Элюирование восходящее

Направление элюирования (восходящее элюирование, элюирование в горизонтальной камере). [c.27]

В ионообменной хроматографии важно, чтобы растворы проходили через колонку равномерно по всему поперечному сечению каких бы то ни было нарушений равномерности потока необходимо тщательно избегать. До сих пор почти все исследователи применяли нисходящие потоки однако успешные результаты были получены также и при элюировании восходящим потоком элюента [64]. Процессы с нисходящими потоками проще в осуществлении, но в некоторых случаях, когда элюент имеет высокую плотность, следует предпочесть проведение процесса в восходящем потоке. При всех сложных разделениях рекомендуется применять плоское днище (например, в виде стеклянного пористого диска), но пе пробку из стеклянной ваты. В настоящее время имеются хроматографические колонки с взаимозаменяемыми частями. В таких колонках можно производить замену стеклянных фильтров, а также другие необходимые изменения. В случае ионитов, которые могут забивать поры стеклянного фильтра, на его поверхность наносят ровный слой волокон стеклянной ваты или кварцевого песка. Оба способа с успехом применяются в лаборатории автора. Предлагалось также покрывать стеклянный фильтр волокнами синтетических материалов (например, полиэфира) или слоем фильтровальной бумаги. Некоторые исследовате.ли рекомендуют помещать пробку из стеклянной ваты в верхнюю часть колонки, чтобы предотвратить образование каналов в слое ионита. [c.189]

При градиентном элюировании осуществляется постепенное, а не дискретное изменение состава элюирующих растворителей. Два (рис. 1.10) или большее число растворителей постепенно смешиваются, и состав элюента, вводимого в колонку, постепенно изменяется в соответствии с количеством выходящей из колонки смеси. При этом нисходящая ветвь пика (к) всегда элюируется растворителем с несколько более высокой элюирующей способностью, чем растворитель, использованный для элюирования восходящей ветви пика (в). Таким образом достигается сужение зон и уменьшается возможность образования хвостов . Применение градиентного элюирования обычно спо- [c.32]

На практике применяют различные виды элюирования восходящее, нисходящее, горизонтальное, круговое (центрифужное). При нисходящем хроматографировании следует тщательно уложить край бумаги в лоток и прижать ее тяжелой стеклянной палочкой или узкой пластинкой, чтобы бумага не могла соскользнуть в процессе элюирования. Во время работы не следует касаться бумаги пальцами, особенно если хроматографируются аминокислоты. Закрепленную в лотке полоску или лист бумаги помещают на подставку внутри камеры, закрывают камеру крышкой и выдерживают в атмосфере паров неподвижной фазы в течение определенного времени — от 5 мин до 16 ч, т. е. до следующего дня. При работе с сильно летучими растворителями типа растворителей Буша (см. разд. 3.5.6 Стероиды и терпеноиды ) бумагу следует выдерживать над неподвижной фазой не менее 3 ч, а лучше до следующего дня, если неподвижная фаза не наносилась на бумагу посредством одного из указанных выше методов. По окончании выдержки наливают в лоток подвижную фазу и дают ей передвигаться в бумаге под действием капиллярных сил почти до самого края. После этого осторожно вынимают хроматограмму из камеры, сразу же отмечают положение фронта растворителя и дают листку высохнуть. При работе с большими листами удобно пользоваться специальными широкими щипцами. [c.92]

Хроматограммы чаще всего элюируют по восходящему варианту. Для закрепленных слоев обычно используют высокие узкие камеры, занимающие мало места насыпные слои элюируют в плоских камерах. В качестве последних годятся чашки Петри с пришлифованным к крышке верхним краем. Некоторые специальные варианты элюирования приведены в разд. 3.1. На рис. 13 схематически изображено проявление закрепленных и незакрепленных (насыпных) слоев в самом обычном варианте. [c.66]

Для элюирования можно воспользоваться любой из хорошо известных методик, а именно восходящей, нисходящей или радиальной хроматографией. Чаще всего, однако, применяется техника восходящей хроматографии. [c.463]

Элюирование проводят восходящими, нисходящими и горизонтальными методами. Методики нанесения пятен и детектирования элементов аналогичны уже описанным для хроматографии на бумаге. Здесь также справедливы замечания об окрашенных реагентах для детектирования элементов. Тонкослойные хроматограммы следует сушить в сушильном шкафу, а не в струе воздуха, что достаточно при работе с бумагой. [c.464]

На одну сторону стеклянной пластинки (ширина 2—4 см, длина 15—20 см) наносят тонкий слой измельченного адсорбента. На расстоянии 2—3 см от края пластинки отмечают стартовую линию, на которую помещают каплю анализируемого раствора. Пластинку ниже стартовой линии погружают в систему растворителей. По мере продвижения жидкости вверх по слою адсорбента происходит разделение смеси веществ (восходящее элюирование). Отмечают границу подъема жидкости (линия фронта растворителя), высушивают и всю поверхность смачивают раствором соответствующего реагента (проявление). При этом разделенные вещества обнаруживают по появлению окрашенных пятен между стартовой линией и фронтом растворителя. Измеряют расстояние от центра пятна до линии старта (отрезок АБ), находят расстояние от линии старта до фронта растворителя (отрезок АВ) АБ/АВ=7 / — качественная характеристика вещества, образовавшего данное пятно. [c.102]

Выше описано разделение путем восходящего элюирования. Возможны иные варианты элюирования [244] нисходящее элюирование горизонтальное элюирование (круговая хроматография [250]) — пробу наносят по кругу на квадратную пластинку с тонким слоем сорбента (на пересечение диагоналей), в центр подают растворитель, вещества разделяются с образованием концентрических зон многократное элюирование одним и тем же растворителем (после элюирования пластинку высушивают и операцию повторяют со свежей порцией элюента) ступенчатое элюирование — многократное элюирование разными растворителями центрифужное элюирование — под действием центробежной силы движение потока растворителей ускоряется в 2—3 раза градиентное элюирование — состав элюента непрерывно изменяется. [c.103]

ПОМОЩЬЮ приспособления для нанесения тонких слоев быстро распределяют по чистой стеклянной пластинке. Можно обойтись без приспособления и разровнять массу на пластинке стеклянной палочкой. Пластинки высушивают на воздухе и наносят на них меченые вещества. Элюирование водой осуществляют либо как в восходящей хроматографии, либо при горизонтальном положении пластинки с использованием фитиля для подвода воды. [c.249]

Непропитанная бумага подвижная фаза — насыщенный 2%-ным водным раствором КОН н-бутанол восходящее элюирование. [c.102]

Литий, натрий и калий можно четко разделить на необработанной бумаге в виде хлоридов, применяя восходящее элюирование метиловым спиртом [24] (/ / К 0,22 Ыа 0,44 Ы 0,72) [c.143]

ИЛИ смесью этанола с водой (9 1) [24]. Калий, рубидий и цезий можно отделить один от другого при элюировании фенолом, насыщенным 20%-ной соляной кислотой [121]. Для разделения щелочных металлов используется восходящая хроматография на полоске бумаги, пропитанной фосфомолибдатом аммония [2]. Сначала пробу элюируют раствором 0,1 М азотной кислоты и 0,2 М нитрата аммония. При этом цезий и рубидий (Rf 0,00 и 0,06) отделяются от калия (/ / 0,27) и смеси натрия и лития (Rf 0,73 и 0,78). Далее разрезают полоску на три части. На средней части проводят обнаружение калия. Нижнюю часть повторно хроматографируют смесью 0,2 М азотной кислоты и [c.144]

Разработан метод определения примесей в дифенилолпропане с большой точностью без предварительного их кoнцeнтpиpoвaния . Раствор исследуемого вещества хроматографировали восходящим способом в тонком флюоресцирующем слое силикагеля, закрепленном на стеклянной пластинке с помощью гипса и активированном при 100 С в течение 30 мин. (силикагель предварительно смешивали с родамином С). Раствор для элюирования — смесь хлороформа, ацетона и метанола (36 1 1). Хроматограмму проявляли, кратковременно действуя на пластинку парами иода при освещении (прямым солнечным светом или мощной лампой накаливания). Разделенные вещгства наблюдали при свете люминесцентной лампы, снабженной светофильтром. [c.188]

Щелочные металлы. Литий, натрий и калий можно четко разделить на необработанной бумап в виде хлоридов, применяя восходящие элюирование метиловым спиртом (Rf . К —0,22 Ма — 0,44 Ы — 0,72) или смесью этанола с водой (9 1). Калин, рубидий и цезий можно отделить один от другого при. элюировании фенолом, насыщенным 20%-ной соляной кислотой. [c.241]

В зависимости от положения пластинки и направления потока элюента различают восходящую, нисходящую и горизонтальную ТСХ. По технике работы выделяют фронтальный анализ (когда подвижной фазой служит анализируемая смесь) и обычно используемый элюционный вариант. Применяют также круговую (когда анализируемый р-р и р-ритель последовательно подаются в центр пластинки) и антикруговую ТСХ (когда анализируемый р-р наносится по окружности и элюент перемещается от периферии к центру пластинки), ТСХ под давлением (когда р-ритель под давлением пропускают через слой сорбента, покрытый плотно прижатой полиэтиленовой пленкой), а также ТСХ в условиях градиента т-ры, состава сорбента н т. п, В т. наз. двухмерной ТСХ хроматографич. процесс осуществляют последовате.чьно в двух взаимно перпендикулярных направлениях с разл. элюентами, что увеличивает эффективность разделения, С этой же целью применяют многократное элюирование в. одном направлении. [c.608]

Хотя преимущественным методом проявления в ПТСХ служит восходящее элюирование, Хоробин [25] использовал непрерывное нисходящее элюирование в бак с верхним расположением резервуара. [c.139]

Так как в приведенных выше системах растворителей не получают четкого отделения диглицеридов от свободных стеринов, то важное значение в ПТСХ приобретает следующая методика [43]. До 20 мг нейтральных липидов можно разделить на пластинке размером 20X20 см со слоем силикагеля О толщиной 0,5 мм, используя систему двух растворителей Скипского и сотр. [44]. В этой методике первоначально проводят восходящее проявление с использованием в качестве подвижной фазы смеси изопропиловый эфир—уксусная кислота (96 4 по объему). Затем, после высушивания пластинки, второе восходящее проявление осуществляют с помощью смеси петролейный эфир—диэтиловый эфир—уксусная кислота (90 90 1 по объему). Нейтральные эфиры визуализируют с помощью иода. Порядок элюирования (от низких к высоким 1) —диглицериды, свободные стерины и триглицериды. [c.145]

Фракции хлорофилла из листьев растений, экстрагированные с помощью хлороформа, наносили в виде полос на слои силикагеля PF254 толщиной 2 мм [12]. Зоны разделили при многократном проявлении в восходящем направлении подвижная фаза смесь петролейный эфир — хлороформ (1 1 по объему). После нескольких проявлений отделенные хлорофилловые и нехлорофилловые полосы были видны в дневном свете и в ультрафиолете. Вещества были извлечены из зон обычной процедурой элюирования. [c.148]

V NH4OH (2 1 2) [7571 ацетон—пиридин—вода (4 2 1) [380]. На бумаге Ватман № 3 последняя из названных ПФ обеспечивает высокую эффективность разделения. Как и в предыдущих случаях, разделение осуществляют методом восходящей хроматографии полоски бумаги длиной 60 см и шириной 2,6 см с нанесенной на них анализируемой смесью помещают в вертикальном положении в стеклянные цилиндры с ПФ. После 24 час. хроматографирования полоски бумаги сушат, кондиционируют 30 мин. в атмосфере с влажностью 90% и проявляют 1 %-ным раствором AgNOg, а после освещения дневным светом измеряют Rf. Для ионов F , СГ, Вг и значения Rf соответственно равны О, 0,20 + 0,03, 0,36 + 0,06 и 0,69 0,06. В случае необходимости количественного анализа каждую зону после проявления элюируют 25 мл воды и измеряют радиочастотное сопротивление полученного раствора. В других случаях количественный анализ выполняют после сухого или влажного сожжения проявленных пятен в этнх методах отпадают возможные погрешности за счет неполноты элюирования. [c.65]

Сравнительно просто осуществить непрерывное разделение восходящим способом. Непрерывность элюирования обеспечивается выпариванием растворителя из верхней части хроматографического слоя, которая всасывает все новые порции растворителя (аналогично тому, как это происходит при хроматографировании по методу Бреннера и Нидервайзера). Выпаривание растворителя обеспечивается нагреванием верхней части пластинки. В крышке камеры укреплена стеклянная трубка с нагревательной спиралью мощностью 10 Вт. Спираль включается в сеть через трансформатор, позволяющий регулировать температуру трубки. Хроматограмму размещают в камере таким образом, чтобы верхняя часть ее обратной стороной опиралась о нагреваемую трубку (рис. 26) [205]. При более простом варианте крышку камеры снабжают щелью соответствующего размера. Высоту камеры подбирают с таким расчетом, чтобы верх пластинки находился над крышкой и растворитель свободно испарялся с этого участка хроматограммы. В том участке хроматограммы, с которого испаряется растворитель, разделенные пятна веществ концентрируются в очень компактные зоны, что способствует улучшению качества разделения [22, 203]. Поэтому этот метод используется не только для непрерывного хроматографирования, но и для концентрирования раз- [c.94]

Ход анализа. На стеклянную пластину размером 200x200 мм равномерным слоем толщиной 0,25 мм наносят свежеприготовленную смесь адсорбента с водой (30 г Силикагеля тщательно перемешивают с 60-мл дистиллированной воды), пластинку подсушивают 10—15 мин при комнатной температуре, а затем выдерживают 30 мин в сушильном шкафу при 120 °С. На стартовую линию (на расстоянии около 15 мм от нижней кромки слоя) наносят пипеткой около 5 мкл 1 %-ного водного или щелочного раствора пробы исследуемого продукта оксиэтилирования. Хроматографирование осуществляют по восходящему способу в камере, заполненной на высоту 5—7 мм одним -ИЗ элюентов. Так, для элюирования вышеуказанных продуктов, за исключением оксиэтилированных аминов, применяют смесь бутанон-2 — вода. Для элюирования оксиэтилированных жирных аминов применяют смесь бутанон-2 — раствор аммиака. После подъема фронта растворителя на высоту 150 мм пластинку выдерживают 20— 30 мин в сушильном шкафу при 60—70 °С и обрызгивают модифицированным реактивом Драгендорфа. Разделенные компоненты проявляются в виде оранжево-красных пятен на желтом фоне. [c.219]

Ход определения. На стартовую линию пластинки, предварительно активированной при 110 °С в течение 30 мин и затем охлажденной в эксикаторе до комнатной температуры, наносят 8 мм 2%-ного раствора анализируемой пробы в хлороформе. Элюирование проводят по восходящему способу смесью петролейный эфир —диэтиловый эфир — ледяная уксусная кислота до высоты примерно 160 мм (продолжительность элюирования около 90 мин). Пластинки подсушивают при комнатной температуре в течение нескольких минут, а затем в Сушильном шкафУ при 100° С до исчезновения запаха уксусной кислоты. Охлажденные до комнатной температуры пластинки обрызгивают раствором 2% 7 -дихлорфлюоресцеина и после подсушивания при комнатной температуре облучают УФ-лучами (А, = 254 или 366 нм). На слое пластинки проявляются желтые флюоресцирующие пятна. Сложные эфиры олеиновой кислоты и полиспиртов, а также сложные эфиры жирных кислот и сорбитана более четко проявляются в виде зеленых пятен на белом фоне посде обрызгивания пластинки раствором фосформолибденовой кислоты и нагревания до 130 °С. , [c.259]

Моноалкильные производные можно обнаружить при помощи простой хроматографичеокой методики. Разработанный Харди и Скардилом метод восходящей хроматографии [28] позволяет определять до 0,5% (объемных) моноалкильного производного в Д2ЭГФК на бумаге ватман № 3 (длина полосы 20—30 ом) при элюировании свежеприготовленной смесью равных объемов -бу- [c.119]

На рис. 2 (верхний) приведены 7 /-спектры четырех элементов, полученные методом восходящей хроматографии на бумаге, обработанной Д2ЭГФК. Кроме того, с помощью этого же метода установлено, что пятно алюминия Rf > 0 имеет неправильную форму и сопровождается хвостом, галлий дает два пятна при элюировании 5,5—6,5 М соляной кислотой, т. е. такой элюент соответствует области концентрации кислоты, где значения Rf резко уменьшаются вследствие сильной сольватации комплекса галлия молекулами экстрагента, который координируется своими Р —нО-груп-пами. В этой области концентраций кислоты Rf одного из пятен [c.477]

Проявление тонкослойных или бумажных хроматограмм может осуществляться путем восходящего, нисходящего, горизонтального или радиального движения растворителя. При восходящей хроматографии ослол непия, связанные с образованием каналов при движении растворителя, сводятся к минимуму. При непрерывном проявлении растворитель продвигается до конца бумаги или тонкого слоя в одном опыте. При многократном проявлении после того, как фронт растворителя достигает края листа, растворителю дают испариться и повторяют проявление при том же направлении движения растворителя. Ступенчатое проявление включает проявление на пластинке в неполярном растворителе, испарение растворителя и второе проявление в более полярном растворителе. При двухмерном проявлении также последовательно применяют два растворителя сначала проводят хроматографирование в одном направлении, затем высушивают пластинку для испарения первого растворителя, поворачивают пластинку на 90° и проводят проявление вторым растворителем. При градиентном элюировании состав растворителя меняется в ходе проявления [94]. Эта методика, однако, сложна, в ней теряется простота тонкослойной или бумажной хроматографии. [c.553]

Поскольку в ТСХ обычно элюируют восходящим методом, прежде всего мы кратко опишем камеры, применяемые именно в этом случае. Чаще всего это простые прямоугольные стеклянные лотки, соответствующие пластинкам по размерам. Такие камеры обычно называют К-камерами. Для пластинок размером 20X20 см применяются N-кaмepы размером 21X21X6 см. Для элюирования микропластинок удобны стеклянные сосуды, используемые для окрашивания биологических препаратов, нанесенных на предметные стекла. В этих камерах можно элюировать сразу две пластинки, если расположить их в форме буквы V, обратив слои друг к другу. Элюировать одновременно больше двух пластинок можно, отделив их друг от друга изо- [c.92]

В разд. 6.3.4 указывалось, что при неполном разделении двух соединений посредством гель-хроматографии можно улучшить степень разделения, увеличив длину колонки. Однако работа с длинными колонками связана с рядом неудобств их сложно заполнять и элюирование приходится вести с очень малыми скоростями, особенно если колонка заполнена мягкими гелями. Однако последовательно соединяя две и большее число колонок, можно добиться увеличения эффективной длины колонки и тем самым лучшего разрешения. С этой целью выбирают несколько одинаковых плунжерных колонок, каждую из которых заполняют гелем независимо от других. После заполнения колонок гелем и фиксации заполняющих слоев плунжерами вывод из одной колонки соединяют с вводом в другук возможно более короткой и тонкой трубкой. Хроматографирование на такой составной колонке ведут восходящим методом (разд. 6.3.6). В такой составной колонке допустимы большие скорости потока, чем в одной колонке, высота которой равна сумме высот соединенных колонок. [c.377]

Колонка 10X97 см (1 ,=9100 мл) элюент —0,1М раствор ацетата натрия с добавкой 0,01% азида натрия восходящее элюирование скорость потока 200 мл/ч проба — 55 мл экстракта отбор фракций каждые 30 мин температура хроматографирования 5 °С обнаружение— по поглощению при 280 и 410 нм. Ферментативная активность / — катепсн-на С (410 нм), 2 —катепсина В (280 нм), 3 —катепсина В1 (410 нм). [c.384]

На стартовую линию силикагелевой пластинки типа silufoi наносят 3 мл 2 %-го раствора анализируемой пробы в хлороформе. Элюирование проводят по восходящему способу смесью петролейный эфир (фракция = 40—60 " С)—диэтиловый [c.138]

Подобный прием элюирования был рассмотрен Маттиненом и др. [3] для случая нисходящей хроматографии. Другие авторы описывали методы многократного элюирования хроматограммы одним и тем же [4] или различными [5] растворителями для случая восходящей хроматографии. При этом каждый раз элюирование заканчивали по достижении фронтом растворителя верхнего края, и перед следующим элюированием хроматограмма высушивалась. Разработка этих методов была связана с необходимостью разделить вещества, имеющие близкие и низкие значения R/. [c.27]

Диамин идентифицируют по температуре плавления, ИК-спектру и методом восходящей хроматографии в незакрепленном слое (адсорбент — окись алюминия для хроматографии II степени активности, слой 0,3 мм размер пластины 9X12 см растворитель — бензол — этанол в соотнощении 47 3 расстояние, покрытое фронтом растворителя, 100 мм угол наклона пластины во время элюирования 30° йодное проявление после высушивания пластины). [c.132]

В период 1945—1954 гг. автор книги и сотрудники занимались выделением и идентификацией пахучих веществ, присутствующих в соках цитрусовых. Поскольку содержание таких веществ во фруктах чрезвычайно мало, нам необходимо было разработать микрохроматографический метод очистки и идентификации терпенов. Мы попытались воспользоваться в этих целях бумажной хроматографией, однако вскоре стало очевидно, что она не годится из-за ограниченной адсорбционной способности бумаги. Чтобы повысить адсорбционную способность бумаги, мы попробовали пропитывать ее различными реактивами. В частности, мы первыми ввели пропитку бумаги кремневой кислотой [31]. Полученные результаты оказались довольно обнадеживающими, однако приготовление пропитанной бумаги было весьма трудоемким, а ее емкость все еще недостаточной. Примерно в это время появилась статья Мейнхарда и Холла [30], и нам пришла мысль, что в принципе можно разработать метод, соединяющий в себе преимущества колоночной и бумажной хроматографии. С этой целью необходимо 1) устранить фильтрующий материал, чтобы получить более сильный адсорбент и более твердую поверхность возможно, для этого нужно более тщательно подобрать связующий материал, который бы не давал трещин 2) использовать другие адсорбенты, в особенности кремневую кислоту, т. е. силикагель 3) использовать в качестве адсорбента только материал, проходящий через сито в 100 меш (149 мкм) 4) использовать в качестве неорганического связующего алебастр вместо крахмала, поскольку последний может мешать обнаружению, образуя с проявляющим реактивом окрашенное соединение 5) использовать полоски и пластинки больших размеров, чтобы обеспечить более эффективное разделение 6) проводить элюирование покрытых адсорбентом пластинок в закрытой емкости восходящим током растворителя, как это делают в бумажной хроматографии 7) использовать покрытые адсорбентом пластинки для двумерной хроматографии и 8) применять для опрыскивания хроматограмм такие реактивы, которые позволили бы не только обнаружить разделенные компоненты, но и определить типы присутствующих соединений. [c.19]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология