Пятно в ТСХ детектирование

В то время как в КЖХ хроматографическая система жестко связана с детектором, в ТСХ разделение проводят Б камере независимо от типа детектора. В связи с этим ТСХ является более гибким методом для решения разнообразных задач разделения и для разработки новых методик. Показания фотометрической детектирующей системы в ТСХ обычно не зависят от состава элюента. Жидкостную колоночную хроматографию целесообразно использовать в лаборатории для однотипных анализов, тогда как ТСХ с последующим фотометрическим детектированием — в лабораториях, где имеют дело с самыми различными задачами разделения. Для количественной оценки хроматограмм пригоден только фотометрический метод , поскольку даже опытный оператор при визуальном определении допускает ошибку не менее 10%. Дополнительным приемом при проведении количественного детектирования является удаление пятна вещества вместе с сорбентом с подложки. После этого проводят жидкостное извлечение вещества из сорбента. Количественное определение поглощения или флуоресценции раствора осуществляют с помощью фотометра [1]. Широкому распространению этого метода мешает ряд препятствий. [c.174]

По сравнению с обычными ТСХ-пластинками уменьшение размеров ВЭТСХ-пластинок с закрепленным слоем не отражается на хроматографических характеристиках. Уменьшение длины пути разделения приводит к сокращению времени разделения на ВЭТСХ-пластинках. Уменьшение диаметра стартового пятна позволяет снизить предел обнаружения при детектировании. Разрешение на этих пластинках в 1,6 раза выше, а соответствующее число теоретических тарелок увеличивается в три раза. [c.218]

Детектирование и количественное определение. Обнаружение и идентификацию веществ по пятнам на тон- [c.34]

Описан количественный анализ углеводов с использованием одиннадцати различных методов пост-хроматографической дериватизации при погружении пластин в соответствующие реагенты. При этом предел детектирования углеводов был понижен до 5—30 нг/пятно. [c.365]

Однако из-за несовершенного детектирования границ пятна эта зависимость не всегда выполняется. Поэтому количественная оценка может быть проведена только прямым сравнением с серией эталонных растворов, которые обычно наносят на одну пластину с исследуемыми образцами. Строят графическую зависимость в координатах л/ —Я по эталонным образцам и по ней определяют количество неизвестного образца. Было показано, что формула справедлива только при небольшой разнице в количестве вещества в исследуемых зонах (при значительном различии коэффициенты пир перестают быть постоянными). Для более точного определения границ зоны целесообразно использовать фотографии тонкослойных хроматограмм на сверхконтрастных фотоматериалах с последовательной многократной фотопечатью (поскольку при этом для фотографического процесса контрастность изображения резко увеличивается). [c.369]

Существенный недостаток количественных методов анализа тонкослойных хроматограмм, основанных на измерении пропускания света, был связан с нелинейной зависимостью сигнала оптического детектора от количества вещества в хроматографическом пятне. Эта нелинейность обусловлена специфическим законом прохождения света в рассеивающей среде, описываемым уравнением Кубелки — Мунка, и неоднородностью пластины по толщине слоя адсорбента. Последнюю можно учесть, измеряя оптические свойства подложки непосредственно в хроматографическом пятне. Использование двухволнового метода спектрофотометрического детектирования, когда излучение одной волны Л поглощается и веществом, и адсорбентом, а другой волны Лг — только адсорбентом, позволяет выделить сигнал, связанный с поглощением излучения только анализируемым веществом. Дальнейшая обработка сигнала детектора в соответствии с уравнением Кубелки — Мунка позволяет линеаризовать зависимость оптического сигнала от количества вещества в ТСХ. Поглощение света адсорбентом может быть учтено также при спектрофотометрическом сканировании пластины на просвет и отражение. Эти принципы реализованы в лучших современных зарубежных денситометрах — флуориметрах. Менее точным, но более простым решением является линеаризация зависимости сигнал — вещество с помощью двойного логарифмирования (с использованием ЭВМ). В результате этих усовершенствований воспроизводимость результатов в современной количественной ВЭТСХ приближается к 1%. Использование двухкоординатного сканирования в случае эллипсовидных пятен (двумерное размывание зон в ТСХ) и многошагового сканирования пятен неправильной формы (дву- [c.370]

Универсальным обнаружителем является иод. Детектирование осуществляют опрыскиванием хроматографической пластинки 1%нным раствором иода в спирте или обработкой ее парами иода в замкнутом объеме [177]. Эффективен способ, согласно которому на чистую стеклянную пластинку наливают свежеприготовленный раствор иода в ацетоне ацетону дают испариться. На пластинке остается слой мелких кристалликов иода. Эту пластинку выдерживают в непосредственной близости от хроматограммы. Уже через несколько секунд начинают вырисовываться коричневые пятна [74]. Обнаружение иодом имеет то преимущество, что через некоторое время иод улетучивается с пластинки, что позволяет применить затем другие обнаружители. Обнаружение иодом удобно при проведении препаративного разделения или при количественном анализе. Пятна веществ можно сделать более контрастными дополнительным опрыскиванием хроматограммы раствором крахмала. Контуры пятен сразу после обнаружения необходимо обвести. Хотя вещества, изменяющиеся под действием иода, встречаются редко, все же с этой возможностью следует считаться, прежде всего при количественном анализе. [c.71]

Достоинства указанного метода этим не исчерпываются. Имеются еще по крайней мере два существенных преимущества тонкослойной хроматографии — удивительная простота техники эксперимента, доступная даже для малоподготовленного исследователя, и высокая чувствительность при детектировании вещества на пластинке вследствие сохранения значительной концентрации вещества в центре пятна. Это позволяет в ряде случаев разделять вещества в количествах, не превышающих сотых долей микрограмма. [c.197]

Таким образом, 8 линейно зависит от lg q. Однако для тонкослойной хроматографии это правило, по-видимому из-за несовершенного детектирования границ пятна, не всегда выполняется. Поэтому количественная оценка может быть проведена только прямым сравнением с серией стандартных растворов. Для этого Зеер [18] предложил следующий метод стандартный объем определяемой смеси веществ наносится в виде точек через определенные интервалы на слой силикагеля. Между этими точками наносятся стандартные объемы ряда эталонных растворов различной концентрации. После развития и проявления хроматограмм приготовляют контактную фотографию пластинок. На ней измеряют площади соответствующих пятен и строят по эталонным растворам графическую зависимость измеренных площадей от количеств вещества. Из полученного графика находят содержание вещества в определяемой смеси. [c.303]

Техника хроматографирования в тонких слоях состоит в подготовке пластинок, нанесении пробы, проявлении хроматограммы и детектировании пятен. Положение пятна разделенного вещества описывается, так же как и в бумажной хроматографии, посредством измерения величины R , т. е. путем сопоставления с стандартных веществ вещества идентифицируются способом свидетелей . [c.323]

Для ТСХ применяют выпускаемые про.мышлен-ностью пластины с закрепленным слоем сорбента — силикагелем и оксидом алюминия — размерами 5X15 и 20X 20 см. Анализируемый раствор наносят на пластину с помощью микрошприна или микропипетки. Как правило, наносимый объем в обычной ТСХ составляет 1—5 мкл. Пробу следует растворять в легко испаряющихся растворителях, чтобы размер пятна на пластине был минимальным. В ТСХ применяют концентрированные пробы, так как для детектирования нятна оно должно содержать 1 —10 мкг определяемого вещества. [c.612]

Метод гель-фильтрации в топком слое (ТСГФ) имеет ряд преимуществ перед колоночной хроматографией. Во-первых, на стартовую линию пластинки шириной, например, 20 см можно нанести 10—15 препаратов в виде пятен диаметром 3—5 мм, что позволяет сопоставлять результаты фракционирования многих препаратов в одном опыте, в идентичных условиях. Во-вторых, благодаря малой толщине слоя геля (0,4—1 мм) объем препарата может быть уменьшен до 5—20 мкл. Соответственно можно сильно уменьшить и количество фракционируемого материала, тем более что для его детектирования в этом случае можно использовать высокочувствительные методы окраски (см. ниже). Нет проблем и с обеспечением ровного слоя препарата — он мигрирует в виде пятна, как обычно при ТСХ. Наконец, нет необходимости ожидать, пока все компоненты фракционируемой смеси один за другим достигнут конца пластинки. Процесс разделения прекращают, как только наиболее быстрый компонент приблизится к нижнему краю геля. В этот момент регистрируют [c.162]

Минихмальное количество материала, вносимого в пятно, зависит от ожидаемого числа фракций и чувствительности метода их детектирования. Ориентировочно для обычной ТСХ — это микрограммы вещества, т. е. несколько десятков наномолей каждой аминокислоты или несколько наномолей каждого из пептидов среднего размера. Максимальная загрузка одного пятна не должна по возможности превышать 100 мкг материала (а при ВЭТСХ — соответственно меньше). В препаративном варианте загрузка одной полосы на всю ширину пластинки (20 X 20 см) при толщине слоя [c.468]

Используя аналогичную систему ТСХ для идентификации ФТГ-АК в последовательных циклах секвенирования полипептидов по методу Эдмана (вручную), Рид и Мак-Кэй столкнулись со следующей трудностью иа месте ФТГ-Arg в каждом цикле выходил некий, также гасящий флюоресценцию фона побочный продукт реакции. Они описали метод детектирования истинного пятна ФТГ-Arg путем дополнительной обработки пластинки смесью (1 1) 0,02%-ного раствора фенантренхинона и 10%-ного раствора NaOH в 60%-ном этаноле. После такой обработки только пятна ФТГ-АК прн освещении длинноволновым УФ-светом давали интенсивную желто-зеленую флюоресценцию иа слегка флюоресцирующем голубоватом фоне пластинки [Reed, Ma Kay, 1978]. [c.485]

Упомянем также работу, где фракционирование большого числа минорных нуклеозидов с помощью распределительной ТСХ на целлюлозе осуществляли вообще без использования радиоактивных изотопов, проводя визуальное детектирование пятен под УФ-светом. Правда, при этом авторам приходилось наносить на пластинку (в пятне диаметром 1,5 сл1) 2—3 оптические единицы, т. е. около 0,1 мг гидролизата тРНК, а в качестве пластинки пспользовать лист покрытой целлюлозой алюминиевой фольги размером 20 X 50 см, зато приведенная ими картина разделения нуклеозидов содержит около 40 пятен. Количественную оценку (для расшифровки структуры тРНК) проводили по УФ-поглощению элюатов из пятен [Rogg et al., 1976]. [c.495]

С этой целью в случае колоночной хроматографии вытекающую из колонки жидкость разделяют на малые фракции и определяют концентрацию содержащегося в них вещества. Детектирование можно осуществлять с помощью цветных реакций, проточных рефрактометров, фотометров, поляриметров и т.д. Для проявления бумажных или тонкослойных хроматограмм бумагу или пластинку опрыскивают какими-либо проявляющими реагентами, образующими с веществами окрашенные соединения. В ряде случаев пятна веществ на хроматограмме можно увидеть в УФ-свете. Хроматографической характеристикой вещества служит величина постоянная для каждого вещества в определенной системе растворителей и представляющая собой отношение длины пробега пятна веи ества на хроматограмме к длине пробега фронта растворителя. Вещество можно выделить из хроматограммы в индивидуальном виде, экстрагируя из пятна. В газовой хроматографии для обнаружения выходящего из колонки вещества применяются иламенно-ионизационные детекторы или детекторы теплопроводности (катаро-метры). Хроматографической характеристикой вещества в этом методе является время задержки его на неподвижной фазе (время удерживания), а также задерживаемый на ней объем, отнесенный к объему подвижной фазы (удерживаемый объем), и иногда — путь, пройденный на неподвижной фазе, также отнесенный к пути, пройденному подвижной фазой (значение / /). Выделение получаемых в процессе газовой хроматографии индивидуальных компонентов возможно вымораживанием их из соответствующих газообразных фракций. [c.30]

Для лучшего понимания этих вопросов полезно рассмотреть экспериментальные зависимости значений Кг от состава бинарной ПФ. Бинарные ПФ состоят обычно из разбавителя (например, гексана) и активного (в элюирующем смысле) компонента. При больших элюирующих силах (т.е. больших значениях концентраций активного компонента бинарной ПФ), когда значения Rf велики, происходит нивелирование (выравнивание) величин Rf разных соединений [41]. Так, значения п-аминобензойной кислоты и анилина в чистых этилацетате и метаноле очень близки, в то время как при меньших значениях Rf в смесях гептан—этилацетат и бензол—метанол они существенно различаются [41 ].С учетом того, что площадь хроматографической зоны (пятна) растет (т.е. чувствительность детектирования падает) примерно пропорционально квадрату величины Rf (это следует из определения числа теоретических тарелок в ТСХ [42]), оптимальными величинами Rf при установлении подлинности можно считать значения К =0.4—0.6. При контроле примесей для повышения чувствительности величины их целесообразно уменьшить до 0.2—0.4. [c.468]

Метод открываемого минимума. Предварительно устанавливается чувствительность обнаружения ( открываемый минимум ) примеси при выбранных условиях хроматографирования и детектирования. Затем задаются (исходя из соображений фармакологии или технологии) допустимым процентом содержания примеси в пробе (например, не более 0.5%), вследствие чего на хроматограмму наносят такое количество пробы, при котором допустимое содержание примеси оказывалось бы ниже ее открываемого минимума. При этом на хроматограмме пробы не должно обнаруживаться пятно примеси (обычно указывают примерное значение ее R,). Например, примесь имеет значение Rf около 0.3, ее открываемый минимум 0.2 мкг, допустимое содержание в основном веществе — не более 0.5%. Следовательно, при нанесетгаи на пластину 40 мкг основного вещества и последующем хроматографировании и проявлении не должно обнаруживаться пятно с Rf около 0.3. [c.473]

Современная высокоэффективная ТСХ (ВЭТСХ) включает комплекс методов и средств для получения максимальной эффективности разделения, минимального времени анализа и максимальной чувствительности детектирования. На ВЭТСХ-пластинах фирмы Мерк с диаметром частиц адсорбента 3—8 мкм пробег элюента составляет 2—4 см. Для достижения оптимальных параметров разделения применяют специальные устройства для нанесения проб (с оптимальным размером стартового пятна) и различные методы сжатия зон в направлении движения элюента (круговая и антикруговая ТСХ, многократное хроматографирование и другие), что позволяет увеличить разрешение компонентов (на данном отрезке пластины может разместиться большее число зон). [c.341]

Ввод твердых проб в источник ионизации ИСП можно осуществлять путем лазерной аб.аяции, достигая таких же-пределов определения элементов, как и при использовании растворов солей. Этот метод ввода исключает необходимость применения длительньк операций растворения исследуемого образца, тем самым уменьшается вероятность его загрязнения. Для абляции исследуемых проб твердых материалов их размещают в абляционной камере. Луч лазера фокусируется на поверхности пробы, и управляемые лазерные импульсы продолжительностью, равной миллисекундам, испаряют материал пробы. Образующееся облачко пробы, состоящее из микрочастиц, уносится потоком аргона в факел ИСП и затем ионизируется в плазме. При этом обеспечиваются пределы детектирования, превосходящие возможности оптических систем. Размер пятна лазерного луча можно регулировать от 10 до 300 мкм, что дает дополнительную возможность пространственного анализа дискретных характеристик пробы. Особое значение такой прибор имеет для использования в полупроводниковой, ядерной, минералологической и керамической областях, где необходимо быстро определять содержание примесей на уровне менее 10 -10 г без растворения. МС-анализ (с ИСП и лазерной абляцией в совокупности) является единственным методом, который удовлетворяет всем аналитическим требованиям, предъявляемым к ана- [c.854]

В таких системах в качестве преобразователей применяются линейные матрицы детекторов, квантовая эффективность которых выше, чем у пленочных преобразователей. Щель с раскрьггием 0,1 мм внутри куба с объемом 8 мм изменяет его эффективную плотность только на 5 %, и, следовательно, маловероятно выделение таких узких отслоений при детектировании рассеянного излучения. Дальнейший професс рассматриваемого метода контроля может быть связан с использованием источников с подвижным фокусным пятном и нескольких детекторов. Это позволит контролировать достаточно большую площадь объекта без его движения и использовать детекторы с достаточно большим рабочим полем. [c.100]

В аналитической ТСХ чувствительность используемых методов детектирования такова, что позволяет обнаруживать компоненты образца, содержание которых меньше 1 мкг. В обычной практике следует использовать образцы по 10-50 мкг для слоев адсорбента тол-ишной 250 мкм такая толщина является оптимальной с точки зрения максимальной скорости и качества разрешения. Указанные нагрузки значительно ниже максимальной линейной емкости (75 мкг) которая получена в предположении, что проба образует пятно площадью 1 см на слое силикагеля толщиной 250 мкм на пластине и хроматограмма проявляется обычным способом (см. гл. 6). [c.65]

Для детектирования полимеров пластинку опрыскивали 3%-ным раствором КМПО4 в конц. H2S04 и нагревали в термостате в течение 15 — 30 мин при 140—150° С. При этом пятна полимеров приобретали черную окраску. Для детектирования блоксополимеров стирола (СТ) и этилен-оксида (ЭО) применяли модифицированный реактив Драгендорфа [57—58]. При этом ПЭО проявляется в виде красновато-оранжевых пятен на желтом фоне. Чувствительность детектирования 0,5—1 мкг полиме])а. [c.154]

Сущность метода. Для детектирования пятна анилина на хроматограмме испельзуют реакцию д авот рования. При этом пятна анилина скрашиваются в оранжевый цвет. С целью достижения наилучшей формы пятен соответствующим образом должны быть подебраны смесй pa fS6pи %лeй, зернистость адсорбента и [c.297]

Детектирование производныхспиртов. Хроматограммы орошают раствором хлористого олова и через 1,5 ч раствором и-диметиламинобензальдегида. Производные спиртов проявляются желтыми пятнами, окраска которых сохраняется в течение года. [c.303]

В ряде случаев для сохранения окраски уже проявленную хроматограмму опрыскивают вторым реагентом или вводят соответствующее соединение в первоначальный раствор реагента-индикатора. Например, при детектировании пятен аминокислот нингидри-ном образуются пурпурные пятна, вьщветающие при комнатной температуре в течение одного дня. Если в исходный нингидриновый реактив ввести ацетат кадмия или после детектирования нингидри-ном опрыскать пятна раствором ацетата никеля, окраска сохраняется пять лет. [c.322]

Смотреть страницы где упоминается термин Пятно в ТСХ детектирование: [c.276] [c.277] [c.278] [c.614] [c.481] [c.489] [c.491] [c.151] [c.611] [c.141] [c.175] [c.183] [c.192] [c.194] [c.367] [c.371] [c.298] [c.82] [c.199] [c.274] [c.312] [c.319] [c.325] [c.274]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология