Белки поглощение в ультрафиолетовой

Заметим, что именно аминокислоты фенилаланин, тирозин и триптофан обусловливают спектры поглощения белков в ультрафиолетовой области спектра. Обычно считают, что максимум поглощения белков соответствует 280 нм. [c.30]

Спектрофотометрический метод определения белка основан на способности ароматических аминокислот (триптофан, тирозин и в меньшей степени фенилаланин) поглощать ультрафиолетовый свет с максимумом поглощения при 280 нм. [c.33]

Ультрафиолетовые спектры белков отличаются сильным поглощением, характеристическим для ароматических фрагментов аминокислот, входящих в их состав фенилаланин, тирозин, триптофан. Эти спектры поглощения используют для аналитического определения остатков указанных аминокислот. Резкий максимум поглощения, характерный для нуклеиновых кислот и нуклеопро-теидов, позволяет определить их содержание в отдельных клетках. [c.361]

Метод основан на способности ароматических аминокислот (триптофана, тирозина и в меньшей степени фенилаланина) поглощать ультрафиолетовый свет с максимумом при 280 нм. Измеряя величину оптической плотности при этой длине волны, находят количество белка в растворе. Поскольку белки отличаются по содержанию ароматических аминокислот, их поглощение в ультрафиолетовой области спектра может сильно различаться. Условно считают, что при концентрации усредненного белка в растворе, равной 1 мг/мл, величина оптической плотности при 280 нм-равна 1,0 (при толщине слоя жидкости в 1 см). [c.83]

Поглощение ультрафиолетовых лучей растворами белков объясняется присутствием в белке триптофана, тирозина и в меньшей степени фенилаланина. На максимумы поглощения сильное [c.266]

Ультрафиолетовые спектры поглощения определяются возбуждением электронных уровней атомов и молекул и обладают максимумами, положение которых характерно для определенных атомных группировок, сопряженных двойных связей и др, В белках ультрафиолетовые спектры поглощения в основном определяются ароматическими аминокислотами — фенилаланином /--макс— 260 м х), тирозином и триптофаном 280 жр-), причем спектры поглощения могут быть даже использованы для аналитического определения этих аминокислот. Нуклеиновые кислоты и нуклеопротеиды обладают настолько резким максимумом поглощения при 260—265 лр., что при помощи фотографирования в ультрафиолетовом микроскопе легко определить их содержание в отдельных клетках (Брумберг). Зависимость ультрафиолетовых спектров поглощения от pH, сос- тава среды, от образования комплексов с другими соединениями позволяет исследовать изменения состояния растворенных веществ так, по смещению максимума поглощения с 280 до 260—265 м а было обнаружено образование комплекса между белками и полисахаридами (Розенфельд). Линейные полимеры обычно не имеют интенсивных полос поглощения в видимой и ближней ультрафиолетовой областях спектра. [c.61]

Очевидно, что исчезновение гипохромизма при переходе спираль — клубок, при денатурации, может дать количественную меру а-спиральности белка. Ввиду трудностей, с которыми сопряжены спектрофотометрические измерения в дальней ультрафиолетовой области вблизи 2000 А, этот метод в применении к белкам малоупотребителен. Напротив, он весьма прост и эффективен в случае нуклеиновых кислот при определениях степени спаривания цепей. Длинноволновые электронные полосы поглощения нуклеиновых кислот лежат вблизи 2600 А. Эти полосы, обусловливаемые лл -переходами, характеризуются дипольными моментами, лежащими в плоскостях азотистых оснований. В табл. 5.3 приведены характеристики полос поглощения в спектрах азотистых оснований 71]. [c.288]

Из аминокислот, входящих в состав белков, лишь триптофан, тирозин и в меньшей степени фенилаланин обладают заметным поглощением в ультрафиолетовой области спектра. Оптическая плотность растворов белков, содержащих эти аминокислоты, шри 280 нм прямо [c.22]

Для расчета доли спиральной формы можно также воспользоваться линейной зависимостью между этой величиной и поглощением белка в ультрафиолетовой области при длинах волн менее 200 ммк, где находится полоса поглощения пептидной группы. В этой области поглощение зависит от конформации молекулы — для спиральной структуры оно вдвое слабее, чем для хаотической или Р-структур, спектры которых подобны. Наблюдается также дихроизм поглощения в ультрафиолетовой области, обусловленный особенностями симметрии спирали. Данные о содержании а-спиральной формы, рассчитанные на основании интенсивности поглощения при 190—200 ммк, приведены в последнем столбце табл. 13. При измерениях в этой коротковолновой области необходимо учитывать светорассеяние и разницу в поглощении, обусловленном боковыми группами для двух конформаций. [c.297]

Метод Лоури приблизительно в 100 раз чувствительнее биуретового метода и в 10—20 раз спектрофотометрического метода измерения концентрации белка по поглощению света с длиной волны около 280 нм (ультрафиолетовая область). С помощью метода Лоури можно определить количество белка в растворе, если его содержание составляет 10—20 мкг в 1 мл, [c.20]

Мутагенное действие различного рода излучений и химических веществ на организмы связано в первую очередь с изменением ДНК. Так, было установлено, что спектр мутагенного действия ультрафиолетовых лучей соответствует спектру их поглощения ДНК и не соответствует спектру поглощения хромосомных белков. Белки поглощают ультрафиолетовые лучи в диапазоне 180 нм, а ДНК — 260 нм (в том диапазоне, в котором эти излучения вызывают больше всего наследственных изменений). При действии лучей Рентгена на чистые препараты ДНК ее молекулы разрушались. Горчичный газ (иприт) и некоторые другие химические мутагены оказывают на ДНК значительно большее химическое действие, че м на белок и другие вещества клетки. [c.130]

Мы рассмотрели только те методы количественного определения белка, которые могут быть особенно полезны для наблюдения за ходом выделения и очистки. Известно немало других, менее универсальных, методов, применяющихся для решения других задач. К ним относится, например, определение концентрации белков в сыворотке крови по удельному весу последней — метод весьма ценный для клинических анализов.. Заслуживает особого упоминания и весьма чувствительный метод определения белка по поглощению ультрафиолетового света с Я = 200 220 ммк (область поглощения пептидными группами белка). Его распространение сдерживается пока крайней дефицитностью соответствующей аппаратуры. [c.34]

Кроме того, следует считаться с возможностью смещения обеих нуклеиновых кислот, особенно при определении их содержания в ядре. И наконец, поглощение света белками в ультрафиолетовой области также может послужить источником ошибки, особенно при их высоком содержании. Поглощение ультрафиолетового света жирами и углеводами в большинстве тканей не играет никакой роли. [c.312]

Дж/моль — энергия разрыва связи С]—С1), что соответствует видимой области света. Действительно, разложение СЬ на атомы С1 может происходить под действием видимого света. Уксусный альдегид и ацетон поглощают только в ультрафиолетовой области спектра и поэтому устойчивы к действию видимого света. Заметим, что бесцветны все белки и нуклеиновые кислоты ( если вещество белковой природы окрашено, как, например, гемоглобин, то это обусловлено поглощением света не белком, а связанным с ним низкомолекулярным соединением, в данном случае гемом). Поэтому эти важнейшие биологические полимеры устойчивы к видимому свету, и фотохимические реакции с их участием начинаются [c.368]

Окраска растворов макромолекул и белков зависит прежде всего от истинного поглощения. Максимумы этого поглощения, как правило, расположены вне видимой области спектра. Поэтому растворы, бесцветные в видимых лучах, могут обладать сильным поглощением в ультрафиолетовой и инфракрасной областях спектра. [c.361]

И ближнюю инфракрасную область. Этот участок в увеличенном масштабе изображен на рис. 13-1 (вторая линия сверху). Свет, достигаю-ш,ий поверхности Земли, занимает узкий интервал от 320 до 1100 нм. Глаз человека способен воспринимать свет в еще более узком интервале 380—760 нм, включающем все цвета радуги. Максимум поглощения ароматических колец белков и нуклеиновых кислот равен соответственно 280 и 260 нм. Хотя свет с такими длинами волн в основном поглощается озонным слоем стратосферы, сквозь атмосферу проходит достаточное количество ультрафиолетовых лучей, чтобы вызвать многочисленные мутации и солнечные ожоги. [c.6]

Есть основания предполагать, что мутагенное действие (способность вызывать мутации) различного рода из.пучений и ряда химических факторов связано в первую очередь с изменением ДНК под влиянием этих воздействий. Было найдено, что во многих случаях спектр действия ультрафиолетовых лучей соответствует спектру их поглощения нуклеиновыми кислотами. В некоторых случаях отмечалось наличие двух точек в спектре де11ствия ультрафиолетового освещения, одна из которых соответствовала поглощению ультрафиолетовых лучей белками, а другая — нуклеиновыми кислотами. Таким образом, в иных случаях получалась довольно сложная картина. [c.67]

Методы исследования пространственного строения белков и пептидов в растворе. Конформационные состояния белков и пептидов в растворе исследуются различными методами, каждый из которых имеет свои достоинстаа и ограничения. Информацию о вторичной структуре можно получить из ультрафиолетовых спектров поглощения в области ISO — 210 нм как показали исследования регулярных полипептидов (например, полилизина), а-спираль имеет меньшее (гипохромизм), а Р-структура большее (гиперхромизм) поглощение, чем неупорядоченный клубок. В течение долгого времени процентное содержание а-спиральных структур оценивали по кривым дисперсии оптического вращения (уравнение Моф-фита, 1956). В настоящее аремя содержание различных типов аторичных структур определяется из спектров кругового дихроизма (КД) на основе сравнения спектров пептидов и белков с кривыми КД канонических вторичных структур, полученных для регулярных полипептидов (Э. Блоут, 1961) (рис. 64) или выведенных на основе анализа кривых КД ряда белков с установленной пространственной структурой в кристалле. [c.111]

Для быстрых предварительных и сравнительных оценок может быть полезным определение белка по поглощению ультрафиолетового света при Я = 280 ммк, обусловленному входящими в его состав ароматическими аминокислотами. Чувствительность его довольно велика — около 0,2 мг/мл. Однако в присутствии нуклеиновых кислот результаты существенно искажаются. Частично С1 орректировать эти искажения можно, определяя поглощение не только при 280 но и при 260 ммк — в области максимального поглощения света нуклеиновыми кислотами. Существуют специальные таблицы и формулы, позволяющие по этим данным оценить соотношения содержания белка и нуклеиновых кислот. Однако для точных количественных определений малоизученных белков этот метод не может быть рекомендован. [c.34]

Белковые АК - твердые вещества, выделяемые в виде белого порошка, обычно хорошо растворимые в воде и в полярных растворителях. Многие аминокислоты поглощают в ультрафиолетовой (УФ) области, но особенно специфическое поглощение при 280 нм имеют ароматические АК (фенилаланин, тирозин и триптофан) и поэтому содержание белка часто определяют именно по характеру спектра поглощения в УФ-об-ласти. [c.8]

Фотодинамическое действие можно рассматривать как сенсибн лизируемое красителем фотоокисление субстрата типа окислительной деструкции определенных аминокислотных боковых цепей белка [639], которое протекает без разрушения красителя [320, 651]. Биологический эффект этого процесса отличается от биологического эффекта, вызываемого прямым поглощением ультрафиолетового излучения [662—665]. Например, при бактерицидном действии УФ-света (280 нм) может иметь место фотодимеризация тимина, протекающая в процессе дезактивации ДНК [665, 666]. Для объяснения различных фотодинамических эффектов могут быть привлечены механизмы, рассмотренные на стр. 454, например, механизмы с переносом кислорода. В отсутствие кислорода фотоокисленИе может протекать и по пути отрыва водорода с образованием семи-хиноновых радикалов красителя и радикалов субстрата [237]. [c.459]

Спектрофотометрическое титрование комплексов железа и меди с сидерофилином также показало значение тирозильных остатков в металлсвязывающей функции белка [75, 76]. В дифференциальных спектрах поглощения белка в ультрафиолетовой области в присутствии щелочи по сравнению со спектрами при нейтраль- [c.346]

Поглощение ультрафиолетового излучения. Большинство белков поглощает ультрафиолетовое излучение с длиной волны около 280 тр. Было показано1 [91—94], что это поглощение обусловлено тирозином, триптофаном и (в меньшей степени) фенилаланином. Таким образом, величина поглощения зависит от содержания этих аминокислот в белке. Измерение оптической плотности белкового раствора при 280 пу служит удобным и точным методом определения концентрации белка [95], если известен коэффициент экстинкции и в растворе нет других веществ, поглощающих свет с этой длиной волны. Рассматриваемый метод можно также применять для приближенного измерения общего содержания белков в смеси в тех случаях, когда допустимо использование среднего коэффициента экстинкции. Метод имеет то преимущество, что на поглощение света не влияют растворенные соли и многие другие вещества и что, следовательно, определение можно производить на образцах белковых фракций без всякой специальной их подготовки, Анализ производится быстро, причем требуются всего лишь доли миллиграмма белка. [c.20]

Количественное определение белков. Различают две группы методов 1) определение количества белков в растворе на основе физикохимических свойств биуретовый, рефрактометрический и нефело-метрический методы, поглощение ультрафиолетового излучения (при 280 нм поглощают ультрафиолет остатки ароматических аминокислот, при 180—210 НМ — пептидная связь и ряд конформационных факторов) 2) количественное определение индивидуальных белков на основе их биологических свойств (радиоиммунный, иммунофер-ментные методы). [c.49]

Недостатки непрерывной элюции заключаются в том, что белни (особенно движущиеся более медленно) элюируются в разбавлен 10М виде и что некоторые из них адсорбируются на трубках, по которым элюат поступает к регистратору поглощения ультрафиолетового света и коллектору фракций. Страух [1239] создал прибор, который одновременно регистрирует ультрафиолетовое поглощение и управляет скоростью элюции, вследствие чего устраняется разведение выходящих из колонки веществ. Описана также [811] методика элюирования белков при помощи буфера, циркулирующего по заранее заданной программе. [c.121]

Ароматические аминокислоты тирозин и триптофан, содержащиеся в белках, поглощают свет в области 280 нм. Однако сильное поглощение ультрафиолетовых лучей в этой области характерно и для нуклеиновых кислот, хотя в целом пик поглощения последними ультрафиолетовых лучей приходится на область спектра 260 нм. Поэтому при определении концеитрации белка в растворах названным методом показания светопогло-щеиня (синонимы —оптическая плотность, экстинкция) снимают при 280 и 260 им. Показания свстопоглощеиия шкалы прибора подставляют в уравпеипе Варбурга — Христиана [c.177]

В Присутствии примесей, поглощающих в ультрафиолетовой области при 260—280 нм, например компонентов нуклеиновых кислот, определение белков по поглощению при 220 нм идентично колориметрическому методу Лоури. Показано, что при этом можно работать в растворах хлористого натрия, какоди-лата, бората, фосфата натрия и калия, сульфата аммония (при концентрации выше 0,1 М), тогда как концентрация гидроокиси натрия, ацетатов, глицина, трис-буфера не должна превышать [c.458]

Белки, содержащие свободные сульфгидрильные группы, образуют аналогичные соединения с метилнафтох/иионом, о чем свидетельствует появление в ультрафиолетовом спектре характерных полос поглощения, остающихся после повторной очистки путем переосаждения сульфатом аммония. [c.423]

Большинство аминокислот практически не поглощает свет в доступной для регистрации области, так что их приходится окра-тпвать нпнгидрином. Этот метод окраски будет подробно рассмотрен в приложении 2, посвященном аминокислотным анализаторам. Пептиды и белки поглощают свет в области 206—215 нм за счет пептидной связи и в широкой области спектра с максимумом вбли- и1 280 нм за счет присутствия в них ароматических аминокислот. Азотистые основания и нуклеиновые кислоты хорошо поглощают вблизи 260 нм. Поэтому не удивительно, что основной метод детектирования в хроматографии белков и нуклеиновых кислот — это регистрация поглощения света в ультрафиолетовой области спектра. Соответствующие приборы мы будем для краткости именовать УФ-детекторами. [c.82]

Электронные переходы полипептидных и нолинуклеотидных цепей и, тем самым, белков и нуклеиновых кислот расположены в ультрафиолетовой области спектра. Полосы поглощения пептидной связи —СО—NH— лежат в области 185—240 им, здесь же и в более коротковолновой области расположены полосы алифатических боковых цепей аминокислотных остатков. Ароматические остатки Трп, Фен, Тир имеют полосы поглощения в области 280 нм. Азотистые основания в нуклеиновых кислотах поглощают свет в области 260 нм. Таким образом, белки и нуклеиновые кислоты бесцветны, они не поглощают видимый свет. [c.140]

Давно известно, что облучение водных растворов белков изменяет спектры поглощения в ультрафиолетовом свете. На рис. 39 приведены данные Гузман Баррона [62], полученные при облучении сывороточного альбумина быка рентгеновскими лучами, Максимум поглощения при 2800 А в значительной мере обусловлен тирозином и частично триптофаном максимум [c.225]

Фотохимическая реакция в каждом данном биологическом соединении проходит под воздействием ультрафиолетовых лучей определенной длины волны. Так, ультрафиолетовые лучи с длиной волны 275. .. 280 нм поглощаются преимущественно белками ультрафиолетовые лучи области 250. .. 260 нм - нуклеиновыми кислотами и нуклеопротеидами лучи с длиной волны 297 нм поглощаются 7-8-дегидрохолестерином (провитамином з) и т.п. Под влиянием поглощенной энергии ультрафиолетовых лучей в организме животных образуются биологически активные продукты - ацетилхолин, гистамин, гистаминоподобные вещества. Кроме того, ультрафиолетовые лучи способствуют денатурации белка и нуклео-протеидов, т.е. изменяют физико-химичес-кое состояние протоплазмы клеток. [c.731]

Использование флуорометрических методов ограничивается тем, что далеко не все поглощающие ультрафиолетовое излучение вещества являются достаточно эффективными флуорофорами. Тем не менее среди них находятся такие аминокислоты, как триптофан и тирозин, в результате чего флуоресцируют все содержащие их белки. При облучении светом длиной волны 280 нм, т.е. в максимуме поглощения остатков триптофана, наблюдается флуоресценция с максимумом испускания при 348 нм. [c.252]

При облучении водных растворов тирозина образуются аммиак и 3,4-дноксифенилаланин 2,4-диоксифеннлал.анин (тира-мин) образуется в незначительных количествах или совсем не образуется. Известно [48], что аналогичная реакция вызывается реактивом Фентона (стр. 205), и почти не остается сомнений в том, что эти реакции обусловлены реакциями гидроксила с ароматическим кольцом. Это открытие особенно важно в связи с изменениями спектра поглощения в ультрафиолетовом свете при облучении белков. Данный вопрос мы рассмотрим ниже. [c.221]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология