Ферменты модифицированные производные

Субъединицы и модифицированные производные ферментов [c.332]

Указанные направления не исчерпывают возможностей использования производных целлюлозы с новыми свойствами. Большой интерес представляют разрабатываемые в настоящее время в нашей лаборатории методы получения волокон из эфиров целлюлозы, содержащих иммобилизованные ферменты, термопластичных производных целлюлозы и ряда других химически модифицированных целлюлозных материалов. [c.130]

Коллаген — самый распространенный белок высших животных. Легкость выделения коллагена из ряда биологических источников в сочетании со свойственным белкам наличием большого числа групп — участков для связывания ферментов — привлекает внимание к коллагену как к носителю для иммобилизации ферментов. Коллаген используют и в виде модифицированных производных, придавая матрице широкий набор же-лаемы> свойств. Так, блокированием амино- или карбоксильных групп можно изменить поверхностный заряд носителя и, соответственно, гидрофильно — гидрофобный баланс с помощью сшивающих агентов можно получить сжатую микроструктуру. Наиболее часто коллаген употребляется в азидной форме. Для этого карбоксильные группы коллагена этерифицируют с последующей обработкой гидразином и азотистой кислотой [c.17]

Известно, что длительное использование пенициллина в мировой медицинской практике привело к тому, что многие виды микроорганизмов частично к нему приспособились, и действие пенициллина не оказывает на них пагубного влияния. Поэтому необходимо искать Модифицированные формы этого лекарственного препарата, сохраняющего антибиотический эффект. Наиболее современны методы синтеза производных пенициллина на основе использования иммобилизованного фермента. Схема промышленно реализованного процесса выглядит следующим образом [c.200]

Оптимум pH карбоксипептидазы в значительной степени зависит от природы того С-концевого остатка, на который карбоксипептидаза воздействует согласно литературным данным значение оптимального pH. может колебаться от 5,5 до 9,2. Оказалось даже возможным, используя эту способность фермента оказывать различное действие при разных значениях pH, получать модифицированные белки. Дэви и др. [4] после действия фермента при pH 7,6 удалось выделить в кристаллической форме производное Р-лактоглобулина, у которого были удалены оба С-концевых остатка изолейцина. Далее воздействием карбоксипептидазы при pH 9,2 получили другое кристаллическое производное, у которого были удалены оба концевых остатка гистидина. [c.187]

Тиольная форма сохраняет физиологическую активность витамина В1, что послужило созданию и изучению различных модифицированных производных тиольной формы витамина В1 (особенно дисульфидных производных тиамина). Интерес к этим соединениям диктуется тем, что фермент тиаминаза, продуцируемый нормальной микрофлорой кишечника и содержащийся в значительном количестве в рыбных продуктах, разлагает витамин В1 в организме, но не расщепляет тиольные производные тиамина. Поскольку последние физиологически активны, это создает возможность сохранения витамина в том количестве, которое необходимо организму. [c.398]

Классификация коферментов. Она основана на строении и функциональных особенностях коферментов. Большая группа коферментов представляет собой водорастворимые витамины и их химически модифицированные производные. К ним относятся фосфорилированные тиамины, флавин, моно-и дифосфаты, пиридоксалевые, биотиновые, никатинамидные и другие коферменты. (Подробно о связи витаминов с ферментами говорится в гл. Витамины .) [c.63]

Ряд алкилагароз со структурой СНз(СН2)пМН—сефароза (где п принимает значения от О до 7), и-аминоалкилагароз со структурой ЫН2(СН2)п ЫН—сефароза (где п — от 2 до 8) характеризуется близким содержанием алкильных боковых цепей на гранулу геля [15, 49]. В одинаковых условиях (pH, ионная сила, состав буферного раствора и температура) способность СНз(СН2)пЫН—сефарозы удерживать фосфорилазу Ь зависит от длины углеводородных цепей. При хроматографии на производных сефарозы (я = 0 или 1) фосфорилаза Ь выходила из колонки с фронтом растворителя при п = 2 происходила задержка фермента, а при п = 3 фермент адсорбировался. Элюирование фосфорилазы Ь с модифицированной сефарозы (п = 3) возможно с помощью деформирующих буферных растворов, которые, как было показано, приводят к обратимым структурным изменениям фермента. На производном сефарозы с л = 5 связывание фосфорилазы было настолько сильным, что фермент не элюировался с колонки, даже когда pH деформирующего буферного раствора понижался до 5,8, хотя деформирующая способность такого буфера намного выше. Освободить фосфорилазу Ь из комплекса с этим производным можно только в неактивной форме после промывки колонки 0,2 М уксусной кислотой. Сама агароза содержит отрицательные заряды, а связывание алкил- или ариламинов на активированной бромцианом агарозе вводит в гель положительные заряды (разд. 8.2.4). В связи с этим йост и др. [28] обращали внимание на то, что на сефарозе с алкиламинами, прикрепленными после предварительной активации носителя бромцианом, связывание белков происходит большей частью при pH выше изоэлектрической точки выделяемых белков. Поэтому допускалось, что в этих случаях электростатические взаимодействия с положительно заряженной Ы-замещенной изомочевиной более существенны для связывания, чем гидрофобные взаимодействия с гидрофобной боковой цепью. Тем не менее гранулы агарозы не связывают фосфорилазу Ь, пока к ним не будут прикреплены алкильные боковые цепи некоторой минимальной длины. Кроме того, отмеченные выше заряды в равной мере присутствуют во всех членах гомологического ряда, и, следовательно, они не могут быть причиной различий в степени [c.152]

Окисление функциональных групп фермента. При повышенных температурах некоторые функциональные группы в белках, и в первую очередь SH-группы цистеина и индольные фрагменты триптофана, окисляются. В результате окисления образуются модифицированные производные аминокислот сульфоксисоеди-нения цистеина (SOH, SO2H и т. д.), продукты раскрытия ин-дольного кольца триптофана и др. В некоторых ферментах сульфгидрильные группы, входящие в состав активного центра, обладают повышенной реакционной способностью и окисляются даже при комнатной температуре. [c.122]

В курсе приведены многочисленные примеры практического применения главным образом газовой и молекулярной жидкостной хроматографии на адсорбци-онно или химически модифицированных адсорбентах для анализа углеводородов, их производных и гетероциклических соединений. Особое внимание уделено анализу вредных примесей, разделению углеводов, стероидов, гликозидов, азолов, азинов, а также таких важных галогенпроизводных, как фреоны и пестициды. Адсорбция микотоксинов, представляющих собой одну из серьезнейших пищевых и кормовых проблем, рассматривается как в аспекте хроматографического их анализа, так и в аспекте хроматоскопического исслв1Дования структуры их молекул. В конце курса приведены примеры адсорбции и хроматографии синтетических и природных макромолекул. Здесь рассматривается иммобилизация некоторых ферментов и клеток (например, для осахарнвания крахмала, изомеризации глюкозы, для решения проблем искусственной почки), а также вопросы хроматографической очистки вирусов, в частности, вирусов гриппа и ящура. [c.4]

Такая модификация ограничивает действие трипсина расщеплением по остаткам аргинина, что приводит к большим фрагментам, чем те, которые образуются после действия фермента на не-модифицированный белок. Малеильную группировку можно удалить при pH 2—3 при комнатной температуре для того, чтобы выделенные в результате первого расщепления фрагменты можно было гидролизовать на более мелкие с помощью того же фермента. Такая процедура помогает при определении порядка связи пептидов в исходном белке. Альтернативно, е-аминогруппу лизиновых остатков можно модифицировать S-этилтрифторацетатом, что приводит к Л -трифторацетильным производным схема (28) . После расщепления по остаткам аргинина Л -трифторацетильную группу можно удалить обработкой водным пиперидином при 0°С. [c.275]

Некоторые производные полисахаридов находят применение в промышленности так, например, ксантогенат целлюлозы применяется для производства искусственного шелка, а нитрат целлюлозы— для производства взрывчатых веществ. В связи с появлением водонерастворимых реагентов для приготовления иммуноадсорбентов и перевода ферментов и антител в нерастворимое состояние был синтезирован ряд новых модифицированных полисахаридов. Сведения о таких производных включены во многие обзоры, посвященные полисахаридам, например целлюлозе [222,223], крахмалу [224, 225] и другим [226] см, также [65, 227]. Чтобы облегчить поиск ссылок на методы их получения, эти производные классифицированы ниже по типу содержащихся в их молекулах заместителей, а не по природе исходного полисахарида. [c.273]

Третьим преимуществом ионитов как катализаторов по сравнению с растворимыми кислотами и основаниями является их более высокая селективность. Эта особенность ионитовых катализаторов обеспечивает повышение выхода и качества продуктов многих реакций, а в ряде случаев дает возможность осуществить превращения, которые в условиях гомогенного кислотно-основного катализа протекают неоднозначно или с другим результатом. Например, при алкилиро-вании фенолов олефинами нормального строения в присутствии бензолсульфокислоты образуются нежелательные диалкилфенолы, а при проведении этой реакции на катионите КУ-2 в качестве основного продукта получается монозамещенный алкилфенолЧ Аналогично этому пропиленгликоль дает в присутствии той же смолы моностеарат . Производные глицеринового альдегида, содержащие эфирные фосфатные группы, в присутствии обычных катализаторов легко гидролизуются, вследствие чего конденсация триозо-фосфатов во фруктозо-1,6-дифосфат может быть осуществлена только методами ферментативного катализа или же в присутствии модифицированных цис-теином анионитов как конденсирующих агентов . Селективность ионитов ярко иллюстрируют работы советских ученых по моделированию действия протео-литических ферментов - использование карбоксильных смол дало возможность осуществлять гидролитический разрыв строго определённых связей окисленного инсулина. . - [c.14]

Обсудим последовательные стадии определения первичной структуры небольшого пептида для белка эта процедура аналогична, но более громоздка. Сначала необходимо выяснить, какие аминокислоты находятся на концах цепи. Обратите внимание, что на рис. 40.1 одна концевая аминокислота содержит свободную а-аминогруппу, а другая концевая аминокислота — свободную а-карбоксильную группу. Эти аминокислотные остатки называют соответственно М-концевым и С-концевым. В соответствии с методикой, разработанной Сенджером в его работе с инсулином, сначала используется 1-фтор-2,4-динитробензол, который образует стабильное динитрофенильное производное с Ы-концевым остатком. После кислотного гидролиза модифицированная аминокислота отделяется и идентифицируется. Определение С-концевого остатка можно провести с помощью осторожной обработки ферментом карбоксипептидазой, которая специфически катализирует гидролиз С-концевой пептидной связи, отщепляя от полипептидной цепи единственную аминокислоту. Существуют также и другие методы определения Н- и С-конце-вых аминокислотных остатков, но два описанных являются наиболее распространенными. [c.374]

Большая физиологическая роль многих стероидных метаболитов в организме животных диктует необходимость сравнительно жестко фиксированного пути метаболизма, что, в свою очередь, обусловливает большую специфичность ферментных систем млекопитаюш,их по отношению к субстрату. Так, если 3-кетостероид-А -А -изомераза из бактерии Pseudomonas testosteroni одинаково хорошо изомеризует производные андростана и прегнана (см. гл. IV), то в тканях млекопитающих эти превращения осуществляются двумя различными ферментами [194, 195]. То же относится к восстановлению А -3-кетостероидов в 5а-дигидропроизводные, которое, в зависимости от субстрата, также катализируется различными ферментами [196]. Относительно меньшая специфичность ферментных систем микроорганизмов по отношению к субстрату позволяет широко использовать микробиологические трансформации для синтеза различных модифицированных стероидов, которые слабо или совсем не метаболизируются тканями животных. [c.29]

Конструирование определенного биологического катализатора ведется с учетом как специфичности белка, так и каталитической активности металлоорганического комплекса. Вот примеры такой модификации, проведенной для получения полусинтетических биоорганических комплексов . Миоглобин кашалота способен связывать кислород, но не обладает биокаталитической активностью. В результате объединения этой биомолекулы с тремя электрон-переносящими комплексами, содержащими рутений, которые связываются с остатками гистидина на поверхности молекул белка, образуется комплекс, способный восстанавливать кислород при одновременном окислении ряда органических субстратов, например аскорбата, со скоростью-почти такой же, как для природной аскорбатоксидазы. В принципе белки можно модифицировать и другими способами. Рассмотрим, например, папаин. Он относится к числу хорошо изученных протеолитических ферментов, для которого определена трехмерная структура. Поблизости от остатка цистеина-25 на поверхности белковой молекулы располагается протяженный желобок, в котором протекает реакция протеолиза. Этот участок может быть алкилирован производным флавина без изменения доступности участка связывания потенциальных субстратов. Такие модифицированные флавопапаины использовались для окисления Ы-алкил-1,4-дигидроникотинамидов, и каталитическая активность некоторых из этих модифицированных белков была существенно выше, чем у природных флавопротеин-ЫАОН-дегидрогеназ. Таким образом удалось создать очень эффективный полусинтетический фермент. Использование флавинов с высокоактивными, находящимися в определенном положении элек-трон-оттягивающими заместителями, возможно, позволит разработать эффективные катализаторы для восстановления никотин-амида. [c.182]

Аминокремнезем использован как предшественник для получения сорбентов с привитыми производными N-2(3)-гyaнидинoaлкaнтиoлoв (ГЭТ-кремнеземы) [106], используемых как комплексообразователи, радиозащитные препараты (из-за их высокой биологической активности) и ингибиторы синтеза оксида азота (II), а также для иммобилизации ферментов [67] и как основа для приготовления металлокомплексных и биокатализаторов. ГЭТ-группы способствуют значительному увеличению и энергии дисперсионных сил, и специфичности модифицированной поверхности, а наличие кислой тиольной группы приводит к росту селективности в отношении органических оснований [107]. Например, селективность к изомерам 3,5-и 2,6-диметилпиридина повышается в 1,5 раза, а теплота сорбции пиридина увеличивается иа 25 кДж/моль при переходе от аминокремнезема к ГЭТ-кремнезему. [c.396]

Повышение стабильности и эффективности действия НАД-зависимых ферментов в растворах может быть достигнуто ковалентным связыванием кофермента или его низкомолекулярного производного с апоферментом [94]. В этом случае в роли полимера-носителя выступает сам активируемый апофермент. Такой прием, по-видимому, важен для создания циркулирующих ферментов медицинского назначения с эндогенно обусловленной активностью. В [95] предложен интересный метод ковалентного связывания кофакторов с активным центром ферментов. Метод основан на способности сополимера акролеина с частично кватернизованным 4-винилпиридином образовывать комплексы с молекулами глобулярных белков так, что белковая глобула оказывается покрытой полимерной оболочкой, содержащей альдегидные группы. Формиатдегидрогеназа в виде комплекса с №-(6-аминогексил)ацетамид-НАД+ и азид-ионом была обработана упомянутым выше сополимером, в результате чего молекула модифицированного кофактора оказалась связанной с белком в его активном центре через амино- [c.106]

Значительное улучшение термической устойчивости термолизина было достигнуто [51] путем ацетилирования шести-семи аминогрупп лизиновых остатков длинноцепочечными жирными кислотами, содержащими различное число эфирных групп (рис. 8.3). Гидрофобность модифицирующих групп убывает от V к I. Белки, модифицированные группами I, имеют фактически нормальную активность (> 90% активности нативного фермента) и повышенную термическую стабильность производные же V нерастворимы в воде. [c.109]

Возможность придания белку соверщенно нового типа ферментативной активности путем его химической модификации была реализована лищь в немногих случаях. Стратегия модификации здесь заключается в усилении слабой каталитической активности органической молекулы путем ковалентного связывания ее с белковой цепью, чтобы использовать способность последней связывать субстрат. Один из лучших примеров этого рода-флавопапаин [23]. Папаин представляет собой протеазу растительного происхождения, которая содержит каталитически активную тиольную группу. Обработка папаина бромоизоаллоксазинами приводит к ковалентному присоединению редокс-групп к тиолу [23], как показано на рис. 8.5. Модифицированный таким образом фермент теперь не проявляет протеолитической активности, но зато проявляет оксидазную. Производное папаина, полученное алкилированием цистеинового остатка активного центра, обладает слабой способностью к окислению дитиолов [18] и дигидроникотинамидов [26, 27]. Окисление дитиолов протекает лишь несколько более быстро по сравнению с самим изоаллоксазином обычно скорость реакции возрастала в 4-17 раз при значениях равных 4-21 М с"" [18]. Анализ молекулярных [c.110]

Для иммобилизации ферментов используют захват их полиакриламидным гелем и иными полимерами при полимеризации составляющих их мономеров, а также захват гелями, возникающими при желатинизации природных полимеров, например полисахаридов морских водорослей присоединение ферментов к целлюлозе, сефарозе, сефадексу, крахмалу, декстрану, агарозе и другим полисахаридам, активированным цианбромидом и другими агентами привязку ферментов к стеклянным бусинкам через диазосоединение ковалентное связывание фермента с азидными и гидразидными группами сополимера акриламида и акрилгидразина (энзакрила) и других носителей соединение фермента с гидратированными оксидами металлов, производными поливинилового спирта, альдегидными и диазогруппами модифицированных фенольных полимеров, силикагелями и многими другими материалами. [c.141]

Закономерно распределены в первичной структуре тРНК также минорные нуклеотидные остатки. Это объясняют тем, что только некоторые позиции в молекулах тРНК доступны действию метилирующих ферментов, с помощью которых осуществляется модифицирование обычных оснований в метилированные производные на уровне уже полностью сформированной молекулы. [c.214]

Смотреть страницы где упоминается термин Ферменты модифицированные производные: [c.98] [c.211] [c.307] [c.514] [c.30] [c.329] [c.307] [c.113] [c.57] [c.374] [c.127] [c.434] [c.182] [c.261] [c.113] [c.681] [c.331] [c.348] [c.300] [c.133] [c.188] [c.73] [c.43] [c.310] [c.187] [c.107] [c.85] [c.161]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология