Гексозамин, определение

Методы количественного определения гексозаминов . Ввиду исключительно важной роли, которую играют 2-амино-2-дезоксигексозы в построении биополимеров и в биохимических процессах, необходимы надежные методы количественного определения этих моносахаридов. Однако ни один из известных методов количественного определения гексозаминов не является специфическим получаемые результаты зависят от наличия в смеси обычных моносахаридов и аминокислот, которые наряду с аминосахарами всегда образуются при гидролизе мукополисахаридов и гликопептидов. Поэтому все современные методы анализа аминосахаров включают стадию отделения их от аминокислот, других моносахаридов и неорганических солей с помощью ионообменной хроматографии [c.280]

Определение гексозаминов, особенно в нервных тканях [1012]. [c.245]

Применение ионообменной смолы для гидролиза тканей ири определении гексозамина [2575]. [c.246]

Реакция с орцином значительно чувствительнее при 420 тц, чем при 540 тц, но различные гексозы больше различаются между собой при более коротки.х волнах и, если процентное содержание их в стандарте отличается от такового в исследуемо.м растворе, ошибка определения будет больше. При определении при 540 Ш 1 не мешают гексозамин и фукоза, заведомо имеющиеся в глюкопротеинах сыворотки, а также и сиаловая кислота . [c.210]

Отдельные образцы полисахарида гидролизуют 0,5 и 6 и. соляной и 1 и. уксусной кислотами. Гидролиз проводят в небольших (по 2—3 мл) запаянных стеклянных ампулах, которые нагревают в течение определенного времени на кипящей водяной бане. Ампулы затем охлаждают, содержимое переносят в небольшие стеклянные чашки и упаривают досуха в вакууме над гранулированным едким натром и концентрированной серной кислотой. Небольшие количества хлористого натрия не мешают определениям восстанавливающей способности и гексозаминов, и поэтому после гидролиза 0,5 и. соляной кислотой гидролизат не упаривают досуха, а нейтрализуют равным объемом 0,5 п. раствора едкого патра. [c.447]

В случае преобладания углеводных компонентов разложение аминокислот нри гидролизе происходит в большей степени. Некоторые группоспецифические гликопептиды крови, содержащие 7—15% белка, были гидролизованы перед аминокислотным анализом в кипящей 6 н. соляной кислоте при не указанном, но, вероятно, низком разбавлении [73]. Расчет выхода азота показал, что только 69—91% азота, определенного по методу Кьельдаля, обнаруживается в аминокислотах и гексозаминах. Амидный азот не определяли, но даже если принять, что все кислотные группировки боковых аминокислотных цепей существуют в виде амидных групп, выход общего азота был бы лишь немного больше (71—94%). Хотя не исключено, что в веществах присутствовали неизвестные азотистые составляющие (сиаловые кислоты не обнару кены), весьма вероятно, что в условиях гидролиза произошло значительное разложение аминокислот. [c.134]

Нами исследованы полисахариды, выделенные И. Л. Тыдель-ской по методу Фуллера [12] из следующих штаммов стрептококков группы А, группы Д и атипичного штамма, выделенного от больного. Этот штамм по ряду свойств относится к группе Д. Проведен качественный анализ состава сахаров, входящих в полисахариды, выделенные из перечисленных штаммов. Анализ проводили методом хроматографии на бумаге, растворитель пиридин — бутанол — вода (3 2 1,5) [2], проявитель — анилингидрогенфталат [13]. Хроматограммы гидролизатов полисахаридов, выделенных из стрептококков, представлены на рис. 1—3. Во всех полисахаридах был найден гексозамин, определенный по методу Элсона и Моргана. [c.291]

Включая амидный азот и азот гексозаминов, определенный методом Маршалла и Нойбергера [30]. [c.28]

Образование третьего хромогена можно объяснить, предположив, что дегидратации подвергается фуранозная форма аминосахара На первой стадии после отщепления одной молекулы воды образуются хромогены, которым, очевидно, соответствуют две из трех возможных структур XIX, XX и XXI. Из приведенных данных ясно видно, что 4-О-замещенные гексозамины не могут вступать в реакцию Моргана — Эльсона, тогда как 3-0- и 6-О-замещенные гексозамины дают эту реакцию В основе второго метода определения аминосахаров (метод Эльсона — Моргана) (см. стр. 280) лежит реакция незамещенного аминосахара со щелочным раствором ацетилацетона. О природе хромогенов, образующихся в этих условиях, известно сравнительно мало лишь один хромоген выделен в индивидуальном состоянии и идентифицирован как 2-метилпиррол [c.275]

Для определения аминосахаров обычно применяются колориметрические методы, предложенные Морганом и Эльсоном. Существуют два таких метода метод Моргана — Эльсона известный также под названием непрямого метоДа Эрлиха, и метод Эльсона—Моргана . Метод Моргана — Эльсона пригоден для определения микроколичеств N-ацетиль-ных производных аминосахаров (20—50 мкг). Он состоит в непродолжительном нагревании N-ацетилгексозамина с раствором соды при pH 10,8 с последующей обработкой солянокислым раствором /г-диметиламинобенз-альдегида (реактив Эрлиха), что приводит к образованию хромогена, содержащего фурановое кольцо (см. стр. 274), и к возникновению интенсивной красной окраски. Оптическую плотность окрашенного раствора определяют при 550 ммк. Присутствие в анализируемом субстрате лизина и обычных моносахаридов искажает результаты анализа, так как возникающие хромогены дают с реактивом Эрлиха окрашивание с максимальной оптической плотностью при 560 ммк Все гексозамины D-ряда образуют, по-видимому, один й тот же хромоген, поскольку при этом разрушаются все асимметрические центры, кроме С5. Однако интенсивность окраски в случае М-ацетил-О-галактозамина в четыре раза слабее интенсивности окраски М-ацетил-О-глюкозамина [c.280]

Второй, наиболее распространенный метод, пригодный только для определения аминосахаров со свободной аминогруппой (метод Эльсона — Моргана , состоит в нагревании гексозамина со щелочным раствором ацетилацетона при pH 9,6—9,7 с последующей обработкой реактивом Эрлиха. Оптическая плотность окрашенного в красный цвет раствора измеряется при 530 ммк. О природе хромогенов, образующихся из гексоз- аминов в этих условиях, известно сравнительно мало (см. стр. 275)е по-видимому, в зависимости от условий реакции они имеют различный структуры. К настоящему времени разработано несколько модификацию этого метода направленных главным образом на стандартизаци [c.280]

Аминополисахариды в почвах. Колориметрическое определение гексозаминов в почвенных гидролизатах [2313]. [c.308]

Аминокислотный анализатор использовали также для разделения гексозаминов [77, 78] с целью количественного определения антибиотических амнносахаров и их продуктов распада [79], а также для определения 0-метилированных производных ами-носахаров [80] и т. д. [c.79]

Более подробно были изучены полисахариды, входящие в состав комплексов. В кислотных гидролизатах изучаемых фракций проводили количественное определение сахаров. Для определения сахаров использовали водные элюаты, полученные из непроявлен-ных участков хроматограммы, соответствующих определенным сахарам. Гексозы определяли антроновым методом (7], пентозы — с помощью окраски орцином [8], гексозамин — методом Элсона и Моргана [9]. [c.289]

Одним из основных методов анализа белковых составляющих углевод-белковых (комплексов является кислотный гидролиз и количественное определение аминокислот. Однако следует иметь в виду легкое образование интеноивно окрашенного гумина при наличии углеводов в гидролизате аминокислот (см. кн. I). Присутствие в пидролизате гексозаминов может осложнить аминокислотный анализ, поскольку о.ни проявляются нингидрино М и элюируются аналогично аминокислотам. Ы- и С-Концевые остатки определяются так же, ак для обычных белков (см. кн. I). [c.72]

Патологические состояния организма влияют на уровень содержания этих веществ и их состав. Отмечено, что при болезненных нарушениях содержание углевод-белковых веществ в крови повышается, что можно количественно оценить по возрастанию уровня гексозаминов и других моносахаридов. Такого рода отклонения нябпюдчкт я ппи п ке желудка, яичников, легких, саркомы ретикулярных клеток, лимфатической лейкемии, воспалении легких, туберкулезе, остром ревматизме, менингоколковои оактереыий, инфаркте миокарда и др. Определение изменений в качественном и количественном составе глобулинов может использоваться в диагностике ряда заболеваний. [c.92]

Большинство г. выделено в кристаллич. виде. Г. хорошо растворимы в воде и р-рах кислот с к-тами образуют соли. Г. дают реакции восстанавливающих сахаров (восстановление Фелинга реактива и аммиачного р-ра AgNOз, окисление до соответ-ствуюш,их к-т) и аминов. С нингидрином Г., подобно аминокислотам, дают цветную реакцию. Для колич. определения ряда гексозаминов обычно используют Элсона — Моргана реакцию (цветная реакция, к-рую дают продукты конденсации гексозаминов и ацетилаце-тона с п-диметиламинобензальдегидом). [c.477]

Присутствие белков в высоких концентрациях усиливает поглощение при 492 ммк, но максимум поглоп1,ения соответствует большим длинам волн. Влияние этих примесей можно почти полностью исключить для этого после завершения реакции реакционную смесь встряхивают с равным объемом хлороформа. Чтобы удалить эмульгированный х горо-форм из водной фазы, жидкость центрифугируют или оставляют на ночь для отстаивания [9] и спектрофотометрпруют водную фазу. Оптическая плотность, обусловленная гексозамииом, возрастает примерно на /3 по сравнению с первоначальной. Точность количественного определения увеличивается при применении дихроматических измерений при 492 и 520 ммк. Разность />490 — -Опго только на 25% меньше, чем 492, и является линейной функцией концентрации гексозамина. Величина коэффициента экстинкции для п-галактозамина на 5%1 меньше его величины для ю-глюкозамина. Окраска раствора устойчива. [c.51]

Чувствительность реакции с пирролом почти в 2 раза выше чувствительности реакции с индолом ото связано с использованием в первом случае более концентрированной кислоты. Влияние высокой концентрации кислоты на другие сахара не изучалось. На реакцию влияет присутствие гексоз. Для количественных определений реакцию ведут после отделения гексозамина путем хроматографирования на колонке с амбер-литом ШС-50 и последующего элюирования гексозамина соляной кислотой, которую перед определением нейтрализуют карбонатом натрия. Реакция с пирролом дает ожидаемую величину при определении гексозамина в нолиуропидах, в то время как реакция с индолом в этом случае воспроизводимо дает только 50—55% теоретической величины. [c.51]

Опредолеппе гексозамина было проведено на негидролизованных образцах по модифицированной методике Ольсона—Моргана. Указанная методика приведена в работе [8], при определении гексозамина опущена стадия хроматографирования на ионообменной смоле. [c.241]

Разработано два подхода к определению структуры частично метилированных моносахаридов. Первый [77, 78] заключается в превращении частично метилированного моносахарида в метилгликозид и последующем метилировании иодистым метилом-< з. Сравнивая масс-спектры дейтерометилированиого и полностью метилированного вещества [34, 39, 78] (см., наиример, табл. 94.1), можно определить, является ли исходный моносахарид пентозой, гексозой, 6-дезоксигексозой, гексозамином и [c.417]

В течение длительного времени большой интерес исследователей привлекали гексозамины. Разработаны превосходные газохроматографические методы определения этих соединений. Впервые разделение гексозаминов методом газовой хроматографии было выполнено Джонсом и сотр. [204]. Эти авторы разделили аномер-ные ацетаты /)-глюкозамина и -галактозамина на колонке, содержащей 5% неопентилгликольсебацината на стеклянных шариках (в головной части колонки насадка состояла из стеклянных шариков с 1% 8Е-30 и была нагрета до 214 °С). [c.251]

Описано также количественное газохроматографическое определение гексозаминов в виде Н-ацетил- и тетра-О-триметилси-лильных производных [205—207]. Существует несколько методов получения Ы-ацетильных производных. По-видимому, наилучши-ми из них являются методы, описанные Уайтом [208], Роземаном и Лудпвейгом [209] и Кобата и Зиро [210]. [c.251]

Для гидролиза белков в мягких условиях было предложено использование твердой ионообменной смолы в присутствии очень разбавленной кислоты. Однако Паульсон и Дитередж [7] обнаружили, что после обработки сывороточного альбумина быка и эдестина пятикратным (по весу) количеством смолы, содержащей группировки сульфоновых кислот (дауэкс-50), и 50—100-кратным количеством 0,05 н. соляной кислоты при 100° остаются значительные количества пептидов, даже если нагревание продолжалось 100 час. Относительные скорости освобождения различных типов аминокислот были сравнимы с величинами, наблюдаемыми при гидролизе более концентрированной соляной кислотой. Однако реакция, особенно на последних стадиях, идет слишком медленно, чтобы гидролиз с дауэксом-50 стал удобным методом получения полных белковых гидролизатов. Эта методика может быть эффективной для более легко гидролизуемых соединений и была использована при определении гексозаминов [8]. [c.122]

Применение одной из количественных модификаций нингидринового метода (см. стр. 144) к общему гидролизату представляет собой чувствительный метод определения белка, более строго обоснованный, чем вышеописанные методики. В применении к гликопротеинам нингидриновый метод нуждается в существенных поправках на аммиак (образующийся при расщеплении амидных групп, сиаловых кислот и гексозаминов) и гексозамины, которые тоже реагируют. Гидролизаты разных белков не дают с нингидрином идентичных интенсивностей окраски на единицу веса белка отчасти за счет различного веса остатков (и образования окраски) различных аминокислот, а также, что более существенно, за счет различного содержания в них имипокислот, практически не дающих окрашивания при длине волны 570 ммк, при которой производятся измерения (см. стр. 149). [c.151]

НОЙ желез и цервикального гликонротеина вычислили значения от 16,1 до 17,5%. Необходимо вводить большие поправки на азот, содержащийся в других компонентах гликопротеинов, таких, как гексозамины и сиаловые кислоты, и ошибки в определении этих веществ будут понижать точность рассчитанных значений для белка. Общее содержание азота легче всего определять по методу Кьельдаля. Автор нашел, что очень точные результаты дает методика Чибнелла и сотр. [125]. Время разложения можно уменьшить с 8 до 2 час без снижения точности, если заменить сульфат меди в катализирующей смеси на то же (по весу) количество сульфата ртути [118]. При этом необходимо ввести 5% (вес/объем) тиосульфата натрия в 30%-ный (вес/объем) раствор едкого натра, прибавляемый для нейтрализации серной кислоты перед отгонкой аммиака. [c.152]

Точные данные о содержании амидного азота в белках необходимы при определении в них общего азота и при изучении вопроса о том, не являются ли различия в содержании амидного азота причиной электрофоретической гетерогенности белков, как это показано для желатина [1] и предполагается для у-глобулина [2]. Для установления тонкой структуры гликопротеинов [3] очень существенно точное онределение амидного азота, но при выполнении такого анализа в этой группе веществ встречаются значительные трудности. Во-первых, при действии кислот, применяемых для освобождения амидного азота в виде аммиака из остатков аспарагиновой и глутаминовой кислот белковой части, будут образовываться, по крайней мере частично, 2-ацетамидо-2-дезоксигексозы. Свободные гексозамины, образующиеся при деацетилпровапии, являются потенциальным источником аммиака в условиях его отгонки из щелочного раствора. Во-вторых, известно, что сиаловые кислоты, обычные компоненты гетеросахаридов гликонротеинов, даже в мягких кислотных условиях расщепляются с выделением части их азота в виде аммиака [4]. [c.159]

Образование аммиака нри действии горячей щелочи на гексозамины в контролируемых условиях иногда используется для определения амино-сахаров (см. стр. 216). Механизм этой реакции ие исследован, но кажется вероятным, что сначала образуется 2-иминопроизводное, которое находится в равновесии с фруктозой и аммиаком [c.174]

Различные типы моносахаридов сильно различаются по устойчивости к кислотам (стр. 168 и сл.). Гексозамины представляют собой группу, наиболее устойчивую к расщеплению кислотами, но и они менее устойчивы, чем большинство аминокислот так, при нагревании в 4 н. соляной кислоте при 100° в течение 16 час разрушается 5% D-глюкозамина [2]. D-Галактозамин менее устойчив, так как аналогичная обработка 4 н. соляной кислотой при 100° приводит к потере 10—14% вещества [3, 4]. Это расщепление не обусловлено действием одной кислоты, так как недавно проведенное исследование показало, что удаление кислорода значительно понижает степень деструкции [5]. Другой крайностью являются сиаловые кислоты, которые быстро расщепляются при нагревании с разбавленными минеральными кислотами, причем по данным определения с тиобарбитуровой кислотой 20%-ная деструкция N-ацетилнейраминовой кислоты происходит при нагревании с 0,01 н. соляной кислотой при 100° в течение 30 мин [6]. Альдозы, не содержащие азота, такие, как манноза и галактоза, занимают промежуточное положение между этими двумя крайними случаями показано, например, что при нагревании в 2 н. соляной кислоте при 100° в течение 5 час расщепляется 23% D-маннозы [7]. [c.196]

Может показаться возможным анализ смеси глюкозамина и галактозамина путем измерения количества свободных аминосахаров по реакции Эльсона — Моргана с последующим ацетилированием и определением по Моргану — Эльсону. Глюкозамин и галактозамин образуют примерно одинаковое окрашивание в реакции Эльсона — Моргана, но интенсивность окрашивания, которое дают их N-ацетильные производные в реакции Моргана — Эльсона, различна [252, 253]. С применением этого метода было найдено, что овомукоид содержит 15 остатков глюкозамина и 7 остатков галактозамина [214] однако эти величины не совпадают с данными других исследователей (см. гл. 2, раздел 2). По-видимому, этот метод можно будет рассматривать как надежный способ точного измерения содержания двух гексозаминов в смеси только после дальнейших исследований. [c.219]

Рис. 1. Аппарат для перегонки, используемый в модификации Цесси методики Эльсона — Моргана для определения гексозаминов. Высота прибора без колбы около 12 сл остальные детали изображены в соответствии с этим размером.

Гликопептиды содержат половину галактозамина природного ПЖО. Очень низкое содержание дикарбоновых кислот во фракции, вероятно, является следствием пропускания гликопентидов через колонку с дауэксом-1 и применения воды в качестве элюента. Средний молекулярный вес гликопентидов, определенный потенциометрическим титрованием, составляет 660. Молярное отношение аминокислот к гексозамину было около 3,3, следовательно, гликопептиды в среднем были тетрапептидами с присоединенными к ним 1,3 остатка N-ацетилгалактозамина. На основании стехиометрии можно считать, что серин и треонин были аминокислотами, через которые осуществлялась связь с галактозамином (см. также ниже). [c.289]

Наряду с определением нейтрального сахара в белке изучали также содержание в нем гексозаминов. В более ранних работах гексозамины определяли с использованием реакции Эльсона — Моргана, гидролиз альбумина проводили в 2 и. соляной кислоте при 100° в течение 3 час при этом были получены значения, равные 0,8 [53] и 0,9% [51]. Однако в более поздней работе Моггриджа и Нойбергера ([67], см. также том 1, гл. 8) было показано, что для количественного выделения гексозамина применявшиеся условия гидролиза не являются оптимальными (ср. [68]). Действительно, позднее было показано, что для освобождения всех остатков аминосахаров, связанных гликозидными связями, требуются более жесткие условия (необходима обработка 4 н. соляной кислотой при 100° в течение 3—6 час) и тогда получаются значения [c.12]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология