Флуоресцирующие вещества стандартные

Таблица 16.1 Стандартные флуоресцирующие вещества [О 10861

Интенсивность излучаемого света связана с концентрацией флуоресцирующего вещества в растворе прямой зависимостью, благодаря чему методика количественного анализа по спектрам флуоресценции довольно проста. Строят график зависимости флуоресценции от концентрации для серии стандартных растворов и затем по интенсивности флуоресценции анализируемого образца определяют его концентрацию. Подчеркнем, что линейная зависимость соблюдается только до тех пор, пока абсорбционность раствора имеет небольшую величину (еС/ 0,1). Это условие выполняется для разбавленных растворов. Если необходимо исследовать концентрированные растворы, берут тонкие слои. [c.363]

Стандартные флуоресцирующие вещества [c.250]

Подбирают стандартное флуоресцирующее вещество, поглощающее свет в области поглощения исследуемого вещества. [c.69]

Область, в которой флуоресценция пропорциональна концентрации флуоресцирующего вещества, обычно очень узка поэтому соотношение (с—с )/(а—Ь), где а — интенсивность флуоресценции для стандартного вещества, Ь — то же для соответствующего контрольного вещества, с — интенсивность флуоресценции для испытуемого вещества и ё — то же для соответствующего контрольного раствора, должно быть не менее 0,40 и не более 2,50. Поэтому необходимо построить рабочую кривую зависимости интенсивности флуоресценции с поправкой на контрольный раствор от концентрации. [c.55]

Методика. По 30 iz отдельных веществ в соответствующем растворителе наносят на пластинку с силикагелем, полученную стандартным методом с добавлением флуоресцирующего вещества (стр. 35). Для удаления растворителя, содержащего пиридин, после разделения сушат в течение 15 мин при 150°. (Снотворное можно обнаружить затем в УФ-свете (254 мц) в виде абсорбционного пятна пятна получаются особенно контрастными после хлорирования и опрыскивания раствором толидин — иодид калия (реактив № 32). [c.320]

Указанные недостатки устраняются в методе одновременной съемки, при котором вместо флуоресцирующего вещества применяется стандартное рассеивающее вещество с достаточным числом интенсивных линий рассеяния (например, толуол или метилциклогексан), а кривые почернения строятся при помощи марок, наносимых на ту же пластинку независимо [25]. [c.32]

Второй вариант—с последовательной съемкой спектра комбинационного рассеяния и эталонного флуоресцирующего вещества — несколько проще для осуществления. Б этом варианте съемка производится в обычных стандартных осветителях с эллиптическими зеркальными стенками. [c.32]

Количественный и полуколичественный анализ. Соединения можно количественно определить непосредственно на пластинке. С этой целью пластинку опрыскивают реагентом, который через некоторое время образует с определяемым соединением окрашенные или флуоресцирующие вещества, концентрации которых количественно определяют денситометром. В некоторых случаях области, соответствующие стандартным пятнам, измеряли и представляли в виде зависимости от концентрации. Содержание компонента затем определяли сравнением площади пятен образца и [c.574]

Отметим, что Q — безразмерная величина. Так как энергия Е одного фотона определяется уравнением Е = Ы, для измерения числа фотонов требуется измерить величину энергии светового потока и разделить ее на величину Измерение абсолютного квантового выхода — трудный и утомительный процесс, в биохимических целях его проводят крайне редко. (Методики измерений даны в избранной литературе, приведенной в конце этой главы.) При обычном методе измерения Q требуется провести сравнение с флуоресцирующим веществом, Q которого известно готовят два раствора один — образца, другой — стандартного флуоресцирующего вещества — и измеряют интегральную флуоресценцию (т. е. площадь, ограниченную спектром) каждого, используя один и тот же источник возбуждения. [c.420]

Интенсивность света, испускаемого флуоресцирующим раствором, при определенных условиях находится в простой зависимости от концентрации растворенного вещества и, следовательно, может быть использована для анализа. Трудно, однако, измерить абсолютную интенсивность флуоресценции, и обычно измерения проводят по отношению к разведениям правильно выбранного стандартного образца. Общая схема флуоресцентной спектроскопии состоит в возбуждении флуоресценции излучением при длине волны максимума поглощения и в измерении или сравнении интенсивности флуоресцирующего света с флуоресценцией определенного стандартного раствора. Флуоресцирующий свет должен быть тщательно отделен от рассеянного света, падающего на вещество. [c.52]

Все эти правила (за исключением д ) можно использовать в качестве строгого способа определения чистоты флуоресцирующего или фосфоресцирующего соединения, будь то стандартный образец или фракция, выделенная из смеси в ходе анализа. Конечно, правила справедливы только для разбавленных растворов, в которых эффекты внутреннего фильтра незначительны. Таким образом, если известно, что вещество дает испускание флуоресценции с максимумом при более коротких длинах волн, чем его длинноволновая полоса поглощения, можно констатировать присутствие примесей (правило а ). Аналогично, если испускание фосфоресценции наблюдается при более коротких длинах волн, чем испускание флуоресценции, то это говорит о наличии нескольких веществ (правила б , е ). Часто возникает проблема, связанная с наличием очень слабого хвоста в длинноволновой области поглощения. Иногда это вызвано малоинтенсивным переходом, но часто следами примесей, и решить, что именно является причиной, можно, измерив спектр возбуждения (флуоресценции или фосфоресценции). Если хвост обусловлен примесями, спектр возбуждения будет ниже, чем спектр поглощения в этой области (правило г ). Может случиться, что при всех длинах волн поглощение примесей будет меньше поглоще- [c.418]

Свойство веществ флуоресцировать под действием света используют во флуоресцентных красителях и оптических отбеливателях. В особенно больших масштабах производятся последние. Они содержатся почти во всех моющих средствах и придают волокнам стандартную белизну. [c.360]

Однако ДЛЯ аналитической химии имеет значение не квантовый выход и не спектральный состав флуоресцентного излучения, а зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации флуоресцирующего вещества в исследуемом растворе. При измерении флуоресценции для определения концентрации вещества следует учитывать, что интенсив 1юсть флуоресценции зависит не только от природы, но и от интенсивности возбуждающего излучения и что очень часто может происходить более или менее сильное вторичное поглощение флуоресцентного излучения. Именно поэтому при определении концентрации вещества постоянно имеют дело с относительными измерениями. Флуоресценцию ряда растворов с известными концентрациями вещества измеряют по отношению к раствору подходящего стандартного флуоресцирующего вещества с близкими флуоресцентными спектральными свойствами. Очень часто в качестве стандарта используют сульфат хинина. Таким образом, получают калибровочный график, при помощи которого определяют содержание вещества в исследуемом растворе, измеряя его флуоресценцию. Калибровочный график никогда не представляет собой прямую. Только для растворов с очень небольшими концентрациями интенсивность [c.428]

В процессе разделения начальный ток в 3 мА/см вследствие электроосмоса уменьшается до 2 мА/см. После высушивания в. потоке теплого воздуха полоску можно обнаруживать в УФ-све-те, где DNS-производные флуоресцируют. Количества, рекомендуемые для нанесения, составляют 8-10 —мкмолей. Использованные полоски сразу после обнаружения можно регенерировать путем элюирования 16%-ной муравьиной кислотой высушивания. Относительные подвижности не меняются даже на повторно используемых полосках. В качестве стандартного, вещества применяют DNS-NH2. В табл. 12.14 приведены относительные подвижности DNS-аминокислот, причем подвижность. DNS-NH2 принята за единицу. [c.337]

Существующие стандартные методики [4] чаще всего удовлетворяют требованиям к анализу неорганических веществ в сточных водах. Тем не менее, для повышения точности и надежности, а также уменьшения времени, затрачиваемого на определение, широко используются инструментальные методы определения концентрации неорганических веществ в сточных водах газов (О2, СО2 и других)—газовая хроматография [17] ионов тяжелых металлов [18] — тонкослойная хроматография [19], полярография [4, с. 175, 284, 290, 300, 305], атомно-абсорбционная спектрофотометрия [20], пламенная спектрофотометрия [21], нейтронная активация [22] анионов — спектрофотометрия с лазерным возбуждением [23], флуоресцирующая спектрофотометрия [24] и др. [c.18]

Вытяжку и стандартный рабочий раствор рибофлавина, приготовленный на трихлоруксусной кислоте, помещают в кюветы флуорометра и интенсивность флуоресценции определяют по шкале гальванометра. Затем в обе пробирки прибавляют по 0,1 г МаНСОз и около 0,1 г Ма25204 и вновь производят измерение флуоресценции Флуоресценция рибофлавина гасится до нуля. В опыт ных вытяжках остается небольшая флуоресценция, вызы ваемая посторонними флуоресцирующими веществами которые сохранились в вытяжках, несмотря на указан ную обработку. Тушение флуоресценции рекомендуется проводить 2—3 раза, так как в некоторых случаях оно протекает очень медленно. Для этого к пробам повторно добавляют гидросульфит и вновь измеряют флуоресценцию растворов. [c.141]

Приведенные в табл. 57 и на рис. 133 биологически активные вещества подробно изучены методом ХТС, поскольку некоторые из этих веществ имеют исключительно важное значение [14]. Используют пластинки с силикагелем Г, полученные стандартным методом (стр. 35) при добавлении к сорбенту 2% флуоресцирующего вещества З-супер. После разделения все вещества можно обнаружить в виде пятен поглощения в УФ-свете при 254 м 1. Пластинки, приготовленные без добавки флуоресцирующего вещества, можно опрыскивать растворами флуоресцирующих индикаторов, например флуоресцеина Ка, морина, родамина В и т. д. (реактив № 90). Ряд оснований реагирует с иодоплатинатом (реактив № 76). После хлориро- [c.308]

Для флуоресцирующих веществ может быть предложен флуориметрический метод. К сожалению, интенсивность флуоресценции не находится в простой зависимости от концентрации определяемого вещества, за исключением узкого диапазона при низких концентрациях, где по наблюдаемой интенсивности флуоресценции обычно находят концентрацию с помощью стандартной кривой. Порошкообразные вещества, как, например, частички адсорбента и т. д., могут приводить к значительным изменениям в результатах. Впервые метод применили для определения 7-гераноксикумарина [44], но точность метода не была высокой. Впоследствии были получены более точные результаты [45, 46]. [c.70]

Спектрофотометр для хроматограмм в тонком слое сконструировал Цейс совместно с Шталем и Джорком. Детальное описание прибора читатель сможет найти в работах [60, 61 ]. Конструкцией прибора предусмотрено поглощение постоянно излучаелюй энергии либо фактического излучения от вещества. Так, оценка разделенных пятен или зон на тонкослойных пластинках южeт быть сделана измерением проходящего нли отраженного света, а в случае флуоресцирующих веществ— измерением флуоресценции, причем чем больше количество вещества в пятне, тем меньше степень отражения. С целью уменьшения помех со стороны внешних факторов на той же самой пластинке во время хроматографического опыта наряду с образцом испытывается стандартное вещество. По показаниям степени отражения строят соответствующие калибровочные кривые. [c.275]

Количественный флуоресцентный анализ основан на определении интенсивности люминесценции. Для этой цели могут быть применены методы, дписанные выше, в главах Колориметрический и фотоэлектрический методы анализа . При этом для количественных определений можно применять метод стандартных серий. В ряде случаев в качестве стандартов можно пользоваться стандартными флуоресцирующими веществами. Например, при определении витамина В в молоке в качестве стандартов можно пользоваться ураниловыми стеклами. Для целей количественного анализа могут быть использованы также колориметры и фотоколориметры, описанные выше. Так как черный светофильтр пропускает кроме ультрафиолетовых красные и фиолетовые лучи, необходимо принять меры предосторожности, чтобы избежать попадания этих лучей в колориметр. Для этой цели между раствором и колориметром или фотоколориметром помещают соответствующие светофильтры. Для количественных флуорометрических исследований чаще всего применяют фотоэлектрические приборы. Одна из схем [c.304]

Р И С. 103. Прибор для изучения люминесценции полимерных систем. Свет от ртутной лампы среднего давления АН4 (А) фокусируется с помощью конденсора на небольшом отверстии Д и с помощью коллиматора направляется в виде параллельного пучка. Пучок может прерываться периодически сектором Ви приводимым в движение синхронным мотором Бх или затвором Е. Параллельный пучок монохроматизируется фильтром Жь падает на зеркало Зх, отражающее большую часть пучка, и затем отражается зеркалом Зг- Часть падающего пучка проходит через З1 и отражается З3 по направлению к кремниевому фотоэлементу Их или при необходимости по направлению к стандартному образцу флуоресцирующего вещества К, снабженного подходящим фильтром Жг- Пучок отражается от З2 и, проходя через поляризатор Л1, падает на образец О под углом 45°. Ось поляризации должна быть параллельна поверхности образца. Флуоресцентное свечение образца фокусируется на детекторе — кремниевом фотоэлементе — Яг с помощью линзы Гз и подходящего фильтра Жз. поглощающего любое возбуждающее излучение. Излучаемый образцом пучок света может периодически прерываться сектором В , приводимым в движение мотором Б . Для измерения фосфоресценции соотношение фаз секторов В1 и В2 должно быть таким, чтобы проходило только фосфоресцирующее излучение. При поляризационных измерениях В2 заменяют циркулярной пластинкой поля-роидиого дихроичного фильтра Л2. [c.176]

Глаз насто.дько чувствителен к излучению малых яркостей и так хорощо улавливает разницу интенсивностей, что во многих случаях при определенпи концентрации вещества можно довольствоваться сравнением интенсивности флуоресценции анализируемого раствора и набора стандартных растворов разной концентрации того же вeщe твa . Применением светофильтров удается в некоторых случаях избавиться от ошибки, вызываемой присутствием посторонних флуоресцирующих веществ. [c.7]

Для вычисления квантового выхода наблюдаемую интенсивность надо перевести в число квантов. Для этого требуется знать спектральное распределение света и спектральную чувствительность приемника. Боуэн и Соу-телл [58] описали метод, не имеющий этих недостатков. Кусок уранового стекла или иной флуоресцирующий экран, помещенный перед фотоумножителем, преобразует падающий свет с одной и той же постоянной эффективностью независимо от длины волны в их собственные полосы флуоресценции. Свет, который попадает на приемник, имеет при этом всегда одно и то же спектральное распределение, будь то свет от исследуемого образца или от стандартного образца, используемого для сравнения. Таким образом, отношение наблюдаемых интенсивностей дает прямое отношение квантовых выходов. Этот метод применим только в случае длин волн, лежащих в пределах полосы поглощения счетчика квантов, т. е. обычно в голубой и ближней ультрафиолетовой областях. Однако его можно было бы распространить на случай более длинноволнового излучения, если использовать такие вещества, как рубрен, который дает высокий выход флуоресценции и сильно поглощает в зелено-голубой области спектра. В качестве такого счетчика квантов удобен родамин В, флуоресцирующий в красной области спектра. Если флуоресценция поляризована, то ее угловое распределение неоднородно. В подобных случаях измерения при неизменном заданном угле приводят к ошибкам. Чтобы устранить эти ошибки, надо собрать весь испускаемый свет с помощью интегрирующей сферы, покрытой окисью магния. Образец или стандарт помещают в центр сферы, освещают через одно небольшое отверстие, а измерения проводят с помощью приемника, помещаемого у другого отверстия [93]. [c.92]

При проверке материалов, содержащих флуоресцирующие отбеливаюпще вещества, возникает еще одна проблема, связанная с источником освещения. Как мы уже видели выше, колориметрия флуоресцирующих материалов имеет свои недостатки, и подходящий источник, представляющий стандартное излучение Вдд МКО, еще не стандартизован. [c.384]

Методика флуорометрического анализа аналогична методике фотоколориметрического и фотонефелометри-ческого анализа. Для исследования веществ, обладающих в растворенном состоянии свойством флуоресцировать под действием ультрафиолетовых лучей, снимают сначала показания гальванометра для ряда стандартных растворов, строят калибровочную кривую зависимости показаний гальванометра от концентрации, после чего анализируют таким же образом исследуемый раствор и по калибровочной кривой находят концентрацию определяемого вещества. [c.157]

Приготовление хроматограмм, механизм сканирования и интер-аретация результатов такие же, как описанные для денситометрии. Вещества, имеющие природную флуоресценцию, как, например, полиядерные ароматические углеводороды, можно определять достаточно точно со стандартным отклонением примерно 2%. Поскольку неточная методика опрыскивания образца здесь исключается, то главньп источником ошибок является неточность в нанесении образцов. Предел определения очень низкий (для некоторых соединений порядка 100 нг). Некоторые классы соединений, прежде чем их можно будет определять в виде флуоресцирующих пятен, следует опрыскать флу-орогенным реактивом, например пинакриптолом желтым в случае сульфонатов. Включение стадии опрыскивания увеличивает стандартное отклонение вплоть до 5% /37 /. [c.175]

Для того чтобы исключить многие неудобства этого метода, для сравнения используют флуоресцирующее стандартное вещество, в качестве которого рекомендован [8] хелат алюминия с азокрасителем понтахромовым черно-синим Р. Известно, что родамин 60 обладает характерным откликом на возбуждение в широком интервале длин волн (220—600 нм) и, следовательно, может использоваться как счетчик фотонов, что облегчает калибровку фотоумножителя [9]. Использование способов калибровки, описанных в упомянутых выше работах, в будущем должно привести к уменьшению сообщений о нескорректированных спектрах. [c.157]

На практике на бумагу наносят несколько микролитров относительно концентрированного раствора образца на расстоянии 1—2 см от края и растворитель испаряют. На одну полоску бумаги можно нанести пятна нескольких образцов и стандартных вен1,еств на расстоянии 1—2 см друг от друга. Следующий этап состоит в хроматографировании. Бумагу помещают в закрытый сосуд с растворителем (слой толщиной 1 см), стараясь, чтобы конец бумаги был опун1,ен в растворитель, но пятна веществ были выше уровня жидкости. Сосуд закрывают для создания в нем атмосферы, насыщенной парами растворителя. Под влиянием капиллярных сил растворитель поднимается вверх по бумаге и переносит компоненты образца со скоростями, определяемыми коэффициентами распределения, в результате чего происходит их разделение. Когда фронт растворителя достигнет необходимой высоты (около 2/3 или 3/4 длины полоски бумаги), хроматографирование считается законченным, бумагу вынимают из сосуда и высушивают. Пятна компонентов проявляют, обрабатывая бумагу раствором реагента. При этом получаются окрашенные или флуоресцирующие продукты. Так, например, для определения аминокислот используют нингидрин. [c.286]