных групп. [c.431]

Рис, 59. Сравнение градиентов pH и результатов изоэлектрического фокусирования белков в 7,5%-НОМ полиакриламидном геле, проведенного в макро- и микромас[нтабах [420]. Гели содержали амфолины фирмы LKB с pH в интервале 3—10. Кривая представляет собой градиент pH, полученный в макрогеле. Светлые кружки обозначают средние значения pH в каждом кусочке разрезанного микрогеля длиной 1 см, отложенные против расстояний от начала геля до середины каждого кусочка. Темные кружки указывают средние расстояния, пройденные стандартными белками при pH, соответствующих изоэлектрическим точкам. Линии, пересекающие темные кружки, отражают утроенную величину среднего стандартного отклоне,ния. Были использованы следующие белки (в порядке увеличения расстояния, пройденного ими от старта) а-ка-зеин, янчный альбумин, бычий сывороточный альбумин, гемоглобин, химотрип-син, а-химотрипсиноген А, рибонуклеаза. [c.153]

Молекулу сывороточного альбумина удобнее всего аппроксимировать как эллипсоид вращения и для выражения формы и размеров использовать величины осей (далее а и Ь) и их соотношения а/Ь. Значения этих величин существенно различаются в зависимости от методов измерения и расчета и коррелируют для одинаковых условий измерения (температура, pH, концентрация и ионная сила раствора). Приняв эллипсоид враид,ения в качестве модели молекулы бычьего сывороточного альбумина, по данным, приведенным в [93, с. 71-73], было установлено, что в изоэлектрической точке при нулевой ионной силе молекула характеризуется отношением осей а/Ь, равным 3, а при ионной силе 0,05 молекула становится сферой. При любой ионной силе молекула удлиняется, если pH смещается от изоэлектрической точки. Например в 0,15 М КаС1 при значениях pH = 3,45 3,95 6,30 и 7,40 соотношение осей а/Ь составляет соответственно 5,8 3,3 2,6 и 3,3 (рис. 9.11). [c.549]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология