Спектрофотометрия гелей

Атомно-абсорбционный спектрофотометр подготавливают к работе в соответствии с прилагаемой к нему инструкцией. Спектральную ширину щелей устанавливают равной 1,0 нм. На выходную щель выводят излучение резонансной линии мышьяка 193,7 нм. Температуру кварцевой кюветы-атомизатора устанавливают равной 1000—]100°С. Через устройство для выделения и атомизации гидридов пропускают аргон или гелий с расходом 500 мл/мин. [c.175]

На приборе, изображенном на рис. 478, можно осуществить разделение до 1 г смеси веществ. Положение зон бесцветных веществ можно обнаружить способами, используемыми при распределительной хроматографии (стр. 462) или противоточном распределении (стр. 429). После окончания разделения к слою геля можно, например, приложить лист фильтровальной бумаги, в которую диффундирует часть вещества с поверхностного слоя геля. Затем на бумаге можно обнаружить вещества любым из способов, применяемых при хроматографии на бумаге (стр. 462). Вещества, поглощающие свет в видимой или ультрафиолетовой области спектра, можно обнаружить следующим образом. Гель разрезают на узкие полоски параллельно стартовой линии, полоски элюируют и измеряют поглощение элюата при помощи спектрофотометра. После обнаружения разделенные вещества можно выделить из геля экстракцией или другим подходящим способом и получить их таким образом в чистом состоянии. [c.536]

Спектрофотометрия в УФ-области является удобным методом исследования равновесия реакции гидратации альдегидов и кетонов и, следовательно, может служить косвенным методом определения количества гидратной воды. Карбонилсодержащие соединения поглощают в области длин волн 270—300 нм. В присутствии воды они обычно образуют соответствующие гел-диолы [c.369]

Спектрофотометр СФ-9 (рис 7.8) предназначен для автоматической записи спектров пропускания (оптической плотности) твердых и жидких веществ при комнатной температуре, а также твердых веществ при температуре жидкого гелия в естественном и поляризованном свете. [c.169]

Метод трассирующего газа. Газ-трассер—гелий. Ввод трассера импульсный по всему сечению слоя. Газоанализатор-спектрофотометр [c.98]

Прямое денситометрическое определение. Анализируя результаты разделения белков и нуклеиновых кислот, часто упускают из вида возможность прямого сканирования гелей с помощью спектрофотометров. Этот метод отличается быстротой, позволяет проводить в процессе электрофореза повторное сканирование гелей через определенные промежутки времени для получения данных об электрофоретической подвижности исследуемых веществ и дает возможность избежать повреждения гелей при извлечении их из трубок. Недостатки метода заключаются в том, что его чувствительность (по отношению к белкам) в 2—3 раза ниже по сравнению с методом окрашивания, а также в том, что он требует [c.267]

Чтобы повысить чувствительность сканирования, необходимо работать при правильно выбранной длине волны. Во многих денситометрах для этого служат светофильтры. Если имеют дело с видимым отраженным светом, то цвет светофильтра должен быть дополнительным по отношению к цвету окрашенных полос. Так, например, при сканировании электрофореграммы с синими полосами требуется желтый светофильтр, В денситометрах иных типов имеются монохроматоры, дающие возможность выбрать желаемую длину волны. Кроме того, существуют спектрофотометры, к которым можно присоединить дополнительное устройство для перемещения геля. [c.192]

Окрашенный гель из трубки можно сканировать в специальном приборе или с помощью приставки, которой комплектуются сейчас многие продажные спектрофотометры. Не следует, впрочем, слишком полагаться на соотношение размеров пиков такой электрофореграммы при оценке количественного соотношения белков в полосах, так как связывание красителя зависит не только от концентрации, но и от химического состава и конформации белка. [c.92]

Если лиганды поглощают при длинах волн >250 нм, то можно определить концентрацию связанного лиганда прямой спектрофотометрией геля. Для этого гель суспендируют в оптически чистом этиленгликоле, глицерине, концентрированном растворе сахарозы или 1%-ном (об./об.) водном полиэтилен-гликоле (polyox WSR 301) и измеряют поглощение приготовленного образца против суспензии той же концентрации немо-дифицированного геля в двухлучевом спектрофотометре. Важно, чтобы гели были тщательно промыты суспензионной средой перед измерением. [c.100]

Работу выполняют с помощью хроматографической колонки, заполненной набухщим в воде гелем декетрана — сефадексом марки G-100. Высота слоя геля в колонке 30 см. Перед работой дают стечь избытку дистиллированной воды над слоем геля. Пипеткой в один прием вносят в колонку 1 мл раствора поливинилпирролидона. Дают раствору впитаться в гель. Вносят в колонку с помощью пипетки дистиллированную воду в таком количестве, чтобы над гелем образовался слой воды толщиной в 1 см. Как только рабочий раствор впитается в гель, начинают элюирование полимера, ведя непрерывную подачу на колонку дистиллированной воды и собирая фракции в мерный цилиндр, из которого их последовательно переливают в отдельные пронумерованные пробирки. Объемы фракций точно измеряют. Объем первой фракции 10 мл, каждый последующий — 3 мл. Процесс продолжают до тех пор, пока суммарный объем элюата достигнет 50 мл. Концентрацию полимера во фракциях элюата определяют по поглощению поливинилпирролидона в УФ-области. Для этого с помощью спектрофотометра измеряют оптические плотности D каждой фракции при = 225 нм и толщине слоя в кювете 1 см. В кювету сравнения помещают растворитель —дистиллированную воду. [c.110]

Спектральный анализ (эмиссионный) — физический метод качественного и количественного анализа состава вещества на основе изучения спектров. Оптический С. а. характеризуется относительной простотой выполнения, экспрессностью, отсутствием сложной подготовки проб к анализу, незначительным количеством вещества (10—30 мг), необходимого для анализа на большое число элементов. Спектры эмиссии получают переведением вещества в парообразное состояние и возбуждением атомов элементов нагреванием вещества до 1000—10 000°С. В качестве источников возбуждения спектров прп анализе материалов, проводящих ток, применяют искру, дугу переменного тока. Пробу помещают в кратер одного из угольных электродов. Для анализа растворов широко используют пламя различных газов. Качественный н полуколичественныйС. а. сводятся к установлению наличия или отсутствия в спектре характерных линий и оценки по их интенсивностям содержания искомых элементов. Количественное определение содержания элемента основано на Эмпирической зависимости (при малых содержаниях) интенсивности спектральных линий от концентрации элемента в пробе. С. а.— чувствительный метод и широко применяется в химии, астрофизике, металлургии, машиностроении, геологической разведке и др- МетодС. а. был предложен в 1859 г. Г. Кирхгофом и Р. Бунзеном. С его помощью гелий был открыт на Солнце ранее, чем на Земле. Спектроскопия инфракрасная — см. Ифракрасная спектроскопия. Спектрофотометрия (абсорбционная)—физико-химический метод исследования растворов и твердых веществ, основанный на изучении спектров поглощения в ультрафиолетовой (200—iOO нм), видимой (400—760 нм) и инфракрасной (>760 нм) областях спектра. Основная зависимость, изучаемая в С.,— зависимость интенсивности поглощения падающего света от длины волны. С. широко применяется при изучении строения и состава различных соединений (комплексов, красителей, аналитических реагентов и др.), для качественного и количественного определения веществ (определения следов элементов в металлах, сплавах, технических объектах). Приборы С.—спектрофотометры. [c.125]

В качестве микрозерен используются следующие частицы ионообменники, гидрофобные сорбенты, применяемые в гель-проникающей и аффинной хроматографии, (С 18), т. д. Как методы детектирования используются спектрофотометрия, флуоресценция, воль-тамперометрия, радиоактивность, наверное, возможно использование ААС и ААС с ИСП. При работе с бусинами, размер которых 50-100 мкм, в ячейке детектора находится неско.ш>ко тысяч бусинок, поэтому нет необходимости использовать частицы строго одного размера. [c.264]

ИК-спектры образцов сняты в таблетках с КВг на спектрофотометре иК-20, рентгенографическое исследование проводили на дифрактометре ДРОН-3 (анод Си-Ка). Размеры частиц ВКЦ определяли с помощью электронного микроскопа 1ет-100-СХ при увеличении 1000—10 ООО. Кислотно-основные свойства ВКЦ исследовали методом термодесорбцип, образцы цеолитов в количестве 0,2—0,5 г помещали в кварцевый реактор и откачивали при 823 К до 1,3-10" Па. Аммиак и пиридин адсорбировали при заданной температуре и давлении в течение 10 мин, затем откачивали газовую фазу из реактора, напускали газ-носитель гелий и охлаждали в токе гелия до комнатной температуры. Термодесорбцию проводили с линейной скоростью нагрева 12,5 град/мин до 1023 К, скорость гелия 50 см /мин. Каталитическую активность ВКЦ в конверсии метанола измеряли в проточной установке при [c.31]

Источником излучения в интервале 20—150 мк служит обычно штифт Нернста или глобар иногда используются в лабораторных исследованиях угольная дуга, сетка Ауэра, платиновая лента, покрытая слоем тория. Однако для установки в спектрофотометрах, выпускаемых промышленностью, приемлемыми оказались только первые два типа источников, эффективных вплоть до длин волн порядка 80 мк, далее же следует использовать ртутную лампу высокого давления. Она обычно представляет собою кварцевую трубку, заполненную парами ртути. В процессе разряда температура паров ртути повышается до 1200° К, а давление достигает нескольких атмосфер. Есть основание полагать, что излучение с длиной волны короче 50 мк исходит от зон, прилегающих к стенкам кварцевой трубки, а длинноволновое — от внутренних зон разряда. Излучение с длиной волны выше 300 мк составляет 70—80% всего излучения разряда. Приемники — металлические и полупроводниковые болометры, а также оптикоакустические приемники. В последнее время начинают все более широко применяться приемники, работающие при температурах жидкого азота и гелия угольные болометры, германиевые болометры и малоинерционные приемники из антимонида индия. [c.277]

Жидкостную хроматографию используют для выделения и очистки синтетических красителей, однако первой стадией является экстракция исходных материалов (продуктов питания, косметических средств и т. п.) или кристаллизация (в случае анализа коммерческих красителей). Затем красители концентрируют на колонке и отделяют от сопутствующих примесей. Следующим этапом может быть хроматография на бумаге, хроматография в тонком слое или спектрофотометрия. Общей задачей является также определение примесей (добавок, солей) в коммерческих красителях, которые затем должны быть проанализированы на колонке с сорбентом. Наконец, иногда требуется разделить смесь красителей на отдельные компоненты. В настоящее время к синтетическим красителям относятся вещества, сильно различающиеся по химическим и физическим свойствам. Поэтому выбор хроматографического метода зависит от поставленной задачи и типа красителя. Практически здесь применяют все известные неорганические сорбенты, иониты, гели декстрана, порошкообразную целлюлозу и полиамиды. Достаточно перспективным методом является также колоночная хроматография высокого разрешения. Возможности жидко-жидкостной хроматографии продемонстрированы на примере определения примесей в антрахиноновых красителях [1]. Хроматографию проводили в системе с обращенными фазами в качестве стационарной фазы использовали пермафазу ODS (Permaphase ODS), в качестве подвижной фазы — систему метанол—вода (15 85). [c.261]

Во всяком случае, для тщательной оценки результатов гель-хроматографического анализа полидисперсных полимеров требуется довольно большая вычислительная работа. При работе на приборе ГПХ вычисления занимают гораздо больше времени, чем собственно фракционирование. Поэтому Кантоу и др. [419, 120] разработали такую программу для вычислительной машины, которая в качестве исходной информации использует показания регистрирующего спектрофотометра и объемы выхода. Тогда выходными данными программы, помимо всего прочего, являются функция распределения по моле лярному весу, а также непосредственно величины и Мп-С помощью этой программы можно получить и всю остальную информацию, связанную с распределением по молекулярному весу. Гесс и Кратц [185] предлагают другой метод расчета. [c.186]

Для определения распределения белка внутри гранул носителя готовят тонкие срезы носителя с прикрепленным ферментом, принимая меры предосторожности против нарушения структуры матрицы. Для этого гранулы носителя включают в 20 /о-ную желатину. Частицы геля выдерживают 5 ч при 37 °С в растворе желатины, затем смесь переносят в подходящий для этих целей небольшой контейнер и оставляют на несколько часов в холодильнике. Желатиновые блоки замерзают, их режут микротомом на образцы толщиной 10 мкм. Полученные срезы наносят на предметные стекла и покрывают тонкими покровными стеклами для предохранения от высыхания. С помощью флуоресцентного спектрофотометра записывают спектры поглощения и излучения флуоресцеинизотиоцианата меченной флуоресцеином аминопептидазы, как свободной, так и связанной с агарозным или декстрановым носителем. [c.255]

Простой приближенный газовый анализ можно выполнить, если рассматривать разрядную трубку через спектроскоп. Так, например, неон в концентрациях 0,001 —1,0% можно определить в гелии по паре линий N6 6402 А — Не 6678 А, интенсивности которых равны друг другу при концентрации 0,08% [3]. На спектрофотометре в кварцевой разрядной трубке определяли кислород в дыхательных газовых смесях [4]. Используя линии триплета О 7772—7775 А и сииглетную линию О 8446 А, можно определять кислород в смеси кислорода и азота в интервале концентраций 3—30%, а в диоксиде углерода — в интервале О—21%. При этом аналитические кривые имеют прямолинейный вид. Воздух и другие активные примеси (Ог, N2, Нг) в инертном газе (аргон и гелий в соотношении 1 1) можно определять с цомощью простой-горелки Столлвуда с кварцевой трубкой в дуге постоянного тока при силе тока 20 А, горящей между вольфрамовыми электродами, содержащими 1 7о тория [5]. [c.179]

Метод трассирующего газа. Газ-трассер—гелий. Ввод трассера импульсный. азоанализатор— спектрофотометр. Двухфазная модель с продольным перемешиванием газа [c.108]

Образцы системы 8 02—Т Ог получены жидкофазным со-гидролизом этиловых эфиров ортотитановой и ортокремневой кислот [2] в водно-спиртовой среде с использованием в качестве катализатора 1 н. НЫОз, последующим самопроизвольным гелеобразованием гидролизата, старением геля в жидкости, синерезиса в течение 20 дн и термообработкой после фильтрации. Контрольные образцы чистых 5102 и ТЮг получали по той же схеме из тетраэтоксисилана и тетраэтоксититана соответственно. Спектральные характеристики снимали на спектрофотометре иК-Ю в области 1300—400 слг из таблеток, приготовленных прессованием тщательно растертой смеси [c.67]

Ртутно-гелиевая спектрофотометрическая лампа низкого давления РСФУ-2 используется для градуировки монохроматоров. Эта лампа входит в комплект спектрофотометра СФ-4 вместе со стабилизатором ЭПС-86, предназначенным для питания лампы. Увиолевое окно ее колбы пропускает коротковолновые излучения ртутных линий начиная от 226 ммк лучистый поток содержит, кроме спектра ртути, линии гелия с длиной волны 294, 319, 389, 447, 471, 492, 502, 588, 668 и 1083 ммк [36]. [c.66]

Из секрета печеночных митохондрий были изолированы два УФ высокомолекулярный и низкомолекулярный. Разделение удалось произвести путем хроматографии секрета на колонке с се-фадексом-Г50 по принципу фильтрации через гель [24]. Регистрация разделяющихся фракций производилась на спектрофотометре СФ-4 по поглощению света в области 280 и 260 тмк. Высокомолекулярный фактор поглощает свет преимущественно при 280 тмк и вызывает ускорение гликолиза печеночной РФ только в среде, насыщенной коэнзимами. Низкомолекулярный фактор поглощает свет преимущественно при 260 тмк и по ряду свойств, по-видимому, является адениннуклеотидом. Он дает усиливающий эффект только в среде с дефицитом коэнзимов. [c.115]

Эксклюзионная хроматография полимеров предъявляет ряд специфических требований к растворителям, используемым в качестве элюента при разделении [25, 106 ]. Эти растворители должны полностью растворять исследуемый полимер, иметь малую вязкость и быть устойчивыми к действию окислителей и препятствовать деструкции полимера в процессе анализа. Чем лучше термодинамическое качество растворителя, тем селективнее разделение. Растворитель должен обеспечивать максимальную чувствительность детектора, допускать быстрое выделение полимера из фракций, а также быть достаточно полярным, либо иметь полярные добавки (спирты, ТГФ), чтобы подавить адсорбцию полимера. В случае рефрактометрического детектора выбор растворителя определяется, при прочих равных условиях, максимальной разницей в показателях преломления полимера и растворителя. В случае абсорбционных детекторов (ИК- и УФ-спектрофотометров) растворитель должен обладать минимальной оптической плотностью в области рабочих длин волн детектора. При использовании в ка честве сорбента гелей необходимым условием является хорошее набухание геля в растворителе —элюенте. Иногда гидрофобные гели можно использовать для разделения водорастворимых полимеров, при введении в элюент ПАВ. Например, добавка 0,1% Ыа-ла-урилсульфата в воду позволяет проводить на стирогелях разделе ние декстранов [365]. [c.190]

Для приготовления конъюгатов смешивали 1 часть 0,1—0,01% стабилизированных в течение 1 нед растворов СгСЬ-бНгО и 9 частей растворов белков (САЧ, гам-ма-глобулин человека —ГГЧ и папаин) в 0,05 М растворе Na l с концентрацией белка 20 мг/мл. Инкубация при -f48° длилась И сут. Затем при 15 g осаждали денатурированную агрегированную фракцию, а элюат очищали от несвязавшегося хрома и белка путем гель-фильтрации на колонке с сефадексом G-25, уравновешенной 0,05 М раствором Na l, и обеззараживали, пропуская через миллипоровые фильтры. Конъюгаты хранили при +4°С в ампулах. Образование конъюгата подтверждалось во время спектрофотометрии в видимой и ультрафиолетовой части спектра по смещению максимума поглощения. [c.43]

Анализ ТМГ проводили следующим образом. Пробу ТМГ массой 0,5—1,0 г гидролизовали изопропиловым спиртом (ИПС) в атмосфере гелия. Вначале ампулу с ТМГ замораживали в жидком азоте, приливали ИПС немного больше Vs объема ТМГ и осторожно размораживали, не допуская бурной реакции. По окончании, реакции продукты гидролиза разрушали 40% раствором КОН (соотношение объемов 1 1). Щелочной раствор пробы ТМГ до 1 г помещали в мерную колбу на 25 мл и добавляли 5—10 мл HNO3 (1 1). Кислоту предварительно перегоняли и разбавляли бидистиллированной водой. Выпадающий при нейтрализации дсадок гидроокиси галлия через 5 мин полностью растворялся.. Затем добавляли бидистиллированной воды до 20 мл и после перемешивания приливали 1 мл 0,1 N раствора азотнокислого серебра, объем раствора доводили до метки водой и вновь перемешивали. Аналогичным, образом готовили раствор сравнения. Оба раствора выдерживали 20 мин в темноте, после чего измеряли оптическую плотность исследуемого раствора по отношению к раствору сравнения на спектрофотометре СФ-26 при длине волны 370 н м в кюветах толщиной 50 мм. Для построения калибровочного графика в мерные колбы на 25 мл вводили стандартный раствор КС1 с содержанием 0,1 мг С1 в мл в количестве 0 0,05 0,1 0,3 0,5 0,7 мл, добавляли 0,5 мл HNO3 (1 1) и далее все как при анализе пробы. [c.22]

Для окрашивания белков в цилиндриках геля используют те же приемы, что и для пластин. Окрашенные гели иногда ден-ситометрнруют с помощью сканирующих устройств, которыми оборудованы многие современные спектрофотометры. Об ограничениях метода денситометрирования окрашенных белковых полос для оценки содержания в них белков подробно сказано в первой книге [Остерман, 1981]. [c.41]

Я < 185 нм), из которого изготовляют оптические детали. Для работ в указанной области применяют приборы с дифракционными решетками и флюоритовон оптикой, внутри которых создается атмосфера водорода, гелия, азота. Для ИК-области используют специальные МК-спектрофотометры с диапазоном длии волн примерно 2,5—50 мкм. Получаемую с их помощью информацию регистрируют самопишущим потенциометром, цнфропеча-тающими устройствами или передают на связанную с прибором ЭВМ. [c.290]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология