Аминокислоты микробиологический метод определения

Микробиологические методы определения витаминов, аминокислот и антибиотиков. — М. Колос, 1968. — 160 с. [c.193]

Кроме приведенных методов в лабораторной практике применяют микробиологические методы определения различных аминокислот Эти методы основаны на изменении интенсивности развития опреде ленных видов микроорганизмов в зависимости от количества амино кислот в исследуемой среде. [c.34]

Микробиологические методы определения витаминов и аминокислот. [c.367]

Микробиологические методы (для определения аминокислот, ферментов, витаминов).,Для жизнедеятельности, роста и размножения микроорганизмов необходима среда определенного химического состава. Если исключить из питательной среды хотя бы один компонент или, напротив, ввести дополнительно некоторое вещество, то микроорганизмы через некоторое время подают соответствующий сигнал. Между интенсивностью ответного сигнала и количеством введенного или исключенного вещества наблюдается определенная зависимость. Микробиологический метод основан на измерении интенсивности развития микроорганизмов в зависимости от количества определяемой аминокислоты (фермента, витамина). Все остальные вещества, необходимые для развития (роста) микроорганизмов, вводят в достаточном количестве в состав синтетической питательной среды. Последняя содержит также углевод (например, глюкозу), из которого молочнокислые бактерии образуют молочную кислоту [259—261]. [c.104]

Накоплено много данных о потребностях в отдельных аминокислотах у различных лабораторных животных, в том числе у крысы, собаки, мыши, а также у цыплят и у животных некоторых низших видов. В последнее время соответствующие сведения получены и относительно взрослых людей. Кроме того, много внимания уделялось изучению роли аминокислот в питании микроорганизмов работы по этому вопросу привели к разработке ценных микробиологических методов определения аминокислот. Исследования, посвященные роли аминокислот в питании, способствовали не только решению практических задач, но и выяснению ряда явлений, связанных с процессами обмена веществ. Заслуживает внимания, что прямым результатом исследований по вопросам питания явилось открытие двух аминокислот — метионина и треонина. [c.120]

Позднее при анализах аминокислотного состава стали использоваться микробиологические методы, существо которых состоит в том, что отдельные микроорганизмы требуют для своего развития наличия в питательной среде определенных аминокислот. Внося в контрольную синтетическую среду все необходимые аминокислоты, а в опытную среду — все аминокислоты, за исключением какой-либо одной, и обеспечивая потребности микроорганизма в этой аминокислоте добавлением белкового гидролизата, определяют интенсивность роста микроорганизмов и рассчитывают содержание в белковом гидролизате данной аминокислоты. Этот метод также очень трудоемок. [c.216]

Для количественного определения аминокислот применяют самые разнообразные методы наиболее важные из них можно разбить на следующие группы 1) химические методы 2) ферментативные методы 3) методы с применением изотопов 4) микробиологические методы и 5) хроматографические методы. Из химических методов особое значение имеют метод с использованием азотистой кислоты (стр. 33) и методы, основанные на реакции с нингидрином (стр. 33—34). [c.39]

Новейшими методами (микробиологическими) было произведено определение содержания отдельных аминокислот в плазме крови человека [c.443]

Существуют также многочисленные микробиологические методы определения аминокислот, основанные на подборе таких условий, при которых определяемая аминокислота становится фактором, лимитирующим скорость роста того или иного микроорганизма. Вопрос о потребности микроорганизмов в аминокислотах для обеспечения роста рассматривается в гл. II (стр. 133). [c.40]

Линейный микробиологический метод. В агаровую среду, находящуюся в чашке Петри и зараженную определенным тест-организмом, помещают бумажный диск (диаметр 10—15 мм). На диск наносят 0,1 мл анализируемого раствора витамина или аминокислоты. Это вещество диффундирует в среду. Ростовая реакция определяется по диаметру роста микроорганизмов вокруг диска (после 24—48-часовой инкубации в термостате при 37°С). Чем выше концентрация витамина или аминокислоты, тем больше диаметр зоны роста (градуировочный график). Данные для построения графика получают одновременно в опытах со стандартными растворами витамина или аминокислоты. Можно определять до 10 —10 ° г витамина в пробе. [c.105]

Главное преимущество микробиологических методов заключается в их исключительной чувствительности. Другое очень важное преимущество этих методов состоит в том, что микробиологическое определение аминокислот требует ничтожного количества исследуемого материала меньше 1 мг, иногда всего несколько микрограммов. Следует, однако, указать, что имеется и ряд затруднений при применении этих методов. Мы еще весьма мало знаем о том, как изменяется потребность бактерий в той или иной [c.34]

Они предусматривают точное определение количества аминокислот. Однако методы, о которых пойдет речь, в целом, как правило, предшествовали разработанному Муром с соавторами [44] способу хроматографии на колонке, который постепенно вытеснил микробиологические анализы, особенно после появле- [c.573]

Определение валина, лейцина и изолейцина. При действии нингидрина на эти аминокислоты (И), (П1) и (IV) также образуются летучие альдегиды, которые можно определить, как описано выше [76]. Количество каждой из трех указанных аминокислот можно определить также микробиологическим методом [64, 77]. Лейцин, в связи с его плохой растворимостью, можно определить методом изотопного разведения [61]. [c.36]

Микробиологические методы используют количественную, поддающуюся калиброванию зависимость между содержанием вещества, вносимого в питательную среду, и интенсивностью размножения определенных штаммов микроорганизмов. Так анализируют вещества, которые либо стимулируют жизнедеятельность микробов, либо, наоборот, ее подавляют. К первым относятся вещества витаминной природы, аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, а также сахара, обусловливающие дрожжевое брожение, а ко вторым — антибиотики и различные микробные яды. Интенсивность роста или угнетения микроорганизмов оценивается по мутности суспензий, изменению кислотности среды, диаметру колоний, а в случаях брожения — по объему образующихся газов. [c.216]

Существует ряд более или менее специфических микрометодов, но за последние годы взимание привлекли два более общих метода разделения и определения малых количеств аминокислот, именно адсорбционный и микробиологический методы. Настоящий обзор посвящен адсорбционному методу и не претендует на полноту (что связано с большими трудностями, так как не вся литература по данному вопросу была доступна автору). Его целью является подчеркнуть главным образом некоторые стороны проблемы, которые сыграли свою роль в работах лаборатории автора. [c.140]

Для количественного определения аминокислот существует много методов. Эти методы делят на химические, хроматографические, микробиологические, ферментативные и методы с применением изотопов. [c.16]

Разработанные впоследствии (к 1930 г.) методы количественного определения аминокислот, главным образом колориметрические, позволили определить до 100% аминокислотного состава белка. В последнее время для исследования состава белка стали применять новые методы химические, микробиологические, энзиматические и т. д. Среди них особое значение приобрел метод распределительной хроматографии . [c.705]

Микробиологические методы определения витаминов, аминокислот и антибиотиков Пер. с англ./Под ред. Н.Г. Первова. М. Колос, 1968. 160 с. [c.117]

И определяли аминокислоты микробиологическими методами. Если учесть, что содержание углеводов в молекуле составляет 24% (см. ниже), то это дает в сумме 90% веса молекулы. Стивенс и Финей [29] использовали метод Мура и Стейна при работе с гидролизатом, полученным после обработки в течение 22 час в 1000 объемов постоянно кипящей соляной кислоты при 110° в запаянных пробирках в вакууме. В этом случае суммирование содержания аминокислот и углеводной части (18,7%), определенной этими же авторами, дает 96% веса всех обнаруженных остатков. Однако никаких анализов, которые могли бы дать поправку на возможное разрушение или на неполный гидролиз аминокислотных остатков в этих условиях, не проводилось. [c.28]

Снелл (1946) разработал микробиологический метод количественного определения состава аминокислот. Различные микроорганизмы требуют для своего роста определенные аминокислоты, и скорость роста на среде, содержащей достаточное количество всех аминокислот, кроме одной, может служить показателем количества этого компонента в испытуемой смеси. Так, содержание аргинина в гидролизате может быть определено по влиянию этого гидролизата на рост La toba illus asei количество аргинина определяют, сравнивая исследуемую пробу со стандартными образцами, содержащими различные концентрации аргинина. [c.655]

Вполне понятно, что в описанных ситуациях речь идет о незаменимых аминокислотах L-ряда, поскольку они необходимы для синтеза белка. Однако L-аминокислоты очень трудно создать путем химического синтеза, при котором получаются рацематы аминокислот, нуждающиеся в разделении на оптические антиподы. Поэтому основная масса аминокислот для нужд животноводства производится путем микробиологического синтеза, т. е. использования определенных микроорганизмов—продуцентов аминокислот, которые вьщеляют те или иные L-аминокислоты прямо в культуральную жидкость в количестве нескольких граммов на 1 л. В частности, в Институте биохимии им. А. Н. Баха под руководством чл.-кор. В. Н. Букина разработан экономичный микробиологический метод получения L-лизина, а во Всесоюзном научно-исследовательском институте генетики и селекции промьпцленных микроорганизмов его сотрудниками под руководством чл.-кор. В. Г. Дебабова методами генетической инженерии создан штамм кишечной палочки, выделяющий в культуральную среду до 30 г L-треонина. Ряд аминокислот получают также при помощи иммобилизованных бактериальных клеток и ферментов (см. гл. ПГ). Лишь метионин синтезируют заводским путем в виде рацемата, который столь же хорошо используется организмом, как и L-метионин. [c.277]

Данные по аминокислотному составу, включенные в настоящие таблицы, получены в основном с помощью ионообменной хроматографии на колонках (ИОХ) [1, 9, 54, 55] и микробиологического метода [11, 25, 30, 70], основанного на ограничении роста специально подобранных микроорганизмов на питательной среде, не содержащей той или иной аминокислоты, которая в этом случае становится лимитирующим фактором [И, 25. 30]. При определении какой-либо аминокислоты к питательной среде, не содержащей ее, добавляют исследуемый гидролизат. Об интенсивности роста микроорганизма судят по нарастанию кислотности среды (или по степени помутнения последней), которое измеряют соответствующим способом (титрование, нефелометрия). Основываясь на зависимости ростопой реакции от содержания в среде лимитирующей аминокислоты, строят графики для количественного определения аминокислот. [c.188]

Другим новым методом количественного определения аминокислот является микробиологический метод. Для этой цели используются различные культуры молочнокислых бактерий, культура Ьеисопоз1ос тезеп1его1йе8 и некоторые штаммы Иеигозрога. Интенсивность роста культуры определяется по мутности бактериальной суспензии, по количеству образующейся молочной кислоты или путем взвешивания мицелия [64—66]. Одну из модификаций микробиологического метода представляет метод определения аминокислот по количеству углекислоты, образующейся в результате ферментативного декарбоксилирования аминокислот бактериальными препаратами. Таким путем можно определить тирозин, гистидин, лизин и глутаминовую кислоту [67]. Для количественного определения какой-нибудь аминокислоты микробы высеваются на синтетическую среду, содержащую все необходимые аминокислоты и факторы роста, за исключением исследуемой аминокислоты. [c.34]

Новым методом идентификации аминокислот и их количественного определения является также спектрофотометрия в инфракрасном свете. Каждая аминокислота и каждая а-хлорокис-лота (получаемая при действии соляной и азотной кислот на аминокислоты) имеют характерную кривую поглощения в инфракрасном свете [68]. При помощи спектрофотометрии в инфракрасном свете было показано, что определение лейцина и изолейцина микробиологическим методом дает слишком высокие величины [69]. [c.35]

Эта реакция не пригодна для отщепления С-концевых остатков пролина, так как они не образуют тиогидантоин, остатков аспарагиновой и глутаминовой кислот, которые образуют циклические ангидриды, а не тиогидантоины (аспарагин и глутамин, наоборот, дают тиогидантоины [301]), а также остатков серина, треонина, цистина, аргинина и лизина [19, 301], которые неустойчивы при циклизации или регенерации аминокислоты из тиогидантоинового производного. Таким образом, этот метод находит весьма ограниченное применение для прямого определения строения пептидов и белков. Для определения С-концевого остатка по разности [107] реакция может оказаться более полезной, но ее все же нельзя использовать для определения аспарагиновой и глутаминовой кислот и пролина. Однако путем микробиологического анализа [107], специфичного для остатков /-аминокислот, эти аминокислоты могут быть определены по потере оптической активности на 50% вследствие рацемизации в том случае, когда они являются С-концевыми. [c.247]

Определение лизина. Другая основная аминокислота — лизин (XIV) — отделяется от остальных основных аминокислот осаждением пикриновой кислотой. Для определения лизина были также использованы метод изотопного разведения [61] и микробиологические методы Leu onosto mesenteroides или декарбоксилаза из бактерий) [106]. [c.39]

Потребность в отдельных аминокислотах у различных видов животных неодинакова. Так, собака может обходиться без аргинина [35], между тем как крыса нуждается и в гистидине, и в аргинине [32]. Любопытно, что потребность в некоторых аминокислотах у многих бактерий и плесеней более резко выражена, чем у человека и других позвоночных. В гл. П1 уже указывалось, что не только валин, лейцин, изолейцин и лизин, но и такие заменимые для организма высших животных аминокислоты, как глицин, пролин и глутаминовая кислота, могут быть определены микробиологическим методом, так как эти последние аминокислоты не могут быть синтезированы микробами, используемыми для их определения. Необходимо также отметить, что потребность в отдельных аминокислотах у некоторых грибов и плесеней, например у Neurospora rassa, может резко меняться под влиянием облучения или других воздействий [36]. [c.368]

В статьях настоящего сборника представлены основные современные методы анализа белков и аминокислот. Сводные обзоры этих методов даны в статьях П. Кирка Химическое определение белков и особенно А. Мартина и Р. Синджа Аналитическая химия белков . Последующие три статьи Э. Снелла Микробиологические методы анализа аминокислот , А. Тизелиуса Адсорбционный анализ смесей аминокислот и Г. Свенссона Препаративньи электрофорез и ионофорез , специально посвящены трем группам методов, получившим за последние годы особенно большое значение. Необходимо, однако, отметить, что теория хроматографических и электрофоретических методов анализа разобрана в этих статьях недостаточно. Кроме того, в статьях сборника неполно представлены изотопный и спектрофотометрические методы анализа. В статье С. Фокса Конечные аминокислоты в пептидах и белках рассматривается весьма важный для изучения структуры белков, но, как видно из материала статьи, еще очень слабо изученный вопрос о конечных группировках полипептидных цепей. Две заключительные статьи сбор- [c.10]

Идеальной средой для проведения микробиологического анализа является такая среда, которая содержит все вещества, существенные для роста или стимулирующие рост данного микроорганизма, за исключением одного вещества, подлежапгего определению. Применяемые в настоящее время микробиологические методы лишь приближаются к этому идеалу. Хорошее знание потребностей в питании микроорганизма является основным для развития метода испытаний в основе дальнейшего усовершенствования метода лежит все возрастающее понимание особенностей обмена организма. Краткие сведения о потребностях в питании микроорганизмов, применяемых до сих пор в анализе аминокислот, даны ниже. [c.171]

Химические методы определения аминокислот. Хотя при определении индивидуальных аминокислот наибольшее развитие получили микробиологические методы, по некоторый успех следует отметить и в отношении химического определения этих соединений. Стабильность и интенсивность окраски, образующейся при реакции открытия аргинина, могут быть значительно повышены, если вместо применяемого обычно концентрированного раствора гинобромита применять 0,06 н. раствор гипохлорита натрия [3]. [c.161]

Химический метод определения ценности белков пищевого продукта сводится к выясиеник) количественного содержания отдел1,ных аминокислот в том или ином белке. Этот метод получил особое применение в последипо годы в связи с использованием хроматографического, а также микробиологического методов количественного оиределения аминокислот. По количественному содержанию отдельных незаменимых аминокислот в белках данного пищевого продукта судят о его биологической ценности. [c.476]

Определение аминокислот всегда представляло исключительно важную задачу биохимии ввиду того, что эти соединения играют роль кирпичиков при построении пептидов и белков. Широко применяемый, основанный на ионной хроматографии и теперь уже ставший классическим метод Мура и Штейна [1] не позволяет провести различие между энантиомерами. Между тем в хиральном аминокислотном анализе ощущается явная потребность так, например, в пептидном синтезе решающее значение может иметь оптическая чистота исходного материала, а результаты стереохимического анализа могут искажаться из-за рацемизации. Другой областью применения дгырдльного аминокислотного анализа является определение строения многих микробиологических продуктов, таких как полипептидные антибиотики, в состав которых входят о-аминокислоты, не обнаруженные у млекопитающих [2]. [c.173]

Формы регуляции обмена веществ при участии метаболитов крайне многообразны. Простейшая из них сводится к ускорению или замедлению биохимических процессов за счет недостатка или избытка тех соединений, которые являются участниками соответствующих реакций. Так, объем белкового синтеза у гетеротрофов лимитируется поступлением незаменимых аминокислот и интенсивностью синтеза полузаменимых аминокислот. На этом, в частности, базируется микробиологический метод количественного определения содержания аминокислот в белковых гидролизатах и иных средах. [c.473]

Физические и химические методы определения органических загрязняющих веществ в почве должны быть пригодны для анализа в присутствии большого числа природных соединений. Стандартные методы [9], используемые специалистами в области сельского хозяйства и почвоведения, могут быть приспособлены для анализа ряда примесей. Так, Блэк и др. [9] приводит исследования органических и микробиологических компонентов, в том числе общего углерода, органического углерода, гексафосфата, инозитола, амино. Сахаров, аминокислот, изучение микробиологической флоры, аэробных спорообразующих бактерий, бактерий, способных присоединять молекулу азота, азобактерий, актиномицетов, грибков, водорослей, клещей и других микроартродов, энзимов и микробиологического дыхания. Выбор соответствующих методов для определения органических загрязняющих веществ в почве должен быть основан на использовании упомянутых ранее методов анализа нормальных компонентов. [c.639]

Резкая интенсификация научной деятельности за последние десятилетия вынуждает исследователя отказаться от чтения множества узкоспециальных публикаций и большую часть информации получать из заслуживающих доверия обзоров. Эта ситуация наблюдается и в области анализа аминокислот, пептидов и белков, где каждые пять лет появляются новые эффективные методы, способные заменить уже существующие. Например, в настоящее время газожидкостная хроматография успешно конкурирует с автоматической ионообменной хроматографией аминокислот по Муру и Стейну, которая полностью заменила микробиологический анализ, хроматографию на бумаге и другие методы количественного анализа, существовавшие до 1958 г. Определение последовательности пептидов — трудоемкая задача при использовании обычных методов — производится на данном этапе автоматически на секвенсере Эдмана, а последовательность небольших пептидов удобно определять с помощью масс-спектрометрии. [c.6]

В литературе приводятся случаи, когда применялись загрязненные аминокислоты. Например, Смит и Грин [35] пользовались для микробиологического определения изолейцимом, который, как было позже обнаружено, содержал аллоизолейцин [36]. Между тем ясно, что наличие примесей в бактериальной среде и меченых аминокислотах может носить серьезные погрешности. Шемин и Фостер [9] подсчитали, что 1 % примеси азотсодержащего соединения яри анализе методом изотопного разбавления вносит ошибку до 9%. [c.215]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология