Количественное определение с применением элюировании

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

Значительно чаще находят применение методы количественного определения сахаров, элюированных с хроматограмм водой [37, 56, 57]. Например, микрометод количественного определения элюированных сахаров путем потенциометрического титрования [59] [c.76]

Учет всех факторов, влияющих на количественное определение анализируемых соединений при применении метода элюирования в тонком слое, может в значительной степени способствовать успеху эксперимента. [c.45]

Метод тонкослойной хроматографии был открыт советскими исследователями Н. А. Измайловым и М. С. Шрайбер в 1938 г. и применен для разделения фармацевтических препаратов. Сначала он не привлек внимания исследователей, лишь спустя 20 лет к этому методу обратились вновь, и через три года он стал универсальным в биохимии. Такое быстрое и широкое распространение метода тонкослойной хроматографии можно объяснить следующими его достоинствами большой чувствительностью и вц-сокой эффективностью разделения, быстротой разделения, простым оборудованием, доступностью реактивов, легкостью элюирования разделяемых веществ, универсальностью обнаружения веществ путем обугливания их серной кислотой, а также возможностью количественного определения с помощью денситометра, [c.5]

В течение многих лет результаты трудоемких и весьма грубых анализов нуклеиновой кислоты, проведенных первыми исследователями, указывали, как полагали, на эквимолекулярные отношения двух пуриновых (аденин и гуанин) и двух пиримидиновых (урацил и цитозин) оснований. Позже применение хроматографии на бумаге [222] и, в меньшей степени, ионообменной техники дало быстрые и относительно точные методы количественного определения компонентов рибонуклеиновых кислот. При гидролизе нуклеиновой кислоты щелочью образуются мононуклеотиды, которые могут быть затем разделены либо как таковые, либо в виде нуклеозидов, после дефосфорилирования. Кислотный гидролиз, напротив, дает пуриновые основания и пиримидиновые мононуклеотиды. Спектрофотометрическое определение подвергнутых разделению компонентов после элюирования их с бумаги (с применением электрофореза [223] или хроматографии) или с ионообменной смолы позволяет получать молярные соотношения оснований. [c.404]

ДЛЯ количественного определения эфиров жирных кислот и сахарозы, а также для свободных сахаров использовал реактивы Рое [126] на основе резорцина и соляной кислоты. Чтобы избежать помех, связанных с применением тонких слоев силикагеля с крахмалом в качестве связующего, Ги элюировал пятна диметилформамидом, который не извлекает мешающих примесей из крахмала и способствует лучшему элюированию сахаров с тонких слоев. Проводить разделение на слоях силикагеля G нецелесообразно, поскольку степень извлечения сахарозы невелика. Скотт [127] обнаружил, что степень извлечения ксилозы зависит от сорта силикагеля для силикагеля Н степень извлечения составляет 93,1 %, для силикагеля GF 94,6 %, для силикагеля AR-7 96 % и для кизельгура 97,7 %. [c.572]

Количественные методы определения сахаров, основанные на образовании окрашенных соединений при кислотной деградации, в настоящее-время более распространены, чем окислительные . Особенно обширное-применение нашли реакции сахаров с антроном и фенолом в концентрированной серной кислоте. Оба метода используются для количественного определения сахаров после элюирования соответствующих зон с бумажных хроматограмм, а также для определения сахаров в разнообразных объектах, в том числе гликозидах и полисахаридах, подвергающихся гидролизу в процессе реакции. По-видимому, фенольный метод, удобнее антронового, так как меньше зависит от посторонних примесей. [c.414]

Тонкослойная хроматография находит все большее применение для количественного определения углеводов. Этот метод чрезвычайно полезен при изучении кинетики реакций, исследовании их механизма и определении выхода продуктов, однако он применим лишь для анализа смесей, компоненты которых можно полностью разделить. Способы количественного определения делят на две большие группы а) прямое определение (установление количества вещества непосредственно на пластинке) б) косвенное определение (элюирование пятен вещества с последующим анализом элюата физическими методами) [1]. [c.46]

Анализируемый препарат в виде раствора или смеси с небольшим количеством сорбента помещают в хроматографическую колонку сверху. После этого через колонку с определенной скоростью (около 20 капель в 1 мин) пропускают подвижную фазу, что должно приводить к разделению хроматографируемой смеси по длине колонки на более или менее отдаленные друг от друга зоны, содержащие индивидуальные вещества. Эти зоны перемещаются по сорбенту со скоростью меньшей скорости течения подвижной фазы. Это позволяет для выделения отдельных компонентов анализируемой смеси использовать элюентный метод, т. е. пропускать подвижную фазу через колонку до тех пор, пока разделенные вещества не будут элюированы из нее. Последовательность элюирования отдельных веществ зависит от их хроматографической подвижности в данных условиях. Элюат собирают по фракциям. При необходимости в ходе элюирования можно менять состав подвижной фазы, увеличивая ее полярность. Вещества, содержащиеся в различных фракциях элюата, могут быть выделены и определены качественно и количественно обычными препаративными и аналитическими методами. Применение элюентного метода делает возможным многократное использование хроматографических колонок. [c.97]

Наибольшая часть материала посвящена методам качественного анализа катионов и анионов. Наряду с этим приведены используемые способы количественной оценки тонкослойных хроматограмм—методы определения разделенных компонентов как непосредственно на пластинке, так и после элюирования. Приведены методы анализа некоторых природных и технических материалов, выполненные с применением ТСХ. Отдельные разделы книги посвящены ТСХ комплексных соединений, использованию метода в радиохимическом анализе, а также электрофорезу неорганических ионов в тонком слое носителя. [c.2]

Количественное определение сложных эфиров в условиях ТСХ проводят одним из трех методов 1) методом элюирования 2) измерением плоихади пятна ручным способом либо в отраженном свете с применением соответствуюихей аппаратуры 3) сравнением о/краоки с эталоном (полуколичественный метод). Эффективна для анализа пластификаторов газовая хроматография [64 . [c.62]

Что касается применения газохроматографического метода для количественного определения воды, то такие попытки предпринимались, можно сказать, параллельно с разработкой метода. Однарю справедливости ради надо сказать, что этот вопрос не был основным. Скорее наоборот, вода поневоле обращала на себя внимание исследователей своеобразием поведения применяемые твердые носители полностью поглоща.т1и влагу из газового потока и по этой причине изменяли со временем свои характеристики. Поэтому было уделено очень серьезное внимание выбору сорбентов, способствующих быстрому элюированию воды из колонки и полному ее отделению от дрз -гих компонентов. [c.130]

Для количественного определения положение зон можно установить до окрашивания по поглощению в ультрафиолетовой части спектра, а затем вырезать соответствующие участки бумаги для элюирования. Опубликовано много отличных прописей для прямой фотометрии полос бумаги, особенно в применении к рутинным клиническим и диагностическим исследованиям. Для окрашивания липопротеидов применяют красители судан черный, масляный красный О и масляный синий N. Их используют в виде насыщенных растворов в 60%-ном (по объему) этаноле. Время окрашивания равно 4—12 час. Гликопротеиды легко можно обнаружить при помощи кипящего раствора дефениламина в уксусной кислоте [11]. [c.251]

Разработан ряд радиоактивных методов количественного определения соединений, разделенных ТСХ. Пробы можно пометить прямой реакцией с компонентами, например путем этерификации кислот радиоактивным диазометаном [309], или методом изотопного разбавления, добавляя известное количество радиоактивного компонента к разделяемой смеси [186, 310]. Шульце и Венцель [311] пользовались методикой Вильц-баха [311, 312] и метили соединения тритием. Эти соединения, разделенные на слоях, можно определить методами 1) авторадиографии 2) автосцинтиллографии 3) элюированием с последующим анализом радиоактивности 4) сканированием полос детекторами Гейгера — Мюллера 5) сканированием полос детекторами на фотоэлементах 6) двумерного сканирования с использованием детектора нового типа на электронных умножителях, 7) двумерного сканирования с -камерой 8) сжигания 9) зонального профильного сканирования с использованием жидкостного сцинтилляционного детектирования и 10) сублимационной автографии. Радиоактивным методам и применению их в ТСХ посвящен ряд обзоров и статей [313—316]. [c.353]

Разработаны и другие методы выделения красителей из пищевых продуктов и лекарственных препаратов. Так, например, образец кипятят вместе с волокнами шерсти в кислотном растворе, при этом краситель закрепляется на шерсти [31]. Далее шерсть отделяют, промывают и элюируют краситель раствором аммиака. При использовании этого метода краситель может вступать в реакции, и его извлечение может не быть количественным. Давидек [32, 33] адсорбировал краситель из водного раствора на полиамидный порошок. Сахара, гликоли, органические кислоты, этанол не препятствуют адсорбции красителей, а большинство природных антоцианов не адсорбируется. Адсорбированные антоцианы можно удалить промывкой 10 %-ным раствором уксусной кислоты в метаноле, проводимой до элюирования смесью метанола и 25 %-ного аммиака (19 1). Леман и др. [34] описали свою модификацию этой методики в применении к различным пищевым продуктам. Джилхулей и др. [35] провели дальнейшее усовершенствование методики, с тем чтобы ее можно было использовать для количественных определений. Пищевые продукты были разделены на три группы, и к каждой из групп был применен свой метод обработки. Образцы таких продуктов, как джемы, желе и конфеты, которые полностью растворимы в воде, растворяли, нагревая 5 г продукта в 50 мл воды. Полученный раствор пропускали через заполненную полиамидом колонку (15x20 мм), после чего через колонку пропускали шесть порций воды по 10 мл и три порции ацетона по 5 мл. Красители элюировали минимальным объемом смеси ацетон—вода—аммиак (уд. масса 0,88) (40 9 1). Аммиак удаляли током воздуха, причем объем раствора уменьшали вдвое, а затем опять доводили до первоначальной величины и подкисляли раствор соляной кислотой до pH 5—6. Подкисленный раствор вновь пропускали через заполненную полиамидом колонку (10x20 мм) и промывали 5 порциями горячей воды по 5 мл каждая. Далее элюировали красители ацетоно-аммиачным раствором, выпаривали элюат почти досуха, остаток растворяли в нескольких каплях 0,1 н. соляной кислоты и затем подвергали тонкослойному хроматографированию. Если в исследуемом об- [c.12]

Хайфлосуперцел нашел применение и в тонкослойной хроматографии. Смесь этого сорбента с оксидом магния и сульфатом кальция образует прочные слои, элюирование на которых можно проводить с высокой скоростью. Разделение неполярных каротинов на таких слоях протекает с хорошим разрешением [369]. На таких слоях можно, например, за один прием разделить все каротиноиды моркови. Хроматографический анализ пигментов хлоропластов перца apsi um включает две стадии сначала на пластинках с целлюлозой разделяют хлорофиллы и ксантофиллы, а затем смесь каротинов хроматографируют на тонком слое оксида магния и хайфлосуперцела [370]. На слоях из оксида магния элюирование можно вести легким петролейным эфиром. ТСХ на этом сорбенте в сочетании с УФ-детектиро-ванием составляет основу метода количественного определения а- и р-каротинов в биомассе [371]. Для обнаружения небольших количеств р-каротина предложен метод хроматографии в тонком слое, сформированном из смеси карбоната кальция, оксида магния и гидроксида кальция, в системе ацетон — легкий петролейный эфир — хлороформ (5 5 4) [372]. Проведен сравнительный анализ эффективности разделения главных пигментов на слоях из кукурузного крахмала, целлюлозы и микрокристаллической целлюлозы. В системе гептан — этилацетат — пропанол полное разделение было достигнуто на слоях из крахмала [373]. [c.251]

Методы переработки для выделения подвергаемых хроматографическому разделению экстрактов определяются свойствами исходного материала, формой применения и количеством находяш ихся в нем витаминов. В природных продуктах витамины находятся не в свободном состоянии, а каким-то образом связаны. Искусственно полученные препараты для стабилизации часто заключают в желатину. Из однородных проб (раствор, порошок) витамины известным способом экстрагируют непосредственно или после гидролиза. Полученные таким образом экстракты после концентрирования и дальнейшей очистки (например, методом вымораживания или колоночной хроматографии) наносят на пластинки для ХТС и подвергают одно- или двумерному хроматографированию, используя соответствующ ие растворители. Обнаружение витаминов на пластинке осуш ествляют либо при рассматривании в свете с различной длиной волны, либо при опрыскивании соответствую-пщми реактивами . Для количественных расчетов целесообразно проводить сравнение со стандартом, прошедшим стадии хроматографического разделения, элюирования и последуюш,его физико-химического определения. Для определения витаминов можно использовать также биоавтографию, т. е. [c.212]

Применение пористых полимерных сорбентов позволило улучшить форму пиков воды при газохроматографических определениях. Относительная ошибка определения воды в пропаноле при использовании порапака К (140 С) составляла 20% при размере пробы 0,01 мг, а для пробы массой 1 мг — 8% [213]. Используя колонку с порапаком р при 110 °С, Коттон и сотр. [88] определяли 5—10 мг воды в 50 мл раствора хлорофилла с воспроизводимостью 10%. Сообщают также о применении порапака рЗ для определения 0,15 мг воды в 1 мл раствора декстрана [223]. Хоган и сотр. [144] установили, что при использовании порапака Q содержание воды Б 100 мл органического растворителя, равное 1 мг, может быть определено правильностью около 20%. Гоух и Симпсон [126] пришли к заключению, что количественное элюирование воды и этанола осуществляется лишь при концентрации воды не менее 35%. Это побудило их исследовать влияние размера пробы и содержания воды на процесс элюирования воды и спирта из колонок с пористым полимерным сорбентом [127]. В ходе работы были изучены порапак Q, порапак QS и порапак Р-НМОЗ (обработанный гексаметилдисилазаном). При этом отмечали существенное изменение количества адсорбированных продуктов при переходе от одной партии порапака к другой. Такое заключение было сделано на основании экспериментов с использованием ВзО и последующим анализом покидающих колонку продуктов при разных температурах методом масс-спектрометрии. При выборе соответствующего наполнителя колонки можно было удовлетворительно определять концентрацию воды до 1%. Установлено, что термическая обработка или силанизация наполнителя колонки по существу не улучшает полноту элюирования. Однако Селлерс [263] получал удовлетворительные результаты при определении воды в органических жидкостях при ее концентрации порядка нескольких миллионных долей с применением колонки с порапаком Р при 100 °С или с порапаком ф при 120 °С. В этой работе были применены колонки из нержавеющей стали размером 170x0,6 см. После заполнения колонок сорбентом их кондиционировали в течение 12 ч при 180 С. При определении воды в гексане, бензоле, дихлорэтане и этилацетате в диапазоне концентраций от 10 млн до 4% воспроизводимость составляла 3%, [c.327]

Б результате подробного исследования Мильтон и Груммит [45 ] разделили все щелочноземельные металлы. Бериллий, магний, кальций, стронций и барий присутствовали в количестве нескольких миллиграммов, а радий — в виде следов. Лактат аммония дал лучшие результаты, чем цитрат аммония и соляная кислота. Разделение выполнялось методом ступенчатого элюирования при 78° С. Вначале элюировали бериллий 0,55М раствором лактата аммония при pH 5, а затем все остальные щелочноземельные металлы — 1,5М раствором лактата аммония при pH 7. Все шесть элементов можна количественно разделить из одной навески за 5 ч. Результаты разделения показаны на рис, 15, 11. Метод был применен для определения стронция-90 в молоке и в воде [35]. [c.311]

Хроматографическое разделение катионов может производиться на катионитах или анионитах. При разделении на катионитах сначала адсорбируют все катионы на соответствующем адсорбенте, из которого потом фракционированно их выделяют при помощи этилендиаминтетрауксусной кислоты. В некоторых анализах можно применить прием, при котором выбором подходящих условий (особенно изменяя величину pH) достигают элюирования только одного катиона, образующего наиболее прочный комплекс с комплексоном III в других методах анализа получают в элюате последовательно два или более катионов. При применении второго способа необходимо собирать фракции отдельно по мере их вытекания, для чего целесообразно применить автоматический коллектор фракций каждая полученная фракция отделяется количественно. Этот способ определения наиболее удобен при анализе радиоактивных изотопов с применением счетчика Гейгера-Мюллера. Результаты всегда обрабатывают графически по зависимости найденного количества от последовательности фракции. Положение максимумов в определенных, точно установленных условиях характеризует разделяемые катионы, высота. максимумов дает количественный состав. [c.250]

Опубликован ряд работ японских авторов по газовой хроматографии хелатов тория(1У) [20, 24, 46, 109] и урана (IV) [20, 46] с ТФА, а также разнолигандного хелата тория (IV) с ТФА и ТБФ [110] с применением газа-носителя, содержап1 его пары трифтор-ацетилацетона (см. главу V), и показано, что в этих условиях элюирование хелатов значительно улучшается. Разделение проводили на колонке (150x0,4 см) с 0,5% силикона ХЕ-60 на газохроме GLH (80—100 меш) при 180° С, температуре испарителя 310° С и при использовании газа-носителя (гелия), насьщенного трифторацетилацетоном при 30° С (детектор — катарометр). Показана возможность количественного экстракционно-хроматографического определения тория в растворах в виде ТЬ(ТФА)4-ТБФ [110]. [c.84]

Металлические Mg и А] можно анализировать и косвенным методом — с помощью реакционной газовой хроматографии. Хоган и Тейлор [18] определяли магний и другие активные металлы путем измерения количества Нг, выделяющегося при взаимодействии металлов с кислотой. Аналогичный метод применен и в другой работе [19] для определения А1 и АЦСз. После обработки пробы соляной кислотой в газоволюметре образующиеся Нг, и СН4 определяли количественно с ошибкой 3,5% после элюирования смеси Нг, Ог, N2 и СН4 на колонке с цеолитом NaX. Отделяя водород, выделяющийся при взаимодействии металлов с кислотой, от углеводородов (метан и ацетилен), образуемых в этих условиях карбидами, можно определять металлы и их карбиды при совместном присутствии [19, 20]. [c.128]

КСИЛОЛ (1 1) представляет собой наилучшую хроматографическую систему для разделения дигитоксина и 7 его метаболитов. С помощью модифицированного варианта метода, основанного на применении Rb, можно количественно определять соединения этой группы при содержании их вплоть до 0,5 нг на пятно однако выход при этом составляет только 59% [163]. Фабер и др. [164] обрабатывали в течение часа элюированные слои парами соляной кислоты, а затем измеряли интенсивность флуоресценции in situ таким способом можно определять дигиток-син при содержании его порядка 1—2 нг. Выход составляет 99,1 %, стандартное отклонение результатов определения И, 2 %. Уотсон и др. [164а] использовали для выделения из мочи ди-гоксина, дигитоксина и их метаболитов хроматографию на бумаге и ТСХ. Исходные соединения переводили во фторированные производные путем обработки гептафтормасляным ангидридом. Содержание этих производных определяли на газовом хроматографе с электронно-захватным детектором (ГХ-ЭЗД) чувствительность определения составляла 25-10 г. [c.221]

При использовании колонки, заполненной смолой дауэкс-50, и элюировании 1,2 М раствором лактата аммония Са количественно выходит с первыми 74 мл, 5г — со следующими 58 и Ва — с 325 мл элюата [65 , 5г далее выделяют из элюата в виде сульфата. Элюирование 10М раствором трилона Б с pH 7,4 дает возможность легко разделить Ва и 5г [65]. Вследствие большой прочности комплекса Са последний вообще на адсорбируется из раствора, содержащего трилон Б, на колонке с катионитом цео-карб-325, 5г же задерживается и затем элюируется 3 N НС1 [67]. 5г и Са могут быть разделены и на анионите дауэкс- Х-8 при элюировании 0,1 М раствором трилона Б с pH 11,2 [68[. Особенно широкое применение нашел этот метод в анализе продуктов деления урана [69—73] для отделения ра-диоизотопа от У ", s Се Ьа и др. Зг и Сз отделяются от всех остальных радиоизотопов при пропускании через анионит в гидроксильной или оксаотатной форме, через которую они проходят, не задерживаясь, и далее могут быть разделены другими методами. Метод используют для определения радиоизотопа Зг" в водах [74, 75], в молоке [76] и в моче [77]. Он также нашел применение для выделення Зг из метеоритов с целью определения его изотопного состава [781- [c.111]

Эллеркер и сотр. [74] описали методы газохроматографического анализа газов, выделяющихся из активного ила, и определение индивидуальных низших жирных кислот, участвующих в анаэробных процессах, высших жирных кислот в сточных водах, содержащих смазки, а также в нефтяных фракциях, спускаемых в канализацию. Шуга и Конвей [75] описали применение газовой хроматографии для идентификации и количественного определе- ия сложных смесей нефтепродуктов в сточных водах. При содержании последних порядка 1—100 мг/л водные пробы вводили непосредственно в хроматограф. Разделение проводили на колонке размером 610X0,32 см, наполненной графитом. Для подтверждения идентификации элюированных компонентов использовали масс-спектрометрию и ИК-спектроскопию. [c.540]

Применение аффинной хроматографии в качестве метода изучения взаимодействий находится еще на ранней стадии развития, несмотря на то что количественная аффинная хроматография была введена уже десять лет назад [1—3]. Действительно, количество исследований, касающихся методологических аспектов аффинной хроматографии, примерно равно количеству сообщений по применению этого метода в конкретных экспериментальных системах. Большинство этих исследований способствовало применению аффинной хроматографии для оценки равновесия с участием ферментов и модификаторов, ингибиторов или субстратов [1—12], но метод был также использован и для характеристики взаимодействий белок — лекарственный препарат [13], система антиген — антитело [14] и, в меньшей степени, белок-белковых взаимодействий [15, 16]. По существу метод заключается в иммобилизации биоспецифической реагирующей группы X на инертной хроматографической матрице (например, часто на сефарозе) и определении средневзвешенных величин объема элюирования Уа распределяющегося растворенного вещества А в ряде хроматографических экспериментов, в которых растворенное вещество мигрирует в присутствии различных концентраций лиганда 5, также специфически взаимодействующего с А и/или X, В некоторых примерах различные изменения значения Уа отражали конкуренцию между растворенными и иммобилизованными реагентами за одно и то же положение в А [2—5, 7—14] в других изменения в величинахГд были обусловлены наличием взаимодействия иммобилизованного реагента X с бинарным А5-комплексом, образованным растворенным веществом и растворимым лигандом [1, 6]. Цель количественной аффинной хром ографии — объяснить возникновение изменений в величинах Га в предложении существования тех или иных равновесий. Поскольку положение равновесия зависит от концентрации (в соответствии с законом действия масс), точное определение состава смеси реагентов, к которой относится Га, обеспечивает применение фронтальной хроматографии [3, 4]. [c.192]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология