Метод определения концевых групп

Другой метод определения концевых групп, предложенный Эдма-ном (1950), включает избирательное отщепление Ы-концевых амино- [c.690]

Химики-органики до настоящего времени не достигли существенных успехов в разработке методов селективного расщепления белков, однако имеющиеся данные о последовательности сцепления аминокислот и стандартизация методов определения концевых групп при расщеплении пептидных связей создают основу для исследования новых методов. Доступность инсулина с точно установленным количественным составом [223] и других белков в сравнительно чистом виде должна послужить стимулом для дальнейшего изучения проблемы селективного расщепления. [c.166]

Полипептидные цепи состоят из аминокислот, соединенных между собой пептидными связями, т. е. связями между а-ами-ногруппами и а-карбоксильными группами. Существуют открытые, циклические й разветвленные полипептидные цепи. Как правило, открытые полипептидные цепи имеют на од ном. конце свободную а-аминогруппу, а на другом свободную а-карбоксильную группу, которые могут быть обнаружены различными методами определения концевых групп [114, 277, 320]. В разветвленной полипептидной цепи одна из групп в зависимости от характера разветвления может отсутствовать. Большая часть белков представляет собой соединения с открытой цепью [265, 277]. [c.167]

Рассмотрение структуры амилозы показывает, что именно этого и следовало ожидать учет такого рода структур лежит в основе очень важного метода — метода определения концевых групп (рис. 34.3). [c.974]

Итак, мы рассмотрели пример применения метода определения концевых групп для установления длины цепи. Поскольку метилирование дает 0,5% тетра-О-метил-о-глюкозы, то на каждую концевую группу (со свободной ОН-группой при С-4) должно приходиться около 200 звеньев, чему соответствует молекулярный вес 30 ООО—40 ООО. Это согласуется с молекулярным весом амилозы, определенным ультрацентрифугированием. [c.975]

Наконец, остается выполнить самую трудную часть задачи — выяснить, в какой последовательности связаны между собой аминокислотные остатки, т. е. структурную формулу пептида. Для решения этого вопроса используют комбинацию двух методов определение концевых групп и частичный гидролиз. [c.1048]

Вместо этого цепь подвергают частичному гидролизу (кислотному или ферментативному) и образующиеся фрагменты — дипептиды, трипептиды и т. д. — идентифицируют при помощи метода определения концевых групп. Как только удастся идентифицировать достаточное число подобных небольших фрагментов, можно установить последовательность звеньев во всей цепи. [c.1050]

Аналогичные превращения протекают в реакциях свободных аминогрупп концевых аминокислот в пептидах и белках, например, с 2,4-динитрофторбензолом при гидролизе пептидных связей 8] образующиеся динитрофениловые кислоты можно идентифицировать. О методах определения концевых групп см. раздел 2.3.2.2. [c.239]

Первичная структура белков устанавливается методами химической деструкции, в основном методом ступенчатого гидролиза или ферментативной деструкции с помощью различных протеаз . Используя набор различных протеаз , селективно гидролизующих связи между конкретными аминокислотами, изменяя условия ферментативного и химического гидролиза (время, температуру и pH), можно получать различные осколки, на основании которых создается представление об исходной белковой молекуле. Очень важную роль в определении первичной структуры белков сыграли методы определения концевых групп. [c.508]

Восстановление пептидов и белков гидридами металлов как метод определения концевых групп уже обсуждалось [40, 190, 285]. Этот метод наталкивается на ограничения, связанные с ра/з-творимостью реагентов и с возможностью восстановления не только концевой сложноэфирной группы, но и пептидных карбонильных групп. [c.114]

Периодатный метод определения концевых групп не уступает по точности методу метилирования, будучи значительно проще по выполнению. [c.711]

Первичная структура белков устанавливается методами химической деструкции. Очень важную роль в определении первичной структуры белков сыграл метод определения концевых групп. Он состоит в обработке белка 2,4-динитрофторбензолом. Незащищенные аминогруппы на концах цепи дают 2,4-динитрофенильные производные, по которым после кислотного гидролиза белка легко установить, какие именно аминокислоты были концевыми [c.359]

Прежде чем подробно описывать методы определения концевых групп, необходимо рассмотреть общие аналитические проблемы, с решением которых приходится сталкиваться при использовании этих методов. Выше было показано, что для определения молекулярного веса методом концевых групп необходимо точно установить химическую природу полимера и его концевых групп. Знание строения полимера необходимо также и для разработки методов избирательного и точного определения концевых групп. [c.279]

Некоторые трудности и ограничения при исследованиях полимеров методами определения концевых групп ясны из предыдущего обсуждения. Низкая концентрация концевых групп даже в конденсационных полимерах сравнительно малого молекулярного веса требует применения микрохимических методов анализа. По этой же причине присутствие малых количеств примесей в растворителе или полимере может привести к ощутимым ошибкам при определении концевых групп необходимо заботиться о сведении таких ошибок к минимальной величине. Другим источником неточных результатов могут быть побочные реакции при полимеризации, в результате которых появляется некоторое количество нелинейных молекул или концевых групп, не являющихся функциональными это обусловливает неточность при расчете молекулярного веса. [c.282]

Исследовалась [1026] применимость метода титрования до точки помутнения для определения строения полистирола. Описан [1027] УФ-спектрофотометрический метод определения концевых групп в полистиролах с молекулярной массой до 10 . [c.247]

Один из химических методов определения молекулярного веса заключается в анализе концевых групп, причем сначала требуется узнать число и характер концевых групп (двух или одной для линейного полимера). Необходимо также, чтобы все макромолекулы полимера в испытуемом образце имели по возможности одинаковые концевые группы, что очень трудно осуществить. Если при полимеризации появились разветвленные макромолекулы, то метод определения концевых групп, естественно, непригоден. В макромолекулах, например, полиэфиров концевая группа —СООН может быть оттитрована. Чувствительность этого метода понижается по мере роста молекулярного веса область применения этого метода лежит в основном в пределах молекулярных весов от 15 до 25 тыс., что соответствует наиболее обычному молекулярному весу конденсационных поли- меров. [c.18]

По методу определения концевых групп всегда получают среднечисловые значения молекулярных весов. Величина среднечислового молекулярного веса чувствительна к изменению весовых долей фракций с низкими молекулярными весами и относительно нечувствительна к небольшим изменениям весовых долей высокомолекулярных фракций. [c.19]

Наиболее распространенными методами определения концевых групп являются определения карбоксильных групп, аминных групп, совместное определение аминных и карбоксильных групп, определение гидроксильных групп, альдегидных групп и др. [c.171]

Методы определения концевых групп полиамидов и полипептидов описаны различными авторами [257—267]. [c.271]

По количеству образовавшегося тетраметилового эфира гексозы (например, тетраметилглюкозы) можно устгновить число концевых сахарных остатков в цепи (метод определения концевых групп в полисахаридах). [c.446]

Метод определения концевых групп, осмотический, криоско нический и эбулиоскопичеокий методы и метод изотермической дистилляции (изопиестический) дают среднечисловые значения молекулярного веса Мп. [c.152]

Поскольку выбираемая методика в любом случае во многом зависит от индивидуальности полимера, здесь не приводится никаких общих методов. Однако в гл. 3, синтез 76, дается метод определения концевых групп —ОН и —СО2Н в полиэфирах с низким молекулярным весом. Этот метод также используется в синтезах некоторых типов полиэфирных смол, описанных в гл. 7. Там же описывается метод определения содержания эпоксидных концевых групп в ннзкомолекулярных эпоксидных смолах. [c.57]

В зависимости от используемого метода определения для одного и того же полимера можно получить различные значения среднего молекулярного веса. Обычно указывают среднечисленный и средневесовой молекулярный вес. Среднечисленный молекулярный вес находят химическим методом определения концевых групп, криоскопическпм, эбуллиоскопическим и осмометрическим методами, а также методом изотермической дистилляции. Величина его зависит от числа находящихся в растворе частиц. [c.74]

Время от времени предлагались различные методы определения концевых групп пептидов, основанные на использовании тонких химических реакций. Как правило, эти методы [106, 320] дают лишь низкие выходы или недостаточно разработаны, чтобы их с успехом можно было использовать для исследования природных полипептидов и белков, харак -теризующихся многообразием реакционноспособных боковых цепей. [c.239]

Необходимо указать, что другие методы определения среднечислового молекулярного веса менее чувствительны к низкомолекулярным примесям. Так, например, при применении химических методов (определение концевых групп) существенно лишь наличие таких низкомолекулярных примесей, оторые способны к взаимодействию с применяемым реактивом. [c.14]

Методы определения концевых групп полиамидов и полипептидов описаны различными авторами [1149, 1200—1208, 1928]. Интересный метод определения концевых аминогрупп в найлоне предложен Йосида с сотрудниками Г1202]. Авторы обрабатывают полимер динитрофторбензолом, образующим с конечными ННа-группами ярко-желтый продукт, количество которого определяется колориметрически. [c.162]

Уайтфилд [47] описал другой метод определения концевых групп в рибонуклеотидной цени. По методу Уайтфилда исследуемый препарат полинуклеотида обрабатывают фосфомоноэстера-ЗОЙ для удаления концевых фосфатных групп. После такой обработки концевое углеводное кольцо с его г ис-гидроксильными группами окисляется перйодатом до диальдегидного производного. Полученное в результате соединение в щелочной среде разрушается с образованием свободного основания и полинуклеотида, содержащего на один нуклеотид меньше, чем исходный полинуклеотид (фиг. 17). Этот процесс может быть повторен для удаления нового концевого нуклеотида, и так далее. [c.51]

Такую же структуру предложил Туппи [403, 404], основываясь на данных Дю-Виньо и сотрудников, а также на собственных данных, полученных с использованием метода определения концевых групп в виде динитрофенильных производных по Сангеру (стр. 35). [c.73]

Другой метод определения концевых групп, предложенный Эдма-ном (1950), включает избирательное отщепление N -концевых аминокислотных остатков. При реакции белка с фенилизотиоцианатом образуется соответствующее фенилтиокарбамильное производное I, которое расщепляется хлористым водородом до фенилтиогидантоина II и модифицированного белка. Наконец, щелочной гидролиз фенилтиогидантои-на приводит к выделению свободной концевой аминокислоты ПГ. [c.675]

Работами Коршака и сотрудников было показано, что между числом концевых амино- и карбоксильных групп и молекулярным весом полимера существует простая зависимость. В этих же работах были приведены методы определения концевых групп в полиамидах и принципы расчета молекулярного веса. В последнее время появились более точные методы определения молекулярного веса по концевым группам . Эти методы основаны на связывании соляной кислоты или динитрофторбензола концевой аминогруппой и на последующем потенциометрическом титровании в некоторых работах использовано хроматографическое титро-вание . Большое внимание было уделено также механизму связывания кислот п оснований концевыми группами полиамидов. Эти работы имеют прямое отношенне к теории крашения полиамидных волокон и позволяют улучшить условия крашения на практике. Еще Элёд и сотрудники показали, что концевые группы полиамидных волокон связывают кислоты и основания, при этом образуются соли. При увеличении концентрации кислот [c.428]

Полезное усовершенствование методов определения концевых групп заключается, по-видимому, в метилировании концевой моно-этерифицированной фосфатной группы в олигонуклеотидах под действием дициклогексилкарбодиимида и метанола. Последующий гидролиз при использовании соответствующих гидролитических методов дает метиловый эфир концевого нуклеотида или концевого олигонуклеотида. Чувствительность, вероятно, можно было бы значительно увеличить применением С -метанола [385]. Этот метод пока не удалось применить к полирибонуклеотидам (или к дезоксинуклеиновым кислотам). Концевую фосфатную группу в олигодезоксинуклеотидах удобнее пометить при помощи обработки олигомера этилхлорформиатом и три-й-бутиламином в водном растворе. В таких мягких условиях реакция, по-видимому, ограничивается тем, что образуются ангидриды с участием лишь концевых фосфатных групп. Последующая обработка диэстеразой дает мононуклеотиды и концевой ангидрид — нуклеотидэтилкарбонат. Можно также использовать неочищенный змеиный яд, поскольку концевой ангидрид устойчив к гидролизу, тогда как мононуклеотиды распадаются далее до нуклеозидов [18]. Предварительное исследование показало, что этот метод также применим к полирибонуклеотидам, содержащим концевую 5 -фосфатную группу. [c.426]

Гидразинолиз как метод определения концевых групп имеет такой серьезный недостаток, как низкие выходы аминокислот и полная потеря цистеина, цистина, аспарагина и глутамина, если эти аминокислоты занимают С-концевое положение [22]. Метионин превращается в метионинсульфоксид, часть аргинина — в орнитин, а аспарагиновая и глутаминовая кислоты частично разрушаются. В табл. 28 приведены выходы аминокислот в виде ДНФ-производных после 10-часового гидразинолиза (по данным Нью и Френ- [c.192]

Определение концевых групп. Методы определения концевых групп в полиметилметакрилате, полученном полимеризацией, инициированной персульфатом, описаны в работах - [1666, 1668]. Сульфаты и другие анионные сульфоксидные концевые группы определяли путем обработки хлороформного раствора образца водным раствором метиленового синего. Интенсивность окраски оценивали спектрофотометрически при 660 нм. Количество анионных сульфоксидных концевых групп рассчитывали, сравнивая экспериментально полученные значения оптической плотности с градуировочной кривой, построенной с использованием чистого лаурилсульфата натрия [1667]. [c.338]

Проведено [564] количественное определение концевых групп в сополимере акрилонитрила с метилакрилатом (90 10), полученном полимеризацией в присутствии окислительно-восстановительной системы КаСЮз—МагЗОз в водном растворе. Для определения ЗОзН-групп применяли методы кондуктометрического титрования и окращивания, для определения концевых групп 5 — рентгенофлуоресцентный анализ, а для определения концевых групп С1 — полярографию. Среднечисловую молекулярную массу измеряли методом осмометрии. Определение концевых групп проводили как в нефракционированном, так и во фракционированном полимере. В нефракционированном полимере в среднем каждая молекула содержит 0,95 концевых групп 5 и 0,71 50зН-групп, в то время как для фракционированного полимера эти величины составляют соответственно 0,68 и 0,69. В обоих случаях было также найдено небольшое количество хлора. Различные методы определения концевых групп более подробно описаны ниже. [c.540]

Уитфелд разработал принципиально новый метод определения концевых групп. Он первоначально обрабатывал полинуклеотид фосфомоноэстеразов, в результате чего удалялась концевая фосфатная группа. Образовавшееся на конце кольцо углеводного компонента с двумя чис-гидроксильными группами окислялось затем перйодатом и превращалось в диальдегидное производное, которое в щелочной среде легко отщеплялось с образованием свободного азотистого компонента и полинуклеотида, длина [c.78]

В заключение отметим, что в этом сборнике приведены различные химические и ферментативные методы определения концевых групп и, следовательно, молекулярного веса РНК. Эти методы основаны на введении радиоактивной метки в один из концов цепи РНК, что позволяет легко отличить интактпые цепи РНК от агрегированных, а линейные формы от кольцевых. [c.265]

Конкретные методы определения концевых групп зависят от химических свойств индивидуальной группы. Следует различать прямые методы анализа концевых групп и косвенные, когда концевые группы предварительно переводят в форму, более удобную для анализа. К первым относится большинство методов анализа полиэфиров и полиамидов. В своих первых работах по полиэфирам Карозерс и другие авторы применяли титрование кислотных концевых групп [18, 19, 45]. Так, полиэфиры, полученные из 3-оксндекановой кислоты, титровали в спиртово-хлороформных растворах стандартным спиртовым раствором едкого кали. Карозерс и Ван-Натта [19] получали надежные результаты вплоть до молекулярных весов порядка 25 ООО. Этот метод оказался очень полезным для исследования кинетики полиэтерификации, как было показано Флори [24, 25], а также для установления зависимости между молекулярным весом и вязкостью. Такое исследование полиэфиров и-оксиундекановой кислоты провели Бейкер, Фуллер и Хейес [3], [c.369]

Позже Нуссенбаум и Хассид [48] описали колориметрический метод, в котором восстанавливающая концевая группа окисляется ионом феррицианида Fe( N)g". Полученный таким образом ферроцианид Fe( N)g обрабатывают сульфатом железа(1И) с образованием берлинской лазури, которую используют для колориметрического определения. Чувствительным методом определения концевых групп полисахаридов является превращение альдегидной группы в циангидрин. Исбеллу [38], применившему меченную H N, удалось получить очень хорошие результаты. Этот метод описан более подробно в главе IV Радиохимический анализ . [c.371]

Концевые МНг - и СООН-группы полиамидов определяют титрованием кислотами и щелочами [9, 73, 74, 220—238]. Исследуемый полиамид можно брать в виде тонко измельченного порошка [220]. Значительно проще проводигь титрование в растворе. В качестве растворителей применяют крезол [222, 223], смесь ж-крезола и хлороформа [234—236], смесь фенил-этилового спирта, фенола и воды [224], смесь фенола с водой [221], смесь фенола с гликолем [225]. Для сополимеров применяют метиловый спирт [222, 226, 235], смесь метилового спирта с хлороформом [235, 236], бензиловый снирт [226]. Для титрования применяют крезольный раствор п.-толуолсупьфокиелоты [222], уксусную кислоту [227], раствор хлорной кислоты в смеси гликоля с изопропиловым спиртом [225]. Конец титрования определяют при помощи индикаторов фенолфталеина [226, 235, 239], фенолфталеина тнмолблау [224, 239, крезолрот [234, 235, 240], либо потенциометрическим [73, 74, 221, 226, 228, 229, 238, 241 ], либо кондукто-метрическим способом [73, 221, 222, 225, 229]. При титровании карбоксильных групп добавляют небольшое количество формальдегида для блокирования аминогрупп [238, 241]. Описаны и другие методы определения концевых групп [242—245]. [c.270]

Все эти реакции дают, очевидно, ряд полимеров с различной длиной цепи, средний молекулярный вес которых обычно устанавливают методом концевых групп (т. е. методом Ван-Сляйка определения а-аминного азота или методом ДНФ-производных). Полученные значения, повидимому, не вполне точны содержание а-аминного азота, как правило, столь мало, что оно (по крайней мере, в случае метода Ван-Сляйка) не превышает вероятной ошибки опыта. Кроме того, не следует пренебрегать возможньТм присутствием в реакционной среде циклопептидов, а эти соединения не обладают а-аминогруппами. Полученные в результате таких расчетов величины можно применять лишь с оговорками иногда они совпадают с величинами, установленными с помощью физических методов, но иногда очень сильно от -них отличаются [4956]. Эти расхождения могут зависеть не только от ограничений методов определения концевых групп, но также и обусловливаться явлениями агрегации при физических измерениях. [c.190]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология