Электрофорез сравнение методов

Электрофорез применяют для очистки различных фармацевтических препаратов. В Фармакопее СССР (изд. 10) предусмотрено установление степени чистоты по электрофоретической однородности ряда антибиотиков, витаминов и других веществ. Электрофорез (ионофорез) является одним из методов введения лечебных препаратов в организм человека. Широкое применение как аналитический и препаративный метод разделения и выделения различных лекарственных веществ и биологически активных соединений нашел электрофорез на бумаге, а также в агаровом или крахмальном геле. Эти методы применяют также при диагностике ряда заболеваний путем сравнения фракционного состава (по числу и интенсивности зон на электрофореграмме) нормальных и патологических биологических жидкостей. [c.408]

Распределительная хроматография. Более разработаны и практически оправданы методы тонкослойной хроматографии (ТСХ), позволяющие разделять сложные смеси серусодержащих ионов. Методы бумажной хроматографии и электрофореза на бумаге по сравнению с другими хроматографическими методами не получили широкого распространения. [c.58]

Чистоту арсеназо III контролируют методом бумажной хроматографии в вариантах круговой восходящей и нисходящей и электрофорезом на бумаге дополнительные методы — сравнение спектров поглощения в слабокислых, щелочных и сернокислых растворах и цветные реакции с элементами. [c.55]

Рассмотрим далее вопрос о критериях гомогенности — как мы узнаем, что вещество чистое . Гомогенность может быть оценена методами, обычно используемыми для разделения, такими, как хроматография и электрофорез. Этими же методами часто доказывают идентичность двух веществ. Выяснение структуры соединений с помощью деструктивных или синтетических методов также обычно завершается сравнением идентичности образцов путем их хроматографирования или электрофореза. [c.17]

Преимущества методов зонального электрофореза в сравнении с методами свободного электрофореза заключаются в следующем [c.10]

Некоторые методические сложности препятствуют широкому распространению электрофореза в крахмальном геле, несмотря на его весьма большую разрешающую способность. По сравнению с электрофорезом на бумаге электрофорез в крахмальном геле включает дополнительные операции, связанные с приготовлением и гидролизом крахмала, сборкой прибора, окрашиванием и количественным определением полученных фракций. Однако присущий крахмальному гелю эффект молекулярного сита увеличивает разрешающую способность данного метода по сравнению с электрофорезом на бумаге, и поэтому его используют для более тонкого анализа. [c.12]

Результаты, сходные с хроматографией на бумаге, при разделении моносахаридов дает метод электрофореза на бумаге . Хотя проведение электрофореза по сравнению с хроматографией требует более сложного -оборудования, разделение веществ с помощью электрофореза происходит быстрее. Известно много случаев успешного применения электрофореза для исследования смесей, которые с трудом поддаются разделению путем хроматографии на бумаге. Поэтому электрофорез является ценным методом анализа моносахаридов, дополняющим метод хроматографии на бумаге . [c.411]

Хотя в настоящее время мы располагаем хорошо разработанным методом электрофореза на бумаге, пригодным для решения многих задач, использование слоев силикагеля, целлюлозы, а в меньшей мере и иных сорбентов по сравнению с бумагой имеет ряд преимуществ, перечисленных ниже [c.160]

Наибольшее распространение нашли водорастворимые грунтовки, в первую очередь в автомобильной пром-сти (д.ля окраски кузовов легковых и кабин грузовых автомобилей). Водорастворимые эмали черного цвета применяют для окраски деталей шасси. Негорючесть В. г. и э., возможность нанесения их наиболее экономичным и аффективным методом — электрофорезом открывает широкие перспективы для их применения в различных отраслях пром-сти, несмотря на высокую стоимость по сравнению с обычными лаками и эмалями. [c.249]

Рис. 5-13. Разделение аминокислот методом электрофореза на бумаге. На полоску бумаги наносят каплю раствора, содержащего смесь аминокислот. Ей дают высохнуть, после чего эту полоску бумаги смачивают буфером с заданным значением pH и помещают между охлаждающими пластинами. Концы полоски погружают в кюветы с электродами и включают высокое напряжение. В возникающем при этом постоянном электрическом поле аминокислоты разделяются в соответствии с их суммарным электрическим зарядом при выбранном pH. Аминокислоты, которые при этом значении pH представляют собой катионы, мигрируют к катоду (отрицательному полюсу), а аминокислоты, имеющие форму анионов, перемещаются к аноду (положительному полюсу), как это показано на схеме, изображающей электрофореграмму в момент времени Т . В конце процесса (на схеме-в момент времени Та) бумагу высушивают, опрыскивают нингидрином и нагревают, в результате чего на бумаге проступают пятна, соответствующие расположению различных аминокислот, которые можно идентифицировать путем сравнения их положения с положением аутентичных аминокислот, используемых в качестве свидетелей .

Следует особо указать на различие между изоэлектрическим фокусированием и электрофорезом. Спектр подвижности , создаваемый с помощью электрофореза, представляет собой картину распределения белков по величине молекул и суммарному заряду при данном значении pH. Существенное преимущество изоэлектрического фокусирования по сравнению с другими методами фракционирования состоит в том, что в ходе разделения зона белка сжимается, поскольку действующие силы стремятся уменьшить размывание зон вследствие диффузии. [c.299]

Сравнение экспериментальных данных, полученных при применении совокупности методов (адсорбции, десорбции, ультрафильтрации, электрофореза, центрифугирования, экстракции), привело авторов к следующим представлениям о состоянии протактиния в слабокислых и щелочных растворах (pH 0—14). [c.183]

В отличие от гетерогенных процессов фракционирование смеси вещества в однофазной системе основывается не на перераспределении веществ при установлении равновесия, а на кинетике перемещения компонентов в силовом поле (электрическом, гравитационном) или при наличии градиента концентрации. На этих принципах основаны методы электрофореза, седиментации и диффузии. Если рассматривать сочетание аналитического и препаративного фракционирования, то наибольшее внимание следует уделить электрофорезу. Сложные смеси веществ могут быть с успехом разделены на основе использования этого метода. Во многих случаях он является равноценным по сравнению с лучшими вариантами хроматографии, а для некоторых систем даже превосходит хроматографические методы по эффективности. Особенно важным оказалось использование электрофореза при фракционировании смесей белков и нуклеиновых кислот в колонке, заполненной гелями как природных, так и синтетических полимеров. Степень разделения зон веществ при фракционировании методом электрофореза определяется отношением подвижностей компонентов в электрическом поле. Увеличение высоты колонки здесь также приводит к лучшему разделению компонентов, как и при хроматографии, хотя при электрофорезе нет многократного повторения элементарных актов межфазного переноса. [c.9]

При сравнении заряда белка, найденного из электрофореза, с данными, полученными титрованием, следует иметь в виду, что первый метод в принципе должен давать полный заряд частицы, а второй — только заряд, связанный с присоединением и диссоциацией протонов. Менаду тем функциональные группы белка могут связывать и другие ионы электролитов как положительные, так и отрицательные. Кроме того, величина заряда влияет на подвижность макромолекулы не только непосредственно, но и косвенно, влияя на ее размеры. [c.59]

Как указывалось выше, для того чтобы границы при электрофорезе были стабильны в поле тяжести, нужно работать при достаточно высокой весовой концентрации исследуемого веш,ества. В то же время эквивалентная концентрация последнего должна быть как мон но меньше по сравнению с концентрацией буфера — иначе невозможны точные измерения. Таким образом, фронтальный метод особенно удобен для исследования белков, эквивалентный вес которых очень велик, особенно вблизи изоэлектрической точки (р1). Кроме того, малый коэффициент диффузии макромолекул приводит к сравнительно небольшому размыванию границ даже при длительных опытах. Для малых ионов метод непригоден из-за их большого коэффициента диффузии и малого эквивалентного веса, а главное потому, что инкремент показателя преломления у них не от.личается от инкремента ионов буфера. Это делает невозможным сколько-нибудь точное рефрактометрическое определение концентрации. [c.62]

Метод тонкослойного электрофореза был применен для разделения смеси аминокислот и аминов [39]. Сравнение электрофореза на бумаге, силикагеле С , кизельгуре О и окиси алюминия С показало, что тонкослойный электрофорез имеет преимущество по эффективности разделения перед бумажным электро- [c.317]

Применение пирофоса в комплексе с другими средствами (дибазол, витамин В , глютаминовая кислота) и методами лечения (ЛФК, массаж, электрофорез) не дает отчетливого ускорения восстановления утраченных функций по сравнению с изолированным применением препарата. [c.475]

Благодаря ряду преимуществ (простота аппаратуры, надежность, более высокое качество покрытий по сравнению с механическими способами нанесения полимеров на металл) электростатическое напыление в поле высокого напряжения начинает довольно широко использоваться на практике [1—9]. Позволяя, как и другие способы, получать разнообразные декоративные, антикоррозионные и электроизоляционные покрытия, электростатическое напыление оказывается более экономичным, в частности, по сравнению с методом нсевдоожиженного слоя [1], электрофорезом и обычным способом окраски из растворов [2—6]. Несомненным достоинством способа является и то, что он исключает использование токсичных и огнеопасных растворителей [4] и загрязнение окружаюш,ей атмосферы [2, 3]. [c.42]

В настоящем исследовании дпя разделения щелочнорастворимых веществ торфа и сапропеля был применен метод непрерывного электрофореза. Этот метод обладает тем преимуществом в сравнении с другими методами разделения, что позволяет разделять смеси веществ близкой химической природы и получать фракции в количествах, достаточных для проведения различных исследований. [c.257]

Электрические свойства растворов полиэлектролитов. Электрокинетический потенциал, как известно, с большей или меньшей точностью может быть подсчитан по уравнениям Гельмгольца — Смолуховского или Генри только для коллоидных частиц, размер которых значительно превосходит толщину двойного электрического слоя. Для частиц же, диаметр которых мал по сравнению с толщиной двойного электрического слоя, при расчете электрокинетического потенциала следует вводить ряд поправок и в первую очередь поправку на электрическую релаксацию. Кроме того, если макромолекулы находятся в растворе в виде рыхлого клубка, то должно быть принято во внимание движение среды через петли свернутой цепи. К сожалению, до сих пор теория электрофореза для свернутых в клубок макромолекул отсутствует. Поэтому в настоящее время распространено определение электрофоретической подвижности не отдельных макромолекул, а макромолекул, адсорбированных на достаточно крупных частицах кварца или угля или на капельках масла. В этом случае электрокинетический потенциал легко определить с помощью микроэлектрофоретических методов. Как показали многочисленные исследования, при достаточной толщине слоя полимера, покрывающего частицу, подобный прием дает вполне воспроизводимые результаты. [c.477]

Имеющийся по этому вопросу экспериментальный материал показывает, что могут получаться различные результаты. Так, Ван-дер-Гринтен сравнивал электроосмос для стеклянных пластинок и электрофорез для стеклянного порошка из того же стекла и нашел большую разницу в -потенциале, полученном этими двумя методами. При оценке его результатов было, однако, отмечено, что поверхность скола частиц стеклянного порошка может быть неодинаковой по сравнению с оплавленной поверхностью стеклянных пластинок. Однако в опытах, проведенных Н. К. Барабанщиковой, о которых было упомянуто раньше, для [c.131]

Из данных о скорости передвижения коллоидных частиц при электрофорезе можно оценить величину их заряда. Получаемые по этому и по друг методам значения в общем хорошо согласуются. Это указывает прежде всего на то, что заряд большинства коллоидных частиц значительно больше, чем у отдельных ионов. С увеличением размеров частиц возрастает обычно и их заряд если при диаметре частицы в 1 нм заряд составляет 2—3 единицы элементарного количества электричества (равного заряду электрона), то для частиц с диаметром 100 нм заряд увеличивается до сотеи и тысяч таких единиц. При всей громадности этой величины по сравнению с числом образующих коллоидную частицу атомов или молекул она все же очень мала. Поэтому при электрофорезе переносится гораздо больше вещества, чем то отвечало бы закону электролиза. [c.334]

Далее проводили фосфорилирование всех олигонуклеотидов по 5 -концам радиоактивным фосфором за счет [7- PlATP с помощью Т4-полинуклеотидкпназы. Смесь меченых олигонуклеотидов разделяли электрофорезом в ПААГ, получая лестницу полос, как было описано при рассмотрении электрофореза [Остерман, 1981]. В отличие от методов секвенирования ДНК здесь каждой полоске ( перекладине лестницы ) соответствует фрагмент, укороченный точно на один нуклеотид по сравнению с фрагментом предыдущей полоски. Как и при секвенировании ДНК, меченые гидролизаты наносили в параллельные треки со сдвигом по времени в 4, 8 и И ч, а весь электрофорез проводили в течение 14 ч, с тем чтобы лучше разрешить разные по длине фрагментов участки лестницы . [c.508]

Б случае иммуноэлектрофореза [49 — 51] принцип электрофореза сочетается с биоспецифической аффинностью белка (рис. 3-5). Белки-антигены сначала разделяются гель-электрофоретически. При встрече с диффундированными внутрь геля антителами происходит образование комплексов антиген — антитело, наблюдаемых в виде серповидных полос преципитации. Иммуноэлектрофорез имеет особое значение в медицинской диагностике (разделение и идентификация сывороточных белков и др.). Рис. 3-6 поясняет эффективность этого метода по сравнению с другими видами электрофореза. [c.352]

Электрофорез и классические иммунологические реакции также используются для сравнения белковых смесей и отдельных нативных белков. Однако разрешающая способность этих методов ограничена, так как они дают либо физико-химическую, либо имму-нохимическую характеристику. В сравнении с ними метод иммунодиффузии более информативен, так как с его помощью в двух или нескольких сравниваемых белковых смесях можно обнаружить не только идентичные компоненты, но и возможные общие антигенные структуры, присутствующие в разных компонентах [И—13]. [c.19]

Для идентификации сиаловых кислот применяется хроматография на бумаге в тонком слое силикагеля или электрофорез на бумаге Если хроматографические данные показывают, что новая сиаловая кислота отличается от всех других известных сиаловых кислот, ее выделяют и очищают методами, принятыми в химии углеводов, учитывая при этом особую неустойчивость сиаловых кислот по сравнению с другими моноса- харидами, а затем проводят функциональный анализ (в первую очередь, определение метоксильных, Н- и О-ацетильных групп). Положение заместителей в молекуле определяют обычными методами, прежде всего окислением перйодатом. [c.338]

Таким образом, для полного анализа последовательности любого полинуклеотида необходимо иметь, во-первых, метод получения четырех наборов специфических концевых продуктов, подобных тем, которые приведены втаблице 12, и, во-вторых, метод, позволяющий проводить сравнение длин этих продуктов. Различие современных методов анализа заключается в способах получения наборов специфических фрагментов. Общность — в способе сравнения длин, которое во всех случаях производится путем электрофореза радиоактивных концевых продуктов в пластинках полиакриламидного геля. По окончании электрофореза положение продуктов в геле определяют путем радиоавтографии. Каждый продукт проявляется в виде темной полосы на рентгеновской пленке сравниваются относительные подвижности полос в разных дорожках, подобно тому как сравнивались длины продуктов в таблице I. Картина распределения полос на рисунке 180 соответствует последовательностн олигонуклеотидов в таблице 12. Это следует нз анализа относительных подвижностей продуктов самый подвижный и, следовательно, самый короткий продукт обнаруживается в дорожке С, следующий по подвижности н длине — в колонке Т, далее — в колонке С, следующие два — в колонках Т и А соответственно и т. д. Выписывая таким образом названия колонок в порядке, в котором в них обнаруживаются последовательно удлиняющиеся продукты, получают формулу исходного олигонуклеотида. [c.321]

В качестве преимуществ метода ХТС по сравнению с хроматографией, на бумаге следует специально отметить следующее а) небольшая диффузия приводит к меньшим пятнам, благодаря чему достигается более высокая чувствительность б) меньшее время разделения в) возможность применять самые агрессивные реагенты для обнаружения разделяемых веществ. Последа нее справедливо также для ионофореза в тонких слоях, а пункт б), уменьшение времени разделения, имеет силу в первую очередь для низковольтного электрофореза. Применение свободных неохлаждаемых стеклянных пластинок в качестве носителей адсорбционного слоя имеет известные недостатки. Вследствие сравнительно большой толщины стеклянных пластинок (3,5 мм) затрудняется эффективное охлаждение, совершенно необходимое-для разделения при высоком напряжении (выше 500 в). При использовании более тонких стеклянных пластинок этот недостаток в некоторой степени устраняется. Из-за опасности повреждения слоя труднее осуществить охлаждение с верхней стороны, которое, в противоположность Пастуска и Тринксу [195], мы считаем необходимым уже при напряжении 400—500 в. [c.430]

Известен также метод пептидных карт, позволяющий устанавливать незначительные различия в первичной структуре родственных Б. Для этого Б. частично гидролизуют специфич. протеолитич. ферментами (особенно удобен трипсин, разрывающий пептидные связи у карбонильных п)упп остатков лизина и аргинина), затем пептиды каждого Б pa дeляют электрофорезом и распределительной хроматографией При сравнении полученных пептидных карт различных Б оказывается, что все идентичные пептиды располагаются в определенных (одних и тех же) местах, за исключением пептидов, по к-рым Б отличаются друг от друга Этим методом впервые обнаружено, что при замене одного остатка глутаминовой к-ты в молекуле гемоглобина на остаток валина образуется серповидноклеточный гемоглобин, встречающийся при одном из видов анемии. Методом пептидных карт изучают генетич. аспекты эвотюционных изменений Б. и выявляют изменения Б. при различных заболеваниях. [c.121]

Для обнаружения белков на бумажной реплике можно использовать любой метод проявления, рекомендуемый при электрофорезе на бумаге. Преимущество лиссаминового зеленого (в виде насыщенного раствора в 5%-ной уксусной кислоте) по сравнению с амидо-черным В состоит в том, что избыток красителя отмывается полностью [8], давая совершенно чистый фон. В качестве высокочувствительного проявителя Моррис [9] предложил 0,01%-ный раствор нигрозина в смеси метанол — ледяная уксусная кислота — вода (50 40 10) с последующим промыванием в той же системе. Чувствительным красителем для проявления белков на бумаге является также кумасси бриллиантовый синий К-250, введенный Фазекашем де Сан Гро и др. [c.261]

В крахмальном геле можно работать при pH от 2 до И. Этим методом были изучены многие белковые смеси, прежде всего сыворотка крови и гемоглобины. Основные результаты этих работ можно найти в обзорах [43, 44]. Как уже говорилось, в сыворотке крови крахмальный гель позволяет обнаружить до 30 компонентов это количество столь велико, что до сих пор не установлено, какую сыворотку считать нормальной , так как у каждого животного и человека имеются индивидуальные, генетически детерминированные отличия. При сравнении с данными электрофореза на бумаге следует помнить, что порядок расположения компонентов в геле может быть совершенно иным. Кроме того, электрофореграмма в геле, вообще говоря, неаддитивпа благодаря влиянию одних компонентов на подвижность других, так как присутствие белков в высокой концентрации в узких зонах приводит к локальным изменениям проводимости, pH и вязкости среды иногда наблюдается и прямое взаимодействие белков. Для сопоставления с результатами электрофореза сыворотки крови па бумаге применяют так называемый двухмерный электрофорез. В этом случае сыворотку сначала разделяют па бумаге. После этого зоны не фиксируют, а влажную бумагу прижимают к поверхности крахмального геля и проводят дополнительный электрофорез в геле в перпендикулярном направлении. Лишь после этого зоны проявляют. Этот метод позволяет еще более улучшить разделение. [c.97]

Изоэлектрическое фокусирование в геле имеет определенные преимущества по сравнению с ИФ в среде со стабилизованным градиентом плотности. Эти преимущества состоят в следующем 1) сокращается длительность разделения 2) полностью подавляется термическая конвекция 3) применяется простое оборудование для ИФ 4) возможно одновременное разделение нескольких образцов 5) возможно обнаружение с помощью различных красителей и различных методик 6) возможно объединение ИФ и зонного электрофореза в двухмерном варианте 7) достаточно небольшого количества образца 8) возможно обнаружение белков методом иммунодиффузии. Однако при применении геля возникают проблемы, связанные с молекулярноситовым эффектом, который имеет место в основном при разделении больших молекул. Другой недостаток метода — это низкая точность определения pH в зонах. В настоящее время этот метод (сокращенное обозначение ИФПАА или ПАГИФ) является общепринятым и широко используется. В отдельных случаях, согласно данным [73], при проведении дискретного трубчатого электрофореза в полиакриламидном геле доо пска-ется окрашивание. Для снижения молекулярно-сито<вого эффекта рекомендуется [23] концентрация геля 3,7%. Типичный градиент напряжения для 8-часового разделения составляет 200 В на 60 мм. Если тепло отводится, то напряжение можно увеличить и соответственно сократить длительность разделения. Градиент pH можно измерить после разрезания столбиков с гелем и последующего элюирования сегментов небольшим коли- [c.323]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология