Хроматография электрофоретическая

Успех хроматографии на бумаге обусловлен не только широким ассортиментом жидких фаз с различными коэффициентами распределения и другими ее достоинствами, но также и возможностью применять одновременное или последовательное воздействие на разделяемую смесь электрического поля. Такой прием получил название электрофоретической хроматографии. [c.220]

Хроматография на бумаге. Известны следующие разновидности хроматографии на бумаге одномерная, двумерная, круговая и электрофоретическая. Одномерная и двумерная бумажная хроматография может быть восходящей и нисходящей. [c.158]

Электрофоретические хроматограммы на бумаге получают путем сочетания распределительной хроматографии на бумаге с электрофорезом при проведении их одновременно или раздельно. [c.284]

Техника проведения хроматографии на бумаге. В настоящее время получили развитие следующие виды проведения хроматографического процесса на бумаге одномерная и двумерная (восходящая и нисходящая), круговая и электрофоретическая хроматография. Для успешного разделения необходимо, чтобы атмосфера камер, где проводится разделение, была насыщена всеми компонентами системы растворителей. Это насыщение обычно осуществляют, помещая на дно камеры чашку с обеими фазами системы растворителей или укрепляя на стенках камеры бумагу, смоченную растворителями. [c.115]

Рис. 32. Схема прибора для получения электрофоретических хроматограмм при последовательном проведении хроматографии и электрофореза

Получение электрофоретических хроматограмм на бумаге. Хорошие результаты получают, применяя одновременно распределительную хроматографию на бумаге и электрофорез. Разделение веществ обусловливается, с [c.86]

В практической медицине все шире применяются методы электрофоретического разделения белковых фракций, хроматографии различных компонентов биологических жидкостей, определение концентрации водородных ионов и др. [c.7]

При разделении нуклеиновых кислот используют те же методы, что и при фракционировании белков, однако имеются ограничения, обусловленные большим диапазоном величин молекулярной массы (2-10 —Ы0 ° Да), отклонениями от глобулярной формы, различиями в четвертичной структуре (двухнитевые, однонитевые, кольцевые), значительным отрицательным зарядом в нейтральной области pH. Поэтому методы гель-фильтрации и ионообменной хроматографии не получили широкого распространения при фракционировании нуклеиновых кислот и значительно уступают ультрацентрифугированию и электрофоретическому разделению в геле агарозы, полиакриламидном геле или их смеси. Поскольку величина отрицательного заряда нуклеиновых кислот и продуктов их расщепления мало зависит от pH, а отношение заряда к молекулярной массе сохраняется практически неизменным, разделение нуклеиновых кислот при электрофорезе определяется не их зарядом, а размером молекул. При наличии маркеров с известной молекулярной массой возможно определение молекулярной массы препаратов нуклеиновых кислот и их фрагментов. [c.171]

Книга представляет собой практическое руководство по капиллярному электрофорезу - новому методу анализа, обладающему высокой разрешающей способностью и сочетающему преимущества электрофоретических методов разделения с возможностью автоматизации анализа и простотой количественного расчета, характерного для высокоэффективной жидкостной хроматографии. Быстрота анализа и эффективность разделения в сочетании с широкой областью применения делают капиллярный электрофорез одним из наиболее высокоэффективных аналитических методов. [c.1]

Влияние pH на перенос пробы к детектору объясняется двумя причинами. Как уже отмечалось, на разделение, основанное на электрофоретической миграции, в большей или меньшей степени накладывается ЭОП, на величину которого влияет диссоциация поверхностных силанольных групп. Кроме того, подвижность ионов определяется их степенью диссоциации в несущем электролите и, следовательно, его значением pH. Поэтому можно оптимизировать разделение изменением величины pH и вида буфера. Наибольшее различие в способности к перемещению для слабых электролитов, т.е. наивысшую селективность получают тогда, когда значение pH буфера лежит между значением рКз компонентов пробы (Кз - константа диссоциации). Это поведение аналогично разделению в ионнообменной хроматографии. [c.49]

Изучение глиадинов с помощью хроматографии гидрофобного взаимодействия подтвердило эти результаты [36, 157, 158]. Оно продемонстрировало существование гидрофобных доступных зон у всех глиадинов, а также различия между глиадинами в гидрофобности поверхности. Некоторые результаты у разных авторов расходятся, однако кажется, что ш-глиадины имеют самую слабую гидрофобность поверхности, а у-глиадины — самую сильную. Гидрофобность поверхности а- и -глиадинов изменчива и зависит от рассматриваемых компонентов, поскольку классификация по степени гидрофобности поверхности не перекрывает обычную классификацию, основанную на электрофоретической подвижности [158]. [c.195]

Аминокислотный состав и последовательность аминокислот выяснены для многих тысяч белков. В связи с этим стало возможным вычисление их молекулярной массы химическим путем с высокой точностью. Однако для огромного количества встречающихся в природе белков химическое строение не выяснено, поэтому основными методами определения молекулярной массы все еще остаются физико-химические методы (гравиметрические, осмометрические, вискозиметрические, электрофоретические, оптические и др.). На практике наиболее часто используются методы седиментационного анализа, гель-хроматография и гель-электрофорез. Определение молекулярной массы белков методами седиментационного анализа проводят в ультрацентрифугах , в которых удается создать центробежные ускорения [c.44]

Аномальные гемоглобины, различающиеся по форме, химическому составу и величине заряда, были вьщелены при помощи электрофореза и хроматографии. Передающиеся по наследству изменения чаще всего являются результатом мутации единственного триплета, приводящей к замене одной какой-либо аминокислоты в полипептидных цепях молекулы гемоглобина на другую. В большинстве случаев происходит замена кислой аминокислоты на основную 1ши нейтральную (табл. 2.1). Поскольку это замещение осуществляется в обеих полипептидных цепях одной из пар (а 1ШИ 3), образовавшийся аномальный гемоглобин будет отличаться от нормального величиной заряда и соответственно электрофоретической подвижностью. [c.82]

В последнее время метод отпечатков пальцев все чаще осуществляют в три этапа, комбинируя два электрофоретических разделения с хроматографией. Дело в том, что двухэтапный метод отпечатков пальцев не всегда дает полное разделение, особенно при анализе ферментативных гидролизатов высокомолекулярных белков, поэтому возникает необходимость дополнительного электрофоретического фракционирования (фиг. 21). [c.104]

Хроматография на ДЭАЭ-сефадексе очень удобна для выделения из сыворотки IgG и для разделения белков этой фракции, обладающих разной электрофоретической подвижностью. Стартовый буферный раствор сначала вымывает из колонки IgG, имеющие низкую электрофоретическую подвижность. Быстро мигрирующие белки этого же класса выходят только при градиентном элюировании. Хроматография, на ДЭАЭ-сефадексе является также общепринятой методикой очистки миеломных IgG. [c.217]

Подобно хроматографии на бумаге, при тонкослойной хромато графии также проводят разделение в двух направлениях под пря мым углом друг к другу. В одном направлении, как правило проводят электрофорез в электрофоретической камере с малым объемом для испарения контакт между слоем адсорбента и электрод ными отсеками в этих камерах обеспечивают фитили из фильтровальной бумаги. Из-за низкой теплопроводности стекла и связанным с этим слабым тепловым рассеянием может возникать проблема охлаждения хроматографической пластинки. Для снижения образования тепла рекомендуется работать на стеклянных пластинках минимальной толщины и применять буферные растворы по возможности минимальной ионной силы. [c.234]

Радиохимическое разделение Ag, Мо, As, u, Sb, Ge, Fe, r, In и Zn методами осаждения и экстракции при анализе облученных образцов железных метеоритов описано в [1051]. Метод распределительной хроматографии для анализа примесей в арсениде галлия описан в [533]. Предложены методы последовательного разделения элементов на ионитах [175, 380, 906, 1091]. В качестве примера приведена схема хроматографического разделения примесей при анализе металлического осмия [380]. Показана [652] возможность использования древесной смолы для концентрирования d(II), Zn(II), Hg(II), u(II), r(III) из проб подземных вод. Найдены условия сорбции r(VI) из вод на Амберлите IR-401 [859]. При анализе селена на содержание Со, Сг, Ga, Na применяют электрофоретический метод разделения катионов и анионов [618]. Степень разделения указанных элементов и селена > 10 [c.104]

Разделение белков методом электрофореза на бумаге. В последнее время при исследовании белков, кроме фракционирования высаливанием, широко начали применять электрофоретическое разделение белкового комплекса, а также количественное определение отдельных фракций белков. Нередко электрофорез объединяют с хроматографией. В настоящее время есть множество приемов электрофоретического и хроматографического анализа белковых веществ, в связи с чем разработано много различных аппаратов для электрофоретического разделения белков. [c.44]

Для анализа и разделения смесей бромсодержащих ионов электрофоретические методы использовались в варианте БХ 15И, 575, 643] и ТСХ [168], а также своеобразной осадочной хроматографии на колонке, заполненной гелем агар-агара [433]. [c.69]

Для улучшения разделения компонентов смеси можно комбинировать электрофорез с хроматографией. Для электрофоретического разделения, однако, нужно использовать такой буфер, который не помешал бы при последующем хроматографическом делении во втором направлении (лучше всего использовать летучие буферы). После электрофоретического разделения в одном направлении слой высушивают, например, в струе теплого воздуха, чтобы полностью удалить следы кислот, часто входящих в состав буферных смесей, и затем проводят хроматографическое разделение во втором направлении. [c.162]

Значение реагентов в аналитической химии исключительно велико. Особенно важны органические реагенты, которые обладают большими возможностями и поэтому стали наиболее распространенными. Области применения реагентов в аналитической химии, в частности в неорганическом анализе, весьма многочисленны. Реагенты широко применяют в гравиметрических и титриметрических методах анализа как осадители и соосадители при разделении и концентрировании веществ их используют в качестве маскирующих веществ. Одна из обширных областей применения реагентов — экстракция. Реагенты нужны для ионообменных, электрофоретических и других методов разделения. Аналитические реагенты важны и для многих физических и физико-химических методов анализа,например амперометрии, радиоактивационного, химико-спектрального анализов. Перспективно применение органических реагентов в методах газовой хроматографии для быстрого разделения и определения элементов. [c.5]

Хроматографический и электрофоретический методы анализа дают возможность разделить сложные смеси, анализ которых обычными методами затруднен. Контролируют процесс по исчезновению исходных веществ или по накоплению продуктов реакции. Сочетание хроматографии и электрофореза с инструментальными методами анализа (колориметрия, спектрофотометрия, полярография и др.) позволяет определить количественное содержание того или иного вещества в продуктах реакции. [c.275]

Наконец, последнее, столь же важное обстоятельство, оказавшее решающее влияние на развитие современной химии углеводов, состой во внедрении новой техники эксперимента. Введение аналитической и пре паративной хроматографии, электрофоретических методов позволил по-новому поставить работу по разделению и индивидуализации углевс дов и решить задачи, которые требовали Раньше поистине титаническог [c.7]

Электрофорез производился на установке, изображенной на рис. 20. Тонкослойная пластинка помещалась на охлаждаемый столик, который также использовался в качестве подставки при проточной хроматографии. Электрофоретическое разделение производили при напряжении 950—1000 в и силе тока 30 ма. Для по.чучения пептидной карты па пластинку размером 20x20 см наносили 0,5—0,05 мг пептидной смеси. Авторы работы [40] указыва-приготовить 8 пептидных карт. На рис. 21 представлена пептидная карта триптического гидролизата миозина. Детектирование пептидных пятен производилось с помощью нингидринового или хлортолидинового реактивов. Весьма перспективно детектирование пептидов на пластинке с помощью реакции динитрофенилирования в модификации Патаки [41] [c.318]

В смеси инертных комплексов миграция их под действием диффузионных электрофоретических или каких-либо других сил происходит для каждого сорта ионов с характерной скоростью. На этом основано применение хроматографии при синтезе комплексных соединений. Хроматография и электрофорез могут быть использованы при синтезе, очистке и разделении координационных соединений. Например, очистка [Сг(ННз)в] " от [Сг(ННз)б (Нр) и [Сг(ЫНз)4 (Н20)2] на ионообменной колонке с AljOg использование для синтеза хлороаквокомплексов Rh , и и т. д. высоковольтного электрофореза на бумаге. [c.195]

Большинство электрофоретических методов не являются истинно хроматографическими методами, поскольку в них отсутствует распределение определяемого вещества между подвижной и неподвижной фазами. При этом аппаратурное оформление классического бумажного электрофореза и современного электрофореза очень похоже на оформление плоскостных хроматографических методов и капиллярной колоночной хроматографии соответственно, поэтому имеющийся опьгг можно перенести на электрофоретические метсды. [c.302]

Ионофоретический метод разделения аминокислот также базируется на их амфотерности. При различных pH раствора аминокислоты движутся к катоду или аноду, в соответствии с их изоэлектрическими точками и электрофоретической подвижностью Так при pH, близком к б, кислые аминокислоты направляются к аноду, основные к катоду, а нейтральные остаются неподвижными. Ионофорез также можно проводить в растворе или на твердом носителе. Первый метод позволяет раздел5ггь аминокислоты только на сравнительно крупные фракции — кислую, основную и нейтральную. Второй метод, так же как и распределительная хроматография на бумаге, дает возможность разделять любые аминокислоты. В качестве твердого носителя применялись силикагель, крахмал и бумага. Из них самым простым оказался ионо- [c.481]

Ген, нередко встречающийся у лиц африканского происхождения, вызывает (в случае гомозиготности) тяжелое, часто летальное заболевание, получившее название серповидноклеточная анемия . В 1949 г. Полинг и Итано с сотрудниками обнаружили, что гемоглобин больных серповидноклеточной анемией имеет необычно высокую электрофоретическую подвижностьб. Позднее, в 1957 г., Ингрем разработал метод пептидных карт (гл. 2, разд. 3.2, рис. 4-20) и применил его для исследования гемоглобина. Он расщепил молекулу гемоглобина трипсином на 15 пептидов и разделил полученную смесь с помощью электрофореза и хроматографии. Ему удалось показать, что аномалия, характерная для серповидноклеточного гемоглобина (гемоглобина 5), локализована в Р-цепи (в шестом положении) (рис. 4-17). Глутаминовая кислота, находящаяся в этом положении в нормальном гемоглобине, оказалась замещенной в гемоглобине 5 на валин. Это [c.314]

Наряду с КЗЭ, при котором удается осуществить разделение только за счет разницы в подвижности, и который в настоящее время представляет собой наиболее распространенный метод, выделяют также капиллярный гель электрофорез (КГЭ) с капилляром, заполненным гелем. При этом на электрофоретическую миграцию молекул оказывает влияние матрица геля, и поэтому достигается селективное разделение молекул по размерам. Незаряженные молекулы можно разделять с помощью мицеллярной электрокинетической хроматографии (МЭКХ). В данном случае к буферу добавляется детергент, и нейтральные молекулы распределяются между буфером и мицеллами в соответствии с их гидрофобностью. Разделение основано на подвижности мицелл, заряженных в большинстве случаев отрицательно. Поскольку в основе разделения лежит процесс распределения, можно с полным основанием говорить о хроматографическом методе. При изоэлектрической фокусировке (ИЭФ) происходит разделение в градиенте pH, формируемом добавлением амфолита к буферу в электрическом поле. Небольшое распространение получила пока электрохроматография (ЭХ), при которой применяется стационарная среда ВЭЖХ, а течение эдюента и перенос пробы происходит только за счет электроосмотического потока. В качестве самой старой капиллярной техники следует упомянуть изотахофорез (ИТФ), который в настоящее время вновь приобрел значение для концентрирования проб в КЭ. [c.7]

Если описанные до сих пор электрофоретические способы разделения в капиллярах соответствовали элюентной хроматографии (прерывистый ввод проб, постоянный состав элюента, различные скорости движения компонентов пробы), то метод ИТФ соответствует вы-теснительной хроматографии. В обоих случаях все компоненты пробы движутся с одинаковой скоростью. ИТФ описан много лет назад и проводился тогда в основном в тефлоновых трубках. Однако из-за проблем выбора конкретных электролитов и ограничений в выборе детекторов (применимы только детекторы по электропроводности) этот метод было невозможно использовать в качестве точного аналитического метода. В случае ИТФ проба вводится между двумя электролитами с различными подвижностями ионов, выбранными так, чтобы они ограничивали подвижности компонентов пробы. Обычно ведущий электролит обладает наивысшей, а конечный электролит -наиболее низкой подвижностью из всех движущихся ионов. После достижения стационарного состояния все одинаково заряженные ионы движутся с одинаковыми скоростями. На рис. 106 это показано схематически. В каждой зоне при ИТФ имеется своя напряженность поля. Внутри каждой зоны напряженность поля постоянна, изменения происходят скачком на границах зон. [c.108]

Метод капиллярного электрофореза постоянно совершенствуется. Предложены методы разделения нейтральных молекул, ионов с одинаковой электрофоретической подвижностью. Для этого используют взаимодействия разделяемых компонентов с псевдонеподвижной мицеллярной фазой в буферном электролите (мицеллярная электрокинетическая хроматография). Для повышения чувствительности определения используют дфугие способы де-текпфования флуоресцентное, электрохимическое, масс-спекгрометрическое. [c.255]

В настоящее время получили развитие следующие виды хроматографии на бумаге одномерная, двумерная, круговая и электрофоретическая. Одномерная и двумерная могут выполняться в двух вариантах восходящим и нисходящим потоком растворителя. Все указанные виды обладают своими преимуществами и недостатками. Поэтому выбор наиболее подходящего способа хроматографирова- [c.254]

Книга авторов из США, Швейцарии и Новой Зеландии из сери изданий, посвященных теории и практике хроматографических н электрофоретических методов. Первая в мировой литературе монография по препаративной жидкостной хроматографии — методу, который позволяет совершенно по-новому решать задачи биотехнологии, генной инженерии, малой химии и т. п., т. е. отраслей, определяющих научно-технический прогресс. [c.4]

Одно ИЗ преимуществ дансилирования по сравнению с динитро-фенилированием состоит в том, что после кислотного гидролиза ДНС-белка аминокислоты могут быть идентифицированы электрофоретически или хроматографически сразу после расщепления белка без экстракции гидролизата. Другим преимуществом является очень высокая чувствительность. Максимум возбуждения флуоресценции ДНС-аминокислот находится около 550 нм, их флуоресценция настолько интенсивна, что с помощью электрофореза на бумаге легко можно определить 1—5, а с помощью тонкослойной хроматографии 0,2—1,0 нмоль ДНС-производного. [c.275]

Для качественного и количественного анализа (как и в хроматографии) в КЭ используются два важнейших параметра площадь (или высота) пика на электрофореграмме и время миграции. Относительное стандартное отклонение для времени миграции и площади пика с использованием двух внутренних стандартов достигает 1%. Использование большего количества стандартов (до четьфех маркеров с известной электрофоретической подвР5жностью) позволяет добиться величины стандартного отклонения 0,01-0,03%. [198]. [c.358]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология