ДНС-аминокислоты, идентификация бумаге

Метод бумажной хроматографии (БХ) был открыт в 1943 г. как метод разделения и идентификации аминокислот при их малых количествах. В БХ в качестве неподвижной фазы используют фильтровальную или хроматографическую бумагу. [c.352]

РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ НА БУМАГЕ ИДЕНТИФИКАЦИЯ АМИНОКИСЛОТ [c.36]

Идентификация ДНС-аминокислот с помощью электрофореза на бумаге [c.150]

Нейтральные аминокислоты не разделяются ни в одном из этих буферных растворов, но их фракционирование можно осуществить при последующем электрофорезе в других условиях, а также с помощью хроматографии. Перенос фракции нейтральных аминокислот в другую систему очень удобно сделать путем пришивания (фиг. 19). Для полной идентификации аминокислот гидролизаты наносят на сухую фильтровальную бумагу. Чем меньше площадь, которую занимает нанесенный образец на бумаге, тем лучше будет [c.101]

Для идентификации аминокислот очень удобны тонкослойная хроматография и хроматография на бумаге (см. литературу в гл. 10 и описание техники в гл. 7). [c.281]

Вопросу анализа аминокислот методом хроматографии на бумаге посвящено большое число работ советских и иностранных авторов. Однако почти все они связаны с разделением аминокислот белков и других биологических препаратов [61. Наша попытка применить их для анализа мелассы не дала положительных результатов, что можно объяснить мешающим действием остальных компонентов мелассы, ио отношению к которым содержание отдельных аминокислот составляет лишь 0,1—3 вес. %. Описанный в литературе метод 17, 81, состоящий в сорбции аминокислот на катионите с последующей их элюцией и идентификацией на бумаге неудобен, так как требует сложной специальной аппаратуры и чрезмерно длителен. Первой частью нашего исследования было хроматографическое разделение искусственной смеси из десяти аминокислот, приблизительно имитирующей аминокислотный состав мелассы [1, 81. Смесь включала лизин, аргинин, серии, глицин, аспарагиновую и глютаминовую кислоты, а-аланин, валин, метионин и лейцин. Растворы аминокислот готовили в 15%-ном этиловом спирте с концентрацией 0,5—1 у аминокислоты в 1 мкл. [c.212]

Под действием электрического тока они мигрируют к аноду или к катоду в зависимости от pH среды. Если этот процесс проводят на хроматографической бумаге или в гелях, то он называется электрофорезом. Этот метод часто применяют для идентификации и разделения аминокислот. [c.491]

Адсорбционная тонкослойная хроматография применима практически для всех органических соединений. Хроматография на бумаге широко используется для идентификации и разделения многих классов полярных природных соединений и в первую очередь аминокислот и углеводов. Пример хроматографического разделения аминокислот приведен в задании 20.2. [c.488]

Анализируемую смесь веществ сначала пытаются разделить физическими методами. Разделение возможно, например, на основе различной растворимости веществ, входящих в состав смеси. При заметном различии в растворимости компонентов смесь можно разделить обычной или дробной кристаллизацией. Если вещества мало различаются по своей растворимости, то для разделения смеси можно использовать методы экстракции и адсорбции (а также и комбинацию этих методов). Для аналитических целей применяют адсорбционную, газовую хроматографию и хроматографию на бумаге. Последняя особенно удобна для разделения и идентификации сахаров и аминокислот. [c.587]

Свободные аминокислоты определялись при помощи бумажной хроматографии (К. В. Чмутов, 1962 К. П. Магницкий и др., 1959), которая основана на различном распределении (передвижении) по фильтровальной бумаге аминокислот, обладающих разной растворимостью. Идентификация аминокислот проводилась по методу пятна на чистой хроматограмме и по расстоянию, пройденному пятном от места нанесения растворителя [c.13]

В пятидесятых годах, в период бурного развития БХ, был опубликован ряд статей с описанием методик и систем растворителей, предназначенных для разделения белковых гидролизатов или аминокислот, полученных из различных физиологических жидкостей (см. [51, 77]). Эти системы использовались для разделения сложных смесей аминокислот и пептидов и смесей аминокислот, с трудом поддающихся идентификации, например лейцин, изолейцин. С появлением автоматических аминокислотных анализаторов [120], а также новых ионообменников (см. гл. 5) БХ все реже и реже используют для анализа аминокислот и пептидов. В настоящее время в лабораториях, ведущих исследование белков, методом БХ проводят главным образом окончательную очистку простых смесей пептидов, полученных с помощью других методов разделения, кроме того, БХ служит одним из критериев однородности вещества (часто в сочетании с электрофорезом на бумаге), и только в считанных случаях ее применяют для идентификации отдельных аминокислот. [c.121]

Важнейшая характеристика всех белков — качественный и количественный аминокислотный состав их гидролизатов, который оценивается теперь преимущественно методами хроматографии и электрофореза. Эти методы разделения и идентификации суммы аминокислот достаточно многообразны и в ряде случаев отличаются высокой эффективностью. Ниже приводится один из упрощенных вариантов анализа гидролизата белка гороха при помощи хроматографии в тонком слое сорбента и электрофореза на бумаге. [c.245]

В большинстве случаев коэффициент распределения не зависит т концентрации, и потому распределительная изотерма представляет собой прямую линию (рис. 38, а). В этом случае транспортный фактор не будет зависеть от концентрации растворенного веш,ества и наблюденную величину его можно даже использовать для идентификации компонентов смеси. Пользуясь именно этим методом, определяют аминокислоты нрп помош,и распределительной хроматографии на бумаге. [c.155]

Распределительная хроматография в начале своего развития довольно щироко применялась в анализе органических веществ, как очень тонкий и эффективный метод. Было произведено разделение близких по свойствам органических кислот, дубильных веществ, аминокислот, пенициллинов и т. д. Подтверждением универсальности метода распределительной хроматографии является полная пригодность и исключительная эффективность этого метода при разделении неорганических веществ с очень близкими химическими свойствами. Например, для разделения редкоземельных элементов, которые имеют незначительные различия в свойствах, требуется провести не мене 40 ООО операций (для выделения их в чистом виде). До появления многоступенчатого метода анализа лишь несколько редкоземельных элементов были получены в чистом виде с содержанием 95%- В настоящее время разработаны надежные методы идентификации редкоземельных элементов хроматографией на бумаге и получение их в чистом виде на колонках. [c.105]

Распределительная хроматография. Принцип распределительной хроматографии впервые описан Мартином и Синджем в их работе по аминокислотам. В этом случае, вместо равновесия между твердой и жидкой фазами, устанавливающегося при работе по методу Цветта, равновесие устанавливается между двумя жидкими фазами, причем одна из жидкостей поддерживается в состоянии геля или находится на подходящем субстрате. Сначала был применен силикагель, способный адсорбировать до 70% воды и сохраняющий при этом вид сухого порошка. При пропускании раствора исследуемой смеси в несмешивающемся с водой растворителе (например, в хлороформе) через колонку из силикагеля происходит разделение компонент смеси, обусловленное различиями их коэффициентов распределения. Впоследствии в качестве стационарной фазы стали применять листы фильтровальной бумаги, насыщенной водой. Наиболее подходящими органическими растворителями оказались фенол, н-бутиловый спирт, коллидин и некоторые другие растворители, частично смешивающиеся с водой. Индивидуальные аминокислоты были идентифицированы по цветным реакциям и охарактеризованы величинами Rf, представляющими собой отношения скорости движения зоны адсорбции к скорости движения фронта растворителя. Можно также измерять и использовать для идентификации отношение расстояния, на которое переместилось данное вещество, к расстоянию, на которое перемещается эталонное вещество (например [c.1512]

Хроматография на бумаге. —Этот метод, введенный Мартином и Синджем2 в 1944 г., используемый теперь во всех областях химии, применим, а частности, для идентификации компонентов смеси аминокислот с дн- и трипептидами, получаемой при частичном гидролизе белков и полипептидов. Компоненты гидролизата распределяются между водой, адсорбированной на целлюлозе и являющейся неподзижной фазой, и органическим растворителем, подвижной фазой (например, водный этиловый спирт, бутиловый спирт, фенол), которая дви кется вдоль листа вверх или вниз, — восходящий или ни- [c.650]

Капли водного илн спиртового раствора каждого из четырех перечисленных выше аминов наносят отдельно на полоску бумаги н производят хроматографирование, как описано выше. Для идентификации аминов рекомендуется тот же растворитель, что и для аминокислот н-бутиловый спирт—вода— уксусная кислота (4 5 1). Для определения положения пятен аминов на хроматограмме производят опрыскивание 0,1%-ным раствором иингидрина в метиловом спирте, как описано при определении аминокислот. [c.155]

Для идентификации ДНС-аминокислот используют методы высоко- и средневольтного электрофореза на бумаге, тонкослойной хро- [c.149]

Ряд количественных определений разделяемых веществ (аминокислот, сахаров, пуринов, красителей и т. д.) основан на элюировании пятна соответствующего вещества с бумаги с последующим анализом элюата колориметрически, спектрофотометрически и т. д. Иногда элюированное вещество подвергается ряду последующих операций для идентификации или установления его структуры. [c.476]

Большие трудности представила идентификация этого так называемого нингидрин-реагирующего вещества, отделяемого хроматографией на бумаге от других продуктов кислотного гидролиза витамина В а- Этот алифатический осколок не являлся аминокислотой, и его нельзя было отделить от искусственной смеси с 2-а.минопропанолом-1. Однако хроматографией на бумаге его нельзя было отделить и от 1-аминопропанола-2 [88]. Так как 2-аминопропанол-1 при окислении дает а-аланин, а нингидрин-реагирую-щее вещество аланина ке дает, то вопрос об их идентичности отпал. [c.585]

Тонкослойная хроматография успешно применяется для идентификации ДНФ-аминокислот. По сравнению с хроматографией на бумаге этот метод более чувствителен и требует меньших затрат времени. Чаще всего смеси разделяют в силикагеле в следующих системах растворителей [2] а) толуол — пиридин — этиленхлор-гидрин—аммиак (0,8 М) (100 30 60 60) эта система гетероген-на, верхняя фаза используется для хроматографии, нижняя — для уравновешивания адсорбента б) хлороформ—бензиловый спирт— уксусная кислота (70 30 3) в) бензол — пиридин — уксусная кислота (80 20 2) г) хлороформ—метанол—уксусная кислота (95 5 1). Для идентификации достаточно примерно 0,2—0,5 мкг ДНФ-аминокислоты. Распределение ДНФ-аминокислот при двумерной хроматографии в различных системах растворителей показано на фиг. 61. [c.270]

При данных условиях каждое соединение имеет свою собственную скорость движения. Этой характеристикой часто пользуются для идентификации таких соединений, как аминокислоты (гл. 24), жирные кислоты (гл. 25), стероиды (гл. 25) и углеводы (гл. 23). В ряде случаев результаты лучше, если бумагу нредварительно до начала хроматографирования покрыть слоем неподвижной фазы. Ограв иченность этого метода в том, что он позволяет разделять только миллиграммы вещества. [c.155]

Общая методика разделения двадцати ФТГ-аминокислот включает хроматографию на двух колонках (/ и //) и идентификацию ФТГ-аргинина и ФТГ-гнстидина—хроматографией на бумаге. На колонку / с скоростью 15 мл/ч подают систему А, а после выхода ФТГ-фенилаланина—систему Б. [c.383]

Примечания. Тип бумаги Ц — целлюлозная (см. разд. 122), С — стекловолокнистая (см. разд. 125). 1—4. Стекловолокнистая бумага приготовлена без добавок свяаующего, отличается высокой скоростью движения растворителя и допускает проявление хроматограмм с помощью серной кислоты при нагревании до 200—300 °С. Бумага № 1 — с небольшим содержанием сорбента, рекомендована для хроматографии липидов и других неполярных соединений. Содержание сорбента в бумагах № 2—4 значительно больше, причем в направлении к одному краю листа pH немного возрастает. Рекомендованы для разделения полярных веществ сахаров, аминокислот, витаминов. Сорт бумаги № 4 предназначен для идентификации наркотиков. 6. Для препаративных работ. 8.9. Время капиллярного поднятия воды на 75 мм —22 и 15 мин (№ 8 и 9), бензола на 115 им — 30 мин. Средний диаметр пор силикагеля 11 нм. 11, 12. Бумаги соответственно аналитического и технического сортов. [c.247]

Интенсивность окраски реакционной смеси, получающейся при добавлении нингидринового реагента к эффлюенту, измеряется проточным колориметром в условиях постоянной скорости потока жидкости. Возникающее изменение напряжения на фотоэлементе регистрируется самописцем. Обычно выходное напряжение колориметра на самописец составляет О—5 мВ. При максимальном развитии окраски (наивысшая оптическая плотность, ОП) напряжение равно нулю, а при отсутствии, за исключением фона реагентов (фоновая линия), напряжение составляет 5 мВ. Для точной записи результатов хроматографического анализа самописец должен а) точно реагировать только на сигнал фотоэлемента калориметра б) допускать длительную работу с минимальным дрейфом из-за тепловых и электрических помех в) иметь постоянную скорость лентопротяжного механизма для обеспечения точной идентификации пиков по времени. Если запись на самописце производится на диаграммной бумаге с линейной шкалой, то для расчета пиков аминокислот или пептидов необходим шаблон с нанесенной сеткой ОП. Если самописец снабжен диаграммной бумагой со шкалой в единицах ОП или логарифмической шкалой, величина поглощения находится непосредственно. Другими вспомогательными элементами, которые связаны с записью анализа и считаются составными частями системы регистрации, являются устройства, осуществляющие расширение шкалы, логарифмирование сигнала, интегрирование пика, а также цифропечать и связь с ЭВМ. Расширение шкалы представляет собой метод, по которому вся шкала самописца может быть легко заменена с О—5,0 мВ на 4,0—5,0 или 4,5— [c.32]

Развитие хроматографических методов разделения и идентификации аминокислот значительно облегчило проведение исследований с аминокислотами многие успехи, достигнутые в изучении аминокислот за последнее время, непосредственно связаны с применением хроматографии. Занимаясь разделением аминокислот, Нейбергер [154] в 1938 г. обнаружил, что у ацетил-производных разных нейтральных аминокислот коэффициенты распределения между водой и несмешивающимися с водой растворителями различны. В 1941 г. хМартин и Синг [155] осуществили разделение ацетилированных аминокислот на силикагеле последний служил инертной опорой для водной фазы, через которую протекал неводный растворитель. В дальнейшем эта техника была усовершенствована. Большим достижением явилось использование фильтровальной бумаги в качестве неподвижной фазы [156], что привело к широкому развитию разнообразных методов хроматографии на бумаге (см. Блок и др. [157]). В настоящее время считают, что в процессе разделения веществ на бумаге наряду с распределением между растворяющими фазами играют роль также механизмы адсорбции и ионного обмена. [c.40]

Хроматография на бумаге. — Этот метод, введенный Мартином и Синджем в 1944 г., используемый теперь iBo всех областях химии, применим, в частности, для идентификации компонентов смеси аминокислот с ди- и трипептидами, получаемой при частичном гидролизе белков и полипептидов. Компоненты гидролизата распределяются между одой, адсорбированной на целлюлозе и являющейся неподвижной фазой, и органическим растворителем, подвижной фазой (например, водный этиловый спирт, бутиловый спирт, фенол), которая движется вдоль листа вверх или вниз, — восходящий или нисходящий способы. Более липофильные аминокислоты сильнее увлекаются органическим растворителем, более гидрофильные —проявляют большую тенденцию связываться с неподвижной водной фазой. Гомологичные соединения, отличающиеся даже на одно метиленовое звено, движутся с различной скоростью и легко могут быть разделены. По окончании хроматографии бумагу высушивают н опрыскивают нин-гидрином для проявления аминокислот в виде окрашенных пятен. Нингидрин (2-гидрат индантриона-1,2,3) окисляет аминокислоты до R HO, NHa и СОг. Образующееся дигидросоединение при взаимодействии с аммиаком образует соответствующий пигмент [c.636]

Наряду с приведенными примерами применения комплексонов в хроматографии или ионофорезе необходимо отметить, хотя бы вкратце, применение комплексонов для выделения мешающих тяжелых металлов из бумаги для хроматографических или электрофоретических целей. Эти металлы могут образовывать соли или комплексы с разделяемыми веществами и мешать хроматографическому разделению их и идентификации [25]. Бумагу можно промывать раствором комплексона III перед хроматографическим проявлением или добавлять комплексон в растворитель. Хайс и Хоржешовский [26] применили второй способ для выделения тяжелых металлов в бумажной хроматографии аминокислот, Уокер и Уоррен [27] и Флеккенштейн, Янке и Эльке [28] — для разделения различ1 ых эфиров с]х сфорной кислоты. [c.260]

Особенно широко применяют при идентификации летучих производных аминокислот метод ГЖХ в сочетании с такими инструментальными методами, как ИК-спектроскопия, масс-снектромет-рия, а также другие варианты хроматографии, в частности ионообменную, хроматографию на бумаге и в тонком слое. [c.69]

Амины. Растворимость в разбавленных кислотах, карбилами-новая проба, проба на диазотирование и сочетание. Производные замещенные мочевины и тиомочеЕины, амиды, фталаминовые кислоты, четвертичные аммониевые соли, пикраты, пикролонаты. Идентификация аминокислот с помощью ионофореза и хроматографии на бумаге. ИК-спектры аминов и амидов. [c.223]

Величины для -аминоспиртов и аминокислот для первых трех из этих систем (при хроматографировании па бумаге ватман № 1 при 20—22") приведены в табл. 32. Как правило, -аминоспирты движутся впереди соответствующих аминокислот, а интенсивность окраски при реакции -аминоспиртов с нингидрином часто составляет только 10—20 о той величины, которую дают аминокислоты. Многие -аминоспирты могут быть окислены до аминокислот с хорошим выходом путем нагревания с суспензией окиси серебра при 100° в течение многих часов [35]. Ионы серебра удаляют в виде хлорида серебра, а образовавшиеся аминокислоты адсорбируют на небольшой колонке с ионитом дауэкс 2 (в форме свободного основания). Путем элюирования 1 п. НС1 получают раствор ам1Шокислот для последующей идентификации. [c.205]

В работах [47—53] описано разделение аминокислот на тонких слоях целлюлозы. Обычно в этом случае вполне приемлемы растворители и реактивы для опрыскивания, применяемые в хроматографии на бумаге. Фон Арке и Негер [54] разработали методику разделения и идентификации 52 амйнокислот (табл. 17.3) на слоях целлюлозы с четырьмя смесями растворителей с применением пяти цветных реакций. С этой целью были приготовлены шесть пластинок раз.мером 20x20 см, покрытых целлюлозой (всего авторы использовали четыре цветные реакции при двумерной комбинации / и //), Пластинки сушили 12 ч при комнатной температуре в горизонтальном положении и наносили водный раствор пробы в угол пластинки на расстоянии 25 мм от края. Объем пробы не должен превышать 1 мкл, а общее количество данной аминокислоты не должно превышать 10 мкг. [c.484]

Для выделения аспарагина и отдельных аминокислот был использован метод многослойной восходящей ли круговой хроматограммы. Идентификацию отдельных аминокислот производили нингидринной реакцией на нескольких листах многослойной хроматограммы. По этим проявленным листам устанавливали локализацию аминокислот на необработанных нингидри-ном листах хроматограммы. Участки бумаги с локализованными иа них аминокислотами вырезали, аминокислоты из этих участков выщелачивали дистиллированной водой и подвергали повторной хроматографической очистке. В процессе очистки отдельных амино1 и(Слот происходили з1начительные их потери, поэтому абсолютный выход большинства индивидуальных аминокислот был мал, кроме аспарагина, содержащегося в исходном материале в весьма больших количествасх. Чтобы иметь достаточные количества исследуемого материала, обеспечивающие высокую точность эксперимента, оказалось необходимым выделять отдельно только аспарагин, а все индивидуальные аминокислоты объединить в две группы — дикарбоновые амино- [c.205]

Ряд дикетопиперазинов был выделен и другими исследователями при полном и ступенчатом гидролизе белков [3]. Однако точное установление состава и строения циклических ангидридов аминокислот всегда требовало огромного труда. Учитывая, что в последние годы метод хроматографического распределения на бумаге [4] приобрел широкое распространение для быстрой и точной идентификации и анализа смесей аминокислот и пептидов, мы решили применить данный метод для анализа циклических ангидридов аминокислот. [c.343]

Мы решили далее применить разработанный нами метод распределительной хроматографии на бумаге, основанный на качественной реакции, дикетопиперазинов с 3,5-динитробензойной кислотой, для идентификации циклических ангидридов аминокислот, выделенных нами после многочасовой экстракции уксусноэтиловым эфиром автоклавного гидролизата желатины. Последний был получен при обработке желатины 2%-ным раствором муравьиной кислоты в течение 3 час. при 180° и давлении 10 атм. Все исследуемые ангидриды давали только сильную темнооранжевого цвета реакцию с пикриновой кислотой в содовом растворе и фиолетовую окраску с 3,5-динитробензойной кислотой. Биуретовая и нингидринная реакции были отрицательные. [c.345]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология