Антитела концентрация li эффективность

НО актуальна при определении гормонов. Кроме того, обычно сыворотка содержит антитела к контаминирующим молекулам, находящимся в инъецируемой смеси, которые могут присутствовать в исследуемых образцах. Аффинная очистка на колонке с антигеном может в ряде случаев оказаться полезной (увеличить концентрацию, эффективность мечения антител, снизить фон), но не оказать влияния на специфичность по изложенным выше причинам. Данный метод не позволит [c.93]

Эту константу сродства, иначе называемую константой ассоциации (К ), можно определить, измерив концентрацию свободного Аг, необходимую для заполнения половины антиген-связывающих участков антитела. Когда половина участков заполнена, [АгАт] = [Ат] и X = 1/[Аг]. Таким образом, константа сродства антитела к антигену равна величине, обратной концентрации антигена, дающей половину максимального связывания. Обычные значения К варьируют в широких пределах-от 5 10 до 10 л/моль. Константа сродства, при которой молекулу иммуноглобулина перестают рассматривать как антитело к данному антигену, несколько произвольна, однако маловероятно, что антитело с К ниже 10 будет биологически эффективным. [c.27]

Таким образом, для практического осуществления описанного метода необходимо, прежде всего, установить наличие линейной зависимости между концентрацией определяемых непрямым методом ИФА антител и регистрируемым значением оптической плотности. Для этого готовят серии разведений исследуемой иммунной сыворотки и изучают их связывание в непрямом методе ИФА. Обычно эти зависимости имеют, вид кривых с насыщением. Для проведения эксперимента выбираются разведения антисыворотки, лежащие в линейном диапазоне кривой. Для установления равновесной константы диссоциации комплекса Аг-Ат концентрацию антигена варьируют в диапазоне от 10 до 10 М. На рис. 20 приведен график для определения Кд комплекса ПХ-Ат. Однако вычисленные этим методом значения констант диссоциации комплекса Ат- Аг являются эффективными, поскольку при выборе уравнения не учитывается влияние взаимодействия антител с антигеном, сорбированным на твердой фазе, на равновесие в растворе. [c.162]

Быстрое разделение компонентов возможно в одной из модификаций данной схемы с использованием меченых специфических антител, что устраняет необходимость второй стадии и приводит к значительному сокращению длительности анализа в целом. Однако следует иметь в виду, что эффективное увеличение концентрации антигена на твердой фазе возможно не во всех случаях. [c.253]

Являясь аналогом лиганда, М—Л может эффективно конкурировать с ним за ограниченное число антител к Л. Однако при связывании с антителами М—Л утрачивает модулирующую активность. В условиях анализа соотношение между связанным с антителами и свободным, несвязанным конъюгатом М—Л зависит от концентрации Л. Свободный М—Л функционален, т. е. способен модулировать активность индикаторного фермента, тогда как связанный М—Л не функционален, т. е. не может модулировать ферментативную активность (Ngo, 1983). [c.57]

Несмотря на огромный молярный избыток антител, меченных пероксидазой хрена (ПХ), по сравнению с антигеном (кратный примерно 10 при самой высокой. концентрации антигена) фоновый сигнал, вызываемый несвязанной ПХ, невелик. Это объясняется тем, что фоновую реакцию эффективно подавляет каталаза. Как видно из рис. 8-14, с ростом концентрации каталазы фон уменьшается, тогда как сигнал, характерный для антигена, существенно не изменяется. [c.120]

Большинству иммунологических методов анализа, которые, как правило, являются гетерофазными методами, присущи ограничения, связанные с диффузией. Антиген должен достичь иммобилизованных на твердой фазе антител и вместе с тем связаться с ферментным конъюгатом. При этом антиген и конъюгат должны мигрировать через реакционную среду. При наличии большого избытка антител, иммобилизованных на носителе, адсорбция антигена даже из растворов с очень низкой концентрацией будет проходить весьма эффективно. В роли фактора, направляющего процесс, в этом случае выступает высокая концентрация иммобилизованных антител. Реакции в жидкой фазе также определяются концентрацией антител. В то же время присутствие реагентов в высокой концентрации сводит к минимуму проблемы, связанные с диффузией. Ввиду высокой концентрации антител фактически отпадает необходимость в миграции молекул на значительные расстояния. Благодаря этим эффектам анализ обладает высокой чувствительностью и проводится очень быстро. [c.387]

Вы хотите измерить концентрацию инсулина (молекулярш масса 11 466) в образце, пользуясь инсулином, меченным радиоа тивным йодом (период полураспада 7 сут). Предположим, чт мечение производится из расчета один атом радиоактивного йод на молекулу инсулина, что йод не влияет на связывание инсулин антителами, что эффективность счета (вероятность зарегистриро вать каждый радиоактивный распад как импульс ) составляв 50%, а минимальное общее количество радиоактивности (связав ная + свободная) для данного метода должно быть не менее 1 ОН импульсов в минуту (имп/мин). [c.218]

Цель задачи — исследовать эффективность очистки антител из антисыворотки на иммуносорбентах, полученных при иммобилизации глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназы на препаратах сефарозы, активированных при разной концентрации Br N. [c.304]

Лекарственные вещества, связанные с моноклональными антителами Лекарственные вещества, проявляющие высокую активность при тестировании in vitro (обычно в культуре клеток), зачастую оказываются значительно менее эффективными in vivo. Кажущееся снижение их активности объясняется тем, что они не достигают органа или клетки-мишени в нужной концентрации. Увеличение дозы принимаемого препарата не решает проблему, поскольку при этом часто возникают побочные эффекты. Более того, чтобы избежать таких эффектов, многие терапевтические средства заведомо вводят в дозах, не достигающих оптимальных, что дополнительно снижает их эффективность. Для облегчения доставки лекарственного вещества к месту его действия используют несколько приемов. 1. Заключают его в особые частицы - липосомы, липидная обо- [c.212]

Метод, разработанный Коном и Эдсоллом, включает фракционное осаждение спиртом при низкой температуре и подходящей вариации значений pH и имеет то преимущество, что в этих условиях на растворимость белков заметно влияет ничтожно малое изменение концентрации солей. Этим методом были получены пять основных фракций, которые не были гомогенными, но оказались пригодными для клинических целей и дальнейшего фракционирования на индивидуальные компоненты. Одна фракция состоит в основном из альбумина и особенно эффективна как противошоковое средство. Другая фракция содержит у-глобулин, который захватывает большое количество антител. Эти белки образуются в живом организме ш ответ на проникновение чужеродных тел (антигенов), например белков различных патогенных организмов. Эта фракция находит клиническое применение для предохранительной временной пассивной иммунизации к различным болезням. Примерно десять глобулинов, принадлежащих к этим трем типам, были получены в индивидуальном, состоянии. Два, из них являются липопротеннами или, может быть, различными формами одного и того же липопротеина. Липопротеины крови состоят из белка, фосфолипи- [c.656]

Гомогенность и специфичность центров связывания моноклональных антител делают их особенно удобными для использования в иммуноаффинной хроматографии. В табл. 6.15 мы приводим высокоэффективный метод получения иммуносорбентов для колонок и их применения, а также различные варианты условий элюции, которые позволили нам очень эффективно с сохранением их биохимической активности очистить макромолекулы, обладающие высокой чувствительностью к воздействию оазличпых агентов и находящиеся в низкой концентрации. [c.196]

Так как молекулы антител обладают, по крайней мере, двумя центрами связывания, то при взаимодействии с поливалентным антигеном возможно образование так называемых комплексных связей, когда после взаимодействия одного активного центра молекулы антитела с одним из эпитопов второй активный центр взаимодействует с расположенным поблизости вторым эпитопом той же молекулы антигена. Общая эффективность взаимодействия в этом случае существенно возрастает в частности, эффективная константа комплексообразования для молекулы IgG может в 10 раз и более превышать Ко одиночных связей. Частота образования таких связей зависит от концентрации реагентов и мо ет колебаться от нуля до максимальной, соответствующей общему количеству молекул IgG в Системе. [c.47]

При выборе твердофазных схем определения следует учитывать, что скорость достижения равновесия в системе иммобилизованный реагент — анализируемое соединение зависит не только от концентрации компонентов, но может снижаться за счет микро-диффузионных эффектов. На анализ в таких системах, как правило, затрачивается время не менее нескольких часов. Переход к гомогенно-гетерогенным методам, в которых реакция образования первичного специфического иммунокомплекса протекает в растворе, значительно снижает время достижения равновесия на первой стадии. При этом сокращается и время анализа в целом, так как для разделения компонентов используется избыток иммобилизованных вторичных антител. Осуществление стадии узнавания в гомогенной фазе повышает также и точность анализа, которая определяется точностью дозирования компонентов. В тех случаях, когда анализируемая среда содержит эндогенный фермент, кофактор или эффектор, твердофазные неконкурентные методы являются наиболее эффективными. [c.102]

Применение в ИФА антигенов и антител, иммобилизованных на нерастворимых носителях, дает возможность эффективно разделять компоненты аналитической системы перед стадией определения концентрации ферментной метки. Такой подход универсален и может применяться для широкого круга соединений — от гаптенов до микробных клеток. Однако нерастворимые иммуносорбенты имеют и некоторые отрицательные стороны, а именно 1) возможность неспецифического связывания компонентов с носителем 2) значительное время анализа (до нескольких часов) из-за длительности реакции антиген — антитело, определяемое низкой концентрацией иммобилизованного агента- (например, при использовании непористых сорбентов — полистирольных плат или пробирок) или диффузионными затруднениями при использовании пористых сорбентов (сефароза, пористое стекло, силохром и т. д.) 3) методические сложности, связаниью с трудностями точного дозирования и промывок иммуносорбентов па основе пористых носителей 4) существенное влияние неоднородности сорбциоииых свойств полимерных носителей (микроплаты и пробирки из полистирола, поливинилхлорида, полиметилметакрилата и т. д.) на точность и воспроизводимость результатов анализа. [c.111]

Количественной мерой в данном методе является коэффициент разделения компонентов, равный отношению концентраций меченого соединения в верхней и нижней фазах. В ряде случаев эффективность разделения может быть существенно увеличена при использовании связыва/оы его агента (антитело, лектин, белок А стафилококка), предварительно модифицированного монометоксипо-лиэтиленгликолем. Метод может быть применен для анализа гаптенов, макромолекулярных антигенов и целых клеток. [c.113]

Таким образом, в данной системе конъюгат выстзшает в роли как аналога антигена, способного эффективно конкурировать за цеПтры связывания антител, так и субстрата фермента. Очевидно, что концентрация определяемого этим способом антигена должна быть сравнима с концентрацией конъюгата в растворе, поэтому чувствительность анализа в данном случае невелика и лежит в микромолярной области концентраций. Метод был использован для определения ряда лекарственных соединений, иммуноглобулинов О и М человека. [c.121]

Иммуноферментные наборы, основанные на принципе EMIT, в настоящее время являются наиболее эффективным средством для быстрого определения наркотиков и лекарственных соединений. Если ранее широкое применение гомогенного ИФА сдерживалось возможностью определения только низкомолекулярных антигенов, то разработанные в последние годы подходы позволяют проводить быстрый количественный анализ макромолекулярных белковых антигенов и антител. К ограничениям применения гомогенных методов следует отнести меньшую чувствительность, чем в гетерогенном ИФА (исключением являются системы с биолюминесцентной детекцией), и сложность анализа биологических сред, содержащих в значительной концентрации эффекторы или кофакторы фермента. [c.123]

Определение титра аитисыворотки. Титр — это эффективная величина, характеризуюи ая связывающую способность антител, зависящая от их концентрации и аффинности. Абсолютное значение титра также зависит от метода и условий проведения эксперимента (температуры, времени, pH и т. д.) и от начальной концентрации свободного антигена. [c.157]

Концентрация фракции антител с высоким эффективным значением константы связывания, как правило, значительно ниже, чем с низким. Для разработки суперчувствительных систем детекции бывает необходимо выделять наиболее высокоаффинную фракцию и использовать в анализе только ее. Это может достигаться путем адсорбции антител на иммобилизованном антигене и последующей их элюцией линейным или ступенчатым градиентом pH, что [c.220]

Описан также электрод, селективный к дигоксину калий-се-лективная мембрана этого электрода состоит из ковалентно связанного с дигоксином бензо-15-крауна-5 и поливинилхлорида [8 ]. Принцип иммуноанализа состоит в конкурентном связывании ди-, гоксина в мембране и в пробе с ограниченным количеством антител. В ходе анализа некоторое количество конъюгата ионофора связывается антителами на внешней поверхности мембраны, что снижает способность мембраны к транспорту ионов. Количество связанного конъюгата обратно пропорционально концентрации дигоксина в растворе. При данной кс нцентрации иона калия на электродный потешщал влияет эффективность удаления различного количества ионофора из мембраны. Калибровочная кривая постро-ога в диапазоне концентраций дигоксина 1-100 нмоль/л. [c.212]

II. Пневмокок,ки типа III, антитела к углеводному компоненту S3. Очищенный компонент пневмококка S3 обладает чрезвычайно низкой иммуногенностью (или не обладает совсем) для кролика. Однако введенный в/в вместе с мембранными белками убитых нагреванием микроорганизмов, он вызывает эффективное образование IgG, отличающихся высокой типовой и антигенной специфичностью. С помощью повторных курсов получают не менее 5 мг/мл специфических антител, и у многих животных можно повысить концентрацию IgG в сыворотке до 20 мг/мл и более. Данный ответ не зависит от влияния белковых иммуногенов на синтез антител. В одном из наших экспериментов [38] кролики получали не менее двух курсов по девять в/в инъекций в течение 19 дней начальная доза составляла 10 микроорганизмов, с шестой инъекции — 4- 10 , а в конце дозу доводили до 10 ° микроорганизмов. Кровь забирали через 3—4 дня после последней инъекции. [c.84]

К опытам с конкурентным равновесием приступают обычно уже тогда, когда определены равновесные параметры хотя бы одного из конкурентов. Предварительный опыт имеет лишь одну задачу — определить эффективную область, концентраций ингибитора. Это значит, что при равновесном диализе следует начинать с такой исходной концентрации гаптена, которая обеспечит измеримое количество свободного гаптена в отделенном компарт-менте после 95%-ного связывания. Исходные концентрации ингибитора, в 10, 100 и 1000 раз большие, обычно перекрывают область, в которой доля измеряемого свободного гаптена возрастает от 5 до 50%. Этот диапазон и следует использовать в основном эксперименте. При равновесной фильтрации и седиментации стартовая концентрация антител должна выражаться титром 1000, а исходная концентрация исследуемого антигена должна уменьшать этот титр в 20—50 раз, т. е. связывать в отсутствие конкуренции 95—98% антител. Область концентраций тормозящего антигена должна быть такой, чтобы титр антител уменьшался вместо этого в 5—20 раз. [c.51]

Как видно из рис. 2, препаративное ИЭФ — это метод, позволяющий эффективно разделять очень близкие клонотипы антител, получая от трех до пяти полос в тех случаях, когда другие методы выявляют лишь одну полосу. Таким образом, метод позволяет изучать молекулярные основы гетерогенности гомологичных антител. Кроме того, с помощью препаративного ИЭФ можно избирательно сконцентрировать белки одного клонотипа, находящиеся в иммунной сыворотке в очень низкой концентрации и не определяемые обычными методами. [c.141]

МЛ Ю7о-ной суспензии на мышь. Наряду с опытной группой животных, получивших фактор, антиген и В-клетки, необходимо ввести две контрольные группы, из которых одна получала бы В-клетки и антиген, а другая (в качестве контроля на антигенную специфичность) — фактор, В-клетки и контрольный антиген, не дающий перекрестных реакций с испытуемым. Для сравнения в опыт следует также включить группы животных, получающих либо только Т-клетки, либо только В-клетки, либо один лишь испытуемый антиген. Через 8—14 дней после переноса (в зависимости от природы антигена и линии мышей) у животных берут кровь и извлекают селезенку. Целесообразно и титровать сывороточные антитела, и определять число антителообразующих клеток (АОК) в селезенке. Для этого используют общепринятые методы, применяя в качестве индикаторных клеток эритроциты, сенсибилизированные испытуемым антигеном. Синтетические полипептиды обычно присоединяют к БЭ с помощью хлорида хрома (III). Условия оптимального присоединения варьируют в зависимости от природы эритроцитов и антигена, и их следует определять заранее. Обычно смешивают в указанной последовательности равные объемы осадка эритроцитов, антигена (в концентрации от 1 до 10 мг/мл) и СгС1з (1—10 мг/мл). Все ингредиенты реакции готовят на физиологическом растворе без фосфатов. Смесь инкубируют 5 мин при комнатной температуре, затем добавляют избыток физиологического раствора, забуференного фосфатами, и клетки тщательно отмывают. Если при этом наблюдается выраженный гемолиз, содержание СгС1з следует уменьшить. Эффективность сенсибилизации эритроцитов проверяют непосредственно после присоединения антигена в реакции агглютинации со стандартной антисывороткой. В большинстве случаев к эритроцитам присоединяют антиген, использованный для иммунизации. Однако в случае, если антигеном служит (Т, 0)-А-Ь, для определения АОК в качестве индикаторных клеток обычно используют эритроциты, сенсибилизированные (Т, 0)-Рго-Ь, которые, как правило, дают более легко учитываемые зоны гемолиза. [c.331]

Берд и Вонг (Burd, Wong, 1977, 1979) разработали иммуноферментный анализ без разделения компонентов, основанный на использовании связанных с лигандом флуорогенных субстратов. В этом методе (рис. 2-4) производное лиганда ковалентно соединяют с флуорогенным субстратом фермента, получая прочный конъюгат [субстрат — лиганд (С—Л)], который конкурирует с определяемым веществом за имеющиеся в ограниченной концентрации антитела к Л. В результате по реакциям I и II образуются Л Ат и С—Л Ат. Когда в растворе нет определяемого вещества Л, конъюгат С—Л связывается с антителами против Л при этом индикаторная реакция III не идет, так как связанный с антителами конъюгат С—Л Ат в отличие от свободного С—Л не является субстратом фермента. Однако при увеличении концентрации Л количество свободного С—Л, чувствительного к ферменту, будет возрастать и, следовательно, по реакции III будет образовываться большее количество продуктов. Таким образом, конъюгат [флуорогенный субстрат — лиганд (С—Л)] играет двойную роль а) как аналог лиганда С—Л успешно конкурирует за связывание с антителами к лиганду б) как эффективный аналог субстрата С—Л участвует в индикаторной реакции III с образованием продуктов. [c.17]

Для решения этой проблемы можно использовать следующие приемы а) увеличивать концентрацию иммобилизованного антигена, б) удалять из смеси конкурирующие антитела, присутствующие в высокой концентрации, например IgG, или в) использовать альтернативную схему анализа сначала связывать иммуноглобулины данного класса, например IgE, и затем тестировать их антиген-связывающую активность. Последний прием был успешно использован в работе Цейса и др. (Zeiss et al., 1973), мы же остановились на втором. Первый из названных приемов, вероятно, является наименее эффективным, поскольку, как было показано выше, возникающие при его применении пространственные затруднения могут существенно снижать эффективность детектирования еще до насыщения антигена. [c.232]

Преимущества, присущие моноклональным антителам, обусловлены их гомогенностью. При работе в условиях избытка реагентов преимущества метода меченых антител достаточно очевидны. Во-первых, при использовании иммобилизованных на носителе антител, эффективно осуществляющих первичный захват тестируемого антигена, значительно ослабляется, а в некоторых случаях и полностью подавляется эффект насыщения, называемый эффектом загиба в области высоких концентраций (Ryall et al,, 1982), С проблемой насыщения приходится сталкиваться практически в любой системе прямого тестирования. В связи с этим создание системы анализа, в которой эта проблема исключается, имеет особо важное значение. Использование моноклональных антител позволяет одновременно легко получить сорбенты с очень высокой емкостью и вводить в систему меченые антитела в высокой концентрации. Для систем, работающих в режиме избытка антител, характерны не только быстрое выполнение анализа и высокая чувствительность определения, но и возможность использования тестируемого антигена в чрезвычайно широком диапазоне концентраций. Концентрационный диапазон, охватываемый в системах анализа, основанных на применении меченых антител, обычно в 3—10 раз шире диапазона, доступного для конкурентного анализа с применением меченого антигена. [c.388]

Располагая системой ИФА, в которой видимая глазом окраска развивается при содержании в образце антигена в концентрации, соответствующей некоторому положительному диагнозу, можно разработать простой метод эффективного скрининга многочисленных пациентов. Так, с использованием двухцентрового ферментативного иммунометрического анализа на базе моноклональных антител была разработана методика определения беременности, основанная на обнаружении в крови хориогонадотропина. [c.394]

Помимо наследственных, бывают патологии окислительного фосфорилирования, обусловленные интоксикациями. Так, хроническое потребление этанола бабуином вызывает двукратное снижение концентрации цитохромоксидазы и ее активности, а также некоторое уменьшение содержания фосфолипидов (прежде всего фосфатидил-холина и кардиолипина) благодаря активации фосфолипазы Аг. Отмечено также, что у крыс, получавших этанол, ослабляется связь фактора с митохондриальной мембраной и снижается эффективность окислительного фосфорилирования. В крови пациентов, страдающих первичным желчным циррозом, обнаружены аутоиммунные антитела к АТФ/АДФ-антипортеру. Резкое торможение окисления пирувата, а-кетоглутарата и пальмитоилкарнитина наблюдается в митохондриях бегунов на длинные дистанции. [c.241]

Важная аксиома биологии гласит, что эффективность биохимической реакции зависит от степени связывания или слипания разных молекул. Взаимодействие между отдельным центром связывания антитела с комплементарным ему антигеном можно оценить количественно. Для этого в пробирке смешивают антиген и антитело в разных концентрациях и определяют, какая часть смеси находится в связанной форме (комплекс антиген-антитело), а какая — в несвязанной (рис. 3.6). Этот метод дает возможность оценить аффинность (сродство) антигенсвязывающего центра. Когда связывается больше одного центра, как у IgG или мономера IgM, имеющих по два центра, или у пентамера IgM с десятью центрами, в действие вступает новый фактор. Если чужеродный агент имеет на поверхности множество идентичных структур (как у бактериальных или вирусных частиц), то, как только происходит одно взаимодействие антиген-антитело, вероятность второго возрастает, и так далее (рис. 3.7). Таким образом, пентамер IgM может прилипать к поверхности бактерии, даже если аффинность отдельного антигенсвязывающего центра низка (из-за относительно плохого соответствия антигену). Сила такого множественного связывания антигена с антителом называется авидностью. Итак, высокая авидность IgM обеспечивает организму селективные преимущества, так как он образуется в первые часы и дни инфекции и способен связывать бактерии в крови и вызывать их элиминацию. [c.83]

Смотреть страницы где упоминается термин Антитела концентрация li эффективность: [c.670] [c.570] [c.585] [c.241] [c.347] [c.252] [c.111] [c.165] [c.435] [c.237] [c.87] [c.216] [c.39] [c.49] [c.219] [c.266] [c.18] [c.73] [c.184] [c.413]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология