Лизин, количественное определени

Быстрое количественное определение аргинина, гистидина и лизина хроматографией на бумаге, пропитанной ионообменными смолами [1026]. [c.247]

В настоящее время хорошо изучены реакции декарбоксилирования бактериями аспарагиновой, глютаминовой кислоты, тирозина, лизина, чис-тидина, аргинина и орнитина. Эти реакции нашли практическое применение для количественного определения соответствующих аминокислот. [c.335]

Подлежащий исследованию гидролизат обрабатывается фосфорновольфрамовой кислотой, которая осаждает количественно аминокислоты аргинин, гистидин, лизин и небольшое количество цистина. Все остальные аминокислоты, в том числе и те, которые могут служить помехой при количественном определении гистидина с помощью реакции диазотирования, остаются в растворе. Осадок тщательно промывается, гистидин и сопровождающие его аминокислоты переводятся в раствор, в котором гистидин определяется количественно с помощью колориметрического метода, основанного на реакции Паули. [c.46]

Этот метод с последующим качественным и количественным определением аминокислот особенно ценен при промышленном получении индивидуальных аминокислот лизина, гистидина и аргинина, так как дает возможность быстро контролировать надежность их разделения и отсутствие в каждой из индивидуальных аминокислот примесей других аминокислот. [c.254]

Нами разработана методика количественного определения аргинина, лизина и гистидина в основной фракции белкового гидролизата и аргинина в полном белковом гидролизате при помощи электрофореза на бумаге. Воспроизводимость определений 5%. [c.256]

Для количественного определения аргинина и лизина можно использовать окись алюминия (Виланд, 1942). [c.122]

Группа основных аминокислот (гистидин, лизин, аргинин), кислых аминокислот (глютаминовая и аспарагиновая кислоты), а также фенилаланин могут быть определены путем де-карбоксилирования специфическими энзима-м и (обычно бактериальными) с последующим количественным определением образующегося углекислого газа. [c.42]

Получение медных комплексов используется для экранирования а-аминогрупп при проведении некоторых реакций (например, при ацетилировании е-аминогруппы лизина), при количественном определении аминокислот полярографическим и радиометрическим методами и для других целей. [c.60]

Нежвачные животные имеют менее сложный пищеварительный тракт, чем жвачные, более требовательны к количественному содержанию белков в корме и их качественному составу, т. е. наличию определенных аминокислот. Интерес к синтетическому метионину повсеместно признан. Желательно также использование других очищенных аминокислот. Уже говорилось о дополнении зерна пшеницы лизином. Можно предусматривать, когда это возможно, добавление к белковым кормовым культурам или кукурузе триптофана промышленного изготовления. [c.28]

В настоящее время широко распространен достаточно точный нингидриновый метод определения аминокислот при помощи хроматографического разделения на бумаге. Однако разделение некоторых аминокислот обычной хроматографией на бумаге требует большой затраты времени например, для разделения основных аминокислот, необходимо минимум 4— 5 суток. Применение электрофоретического разделения позволило сократить время разделения лизина, аргинина и гистидина до 3 часов и за счет этого сократить общее время, необходимое для количественного анализа этих аминокислот, с 5—б дней до 6—7 часов. [c.254]

Разработаны хроматографические количественные методы определения лейцина, валина, пролина, аланина, лизина в белковых материалах с применением нерасслаивающейся системы растворителя (н-бутиловый спирт -вода—уксусная кислота в отношен 1и 3 2 1). [c.103]

В качестве свидетелей используют свободный ДНФ, а также мо-но- и ди-ДНФ-производные лизина. Эти соединения окрашены в желтый цвет и определение их локализации на хроматограмме не требует специальной обработки. Для обнаружения свободного лизина хроматограммы обрабатывают нингидрином (с. 129). В указанных условиях хроматографирования свободный лизин располагается вблизи линии старта, далее в порядке удаления от нее следуют моно-ДНФ-про-изводное лизина (е-ЫНг-ДНФ-лизин), имеющее после обработки нингидрином буро-коричневое окрашивание, свободный ДНФ и ди-ДНФ-производное лизина. Для количественного определения моно- и ди-ДНФ-производных лизина соответствующие участки хроматограммы вырезают, элюируют 1%-ным раствором ЫаНСОз и измеряют оптическую плотность элюатов при 360 нм. [c.148]

История вопроса. Применение электрофореза для отделения диаминокислот от других компонентов белкового гидролизата было опубликовано еще в 1912 г. (японский патент). Однако использование этого метода как предварительного при количественном определении аргинина, гистидина и лизина было, повидимому, введено только Куном и Дэнюэлем [393] в 1937 г. [c.42]

Образование и распространение бактериальных декарбоксилаз лизина, орнитина, тирозина, гистидина, аргинина и глутаминовой кислоты изучены довольно подробно исследована также кинетика реакций, катализируемых декарбоксилазами, и описана частичная очистка некоторых из- них. Эти исследования позволили использовать аминокислотные декарбоксилазы для целей количественного определения аминокислот. Такие определения основаны на измерении количества углекислоты, выделяющейся при действии специфической декарбоксилазы [197], или количества образующегося амина [228]. Поскольку аминокислотные декарбоксилазы обладают строгой стереоспецифичностью, они применяются также для обнаружения примеси следов L-изомеров в препаратах D-аминокислот. Кроме того, эти ферменты применяют и для получения D-аминокислот (например, D-лизина или D-глутаминовой кислоты) путем избирательного разрушения L-изомера в рацемических препаратах аминокислот (стр. 94, 95). [c.206]

Наряду с соответствующими производными ряда простых аминокислот получены также -( -метоксифенилазо)-бензил-оксикарбонильные производные ь-аргинина (ацилирование в смеси едкого натра с бикарбонатом натрия), р-метилового эфира ь-аспарагиновой кислоты, у-метилового эфира ь-глутамино-вой кислоты и Ы -бензил-г-гистидина [2037]. Ы -Защищенный лизин синтезирован через медный комплекс, а соответствующий метиловый эфир получен с помощью Ы-карбоксиангидрида, приготовленного из Ы -защищенного лизина и фосгена [2033]. Благодаря окраске, присущей такого рода Ы-защищенным аминокислотам и пептидам, оказывается возможным их непосредственное обнаружение и количественное определение при [c.63]

Другим новым методом количественного определения аминокислот является микробиологический метод. Для этой цели используются различные культуры молочнокислых бактерий, культура Ьеисопоз1ос тезеп1его1йе8 и некоторые штаммы Иеигозрога. Интенсивность роста культуры определяется по мутности бактериальной суспензии, по количеству образующейся молочной кислоты или путем взвешивания мицелия [64—66]. Одну из модификаций микробиологического метода представляет метод определения аминокислот по количеству углекислоты, образующейся в результате ферментативного декарбоксилирования аминокислот бактериальными препаратами. Таким путем можно определить тирозин, гистидин, лизин и глутаминовую кислоту [67]. Для количественного определения какой-нибудь аминокислоты микробы высеваются на синтетическую среду, содержащую все необходимые аминокислоты и факторы роста, за исключением исследуемой аминокислоты. [c.34]

Применение динитрофенильных производных, введенных в практику Зангером [25] с целью идентификации и количественного определения концевых аминогрупп, позволяет получить ценные сведения о количестве открытых цепей в белке. Кроме того, такие меченые аминокислоты служат в качестве реперных точек при исследовании неполного гидролиза (1346). В этом отношении полезными являются также е -аминогруппы лизина. Путем неполного гидролиза, осуществляемого с помощью кислоты и различных типов ферментов, оказалось возможным разрывать длинные полипептидные цепи в различных точках и путем анализа установить единственно возможную конфигурацию. Этим способом Зангер и Таппи[99]и Зангер и Томпсон [100] определили порядок чередования аминокислот в двух типах цепей, входящих в состав инсулина (табл. 27). Такой подход к проблеме структуры белка был облегчен широким применением новейших микрометодов хроматографии на бумаге и силикагеле и ионофореза. Таким образом, оказывается, что одна из крупнейших проблем химии белка поддается изучению с помощью весьма простых и экономичных методов. Цепи в инсулине имеют различную длину, причем цепь с N-концевым фенилаланином (цепь В) состоит из 30 остатков, а соответствующая глициновая цепь (цепь А) — из 21 остатка. Порядок чередования аминокислот и их содержание даны в табл. 27. Можно отметить следующее. Цепь А не содержит лизина, гистидина, аргинина, треонина, фенилаланина и пролина все эти компоненты входят в состав цепи В, в которой, в свою очередь, совсем нет изолейцина. Не наблюдается ни регулярного чередования аминокислот, ни тенденции к чередованию полярных и неполярных групп. Три ароматические аминокислоты (фен.фен.тир.) расположены последовательно, и два остатка глутаминовой кислоты связаны с двумя остатками ци-стеина (глу.глу.цис.цис.). В обеих цепях содержится шесть цистеиновых остатков, четыре из которых расположены врозь, а только что упомянутые два — рядом друг с другом в молекуле нативного белка все они существуют в форме цистина, но какие из них расположены между пептидными цепями, а какие в самих пептидных цепях — неизвестно. Часть дикарбоновых кислот присутствует в виде амидов — четыре в цепи А и две в цепи В. [c.255]

Для микроопределения триптофана в белках и бактериях предложена модификация колориметрического метода Сюлливана и Гесса [397]. Образование соединения с желто-зеленой флуоресценцией при действии на триптофан непосредственно в белках хлорной кислоты в присутствии бихромата при комнатной температуре является, повидимому, специфической реакцией [401]. Описано применение этой пробы в более ранней модификации для количественного определения триптофана в негидролизованных белках, дающее результаты с точностью до 5% [350 а]. Определение лизина по окраске, образуемой фенольным реагентом после бромирования, хотя и не специфично, однако было использовано с соответствующей поправкой на гистидин при исследовании основной фракции, выделенной на пермутите [360]. [c.162]

Разработана методика, где метод изотошюго разбавления используется в сочетании с деградацией по Эдману [15], Со-1 ласно одному из вариантов этого метода, проводят одну сталию деградации но Эдману, в ходе которой блокируются е-аминогруппы остатков лизина, а затем конденсируют второй Ы-кои-невой остаток с реагентом, содержащим радиоактивную метку [94]. В этом случае нет необходимости экстрагировать производное Ы-концевой аминокислоты. Для количественного определения белка в образце используют аминокислотный анализ, а в аликвотных пробах гидролизата определяют радиоактивность. Для определения удельной радиоактивности [ С]ФИТЦ образец очищенного пептида модифицируют аналогичным образом. [c.35]

Определение качественного и количественного аминокислотного состава белков и пептидов проводят после их гидролиза кислотой или щелочью. Оба вида гидролиза разрушают некоторые аминокислоты. При щелочном гидролизе частично разрушаются цистеин, серии, треонин и происходит частичная рацемизация некоторых аминокислот. При гидролизе соляной кислотой (5,7 н., 105—110° С), которая обычно используется при кислотном гидролизе пептидных связей, практически полностью разрушается триптофан. В связи с этим содержание триптофана в пробах обычно определяют после щелочного гидролиза или спектрофотометрическим методом Кроме того, наблюдаются значительные потери оксиаминокислот (серина, треонина, тирозина), се-русодержащих аминокислот (цистеина, метионина) и частично пролива. При этом степень разрушения аминокислот зависит от чистоты и концентрации НС1, используемой для гидролиза, а также длительности и температуры гидролиза. Следует отметить, что примеси альдегидов при кислотном гидролизе приводят к значительной потере тирозина, а также цистеина, гистидина, глутаминовой кислоты и лизина, а примеси углеводов в больших концентрациях — к разрушению аргинина. [c.123]

Задача 37.15. Реакция первичных алифатических аминов с азотистой кислотой приводит к количественному выделению азота в виде газа, что является основой метода определения аминного азота по Ван-Слайку. Какой объем азота (при нормальных условиях) выделится при обработке 0,001 моля следующих аминокислот а) лейцина б) лизина в) проли-на [c.1045]

Все а-аминокислоты и образованные из них пептиды в большинстве случаев реагируют при комнатной температуре с азотистой кислотой количественно в течение 5 мин Вторая аминогруппа лизина (е-поло-жение) реагирует в течение 30 мин. Азот, входящий в состав пирро-лидинового, индолового и имидазолового колец, не реагирует, поэтому в результате анализа определяется только половина всего количества азота триптофана, треть количества азота гистидина и четверть количества азота аргинина. Пролин и оксипролин совсем не отщепляют азота. Гуанидиновая группировка H2N— ( = NH)—НН—, содержащаяся в гуанидине, креатине и аргинине, не реагирует с азотистой кислотой. При определении метиламина и аммиака приходится встряхивать в течеиие %—2 ч реакция с мочевиной заканчивается только через 8 ч амино- [c.711]

Метод осаждения фосфорновольфрамовой кислотой [139], применявшийся для количественного разделения таких оснований, в настоящее время вытеснен ионофорезом и ионообменной хроматографией. Большой популярностью пользуются также методы разделения оснований в виде пикратов, пикролонатов и флавианатов. Они образуют очень хорошие кристаллы [140, 141], и их состав обычно является вполне определенным. Однако применение этих солей для систематического фракционирования оснований до некоторой степени осложняется явлениями соосаж-дения (флавианаты лизина, шстидина и аргинина пикраты лизина и оксилизина) [27]. [c.118]

Реакция дезаминирования азотистой кислотой лежит в основе общеизвестного метода определения аминогрупп по Ван-Сляйку он описан выше. Если соответствующим образом учитывать ограничения этого стандартного метода и тщательно контролировать условия реакции, то он окажется наиболее удобным способом определения количества свободных аминогрупп в белках. Легче всего реагируют концевые, а-аминогруппы, несколько медленнее—е. -аминогруппы и уже весьма постепенно выделяют азот гуанидинные группы. Тот факт, что количество свободных аминогрупп, определенных по методу Ван-Сляйка, превосходит содержание лизина, рассчитанное на основании аналитических данных, является первым доказательством наличия М-концевых групп в белках. Реакция с азотистой кислотой протекает быстро и количественно она нашла широкое применение для определения степени замещения аминогрупп в модифицированных белках. В последнее время предпочтение стали отдавать нингидринному методу. [c.313]

Для количественной оценки сорбционных равновесий в системе иониообменный сорбент — раствор лизина необходимо проводить последовательное определение констант межфазного распределения отдельных форм вещества. Константа ионного обмена двухвалентный катион лизина — ион водорода, определенная в таких условиях, когда весь сорбированный ионитом лизин находится в форме двухвалентного катиона, используется для расчета концентраций двухвалентного катиона лизина в условиях, когда в ионите сосуществуют две формы вещества. По экспериментальным данным рассчитывается константа ионного обмена для второй формы соединения и константа диссоциации в фазе ионита. [c.306]

Кишечная флора играет известную пололштельную роль для организма. При описании переваривания клетчатки (стр. 263) мы указывали на важную роль кишечной флоры, особенно для жвачных животных. Расщепление клетчатки сопровождается образованием в кишечнике уксусной, молочной, янтарной и других кислот, которые всасываются кишечником в кровь и используются в тканях организма. Наряду с этим, под влиянием микробов в кишечнике образуются газы — метан, водород, углекислый газ, а из серусодержащих аминокислот — сероводород. Под влиянием определенных бактерий в толстых кишках расщепляются тирозин, триптофан, цистеин, аргинин, лизин, гистидин с образованием протеиногенных аминов и других веществ. Следует подчеркнуть, что с количественной стороны бактериальное расщепление аминокислот в толстых кишках сравнительно незначительно и охватывает лишь ничтожную долю аминокислот, появляющихся в кишечнике при переваривании белков, так как аминокислоты по мере своего образования всасываются. Учитывая, однако, высокую ядовитость некоторых продуктов гниения аминокислот в толстых кишках, приходится считаться с возможностью отрицательного влияния на организм кишечной флоры, особенно в тех случаях, когда имеют место сдвиги в ее качественном и количественном составе. [c.361]

Определение L-аминокислот (L-лизин, L-аргинин, L-орнитин, L-тирозин и др.) можно проводить с помощью специфических декарбоксилаз аминокислот. Ферменты синтезируются некоторыми бактериями (например, С/, wel hii. l. septi a) и эффективны при низком значении pH. Образовавшаяся при реакции углекислота может быть измерена количественно. [c.376]

Рнс. 4.9. Реакция аминокислоты с 1-фтор-2,4-динитробензолом (реагентом Сенгера). Реагент назван в честь нобелевского лауреата (1958 г.) биохимика Фредерика Сенгера, который использовал его для определения первичной структуры инсулина. Вначале арилируют (с количественным выходом) всех свободные аминогруппы, после гидролиза пептида образуются 2,4-динитрофенил-производные аминокислот, обладающие яркой желтой окраской. Количественный анализ этих производных осуществляют спектрофотометрическими методами. С динитрофторбензолом реагируют также Е-аминогруппа лизина, имидазольная группа гистидина, ОН-группа тирозина и 8Н-группа цистеина. Динитрофе-нильные группы не отщепляются при кислотном гидролизе и используются для идентификации N-кoнцeвыx аминокислот в полипептидах. [c.38]