Стандарты аминокислот

В случае С-ЯМР-спектроскопии [46, 47], которая применяется для выяснения строения неизвестных соединений и для аналитической характеристики простых производных аминокислот и пептидов, резонансные пики свободных аминокислот (стандарт — ТМС) лежат для карбоксильных групп между —168 и -183 м. д., для -углеродного атома между -40 и [c.36]

Глицин (а-аминоуксусная кислота, гликокол) — СНа — СООН — однй из самых распространенных в природе аминокислот, входит в состав белков бесцветные кристаллы, т. пл. 232— 236° С, растворимы в воде. Г. выделяют из желатина, фиброина, шелка, а также синтезируют. Г. применяется для органического синтеза, для приготовления буферных растворов, в аналитической химии в качестве стандарта для определения аминокислот, для количественного определения Си, Ag. [c.78]

При сравнении результатов анализов одних и тех же продуктов по одной и той же методике гидролиза также наблюдаются заметные различия. Вариабельность аминокислотного состава в этих случаях может быть вызвана особенностью конструкции оптической схемы анализатора, нестабильностью состава фирменных растворов стандартов аминокислот и множеством других причин, часть которых указана в литературе [4]. Как правило, это характерно для отдельных аминокислот. Поэтому периодически следует пропускать через анализатор несколько стандартов разных фирм и в сомнительных случаях целесообразно готовить стандартную смесь самостоятельно из чистых аминокислот (для получения однородной смеси ее сначала растворяют, а затем высушивают сублимацией). [c.284]

Конфигурация а-аминокислот легче всего выражается с помощью системы Я/З. У большинства природных аминокислот а-С-атом имеет 5-конфигурацию. В более старой системе, в качестве стандарта применявшей серин, конфигурация обозначалась буквами О я Ь (см. с. 171). [c.186]

Метод энантиомерной метки учитывает потери L-аминокислот в процессе обработки и дериватизации, но не учитывает их потери вследствие возможной рацемизации [4]. Степень рацемизации можно определить в отдельном эксперименте со смесью чистых стандартов. Отличительная особенность метода состоит в том, что он позволяет полностью компенсировать потерю некоторых лабильных аминокислот, таких как триптофан, цистеин, треонин и серии, в процессе кислотного гидролиза белков. [c.177]

Углеводную номенклатуру следовало бы применять к аминокислотам, используя префиксы О и Ь для обозначения конфигурации хирального центра с наибольшим номером, уточняя с помощью символов Dg и Lg то, что стандартом служил глицериновый альдегид. Названия >5-треонин и Lg -треонин обозначают одну н ту же структуру . [c.197]

Общее содержание аминокислот определяется в пробе, а содержание свободных аминокислот — в пепсиновом гидролизате. Точно такие же анализы выполняются и при использовании белка куриного яйца, который служит стандартом. [c.576]

Несмотря на общий характер метода энантиомерной метки, разработан он был главным образом для аминокислотного анализа с помощью ГХ. Все о-аминокислоты, вьшолняющие роль внутренних стандартов, имеются в продаже, а разделение смеси всех природных белковых ь-аминокислот и соответствующих о-энантиомеров можно [c.175]

Использование этих стандартных спектров КД для подсчета соотношений а-спирали, -формы и неупорядоченных конформаций глобулярных белков с попыткой воссоздания экспериментально измеренного спектра КД белка по алгебраической сумме различных долей спектра из трех чистых конформаций стало главным применением этого спектроскопического метода в данной области. Достигаемая при этом точность зависит от того, насколько конформационно чистым является стандарт, и для этой цели были рекомендованы и несколько поли ( -аминокислот). Неопределенностью, однако, является то, в каких условиях эти поли (аминокислоты) становятся полностью конформационно неупорядоченными. В качестве стандарта с неупорядоченной конформацией предложен поли ( -серин) при высоких солевых концентрациях [23]. КД-спектры, вычисленные для миоглобина, лизоцима и рибонуклеазы на основе их третичных структур, которые ранее были установлены для этих глобулярных белков по данным рентгеноструктурного анализа, согласуются по всем характеристическим точкам с экспериментальными спектрами КД при использовании в качестве одного из стандартов поли ( -серина) [35]. Подобные данные по анализу соответствия кривых по нативным белкам и полипептидам многочисленны, и они дают информацию о степени конформационной упорядоченности этих веществ в растворах [36]. Эти данные не дают, конечно, ответа на вопрос, какая именно часть первичной структуры а-спирализована, какая отвечает -форме и какая— неупорядоченной, однако основываясь на последовательности аминокислотных остатков белка или полипептида, можно строить рискованные предположения о том, где эти конформации локализованы. Как отмечалось в разд. 23.7.2.4, аминокислоты белков разделяются на те, которые при включении в полипептиды способствуют принятию упорядоченной конформации, и те, которые тому не способствуют. Такая информация получена при рассмотрении [c.437]

У большинства природных а-аминокислот, за исключением глицина, имеется асимметрический атом углерода, связанный с аминогруппой и карбоксильной группой. Обозначение конфигурации этих соединений до сих пор проводят по DL-системе, причем стандартом для отнесения и здесь служит глицериновый альдегид. Природные а-аминокислоты принадлежат почти исключительно к L-ряду. В фишеровской проекции аминогруппа оказывается слева, а атом водорода — справа [c.647]

Целью количественного аминокислотного анализа является определение молярного состава пептида, т. е. типа и количеств входящих в него аминокислот. Выражение молярных отношений аминокислот путем сопоставления содержания данной аминокислоты с соответствующим значением аминокислоты, присутствующей в смеси в наименьшем количестве, хотя и дает верную картину общего состава исходного соединения, не позволяет получить информации о размере, т. е. длине полипептидной цепи. Для этого нужно определить количество хотя бы одной из аминокислот и отнести его к количеству взятого пептида. Естественно, такое определение имеет смысл только при условии, что все аминокислоты, составляющие пептид, обнаруживаются с одинаковой точностью. В таком случае можно работать с одним или несколькими внутренними стандартами, имеющими подходящие удерживаемые объемы, и находить индивидуальные поправочные коэффициенты, специфичные для определяемых производных аминокислот и, как уже упоминалось, в сильной степени зависящие от типа детектора [45, 48]. [c.336]

В случае применения подобной методики для анализа последовательности аминокислот необходима идентификация разделенных соединений, однако возможности ГХ в, данном случае довольно ограничены. Кроме того, что необходимы колонки различной избирательности, нужно знать и относительные удерживаемые объемы исследуемых соединений. Идентификация непосредственно зависит также от доступности подходящего стандарта. Если дипептиды можно синтезировать химически, то для более длинных пептидов это очень трудная задача. Применение ГХ только в целях разделения оправдано лишь тогда, когда выделенные пептидные производные можно уверенно идентифицировать и определить их последовательность с помощью других методов. [c.338]

При реакции с нингидрином почти все аминокислоты дают одинаково окрашенные соединения. Поэтому при расчете молярных концентраций стандартом может быть любая аминокислота. Для расчета процентного (весового) содержания необходимо очень точно измерить в самом начале работы объем микрокапли испытуемого раствора, который должен составлять 0,005 мл, причем его необходимо наносить на бумагу в несколько приемов с промежуточным подсушиванием. В противном случае начальное [c.67]

Можно поступить и по-другому к исходному препарату белка добавить известное количество аминокислоты, заведомо не встречающейся в белках и устойчивой в условиях кислотного гидролиза. Для этой цели часто пспользуют норлейцин (выходит между Leu и Туг), реже — норвалин и 3-нитротирозин. Применяют и другие стандарты [Riordan, Giese, 1977]. [c.527]

Приготовление стандартных смесей аминокислот. Для калибровки аминокислотных анализаторов используют все аминокислоты, входящие в состав белков или встречающиеся в физиологических жидкостях или биологических экстрактах. Соответственно различают два стандарта белковый гидролизат и смесь редких аминокислот. Аминокислоты, которые используют [c.342]

Таким образом, в этих двух больших классах природных соединений конфигурационные стандарты различны. Это привело к некоторым недоразумениям в случае аминокислот с двумя асимметрическими атомами углерода, таких, как, например, треонин. Конфигурация природного (—)-треонина была установлена на основании следующих, легко понятных реакций (Розо, 1936 г.) [c.385]

В качестве консервантов мяса и мясных продуктов (бекон, ветчина, колбасный фарш) используют нитриты и нитраты натрия и калия. Из химических соединений, предотвращающих ботулизм, они пока наиболее эффективны. Однако применение их небезопасно, так как в процессе высокотемпературной обработки нитриты вступают во взаимодействие с аминокислотами белков мяса, образуя нитрозамины. Некоторые из них, как показали опыты на животных, канцерогенные и мутагенные. Пересмотренные в США стандарты допускают содержание в беконе нитрозаминов не выше 10,5 ч. на 1 млрд. ч., что обеспечивается концентрацией нитрита натрия, равной 100 ч. на 1 млн. ч. (в 1978 г. — 156 ч.). Найдено, что а-токоферол (витамин Е) подавляет образование нитрозаминов. С ноября [c.210]

Для углеводов в качестве эталонного соединения принят D-глицериновый альдегид, а для аминокислот — L-серин. Соответствие этих стандартов видно из следующих реакций [c.26]

Аминокислотный анализатор ВЭЖХ РКОЗТАК , включающий градиентный насос, УФ-детектор, реактор с нагревателем колб, колонку, реактивы и стандарты аминокислот. [c.553]

Отсюда следует, что (-)-треонин имеет ту же конфигурацию, что и В-треоза и поэтому некоторое время его относили к ряду В. Разумеется, более правильно классифицировать треонин в соответствии со стандартом аминокислот. [Было предложено называть (—)-треонин лйбо Ьд-треонином, либо В2-треонином, причем индекс 8 относится к стандарту серина, а индекс 8 к глицериновому альдегиду.] [c.386]

Вторая из догм, представляющая собой новейший вариант теории один ген — один фермент, опиралась на представления о роли белковой структуры. Согласно этой догме, информационное содержание любого гена, а следовательно, и истинное значение четырехбуквенной записи в ДНК не может быть ничем иным, как изображением первичной структуры данного полипептида. Вместе взятые, обе догмы подразумевали, что роль любой определенной последовательности пурин-пиримидиновых оснований полинуклеотидных цепей ДНК, которая и составляет ген, сводится к тому, чтобы определять последовательность аминокислот в какой-то определенной полипептидной цепи. Так летом 1953 г. зародилась идея о существовании генетического кода, связывающего последовательность нуклеотидов в полинуклеотидах с последовательностью аминокислот в полипептидах. Путем простых рассуждений вскоре легко пришли к выводу, что код этот должен быть до предела прост для каждого аминокислотного остатка в полипептидной цепи должна существовать информация, которая определяет, какая из двадцати стандартьых аминокислот должна находиться в данной точке полипептидной цепи. Совершенно очевидно, что соотношения один к одному между пуриновыми и пиримидиновыми основаниями в ДНК и аминокислотами в полипептиде быть не может, поскольку каждое из четырех оснований. А, Г, Ц и Т, могло бы определять только одну из четырех, но не одну из двадцати аминокислот. Не может быть и так, чтобы каждый аминокислотный остаток детерминировался двумя смежными парами оснований, так как в этом случае четыре основания могли бы кодировать не более чем 16 видов различных аминокислот (4-4 = 16). Следовательно, код должен быть таким, чтобы каждый аминокислотный остаток детерминировался по меньшей мере тремя парами оснований, расположенных в полинуклеотидных цепях ДНК, вероятно последовательно. В этом случае четыре типа оснований, сгруппированные по три, могут определять более чем достаточное число (4.4.4 = 64) различных видов аминокислот. [c.185]

Диаграмма, представленная на рис. 44, составлена на основании больнюго числа данных о наблюдаемых сдвигах, полученных из различных источников. Основная часть данных была предоставлена д-ром М. Мальберг из Национального бюро стандартов США. Все данные приведепы в м. д. относительно ТМС (нижняя шкала) или СЗг (верхняя шкала). Следует обратить внимание на работы [33] по спектрам ЯМР- С стероидов и [34] по спектрам ЯМР- С аминокислот. [c.307]

В тех случаях, когда нужно оценить содержание лишь нескольких, рано выходящих из колонки аминокислот, имеет смысл в качестве внутреннего стандарта использовать /)-глюкозаминовую кислоту < DGA ). Ее пик выходит раньше, чем Asp, имеет удобную для интегрирования форму и хорошо окрашивается нингидрином. Однако следует иметь в виду, что DGA не выдерживает условий кислотного гидролиза белка. Ее можно использовать при других видах гидролиза пли для оценки содержания аминокислот в физиологических жидкостях [Sta ey-S hmidt et al., 1982]. [c.527]

Исходя из степени гидролиза и состава незаменимых аминокислот этих двух белков, подсчитывают содержание гидролизованных незаменимых аминокислот, которое выражают в процентах к стандарту, предложенному ФАО/ВОЗ [20]. Разные процентные показатели зависят от заранее установленных коэффициентов, которые возрастают по мере того, насколько рассматриваемая аминокислота отстоит дальше от стандарта. Процедура расчета показателя -PER (от англ. omputed PER), предложенного авторами, довольно трудоемка, однако она может легко программироваться на ЭВМ. [c.577]

В одном из углов пластины на расстоянии 1 см от краев наме-чают простым карандашом точку старта. Такую же точку ставят с противоположной стороны пластины. Необходимо, чтобы эти точки совпадали. В точку на одной стороне пластины наносят смесь стандартов, а в точку на другой стороне — анализируемый образец. Образец и стандарты наносят в минимальном объеме — 5—10 мкл, постоянно подсушивая место нанесения струей теплого воздуха. Наносят от 0,5 до 3 нмоль дансилированных аминокислот. Пластину ставят в маленькую хроматографическую камеру, следя за тем, чтобы она не касалась стенок камеры, и хроматографируют в растворителе I. Пластины высушивают в струе теплого воздуха в течение 30 мин и хроматографируют в перпендикулярном направлении в растворителе 2. После высушивания пластины просматривают под ультрахемископом. Обычно описанная процедура обеспечивает разделение почти всех ДНС-аминокислот (рис. 23). [c.153]

Н. применяют в произ-ве азокрасителей и красителей для меха. 2-Амино-4-нигрофенол-антиоксидант, светостабили-затор резин, катализатор в произ-ве 1,4-гексадиена при попадании на кожу вызывает дерматит. 2-Амино-4,6-ди-нитрофенол-цветной стандарт при определении сахаров, реагент для обнаружения белков и аминокислот при мех. воздействии и нагревании взрывается т. всп. 205-210 °С. [c.264]

Особо чувствительный метод двойной метки основан на применении меченого ( Н]-дансилхлорида в качестве реагента и меченой [ С]-аминокислоты как внутреннего стандарта. Отношение Н С в дансильном производном зависит от отношения количества добавленной ( 0]-аминокислоты к концентрации немеченой аминокислоты в пробе. Этот метод особенно подходит для идентификации аминокислот в биологическом материале. Его чувствительность лежит в пикомольной области [196]. [c.66]

Как отмечалось ранее, питательная ценность белка зависит также от сбалансированности незаменимых аминокислот. Группа экспертов Продовольственной и сельскохозяйственной организации [20] предложила другой способ расчета химического показателя, учитывая участие каждой незаменимой аминокислоты в общей их совокупности. Стандартным белком, по отношению к которому производится расчет того же типа, могут служить целое куриное яйцо, женское молоко или введенный ФАО стандарт [20], основанный на потребности здорового человека. В этом случае показатель для лимитирующей аминокислоты (выраженной в процентах от суммы всех незаменимых аминокислот) определяется как отношение найденного в изучаемом белке значения к соответствующему значению для стандартного белка. Этот способ расчета несколько лучше, чем показатель Митчела и Блока, он согласуется с биологической ценностью белка, измеренной при кормлении животных. [c.574]

В методе анализа аминокислот и пептидов, предложенном Бови и Тайерсом [78], в качестве растворителя используется трифтор-уксусная кислота. Преимущества этого растворителя по сравнению с водой или 020 в том, что он позволяет точно определить значения химических сдвигов. Трифторуксусную кислоту можно использовать и в качестве стандарта. Для этого приготавливают ее растворы с концентрацией 207о (вес/объем). Глицин, цистеин и цистин менее растворимы в этой кислоте, однако можно получить и их спектры. В анализе, описанном в работе [78], спектры были получены при частоте 40 МГц. Анализируемые растворы приготавливали, растворяя 100 мг анализируемого соединения в [c.306]

К началу работы Фишера была известна примерно дюжина аминокислот, как продуктов расщепления белков, другие были открыты немного позже. Фишер начал работать по нескольким направлениям синтез аминокислот и расщепление их рацемических форм исследования производных аминокислот для того, чтобы ускорить разделение смесей аминокислот и, что особенно важно, рекомбинация двух или более аминокислот в вещества, которые он назвал полипептидами . Величие фишеровского подхода к проблеме полипептидного синтеза произвело прямое воздействие и было склонно затмить другие пионерские работы в этой области, такие как работы КурЦиуса. В 1901 г. он объявил о синтезе гли-цил-глицина — простейшего дипептида, а в 1907 г. — о 18-ти член-ном полипептиде лейцил-триглицил-лейцил-триглицил-лейцил-окта-глицил-глицина. Даже по современным стандартам это было значительным достижением в синтезе. Синтез глицил-глицил-глицина иллюстрирует общий подход, примененный Фишером схема (1) его стратегия и принципы — замечательный предшественник [c.217]

Относительная. конфигурация а-аминокислот определяется как и у гидроксикислот, по конфигурационному стандарту -глицериновому альдегиду — с использованием гидроксикислот ного ключа. Расположение в (правильно построенной ) проеь ционной формуле Фишера аминогруппы слева (как ОН-группы L-глицериновом альдегиде) соответствует L-конфигурации, спрг ва — D-конфигурации хирального атома углерода (см. 3.2.4) По R, S-системе обозначений а-углеродный атом у всех а-амин( кислот L-ряда имеет S-, а у D-ряда — R-конфигурацию (исклн чение составляет цистеин). [c.322]

Одни из первых методов определения N-концевых аминокислотных остатков был предложен Ф. Сенгером в 1945 г. При реакции а-аминогруппы пептида или белка с 2, 4-динитрофторбензолом получается динитрофенильное (ДНФ) производное, окрашенное в желтый цвет. Последующий кислотный гидролиз (5,7 н. H l) приводит к разрыву пептидных связей и образованию ДНФ-производ-ного N-кониевой аминокислоты. ДНФ-Аминокислота экстрагируется эфиром и идентифицируется методом тонкослойной хроматографии в присутствии стандартов. [c.37]

Чтобы определить влияние на хроматографию аминокислот таких составляющих мелассы, как соли кальция и сахар, были поставлены опыты по разделению смеси аминокислот с указанными добавками в концентрации, отвечающей содержанию этих веществ в мелассе. В присутствии сахара аминокислоты несколько отстают от стандартов (см. рис., б), что можно объяснить эффектом экранирования. Этот эффект особенно проявляется при анализе мелассы, содержащей карамелизующие вещества и красители, сорбирующиеся на стартовой линии. Аминокислоты как бы не могут прорваться сквозь эгот экран. [c.215]

При колориметрическом определении аминокислот во фракциях из хроматографических колонок в качестве стандартов используют. хроматографически чистые образцы отдельных аминокислот, дающих с нингидриновым реагентом окраску, близкую по интенсивности к теоретической. Такими аминокислотами являются лейцин, изолейцин и аланин. При последующих расчетах интенсивность окраски различных аминокислот выражают в так называемых лейциновых единицах. Эти данные используют для вычисления истинного содержания той или иной аминокислоты в образце. [c.342]

В серию пробирок вводится точное постепенно снижающееся количество аминокислоты в растворе ставятся параллельно по два опыта. Ряд стандартов охватывает от 0,0 до 0,1 мг dl-ва-лина, с//-лейцина и й/-нзолейцина. Последовательные пробирки не должны отличаться друг от друга более чем на 0,02 мг. Для определений берут нейтрализованный белковый гидролизат (pH 6,5—6.8) не менее как в трех концентрациях. Затем во все пробирки добавляют по 5 лгл соответствующей опыту питательной среды н воды до конечного объема в 10 мл. Содержимое пробирок смешивают, затыкают ватными пробками и стерилизуют в течение 15 мин. в автоклаве. После стерилизации пробирки охлаждают, вводят в них культуру и ставят в термостат при 35°. Через 72 часа содержимое пробирок центрифугируют и титруют пробы (5 мл) 0,1 н. NaOH по бромтимолсинему в качестве индикатора (добавлять в раствор). Содержание искомой аминокислоты вычисляют на основании количеств молочной кислоты, образовавшихся в опытных н в стандартных растворах. [c.293]

Ход работы. Отмерить в две фарфоровые чашки для выпаривания объемы белкового фенилаланина. В две другие чашки отмерить 3 мл vl мл стандартного раствора фенилаланина, содержащего в 1 мл 0,25 мг аминокислоты. Выпарить досуха содержимое чашек на водяной бане. По охлаждении добавить по 2 мл нитрующей смеси (раствор 20 г KNO3 в 100 ял концентрированной серной кислоты) и нагреть на водяной бане 20 мин. Перенести содержимое чашек, споласкивая водой, в мерные колбы на 25 мл, следя за тем, чтобы объем жидкости не был больше 10 мл. Охладить во льду. Теперь в колбу со стандартным образцом и в колбу с раствором неизвестной концентрации, близкой к этому стандарту, добавить по 2,5 мл 30%-ного раствора гидрохлорида гидроксиламина. Быстро охладить во льду и довести до 25 мл добавлением охлажденного льдом концентрированного раствора аммиака (уд. в. 0,9). Схмешать, оставить при комнатной температуре и через 40 мин сравнить окраски в колориметре. Такой же обработке и колориметрированию подвергнуть два других параллельных опыта. [c.166]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология