Неподвижные фазы производные аминокислот

Свойства подвижной и неподвижной фаз. При подборе подвижной и неподвижной фаз, а также носителя необходимо учитывать их свойства. Если носителем является гидрофильное вещество, то в качестве неподвижного растворителя применяют воду, а в качестве подвижного— органический растворитель. Например, для разделения смесей полярных веществ (аминокислот, производных пиридина и других) применяют полярный неподвижный растворитель — воду, который хорошо удерживается на таких гидрофильных носителях, как силикагель, порошок целлюлозы и др. Подвижной фазой в этом случае может служить насыщенный водный раствор фенола, н-бутанол и др. Если же носитель— гидрофобное вещество, то неподвижным растворителем должно быть неполярное вещество (масло, керосин, бензол, парафин), а подвижным — полярные органические вещества и вода. Разделение происходит вследствие различной растворимости компонентов в неподвижной фазе. [c.282]

В качестве расщепляющих неподвижных фаз используют белки, производные аминокислот, оптически активные производные мочевины, углеводов. Иногда расщепляющая среда создается за счет спиральной вторичной структуры полимеров. [c.331]

При решении задачи разделения аминокислот и их производных Мартин и Синдж [32] ряд лет шли другим пуч ем. Используя распределительную-аппаратуру, они разработали распределительную хроматографию. Для этого они закрепляли одну из фаз (неподвижную фазу) на носителе, например порошкообразном силикагеле, и затем заполняли им колонку. В качестве растворителя , называемого в данном случае подвижной фазой, использовали, например, хлороформ. [c.12]

Разнообразие имеющихся в настоящее время жидких фаз ГХ, многие из которых применялись для разделения производных аминокислот, ставит исследователя в затруднительное положение. В ряде работ [13, 14, 27,, 29, 40] проведена оценка приблизительно 100 неподвижных фаз, включая силиконы, поверхностно-активные соединения, полиэфиры, полигликоли, металлоорганические соединения и многие другие. Стараясь выделить наиболее характерные особенности, мы опустим подробности, касающиеся размеров колонок, температурных режимов, потоков газов-носителей и условий нанесения жидких фаз. [c.118]

Неподвижные жидкие фазы, твердые носители и детекторы, применяемые при газохроматографическом анализе летучих производных аминокислот [c.75]

Производные аминокислот Неподвижная жидкая фаза Литература Твердый носитель Литература Детектор Литература [c.76]

В отличие от адсорбционной хроматографии распределительная хроматография особенно пригодна для разделения близких членов гомологических рядов, отличающихся главным образом не химическими или адсорбционными свойствами, а растворимостью. Так, на колонке с силикагелем, применяя в качестве неподвижной фазы воду, а в качестве подвижной фазы смеси бутилового спирта и хлороформа, удается легко разделять ацетильные производные алифатических аминокислот или незамещенные карбоновые кислоты, если постепенно увеличивать содержание бутилового спирта в хлороформе. При этом, например в слз чае смеси низших нормальных карбоновых кислот, в первую очередь при применении смеси хлороформа с 1% бутилового спирта вытесняются такие наименее полярные соединения, как масляная и пропионовая кислоты для вытеснения уксусной кислоты необходимо увеличить содержание бутилового спирта до 5—10%, а муравьиная кислота вытесняется из колонки только тогда, когда содержание бутилового спирта в хлороформе превысит 20%. [c.281]

Свойства подвижной и неподвижной фаз. При подборе подвижной и неподвижной фаз, а также носителя необходимо учитывать их свойства. Если носителем является гидрофильное вещество, то в качестве неподвижного растворителя применяют воду, а в качестве подвижного — органический растворитель. Например, для разделения смесей полярных веществ (аминокислот, производных пиридина и других) применяют [c.303]

Хроматография оптических изомеров (особенно энантиомеров) представляет особый интерес как метод определения степени рацемизации аминокислот в ходе пептидного синтеза и анализа природных пептидов, содержащих остатки О-аминокислот. Для газохроматографического разделения таких изомеров либо используют оптически активную неподвижную фазу, либо в молекулы анализируемых производных вводят второй асимметрический центр и получают таким образом пары диастереомеров. [c.79]

А. Дж.П. Мартин, Р. Л.М. Синг Создание жидкостно-жидкостной (распределительной) хроматографии. Разделение аминокислот и их ацетильных производных на силикагеле, смоченном водой (неподвижная фаза), в потоке органического растворителя (хлороформ, тилацетат) [9] [c.8]

При использовании в качестве носителя гидрофильного вещества неподвижным растворителем является вода, подвижным — органический растворитель. Например, для разделения смесей полярных веществ (аминокислот, производных пиридина и др.) применяются сорбенты, хорошо удерживающие полярный неподвижный растворитель (воду) — силикагель и порошок целлюлозы. Подвижной фазой может служить насыщенный водный раствор фенола и другие вещества. [c.73]

Производные первой группы аминокислот хорошо хроматографировались на относительно неполярных неподвижных жидких фазах ЗЕ-ЗО и 0У-1. Лучшее разделение их было получено на колонке с 7—10% ДС-560, однако на ней не делились производные лейцина и изолейцина. Последние удовлетворительно разделялись на ОУ-220. [c.57]

В качестве хиральных реагентов для получения пригодных для хроматографии диастереомерных производных аминокислот используют оптически активные амиловый спирт как компонент этерификации для N-пентафтор-пропиониламинокислот [178] и а-хлоризовалерилхлорид как аш1лирующий компонент для эфиров аминокислот [179]. Применение продажных стеклянных капилляров с готовой неподвижной фазой обеспечивает оптимальное разделение большинства аминокислот. [c.64]

Проблема получения эффективных ХНФ для разделения энантиомеров методом ГХ достаточно сложна. Во-первых, ХНФ должна иметь необходимые термические свойства низкую температуру плавления и высокую температуру кипения. Использование три-и более высоких пептидов в качестве пептидных фаз ограничено из-за высоких температур плавления этих соединений. В то же время многие производные самих аминокислот имеют низкую температуру плавления и такое высокое давление пара, что это приводит к сильному вымыванию неподвижной фазы при рабочих температурах колонки. Во-вторых, стереохимическая структура ХНФ должна допускать хиральную дискриминацию, т. е. диастереомерные сольваты, образующиеся при растворении рацемического сорбата в ХНФ, должны различаться по энергии. В-третьих, эффективность колонки, т. е. число теоретических тарелок, должно быть высоким, что предполагает отсутствие ухудшения процессов массопередачи. [c.88]

Как правило, увеличение селективности разделения энантиомеров а достигается понижением температуры колонки. Причина этого заключается в различном влиянии температуры на энтальпию ассоциации энантиомеров с неподвижной фазой это различие уменьшается с ростом температуры (см. разд. 5.3). Отсюда следует, что производные должны быть по возможности более летучими. Однако полярные соединения часто лучше разделяются на энантиомеры, чем неполярные. Это, в частности, было установлено при изучении разделения производных 2-оксикислот, амиды которых показывают большие значения а, чем соответствуюшие сложные эфиры. Экспериментально также было найдено, что на дипептидных фазах N-тpифтopaцильныe производные эфиров аминокислот разделяются лучше, чем соответствующие Ы-пентафтор-пропионильные (N-ПФП) или Ы-гептафторбутирильные (Н-ГФБ) производные. [c.88]

Большое распространение в последнее время получила хроматография на полиамиде (е-поликапролактаме). Было показано, что полиамиды в зависимости от способа получения обладают различной разделительной способностью [154]. В качестве связующего для полиамидных слоев хорошо зарекомендовала себя целлюлоза [43, 154]. Полиамид применяли также и для приготовления незакрепленных слоев [154]. Помимо целлюлозы в качестве связующего можно использовать крахмал. Слои с пре-красны.ми механическими свойствами мол<но получить из смеси полиамида, силикагеля и крахмала [94]. Полиамид пригоден для разделения фенолов. В этом случае при использовании водных систем растворителей характер разделения аналогичен получаемому при применении хроматографии с обращенными фазами, т. е, в системе с гидрофильной неподвижной фазой (см. разд. 3.2.1.3) [154]. Необходимо помнить, что элюотропный ряд растворителей в случае полиамида совершенно иной, чем применительно к другим сорбентам. Это объясняется разным характером взаимодействия между хроматографируемым веществом и сорбентом. Помимо фенолов в тонком слое полиамида хроматографировали антипиретики [54], тиаминовые производные [60], антибиотики [77], консервирующие вещества [57, 90], аминокислоты и их производные, нуклеозиды и нуклеотиды [163, 164] и другие соединения. Хроматографируемые вещества хорошо вымываются из полиамидного слоя, поэтому пластинки с полиамидом можно использовать для повторных разделений [163]. [c.41]

Продолжая свои тщательные исследования. Ислам и Дарбр улучшили разделение метиловых эфиров N-ТФА-аминокислот (за исключением гистидина) на смешанной силиконовой неподвижной фазе, состоящей из ХЕ-60 — QF-1 — МС-200, 100 сСт (46 27-.27), на диатопорте-S, комбинируя программирование температуры и изотермический процесс [156]. Высокоочищенные радиоактивные н-бутиловые эфиры N-ТФА-аминокислот получали после хроматографии на силикагеле [163]. При хроматографировании этих радиоактивных производных на колонке с ХЕ-60 — QF-1—МС-200, ЮОсСт (46 27 27), нанесенными на целит 560, не вся радиоактивность была связана с пиком элюируемой аминокислоты [151]. Значительная доля активности распространялась по оставшейся части хроматограммы, главным образом после соответствующего пика. Исключение составлял метиловый эфир ТФА-фенилаланина 13,1% активности выходило перед элюированием производного, причем активность не была связана со вторым пиком. Метиловый эфир фенилаланина более летуч, чем соответствующее ТФА-производное, поэтому отмеченное явление согласуется с медленным непрерывным разложением последнего на колонке. Следует подчеркнуть, что это наблюдение относится только к данной жидкой фазе и данному носителю. К сожалению, отсутствуют сопоставимые исследования других производных, носителей и жидких фаз. [c.135]

Развитие хроматографических методов разделения и идентификации аминокислот значительно облегчило проведение исследований с аминокислотами многие успехи, достигнутые в изучении аминокислот за последнее время, непосредственно связаны с применением хроматографии. Занимаясь разделением аминокислот, Нейбергер [154] в 1938 г. обнаружил, что у ацетил-производных разных нейтральных аминокислот коэффициенты распределения между водой и несмешивающимися с водой растворителями различны. В 1941 г. хМартин и Синг [155] осуществили разделение ацетилированных аминокислот на силикагеле последний служил инертной опорой для водной фазы, через которую протекал неводный растворитель. В дальнейшем эта техника была усовершенствована. Большим достижением явилось использование фильтровальной бумаги в качестве неподвижной фазы [156], что привело к широкому развитию разнообразных методов хроматографии на бумаге (см. Блок и др. [157]). В настоящее время считают, что в процессе разделения веществ на бумаге наряду с распределением между растворяющими фазами играют роль также механизмы адсорбции и ионного обмена. [c.40]

Такие полисиликоны с ковалентно подсоединенными аминокислотными или пептидными остатками могут применяться как неподвижные фазы при температуре 70—240 °С для разделения оптических изомеров аминокислот, спиртов, аминов, производных дифенила, причем не обязательно, чтобы стереоизомеры были диастереомерами. На неподвижной фазе с ь-аминокис-лотными остатками о-энантиомер всегда элюируется перед L-энантиомером, так как последний образует максимальное число водородных связей с неподвижной фазой. Для о-конфигурации это невозможно из-за пространственных ограничений. Так, например, значения коэффициентов разделения ol/d N,0-пер (пентафторпропионильных) производных антиподов боль- [c.140]

В области разделения веществ с очень малой летучестью (сахара, аминокислоты, нуклеозиды, нуклеотиды, полимеры) без использования производных многого можно ожидать от метода, в котором подвижной фазой является газ, находящийся при температуре и давлении выше критических (при давлениях порядка 2000 атм большинство газов- напоминают жидкости и имеют свойства, аналогичные свойствам жидкостей, и их можно использовать в качестве растворителей) [170]. Следующим шагом в развитии ГЖХ являются последние достижения в области жидкостной хроматографии, такие, как высокоскоростные [171, 172] и высокоэффективные [171, 173] системы, а также новые неподвижные фазы и носители (например, щетки Халаша [174] и носители с контролируемой пористостью [172]). Все зто делает жидкостную хроматографию весьма привлекательной для исследователей, работающих со сложными смесями нелетучих веществ . Специалист по газовой хроматографии не должен предубеждать себя против этих новых методов они наверняка окажутся полезными и интересными. [c.326]

В газовой хроматографии на открытых капиллярных колонках внутренние стенки колонок перед нанесением неподвижной фазы подвергают щелочной обработке или травлению. Так, авторы работы [25] обрабатывали капилляр из мягкого стекла 2,5 н. раствором гидроксида натрия в течение 2 - 8 ч при ЮО С. Полученную таким образом колонку использовали для разделения сильных производных аминокислот. Оптимальные условия предварительной обработки колонок такого типа подробно изучены Исии и сотр. [45]. [c.66]

Даванков и сотр. [ 79] показали, что для разделения немодифицированных а-аминокислот методом лигандообменной хроматографии очень эффективны хиральные неподвижные фазы на основе производных аминокислот, В ранних работах Даванкова и сотр. [79], а также Лефебура и сотр. [ 80] хиральные лиганды привязывали к хлор-метилированному полистиролу. Хотя для некоторых распространенных а-аминокислот наблюдалась высокая стереоселективность (а > 1,5), эти колонки пригодны только для аналитических целей. Гюбитц и сотр. [81] решили эту задачу, привив ь-пролин на модифицированный силикагель, и получили высокоэффективные колонки. [c.152]

Во всех рассмотренных до сих пор примерах расщепление достигалось за счет хирального адсорбента (хиральной неподвижной фазы). Однако хиральность может быть создана и в подвижной фазе. Например, добавляя (+ )-Л ,Л -диизопропилтартрамид к смеси хлороформа и гексана, удается создать подвижную фазу, с помощью которой можно расщеплять энантиомерные 1,2-диолы, различные производные рацемических гидрокси- и аминокислот [68]. В качестве хиральной подвижной фазы можно также использовать раствор цинкового комплекса -аспар-гил- -фенилаланина [69]. [c.65]

Адсорбционная хроматография аминокислот на неполярных неподвижных фазах, впервые предложенная в сороковых годах, в период после пятидесятых годов в какой-то степени утратила свое значение в связи с разработкой метода ионообменной хроматографии. Однако развитие высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) вновь пробудило интерес к этим фазам. Сравнивая методы ВЭЖХ, ионообменной и газовой хроматографии применительно к разделению аминокислот, следует иметь в виду, что автоматическое оборудование для ионообменной хроматографии дорого и пригодно только для анализа аминокислот, причем полное разделение 20 природных аминокислот занимает около 60 мин, для газохроматографического анализа необходима предварительная модификация аминокислот с целью получения их летучих производных, что возможно далеко не во всех случаях. Однако метод ВЭЖХ является весьма гибким и с помощью сравнительно недорого оборудования позволяет решать разнообразные проблемы, связанные с изучением различных веществ. В частности, 20 аминокислот можно разделить данным методом менее чем за 40 мин. В результате многочисленных систематических исследований сорбентов установлено, что химически связанные фазы являются наилучшими для анализа аминокислот и пептидов. [c.43]

Разделение энантиомеров аминокислот представляет не только теоретический интерес в связи с изучением механизма взаимодействия хиральных молекул, но и имеет практическое значение как метод анализа биологических объектов и способ оценки степени рацемизации синтетических аминокислот и пептидов. Газовая хроматография позволяет разделять энантиоме-ры аминокислот только в виде их производных [120] (см. разд. 2.4.1.3), причем препаративное разделение сопряжено со значительными трудностями. Поэтому предпринимались многочисленные попытки разделить смесь энантиомеров, используя метод жидкостной хроматографии [121, 122]. Существует два подхода к решению этой задачи. Один из них сводится к превращению энантиомеров в диастереомеры до их разделения [123], а второй, наиболее часто используемый в настоящее время, заключается в том, что диастереомеры образуются в процессе хроматографирования в результате взаимодействия энантиомеров с оптически активным реагентом, присутствующим либо в подвижной, либо в неподвижной фазе. [c.56]

Этот каскадный метод был разработан в процессе поиска простого метода противоточного распределения. Рассуждение строилось следующим образом если неподвижиукэ фазу закрепить на твердом инертном носителе в цилиндрической колонке, а подвижную фазу пропускать через колонку в условиях равновесия с неподвижной фазой, смесь растворенных веществ будет разделяться по мере того, как подвижная фаза будет проходить через колонку. Первоначально в качестве твердого носителя использовали силикагель, который насыщали водой, содержащей индикатор метилоранж, а в качестве подвижной фазы— хлороформ, насыщенный водой. Было обнаружено, что. если К-ацетильные производные аминокислот растворить в небольшом объеме подвижной фазы, нанести на такую колонку, а затем пропускать через нее подвижную фазу, то эти производные движутся с разными скоростями. К-Ацетильныс производные аминокислот — достаточно сильные кислоты и меняют цвет метилоранжа поэтому они образуют в колонке красные полосы на желтом фоне, как показано на рис. 5.13, и их движение хорошо заметно. Каждую фракцию собирали по мере выхода из колонки. С помощью этого метода нельзя разделить все Н-ацетил-аминокислоты, однако при использовании нескольки.х систем растворителей и различных колонок ряд производных удалось выделить в виде препаратов вы- [c.148]

ФИТЦ препаратом, дающим окрашенные производные отщепляемых, аминокислот [Wilson et al., 1979]. Здесь нет возможности останавливаться на этих и других интересных усовершенствованиях процесса секвенирования белков, поскольку это выведет нас за пределы круга вопросов, рассматриваемых в книге. Нам также придется вовсе оставить в стороне вариант секвенирования в твердой фазе (с закреплением полипептида с одного его конца на твердом носителе), а также интересное предложение о создании газо-жидкостного твердофазного секвенатора с миниатюрной неподвижной камерой, в которой полипептид задерживается на стекловолокнистом фильтре fHewi k et al., 1981]. [c.514]

Фенилтиогидантоинпроизводные аминокислот, кроме производных лейцина и изолейцина, разделяются на неподвижной жидкой фазе ЗЕ-ЗО [80]. Последние хорошо делятся на неподвижной жидкой фазе рР-1 [80]. [c.57]

Производные второй группы аминокислот обладали меньшей летучестью и элюировались значительно позже, чем производные первой группы, на всех исследованных НЖФ. Лучшее разделение ФТГпроизводных этой группы аминокислот получено на наиболее полярной из силиконовых неподвижной жидкой фазе ХЕ-60. [c.57]

Для разделения смесей полярных веществ (аминокислоты, производные пиридина) нрименяют сорбенты, хорошо удерживающие полярный неподвижный растворитель (воду) такими сорбентами являются специально обработанный силикагель и порошок целлюлозы. Подвижной фазой может служить насыщенный водный р-р фенола. В качестве сорбентов для разделения смесей аполярных веществ могут быть применены высокомолекулярные гели, нанр. гель полистпрола, получаемый полимеризацией в присутствии различных растворителей, удаляемых затем из готового продукта. Применение специально подоб- [c.377]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология