Михаэлиса ионов

Если взять достаточно концентрированный раствор щелочи, то добавленный к ней индикатор оказывается полностью диссоциированным, и следовательно, количество ионов индикатора в растворе определяется количеством добавленного индикатора. Основываясь на этой зависимости, Михаэлис добавлял а ряд пробирок с концентрированным раствором щелочи различные количества индикатора. Таким образом, был получен ряд растворов с различной интенсивностью окраски, причем она зависит только от количества добавленного индикатора. Затем выбиралась та из пробирок, интенсивность окраски раствора в которой совпадала с интенсивностью окраски изучаемого раствора, содержащего тот же индикатор. [c.496]

Ферментативная реакция — это, как правило, многостадийный процесс, в котором на первой стадии образуется комплекс между ферментом и субстратом (комплекс Михаэлиса), Чаще всего эта стадия представляет собой сорбцию субстрата на ферменте, обусловленную, например, их гидрофобным, полярным и (или) ионным взаимодействием (см, гл. I), На образование комплекса Михаэлиса, предшествующее химическому взаимодействию, указывают многочисленные экспериментальные данные, в том числе и кинетические (см, гл. V и VI) некоторые фермент-субстратные комплексы были выделены в чистом виде [1]. Возникает вопрос, в какой мере способствует (и способствует ли) образование фермеит-субстратного комплекса ускорению катализируемой реакции. [c.34]

На рис. 39, а дана найденная на опыте зависимость левой части уравнения (4.17) от концентрации и природы соли. Для сравнения на рис. 39, б приведено изменение с концентрацией той или другой соли коэффициентов активности бензола и его производных. Эти соединения следует рассматривать как структурные аналоги боковой цепи в молекуле субстрата (они же являются классическими конкурентными ингибиторами). При сравнении рис. 39, а н б видно, что эффективность образования комплекса Михаэлиса изменяется с ионной силой при [c.144]

В реакциях гидролиза сложноэфирных субстратов, катализируемых а-химотрипсином, изменение ионной силы раствора оказывает влияние лишь на константу скорости ацилирования фермента (йа), в то время как значения констант кз ц Ks (схема 7.1) остаются неизменными [6]. Исходя из данных табл. 4, найти отношение констант скоростей k jk и значение истинной константы Михаэлиса Ks для гидролиза метилового эфира Ы-ацетил-Ь-вали-на, катализируемого а-химотрипсином, при концентрациях КС1, равных 0,1М и 2,7М. [c.149]

Рис. 75. Определение истинной константы Михаэлиса в реакции гидролиза метилового эфира Ы-ацетил-Ь-валина, катализируемого а-химотрипсином, при селективном влиянии ионной силы раствора на константу скорости ацилирования фермента. Концентрации КС1 а — 0,1 М 6 — 0,3 М а — 0,5 М г — 0,8 М ( —1,0 М е—1,5 М ж — 2,0 М 3 — 2,7 М

В этой книге авторы, следуя Михаэлису, активность ионов Н+ обозначают не через а +. а через h. [c.502]

Как показал Михаэлис, степень диссоциации ионогенных групп гидрофильных коллоидов (амфолитов) минимальна в изоэлектрической точке, т. е. число частиц (ионы + молекулы) наименьшее при этом значении pH. Следовательно, осмотическое давление коллоидов оказывается самым низким в изоэлектрической точке и увеличивается при смещении pH в обе стороны от нее. [c.193]

Как показал Михаэлис, степень диссоциации ионогенных групп гидрофильных коллоидов (амфолитов) минимальна в изоэлектрической точке, т. е. число частиц (ионы+молекулы) наименьшее прн атом аначении pH. Следовательно, осмотическое давление [c.223]

Применяется при определении концентрации водородных ионов по Михаэлису в бактериологии и при титровании ела бых кислот и оснований в спиртовых- растворах. [c.43]

Механизм поглощения холина нервными клетками из межклеточного пространства неизвестен [6]. Изучение концентрационной зависимости скорости его поглощения синаптосомами (рис. 8.5) показало, что имеются два различных транспортных механизма высокоаффинный с константой Михаэлиса Км 10 М и низкоаффинный с Км Ю М. Последний механизм присущ всем клеткам и для нервных клеток неспецифичен. Высокоаффинный транспортный механизм стимулируется ионами [c.196]

Если константа диссоциации индикатора известна, то измерение глубины окраски, отвечающей отношению а/(1—а), позволяет определить pH раствора. Этот метод часто называют методом Михаэлиса. Чтобы уменьшить солевую ошибку, следует пользоваться формальной константой диссоциации индикаторной кислоты, соответствующей ионной силе исследуемого раствора. При определении значений формальных констант диссоциации индикаторов полезно применять буферные растворы, pH которых измерено электрометрическим методом (стр. 134). [c.144]

Зависимость констант Михаэлиса кз и Км от pH мон ет быть весьма сло кной. Поэтому для исследования зависимости от pH србды требуется использование буферных растворов. При этом нередко оказывается, что между компонентами буферного раствора (особенно НРО ") и ферментом имеется определенное взаимодействие. Кроме того, влияние на активность белка и активность субстрата также оказывает ионная сила раствора, что еще в большей стенени усложняет интерпретацию процесса в буферном растворе. Этот факт не всегда принимался во внимание. Во всех уравнениях, применявшихся в этом разделе, концентрации должны быть заменены на активности. Когда концентрация субстрата меняется в широком диапазоне, то поправка на активность может быть весьма существенной. Например, изучение скорости реакции уреаза — мочевина в диапазоне концентрации мочевины от 0,0003 до 2,0 М показало, что при высоких концентрациях мочевины скорость реакции надает [112]. Это может быть связано с изменением активности, а не механизма реакции. [c.564]

Совпадение интенсивности окраски указывает на то, что концентрация И0Н01) индикатора в обоих растворах одинакова. Значение концентрации индикатора в эталонной пробирке известно, поскольку в щелочной раствор добаплено точно отмеренное количество индикатора. Таким образом, зная концентрацию индикатора, добавленного в испытуемый раствор, и концентрацию ионов индикатора на основании сопоставления с эталонными растворами, МОЖНО рассчитать степень диссоциации индикатора в испытуемом ра творе. Зная константы диссоциации индикаторов ряда Михаэлиса, можно ра считать концентрацию водородных ионов, а следовательно, и pH в изучаемом растворе по формуле (XVIII, 71). [c.497]

Рассмотренные выше представления о механизме изменений чисел переноса в мембранах хотя и являются в настоящее время общепринятыми (в особенности для капиллярно-пористых тел) благодаря работам Михаэлиса и его учеников, а также нашим работам, но не являются единственными. Многие авторы, например Бейтнер, Нортроп, Мейер, Теорелл и ряд других исследователей, выдвигают в этой области другие взгляды, а именно мембрана рассматривается как второй растворитель, в котором концентрации ионов и их подвижности иные, чем в свободном растворе. Многие заключения совпадают с капиллярной теорией, так как, в сущности, принципиальных отличий здесь не сущест- [c.150]

Существуют два основных колориметрических метода определения концентрации ионов водорода буферный и безбуферный. Точность этих методов не превышает 0,1 pH. Наиболее распространенным методом безбуферного определения pH является метод Михаэлиса, основанный на применении стандартных рядов, полученных с одноцветными индикаторами групп нитрофенола в растворах с различным значением pH (см. табл. 20). По методу Михаэлиса может быть определено pH растворов в широком диапазоне от 2,8 до 8,4. Для выяснения, с каким же из указанных индикаторов следует производить определение pH, предварительно при помощи универсального индикатора узнают примерное значение pH исследуемого раствора, а затем производят окончательное определение pH с одним из индикаторов. [c.88]

ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ КАТАЛИЗ, обусловлен действием ферментов. Играет исключительно важную роль в обмене в-в в живых организмах. Характеризуется чрезвычайно высокой активностью и специфичностью (селективностью), гл. причины к-рых 1) сорбция субстрата на ферменте и образование активного комплекса (комплекса Михаэлиса) в результате гидрофобных, полярных и ионных взаимодействий. В этом комплексе происходит сближение и ориентация реагирующих групп фермента и субстрата. В результате р-ция м. б. ускорена в 10 и более раз 2) полифункцион. характер хим. взаимод. между ферментом и сорбиров. субстратом, при к-ром молекула субстрата подвергается атаке сразу неск. каталитич. группами активного центра фермента. Полифункцион. катализ может привести к ускорению р-ции в 10 и более раз 3) отличие характеристик среды [c.617]

Молекула киназы фосфорилазы состоит из субъединиц четырех типов ар б. Молекулярная масса фермента — 1,3-10 Да — отвечает формуле (аРуб)4- Киназа фосфорилазы играет, как показано, ключевую роль в регуляции обмена гликогена и в сопряжении гликогенолиза и мышечного сокращения. В скелетной мускулатуре она существует в двух молекулярных формах нефосфорилированной ( неактивированная ) и фосфорилированной ( активированная ). Первая активна лищь при pH 8,2, вторая — при pH 6,8 и 8,2. При активации фермента отнощение активностей, измеренных при pH 6,8/8,2, возрастает от 0,05 до 0,9—1,0. Активация киназы достигается фосфорилированием а- и р-субъединиц, которое катализирует цАМФ-зависимая протеинкиназа. Каталитическую роль выполняет -субъединица б-субъединица идентична a +- вязывaющeмy белку — кальмодулину. Ферментативная активность киназы фосфорилазы полностью зависит от ионов На р-субъединице фермента имеется регуляторный центр, обладающий высоким сродством к АДФ. Константа Михаэлиса для АТФ равна [c.223]

Глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа — тетрамер (м. м.= 144 000 Да), построенный из химически идентичных субъединиц. Центральную роль в катализе выполняет цистеиновый остаток. Фермент ингибируется ионами тяжелых металлов. Константы Михаэлиса гли-церальдегид-З-фосфатдегидрогеназы из мышц кролика для НАД+ — 13 мкМ, для глицеральдегид-З-фосфата — 90 мкМ, для фосфата — [c.253]

Молекулярная масса 3-фосфоглицераткиназы равна 47 000 Да фермент представляет собой одну полипептидную цепь, состоящую из 420 аминокислотных остатков. 3-Фосфоглицераткиназа из мышц кролика содержит семь SH-rpynn. Она ингибируется ионами тяжелых металлов и SH-реагентами, тогда как фермент из дрожжей имеет лишь одну SH-rpynny, модификация которой не влияет на активность. Ионы Mg2+ и Мп2+ являются активаторами. Константы Михаэлиса для 3-фосфоглицерата — 0,2 мМ, для 1,3-дифосфоглицерата — 1,8 мкМ, для АТФ — 0,1 мМ для АДФ — 0,2 мМ для Mg2+ — 0,2 мМ. [c.260]

Глицерол-З-фосфатдегидрогеназа — димер, состоящий идипали вых субъединиц. Молекулярная масса фермента из мышц кролика составляет 78000 Да. Глицерол-З-фосфатдегидрогеназа угнетается 5Н-реа-гентами, а также ионами тяжелых металлов. Константы Михаэлиса для НАДН — 11,9 мкМ, глицерол-З-фосфата — 0,18 мМ, НАД+ — [c.267]

Наконец этот вопрос был детально изучен для белков, так как в чистых водных растворах заряд белковых молекул определяется только поглощением Н+ или ОН -ионов, что легко может быть измерено при помощи водородного или стеклянного электрода. Для белков поглощение Н+ - и 0Н - ионов непосредственно сопоставимо с константами диссоциации ионогенных групп — карбоксильной Ка и аминогруппы Кв- Точка нулевого заряда, т. е. точка равного поглощения Н+ - и ОН - ионов, называется для белков изоионной (Зеренсен) или изопротонной точкой. Положение изоточки (рУ) на шкале pH определяется для 1—У-валентного амфотерного электролита уравнением Михаэлиса [c.114]

В макроварианте вырезают полоски мембраны шириной 4 см и увеличивают объем наносимой сыворотки до 0,05—0,06 мл. В этом случае электрофорез продолжается 4—5 ч при напряжении 200 В или 1,5—2 ч при напряжении 400 В. Ионную силу буферного раствора Михаэлиса при этом уменьшают, разбавляя его дистиллированной водой в соотношении 3 2. В остальном макрометод ничем не отличается от микрометода. [c.72]

Приготовление буферного раствора. Иммуноэлектрофореа белков проводят обычно в буферном растворе Михаэлиса, имеющем pH 8,2 и ионную силу 0,05. [c.138]

Буферный раствор Михаэлиса готовят следующим образом 47,6 г диэтилбарбитурата натрия растворяют в 3000 мл дистиллированной воды, имеющей pH 7, и подкисляют сначала примерно до pH 8,4 65 мл 1 н. НС1, а затем осторожно до pH 8,2. После этого добавляют дистиллированную воду до конечного объема 4265 мл. Если необходимо получить буферный раствор меньшей ионной силы, производят дальнейшее разбавление. [c.138]

Восстановление соединения Т-1У до лейко-Т-1У осуществляется с помощью почти любого восстановителя, такого, как фенилгидразин [411], цинковая пыль и уксусная кислота или йодистоводородная кислота. Лейкосоль так легко окисляется, что ее нужно защищать от воздуха или ацетилировать. Однако лейкооснованне можно выделить, и оно окисляется не так легко [412]. Окисление лейкосоединения катализируется ионами многих металлов, в частности ионом двухвалентной меди [413], и ингибируется цистеином или глу-татионом [414]. При энзиматической дегидрогенизации молекулярный кислород часто можно заменить соединением Т-1У в качестве акцептора водорода. Если дегидрогенизация проводится в присутствии воздуха, то вторичной функцией кислорода является, вероятно, окисление образующегося лейко-метиле-нового голубого [415]. В этих реакциях в условиях, описанных Михаэлисом [296], играет роль также свободный радикал метиленового голубого. [c.583]

Лля определения активности и изучения кинетики действия ферментов по отношению к НФГ реакцию останавливают защела-чиваш1ем и регистрируют количество НФ в видимой области (при 405 нм) [56]. Однако, более удобным является фотометрический метод непрывной регистрации кинетики образования НФ в кислой области при 346 нм — в изобестической точке п-нитрофенолят иона [3, 57]. Следует иметь ввиду, что целлобиазы и / -глюкозидазы значительно различаются константами Михаэлиса по отношению к НФГ. Методика определения / -глюкозидазной активности изложена в разделе 5.6. [c.141]

Уже в течение долгого времени были известны мембраны, обладающие селективной проницаемостью по отношению к ионам такир.ш мембранами пользовались в химической технологии и в биохимии. С момента, когда химики впервые реализовали преимущества, предоставляемые свойствами этих мембран, были предложены мембраны разнообразных типов, из которых многие были приготовлены в лаборатории. Наибольшей популярностью пользуется коллодий, с помощью которого Михаэлис и Соллнер провели очень важные исследования. [c.146]

ЭФФЕКТОРЫ ФЕРМЕНТОВ, взмевягот скорость ферментативной р-ции. Различают ингибиторы (снижают скорость) и активаторы (повышают скорость). Конкурентные ингибиторы уменьшают константу Михаэлиса (см. Ферментативных реакций кинетика), неконкурентные — макс. скорость р-ции. Ингибиторы смет, типа действуют по обоим механизмам одновременно. Активаторы влияют, как правило, на макс. скорость р-ции. Для ферментов, состоящих из неск. субъединиц, Э. ф. часто влияют на сродство фермента к субстрату (аллостерич. Э. ф.). Прн этом связывание Э. ф. на одной субъединице может повышать или понижать сродство к субстрату др. субъединицы. Это проявляется в изменении характера зависимости скорости р-ции (или ф-ции насыщения фермента субстратом) от концентрации субстрата (появление З-образной или др. типов негипербо-лич. зависимости). Э. ф. могут быть аналоги субстратов (налр., производные.О-аминокислот — ингибиторы протеолитич. ферментов), ионы металлов, мн. анионы (Р , СЫ и др.). Формально Э. ф. является Н+, т. к. изменение pH таеды влияет на скорость ферментативной р-ции. Эхинопсин (М-метил-4-хинолон), хиноли-новый алкалоид, содержащийся в семенах О [c.724]

Обратимая часть изменений около оптимальной pH почти несомненно обусловлена изменениями количеств и активностей различных ионных форм фермента, субстрата и комплекса с ферментом. Большую часть результатов можно объяснить на основании изменений количества присутствующих фермента и комплекса. Объяснение результатов исследования в этой области было впервые предложено Михаэлисом и Давидсоном [56]. Они предположили, что могут существовать три формы фермента и что только одна из этих форм активна, причем она соединяется с субстратом, образуя промежуточный комплекс. Все три формы аналогичны неионизированной двухосновной кислоте, например дикарбоновой кислоте А(С00Н)2, и ее одно- и дважды ионизированным формам [c.131]

Используя полное уравнение, можно определить Ка и Къ при низких концентрациях субстрата, в то время как при высоких его концентрациях можно определить К п и К ъ- Знание этих констант диссоциации позволяет проникнуть в природу групп в комплексе и свободном ферменте на основании этих данных можно определить, какие группы подвергаются влиянию комплексообразования, и поэтому получить некоторые сведения о группах, являющихся активными при образовании комплекса с субстратом. Лэйд-лер [62[ составил таблицу данных, показывающих влияние на величину К комплексообразования, протекающего по тем местам молекулы, которые подвергаются ионизации, и, кроме того, связывающих эти эффекты с изменениями скорости и константы Михаэлиса при изменении pH. Там, где такие сведения оказываются непол ными, иногда для вычисления Ка или Къ можно воспользоваться методом, предложенным Диксоном (381. Сведения о группах, участвующих в комплексообразовании, были получены для взаимного превращения ионов фумаровой и малеиновой кислот в присутствии фумаразы [63J, для гидролиза сахарозы в присутствии сахаразы [64[, для гидролиза ацетилхолина при наличии холинэстеразы и ацетилхолинэстеразы [65[ и для окисления 2-амино-4-оксиптеридина в присутствии ксантиноксидазы [38]. [c.135]

Зёренсен придерживался, в основном, той техники определения, которая ранее предложена Бьеррумом [14]. Была сделана попытка элиминировать диффузион- g ный потенциал на жидкостных границах методом экстраполяции Бьер-рума [15]. Для этой цели проводили два измерения э. д. с. элемента (И. 8) для каждого раствора х с солевым мостом из 3,5 и 1,75 н. растворов КС1, помещенным между двумя полуэлементами. Наблюдаемую разность потенциалов добавляли к а. д. с. цепи с более концентрированным солевым мостом или вычитали из нее (рис. П. 1) для того, чтобы получить гипотетический потенциал, соответствующий солевому мосту с бесконечно большой концентрацией (1/с = 0), при которой диффузионный потенциал становится равным нулю. Очевидно, такая процедура действительно приведет диффузионный потенциал к пренебрежимо малой величине только в том случае, когда наблюдаемая разность э.д.с. мала [16, 17]. Михаэлис [18] считает, что экстраполяцию Бьеррума следует применять тогда, когда концентрация ионов водорода или гидроксила в исследуемом растворе превышает 0,001 г-ион/л. [c.29]

Шульман н сотр. [ИЗ—115] исследовали активный центр карбоксипептидазы А путем измерения релаксации малых молекул, связанных с этим ферментом. Карбоксипептидаза является протео-литическим металлсодержащим ферментом, который катализирует расщепление С-концевой пептидной связи в пептидах и белках. Она имеет молекулярную массу 34600 и содержит 1 атом цинка на молекулу, который обусловливает каталитическую активность, но фермент остается активным при замене 20 + на ионы Мп + или Со2+ [116]. Кристаллическая структура фермента известна [117, 118]. С атомом металла координированы три белковых лиганда, и имеются свободные положения по меньшей мере еще для двух лигандов. Связывание растворителя (НгО) [ИЗ], ингибиторов [114] или фторид-иона [115] на активном центре Мп2+-фермента влияет на релаксацию связанных ядер не только потому, что белок имеет длинное время корреляции, но также вследствие наличия парамагнитного иона металла. Уширение резонансных сигналов растворителя было объяснено тем, что одна молекула воды связывается с ионом Мп2+. Как следует из измерения уширения пиков метильных или метиленовых протонов конкурирующих ингибиторов — индо-лилуксусной, г/7ег-бутилуксусной, бромуксусной и метоюсиуксус-ной кислот — и одновременного определения времен корреляции взаимодействия протонов ингибитора с металлом, релаксация определяется главным образом временем обмена комплекса белок — ингибитор. Используя известные константы Михаэлиса — Ментен и эти данные, можно определить константы скорости всех отдельных стадий реакции фермента с субстратом. [c.393]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология