Поправка на флуоресценцию раствора

Величина /о рассчитывается по измерению интенсивности флуоресценции раствора 4 при длине волны 355 нм, /о —по измерению интенсивности флуоресценции раствора 5 при длине волны 430 нм. Так как недиссоциированная форма нафтола имеет довольно значительную интенсивность флуоресценции при 430 нм, то при измерении следует вводить поправку 7 = /изм действительная интенсивность флуоресценции 2-нафтолят-иона при 430 нм I — интенсивность флуоресценции нафтолят-иона, полученная экспериментально А — интенсивность флуоресценции 2-нафтола в растворе 4 при длине волны 430 нм. [c.78]

Если исключить попадание пыли в исследуемый раствор, то основными источниками ошибок при измерении рассеяния света являются абсорбция света раствором, флуоресценция раствора, отражение от стенок кюветы и разница между показателями преломления содержимого кюветы и среды, в которую она помещена. Поэтому при расчете молекулярного веса из данных по светорассеянию следует вводить соответствующие поправки. [c.114]

Введение поправки на флуоресценцию раствора рассматривал Брайс [48J. [c.115]

Во все восемь пробирок последовательно с интервалом 30 сек приливают по 0,5 мл 0,3%-ной перекиси водорода, встряхивают и через 5 мин с таким же интервалом по 0,2мл раствора комплексона П1, перемешивают и измеряют флуоресценцию растворов на приборе при 540 нм. В измерения вносят поправку на свечение воды и строят график в координатах Ig -J-— количество кобальта, где / — интенсивность флуоресценции раствора с предварительно введенным комплексоном П1. По графику слева от нуля по оси абсцисс определяют количество кобальта в аликвотной части анализируемого раствора за вычетом результата холостого опыта (рис. 21). [c.190]

Растворы производных целлюлозы часто флуоресцируют в синей и зеленой области спектра. Неучет или недостаточно точный учет поправки на флуоресценцию растворов, к сожалению, допущен во многих опубликованных в печати работах по светорассеянию растворов производных целлюлозы. Эти и другие, не отмеченные здесь затруднения ведут к тому, что измерения свойств растворов целлюлозы и ее производных содержат большие случайные и систематические ошибки. Редко в публикациях встречаются попытки анализа этих ошибок. Одним из немногих исключений является работа [63], излагающая результаты исследования свойств растворов нитрата целлюлозы в этилацетате. В большинстве случаев вопрос о точности результатов измерений совсем не рассматривается. [c.238]

Абсолютные значения квантовых выходов флуоресценции или фосфоресценции можно рассчитывать по данным измерений в одних и тех же произвольных единицах интенсивности поглощаемого и испускаемого света. Должны быть сделаны поправки на различия в пространственном и спектральном распределениях возбуждающего света и испускаемого излучения, необходимо также знать кривую спектральной чувствительности фотоприемника. Направленный возбуждающий пучок можно рассеять для сравнения с изотропным испускаемым излучением с помощью матовой поверхности или, лучше, с помощью белкового раствора, рассеивающую силу которого можно рассчитать. Процедура коррекции спектрального распределения испускаемого излучения может быть упрощена. Для этого испускаемое излучение образца и рассеянный возбуждающий свет надо последовательно направить на подходящее флуоресцирующее вещество, которое преобразует все падающее излучение в свой собственный спектр флуоресценции с постоянным [c.192]

Определение абсолютных квантовых выходов флуоресценции представляет собой довольно трудную задачу. Оно требует измерения поглощенных и испускаемых квантов во всей области частот с поправками на рассеянный свет, повторное поглощение и на эффекты преломления. На практике часто используют растворы веществ с известным квантовым выходом флуоресценции. Измеряют интенсивность флуоресценции известного и исследуемого раствора в совершенно идентичных условиях как функцию частоты. Строят кривые зависимости относительного числа излученных квантов от частоты. Площади под этими кривыми пропорциональны квантовому выходу флуоресценции. Зная соответствующее значение квантового выхода для стандарта, определяют величину квантового выхода флуоресценции исследуемого соединения. [c.62]

Определение абсолютных квантовых выходов флуоресценции представляет собой трудную задачу. Оно требует измерения поглощенных и испускаемых квантов во всей области частот с поправками на рассеянный свет, повторное поглощение и на эффекты прелом- ления. На практике часто используют растворы веществ с известным квантовым выходом флуоресценции и определяют квантовые выходы флуоресценции исследуемых соединений по отношению к известным со- [c.158]

Область, в которой флуоресценция пропорциональна концентрации флуоресцирующего вещества, обычно очень узка поэтому соотношение (с—с )/(а—Ь), где а — интенсивность флуоресценции для стандартного вещества, Ь — то же для соответствующего контрольного вещества, с — интенсивность флуоресценции для испытуемого вещества и ё — то же для соответствующего контрольного раствора, должно быть не менее 0,40 и не более 2,50. Поэтому необходимо построить рабочую кривую зависимости интенсивности флуоресценции с поправкой на контрольный раствор от концентрации. [c.55]

Иногда необходимо знать абсолютные квантовые выходы (F) (стр. 169). Прямое определение F требует измерения поглощенных и испускаемых квантов во всей области частот с поправками на рассеянный свет, повторное поглощение и на эффекты преломления. Относительное число квантов, испускаемых за секунду флуоресцирующим раствором, можно определить при помощи счетчика квантов , представляющего собой комбинацию второго флуоресцирующего раствора (например, родамина В в глицерине) и фотоумножителя так как выходы флуоресценции не зависят от длины волны возбуждающего света (выше длинноволнового предела), реакция этой системы зависит от числа поглощенных квантов независимо от длины волны [14, 15]. Число падающих квантов определяется тем же счетчиком квантов после замены второго раствора поверхностью окиси магния, способность которой рассеивать свет известна, или еще лучше очищенным раствором белка, рассеивающую способность которого можно вычислить. Тогда из данных измерения поглощения света можно найти число квантов, поглощенных флуоресцирующим раствором. Отношение числа излученных квантов к числу поглощенных квантов дает величину F. Для бисульфата хинина в воде, например, принято значение 0,55 [15]. [c.158]

Эффект тушения флуоресценции примесными компонентами в некоторых случаях может быть скомпенсирован с помощью метода стандартной добавки, при этом калибровочная кривая строится таким образом, что к раствору добавляются известные количества определяемого компонента. Этим способом можно измерить тушащее действие посторонних веществ (то есть матрицы) и затем вносить необходимые поправки. [c.379]

Елисеевой [35] описан упрощенный метод определения малых количеств рибофлавина в моче,основанный па измерении интенсивности флуоресценции рибофлавина в водных растворах. Для внесения поправки на флуоресценцию примесей автор предлагает разрушать рибофлавин фотохимическим путем, а именно облучением ртутной лампой ПРК-2 без светофильтра. [c.204]

В большинстве случаев измерение долгоживущей люминесценции с временем жизни меньше 1 мс приходится проводить в условиях, когда быстрая флуоресценция в несколько раз интенсивнее, как, например, при измерениях замедленной флуоресценции в жидких растворах. Тогда интенсивность общего испускания при положении в фазе идентична интенсивности быстрой флуоресценции. Однако есть соединения, для которых быстрая флуоресценция в жидких растворах слаба, а фосфоресценция относительно интенсивна. Как правило, полоса фосфоресценции не перекрывается с полосой флуоресценции и для получения спектральной кривой флуоресценции в измерениях при положении в фазе нет необходимости вводить поправку. На рис. 106 [c.262]

Рис. П-6. Спектры флуоресценции водных растворов некоторых веществ (без поправки на спектральную чувствительность прибора)

Реабсорбция. Кроме ослабления возбуждающего потока, возможно и вторичное поглощение раствором излучения флуоресценции его называют реабсорбцией, или самопоглощением. Оно проявляется тем сильнее, чем больше взаимное перекрывание спектров поглощения и излучения. Ослабление полосы флуоресценции (в области наложения спектров) происходит преимущественно с коротковолновой стороны из-за этого не только уменьшается общая яркость свечения раствора, но меняется и цвет, потому что видимый максимум в его спектре в большей или меньшей степени смещается в красную сторону. Для получения истинного спектра излучения, кроме отмеченного выше учета чувствительности приемника света, следует вводить поправку и на реабсорбцию [2]. Как и при экранировании, общая доля молекул, высвечивающих энергию возбуждения (выход флуоресценции), при реабсорбции может и не изменяться. [c.46]

Для измерения слабых интенсивностей флуоресценции были использованы фотоэмиссионные ячейки типа фотоумножителя, в особенности чувствительные к голубой области спектра (тип 931 А) или к красной области (тип 7102). При этом требуются довольно дорогие высоковольтные стабилизаторы напряжения и измерительные приборы, имеющие большой импеданс. Следует отметить, что фотоумножитель 931 А имеет различную чувствительность в зависимости от направления плоскости поляризации падающего пучка. Следовательно, при поляризационных измерениях рядом с баллоном фотоумножителя нужно ставить рассеиватель из матового стекла или сам баллон должен быть обработан карборундом до появления матовой поверхности. Детектор не должен реагировать на возбуждающий свет, отраженный или рассеянный от образца или от других предметов. Поэтому перед детектором помещают фильтр, пропускающий флуоресцентное излучение, но не пропускающий возбуждающее излучение. В промышленности выпускается много недорогих цветных фильтров ограниченной полосы, однако большинство из них сами флуоресцируют при возбуждении светом в области ближнего ультрафиолета. В том случае, когда введение поправки на фон является нежелательным, в качестве фильтра можно использовать раствор каких-либо нефлуоресцирующих веществ (например, бихромата калия) или некоторых окрашенных нефлуоресцирующих пленок. [c.175]

В том случае, когда камера хорошо центрирована, интенсивность флуоресценции не должна зависеть от угла наблюдения при учете поправки на объем раствора (умножение показания фотоэлемента на sin 0). Любое отклонение от круговой симметрии вызывается либо неточностью в расположении камеры относительно светового потока, либо ее загрязненностью, либо появлением рассеянного света. В обычном случае отклонение при отсчете не должно превышать 1 %. [c.390]

Определяют радиоактивность объединенной фракции, содержащей низкомолекулярные вещества (пул метаболитов) непосредственно в растворе, применяемом для определения радиоактивности в водных образцах, как описано в предыдущей главе (разд. 16.4.2). Чтобы внести поправку на тущение флуоресценции за счет ТХУ, используют внутренние или внещние стандарты. В другом варианте ТХУ удаляют путем трехкратного экстрагирования равными объемами эфира. Однако в процессе экстрагирования эфиром из низкомолекулярной фракции удаляются органические кислоты. Радиоактивность в образцах проэкстрагированной фракции измеряют в сцинтилляционной смеси, применяемой для водных растворителей, или же после высушивания под лампой накаливания в сцинтилляционной смеси на основе толуола (разд. 16.4.3). [c.287]

Величина 1° рассчитывается по измерению интенсивности флуоресценции раствора № 4 при длине волны 355 нм, о — по измерению интенсивности флуоресценции раствора № 5 при длине волны 430 нм. Так как недиссоциированная форма нафтола имеет довольно значительную интенсивность флуоресценции при 430 нм, то при измерении / следует вводить поправку / изм — Л 111о), где Г — действительная интенсив- [c.169]

Измерение квантового выхода флуоресценции. Определение абсолютных квантовых выходов флуоресценции представляет собой трудную задачу. Оно требует измерения поглощенных и испускаемых квантов во всей области частот с поправками на рассеянный свет, повторное поглощение и на эффекты преломления. На практике часто используют растворы веществ с известным квантовым выходом флуоресценции и определяют квантовые выходы флуоресценции исследуемых соединений по отношению к известным соединениям. Необходимо работать с очень разбавленными растворами, когда избыточным поглощением возбуждающего света и самопо- [c.68]

Часто соединение, имеющее долгоживущую люминесценцию, также имеет и быструю флуоресценцию. Если выход последней уже определен обычным способом, то выходы фосфоресценции и замедленной флуоресценции при тех же условиях можно определить, не сравнивая с другим раствором. Отношение выхода замедленной флуоресценции к выходу быстрой флуоресценции вычисляется сравнением интенсивностей одного из главных максимумов в спектрах, которые идентичны по форме. Регистрируемый спектр испускания не надо исправлять, но следует сделать поправки на коэффициент фосфориметра и чувствительность прибора, при которой измеряются два спектра. [c.70]

Приготовление холостой пробы (для учета влияния на флуоресценцию фона, создаваемого тукими компонентами сточных вод, как лигнин, скшшдар, фенолы и др.) 50 мл исследуемой сточной воды подкисляют НС1 до рН=1 и кипятят 10 мин затем пробу охлаждают, подщелачивают до рН=14 и доводят объем до 50 мл дистиллированной водой.. Аликвотную часть (1 мл) вносят в цилиндр на 10 мл, добавляют 1 мл раствора ТРАФ и дистиллированную воду до 10 мл. Интенсивность флуоресценции этого раствора /j- Разность (/о — /г) — поправка на влияние фона, которую при расчете концентрации H2S прибавляют к /1. [c.606]

Отношение интенсивностей флуоресценции, измеренных прибором F2IF1), равно отношению абсолютных скоростей испускания флуоресценции двух растворов (Q2/Q1) только в том случае, если геометрическое расположение образца и оптических деталей одинаково для обоих измерений. Изменение показателя преломления (а) раствора приводит к изменению углов, под которыми лучи покидают границу плоскость кюветы — воздух [184]. Так, если два сравниваемых, вещества растворены в разных растворителях, то наблюдаемые интенсивности флуоресценции нужно умножить на п . При использовании бисульфата хинина в водной 0,1 н. серной кислоте в качестве стандартного вещества отношение п2(растворнтель)/п (вода) соответствует поправке 27% для бензола и 5,5% для этанола, [c.247]

При измерении относительных выходов флуоресценции необходимо избегать ошибок за счет эффектов внутреннего фильтра, немонохроматичности возбуждающего света, флуоресценции кювет, тущения кислородом и фоторазложения. Ошибки, обусловленные первыми двумя факторами, в принципе легко устранимы, но на практике на них часто не обращают внимания. Уравнение (21) применимо лишь в том случае, если доля возбуждающего света, поглощаемая раствором, пренебрежимо мала. Оптическая плотность 0,01 (см. раздел 111,3,2) будет давать ошибку 2,3% в интенсивности наблюдаемой флуоресценции. Поэтому по возможности оптическая плотность не должна превышать этой величины. Если выход флуоресценции и чувствительность прибора малы и приходится использовать большие оптические плотности, необходимо вводить поправку на поглощение возбуждающего света (раздел П1,3,2) или, что лучше, подбирать одинаковые оптические плотности двух растворов. Оптическая плотность не должна превышать 0,4 на 1 см, если используется кювета толщиной 1 см, а свет отбирается из ее центра (т. е. эффективная оптическая плотность равна 0,2). Однако при современных чувствительных приборах такие оптические плотности приходится использовать редко. [c.248]

Значительные ошибки при измерении оптической плотности могут возникать, если спектр поглощения в исследуемой области довольно крутой. Большинство ртутных линий состоит из ряда тесно расположенных линий или уширенной линии, если используется лампа высокого давления. Свет, выделяемый монохроматором из излучения ксеноновой лампы, обычно содержит даже еще более широкие полосы. Поэтому, если спектр поглощения очень крутой, следует измерять оптическую плотность раствора тем же пучком света, который используется для возбуждения флуоресценции. Необходимо, однако, отметить, что эта процедура не исправляет полностью немонохромэтичность возбуждающего света. В частности, не вводится поправка на присутствие небольшой доли света с сильно отличающейся длиной волны, для которой коэффициент поглощения во много раз больше, как в случае с антраценом, описанном выше. Из-за трудности получения точных значений поглощения для полихроматического света при измерении выходов флуоресценции ртутные лампы используются чаще ксеноновых. [c.249]

ИЗ главных максимумов в спектрах, которые, разумеется, идентичны по форме. Регистрируемый спектр испускания не надо исправлять, но следует сделать поправки на коэффициент фосфориметра и различные чувствительности прибора, при которых измеряются два спектра. Этот метод расчета иллюстрируется рис. 107, который взят из статьи Паркера и Хатчарда [46] и был первым полученным спектром замедленной флуоресценции типа Р антрацена в жидком растворе. Спектры быстрой и замедленной флуоресценции не исправлены и искажены самопоглощением. Тем не менее их интенсивности можно сравнивать, так как они были измерены в том же растворе при идентичных условиях. Максимальные интенсивности при 2,5 мкм составляли 90,5 деления при чувствительности, равной 1, для быстрой флуоресценции и 66 делений при чувствительности 260 для замедленной флуоресценции. Время жизни замедленной флуоресценции равнялось 3,8 мс при коэффициенте фосфориметра 0,33. Поэтому [c.266]

Вебер показал, что степень поляризации возбуждающего света изменяется с изменением длины волны, но отклонения не превышают 10%- Соответствующая ошибка при определении степени поляризации флуоресценции была того же порядка, что и точность измерений, и поэтому не вводилось никакой поправки. Вебер также обсудил проблему деполяризации при поглощении флуоресценции в концентрированных растворах и вторичном испускании. Для измерения концентрированных растворов он использовал тонкие плепки, зажатые между гипотенузными гранями двух трехгранных призм из синтетической двуокиси кремния. [c.282]

Паркер и Джойс [114] определили описанным методом эффективности образования триплетов для хлорофилла а и хлорофилла Ь в этаноле, использовав в качестве донора антрацен или нафталин. Им пришлось вводить поправки из-за малого вклада замедленной флуоресценции, возбуждаемой при непосредственном поглощении света хлорофиллом в растворах, содержащих сенсибилизатор (подробные данные см. в оригинальной статье). Полученные результаты включены в табл. 33. Сумма (ф/ + фг) заметно меньше единицы, что указывает на значительную роль внутренней конверсии из электронно-возбужденного синглетного состояния. В этом отношении результаты Паркера и Джойс отличаются от результатов Боуэрса и Портера [216], полученных в эфирных растворах методом импульсной абсорбционной спектроскопии. [c.296]

Большинство полимеров не очень устойчиво при повышенных температурах. Поэтому для предотвращения их деструкции измерения следует проводить в атмосфере инертного газа или в присутствии стабилизатора. Необходимо отметить, что проведение измерений светорассеяния при повышенных температурах в среде азота вызывает определенные трудности, такие, как загрязнение раствора частичками пыли и т. д. Присутствие стабилизаторов также осложняет проведенпе эксперимента, так как эти вещества часто окрашены. Окраска растворов мешает измерению светорассеяния, потому что избыточное поглощение или флуоресценция, если не введена соответствующая поправка, будут приводить к ошибочным результатам в определении мутности или молекулярного веса. [c.381]