Элюенты гидрофильные

Этот процесс сходен с предыдущим в том смысле, что задержание молекул вещества в неподвижной фазе обусловлено пх связыванием с поверхностью твердого гидрофильного материала сплошных или пористых гранул, находящихся в контакте с жидким элюентом. Однако в этом варианте хроматографии задержание происходит не за счет молекулярной адсорбции, а в результате электростатического взаимодействия разноименно заряженных ионов. [c.9]

Хотя подавляющее большинство разделений на жестких гелях с привитыми гидрофильными группами проводят в водных системах, эти материалы могут быть использованы и в сочетании с полярными органическими элюентами (тетрагидрофуран, диметилформамид, этанол), что расширяет возможности их применения. [c.109]

Гель-хроматография. В препаративных целях, особенно при очистке белков от примесей, щироко используют метод молекулярных сит, или гель-хроматографию. При обработке эпихлоргидрином полисахарида дек-страна образуются различной степени выраженности поперечные связи, приводящие к формированию крупных гидрофильных зерен, нерастворимых в воде и называемых сефадексами. Благодаря большому сродству к воде зерна сильно набухают в водной среде с образованием геля, которым заполняют хроматографическую колонку. Разделение веществ этим методом основано на том, что большие молекулы не проникают во внутреннюю водную фазу геля, являющуюся стационарной, и остаются снаружи, двигаясь вместе с подвижной фазой вниз вдоль колонки небольшие молекулы, напротив, свободно диффундируют внутрь зерен, образуя равновесную систему между подвижной и стационарной фазами, и соответственно с меньшей скоростью двигаются вдоль колонки (рис. 1.5). Обычно момент появления веществ в вытекающем из колонки с сефадексом элюенте выражают формулой [c.30]

Разумеется, различие между неподвижной фазой набухших гранул геля и подвижным элюентом тем сильнее, чем больше различается по составу растворитель в обеих фазах. Это имеет место в так называемой распределительной хроматографии если суспендировать гидрофильный ксерогель, например, в большом избытке бутанола, насыщенного водой, то гель извлекает из смеси преимущественно воду и до известной степени набухает. Процесс набухания можно продолжить, многократно обрабатывая гель новыми порциями системы до достижения равновесия. Однако в итоге гель все же набухает гораздо меньше, чем в чистой воде. Можно себе представить, что в порах геля находится вода, насыщенная бутанолом, а вне гранул — бутапол, насыщенный водой. В процессе хроматографирования распределение происходит между этими двумя фазами, причем скелет геля служит зачастую только инертным носителем. На такой колонке в препаративных масштабах должны разделяться все соединения, которые легко анализировать методом хроматографии на бумаге. По сравнению с порошком целлюлозы, например, сефадекс обладает тем преимуществом, что на нем можно работать с гораздо большими скоростями кроме того, поскольку неподвижная фаза в сефадексе действительно пронизывает весь гель, распределительные колонки подобного типа обладают значительной емкостью. [c.195]

Отсюда появляется возможность подбора необходимых условий для успешного разделения веществ. Например, для веществ 1 группы разница в полярности между стационарной и подвижной фазами должна быть как можно больше. При этом, по крайней мере, одно из двух веществ долншо быть ограниченно растворимым. Для веществ 2 группы растворимость их в подвижной фазе должна быть возможно большей и для распределения необходим возможно больший путь прохождения по хроматограмме. Вещества 3 группы делятся на подгруппы веществ липофильных и более слабо сорбированных и гидрофильных, но сорбированных более сильно, и наоборот. Соответственно подбираются и составы элюентов. [c.34]

По хроматографии оксипроизводных антрахинона имеется весьма обширная литература, включающая, как указывалось выше, некоторые теоретические обобщения относительно связи строения с хроматографическими характеристиками. Прежде всего следует указать, что введение оксигрупп в молекулу антрахинона увеличивает ее полярность и гидрофильность, что должно бы приводить к значительному уменьшению величин при применении обычных хроматографических систем и их увеличению в системах с обращенными фазами. Однако такие простые зависимости характерны только для Р-оксипроизводных антрахинона. Различное поведение оксипроизводных а- и Р-рядов в настоящее время объясняют тем, что а-изомеры могут образовывать внутримолекулярные водородные связи с карбонильными группами антрахинонового ядра, что уменьшает способность этих соединений к взаимодействию с гидрофильными элюентами и неподвижными фазами за счет водородных связей и увеличивает их сродство к гидрофобным фазам. В результате этого [c.129]

С целью уменьшения адсорбции растворителя при молекулярной сорбции из водных растворов обычно применяют гидрофобный адсорбент — активный уголь, а при сорбции из неполярных растворителей (углеводородов) гидрофильный адсорбент — силикагель. Адсорбция протекает по активным центрам адсорбента, часто мономолекулярно и высокоизбирательно. Изотермы молекулярной адсорбции из растворов, так же как газов и паров, имеют вид кривой, приведенной на рис. 96. Десорбцию, осуществляемую с помощью жидкостей, обычно называют элюцией, а жидкости или растворы, применяемые для этих целей, элюентами. [c.323]

Для разделения галогенидов методом колоночной распределительной хроматографии можно использовать катионит СБС в Na-форме. В качестве элюента применяют органические растворители (например, ацетон), неограниченно смешивающиеся с водой. При этом ионит как сильно гидрофильный носитель удерживает преимущественно воду, которая не вымывается органическим растворителем. За счет многократного повторения процессов распределения происходит разделение компонентов смеси. [c.130]

На рис. 14.13 представлены хроматограммы четырех малых доз растворов цимарина в элюенте этанол — вода, концентрация цимарина в которых изменялась в пределах от 0,0646 до 0,4400 мг/см . Пики в этой области остаются симметричными и положение их максимума не изменяется. Из определения времени удерживания цимарина и практически неадсорбируемого на гидрофобизирован-ной поверхности из водных растворов компонента (весьма гидрофильной галловой кислоты) при независимости времени удерживания от размеров частиц адсорбента для оптимальной скорости потока при разных длинах колонн был получен удерживаемый объем на 1 г адсорбента = = 4,9 смз/г (здесь J — соответствующая константа Генри для адсорбции цимарина на силанизи-рованном силикагеле из водно-этанольного элюента). [c.263]

Перейдем теперь к разделению более сложных полярных молекул на неполярном адсорбенте из полярного элюента. Важной задачей является разделение таких лекарственных препаратов, как сильно действующие сердечные тликозиды, молекулы которых состоят из агликона — стероидной жесткой и обычно более гидрофобной части молекулы с присоединенным к ней лактонным кольцом, и гликона — конформационно подвижной и более гидрофильной сахарной части, связанной со стероидным остовом кислородным мостиком (см. формулу цимарина в разделе 14.7). При применении силикагеля, поверхность которого модифицирована реакцией с дифенилдихлорсиланом (см. рис. 5.7), достигнуто полное разделение восьми сердечных гликозидов (рис. 17.7) из полярного элюента этанол — вода (40 60) в порядке уменьшения полярности гидрофильности ) молекулы первым выходит О-строфантин (5 гидроксильных групп в стероидной части молекулы и 3 гидроксильные группы в моносахариде, всего 8 групп ОН в молекуле) и последним олеандрин (одна гидроксильная группа в стероидной части и одна в моносахариде, всего только 2 группы ОН в молекуле). [c.319]

Сорбенты, применяющиеся в ГПХ, имеют различные свойства. Как правило, их подразделяют на мягкие, полужесткие и жесткие гели. К мягким относят гели, приготовленные на основе полисахаридов (крахмал, декстран, целлюлоза). Мягкие гели не устойчивы к давлению и при высоких скоростях движения элюента деформируются. Такие гели невозможно использовать в современной ВЖХ. Полужесткие ге.ли получают сополимеризацией стирола и дивинилбензола (стирогели) или полимеризацией випплацетата. Сорбенты, полученные на основе этих гелей, способны выдерживать высокое давление и применяются в ВЖХ. Такие гели в отличие от гидрофильных мягких могут быть использованы с органическими растворителями. Жесткие гели представляют собой стекла или силикагели, имеющие фиксированные размеры пор Недостатком этих материалов является их высокая адсорбционная способность. Для подавления активности их предварительно обрабатывают специальными химическими веществами. [c.610]

Хроматографическая бумага должна быть чистой, однородной по плотности, структуре и ориентации во-Л01ЮН. В наиболее простом случае используют плотные сорта фильтровальной бумаги. Обычная бумага гидрофильна и содержит до 20 % влаги, что является вполне достаточным количеством в том случае, когда НФ служит вода, а ПФ — несмешивающийся с водой органический растворитель. В хроматографии на бумаге можно реализовать обращенно-фазовый вариант. В этом случае бумагу предварительно пропитывают гидрофобным веществами (парафин, каучук и др.), либо подвергают специальной химической обработке, устраняя гидроксильные группы ,еллюлозы. Подвижной фазой в обращенно-фазовом варианте служат вода и смеси воды с полярными органическими растворителями. В хроматографии на бумаге, как и в других видах хроматографии, большое значение имеет правильный выбор неподвижной и подвижной фаз. Используемые фазы ие должны смешиваться друг с другом. Анализируемые вепгества должны растворяться в НФ луч не, чем в ПФ, иначе они будут двигаться со скоростью движения фронта элюента. В настоящее-время в качестве ПФ индивидуальные растворители используют, как правило, реД со. Чаще применяют смеси эмпирически подобранных компонентов. Хроматограмма аналогична полученной в методе ТСХ и имеет вид пятен более или менее отделенных друг от друга. Для проявления пятеп пригодны методы, описанные для ТСХ. [c.615]

Отметим одно существенное преимущество обратнофазовой хроматографии для фракционирования белков, НК и их компонентов. При такой распределительной хроматографии эти вещества выходят из колопки растворенными в элюенте, основу которого составляет вода, что способствует сохранению их нативности и облегчает дальнейшие процедуры. Кроме того, использование перечисленных выше средств управления гидрофобностью или гидрофильностью вещества в случае водного элюента значительно упрощается. [c.169]

На рис. 89 показаны результаты эксперимента, в котором элюцию смеси белков, включающей и цитохром-с-оксидазу, с колонки фенилсефарозы вели последовательно пятью разными детергентами. Как и следовало ожидать, цитохром-с-оксидазу снимает Тритон Х-100. Еще две зарегистрированные в опыте ферментативные активности выходят раньше, при элюции другими детергентами, а наибольшее количество сорбированного белка снимает с колонки на последнем этапе элюции ДДС-Na. Высокая эффективность ДДС-Na в качестве элюента, вероятно, связана с его относительно малой молекулярной массой. Можно предположить, что на каждый гидрофобный участок поверхности белка садится несколько молекул ДДС-Na, привнося тем самым сильно выраженную гидрофильную функцию. [c.185]

Декстран ( Sephadex ) — очень гидрофильный материал. Присоединение ионогенных групп происходит также по гидроксилалг полисахарида. Пористость и жесткость матриц на основе сефадексов зависит от процентного содержания сшивки (эпихлоргидрина). Модифицированные сефадексы для ионообменной хроматографии выпускаются на основе только двух типов сефадексов G-25 и G-50. Размеры пор у модифицированных сефадексов значительно выше, чем у двух исходных типов матриц, за счет уже знакомого нам эффекта расталкивания одноименно заряженных ионогенных групп. Ионообменные сефадексы соответственно и менее жестки их объемы тоже могут изменяться в зависимости от pH и ионной силы элюента. Особенно сильно это выражено у ионообменников, полученных на основе сефадекса G-50. Рабочий диапазон pH 2—12. [c.251]

Распределительная ТСХ целых белков встречается редко ввиду обычно прочной сорбции гидрофильных белков на целлюлозе нли силикагеле и плохой их растворимости в органических элюентах. Однако для липофильных белков этот метод может быть с успехом использован [Audubert, Semmel, 1979]. Липофильные белки из культуры клеток зародыша цыпленка (экстрагированные смесью хлороформа с метанолом) авторы успешно фракционировали двумерной тех на пластинках силикагеля, использовав для элюции в первом направленип смесь хлороформ—метанол—вода (65 25 4), а во втором — смесь -бутанол—СНдСООН—вода (3 1 1). [c.490]

Рассмотрение принципа действия и особенностей использования аминокислотного анализатора начнем с того, что сформулируем представления об анализируемом препарате. Для наиболее интересного случая — анализа состава белка — им является смесь 20 природных аминокислот. Все компоненты этой смеси представляют одинаковый интерес, подлежат полному разделению и количественной оценке. Интервал. молекулярных масс простирается ог 75 (Gly) до 204 (Тгр), диапазон значений р1 — от 2,97 (Glu) до 10,76 (Arg). Различия в стеиени гидрофобности тоже выражены сильно от гидрофильных дикарбоновых и оксикислот до весьма гидрофобных, несущих довольно протял<енные алифатические и ароматические боковые группы. Заметим сразу, что такие различия должны облегчить задачу хроматографического разделенпя, но вряд лн позволят обойтись без ступенчатой смены элюентов. В обычных условиях хроматографии все алшнокислоты достаточно устойчивы, но следует обратить внимание с этой точки зрения и на предшествующий хроматографии этап исчерпывающего гидролиза белков и пептидов (от него будут зависеть и результаты анализа). Агрегация аминокислот маловероятна, за исключением возможности окисления цистеинов до цистинов. Не-специфическая сорбция за счет гидрофобных взаимодействий с материалом матрицы безусловно возможна, но здесь она будет использоваться в интересах фракционирования. [c.515]

И. X. применяется для разделения катионов металлов, напр, смесей лантаноидов и актиноидов, 2г и НГ, Мо и W, КЬ и Та последние разделяют на анионитах в виде анионных хлоридных комплексов в р-рах соляной и плавиковой к-т. Щелочные металлы разделяют на катионитах в водных и водно-орг. средах, щел.-зем. и редкоземельные металлы-на катионитах в присут. комплексонов. Большое значение имеет автоматич. анализ смесей прир. аминокислот на тонкодисперсном сульфокатионите.в цитратном буфере при повыш. т-ре. Аминокислоты детектируют фотометрически после их р-ции с нингидрином или флюориметрически после дериватизации фталевым альдегидом. Высокоэффективная И. X. (колонки, упакованные сорбентом с размером зерен 5-10 мкм, давление для прокачивания элюента до 10 Па) смесей нуклеотидов, нуклеозидов, пуриновых и пиримидиновых оснований и их метаболитов в биол. жидкостях (плазма крови, моча, лимфа и др.) используется для диагностики заболеваний. Белки и нуклеиновые к-ты разделяют с помощью И. X. на гидрофильных высокопроницаемых ионитах на основе целлюлозы, декстранов, синтетич. полимеров, широкопористых силикагелей гидрофильность матрицы ионита уменьшает неспецифич. взаимод. биополимера с сорбентом. В препаративных масштабах И. х. используют для вьщеления индивидуальных РЗЭ, алкалоидов, антибиотиков, ферментов, для переработки продуктов ядерных превращений. [c.264]

В гель-фшшдюционной зфоматографии проводят разделение водорастворимых веществ на гидрофильных сорбентах. При этом используются водные элюенты, содержащие, как правило, буф для контроля уровня pH. В гель-проникающей хроматографии применяются гидрофобные сорбенты и соответственно неполярные орган%1ческие растворители, такие, как тетрагидрофуран, дихлорметан или толуол. С помощью гель-проникающей хроматографии определяют соединения, малорастворимые в воде. [c.291]

Величина (размер) поверхности, на которой при хроматографировании происходят сорбциониые явления, снижается, если она покрыта молекулами "дезактиватора , поскольку молекулы "дезактиватора" снижают "свободную", т.е. эффективную (или активную) поверхность сорбента. Таким образом, происходит "дезактивация" поверхности. Вообще говоря, дезактиваторами гидрофильных адсорбентов - силикагеля и оксида алюмнния - являются высокополярные вещества. Для неполярных адсорбентов - угля и графитированной сажи - дезактиваторами являются молекулы липофильных веществ (бензол, стеариновая кислота). Обращенные фазы могут быть дезактивированы тяжелыми углеводородами. Предполагается, что при элюировании дезактиваторы не перемещаются по неподвижной фазе. Поэтому вода не вымывается относительно гидрофобными элюентами, используемыми при обработке гидрофильных адсорбентов. В адсорбционной ТСХ с гидрофильными сорбентами вода является важным регулятором активности. На практике предварительное покрытие слоя осуществляется исключительно в газовой фазе. В этом случае относительная влажность является фактором, контролирующим активность сорбента [168]. Это в некоторой степени абстрактное утверждение будет ниже развито и проиллюстрировано примерами. [c.314]

Поскольку доступная поверхность сорбента всегда ограничена, при пользовании многокомпонентными подвижными фазами различные компоненты элюента воздействуют друг на друга при конкуренции за центры сорбции в этом процессе могут наблюдаться вытеснительные эффекты (более подробно об этом будет говориться в разд. VI, В). Иначе говоря, на тип и на характеристики изотермы сорбции одиночного вещества или многокомпонентной смеси влияют такие параметры, как тип вещества, тип конкурирующих партнеров и степень относительного насыщения конкурирующими вешествами (обычно такое влияние направлено в сторону ослабления сорбции для отдельного вещества). Поскольку большинство гидрофильных адсорбентов предпочтительно улавливает полярные молекулы, в состоянии сорбционного равновесия отношение концентраций сорбированных веществ может отличаться от характерного для газовой фазы и еще бопее от характерного для имеющейся в камере жидкой фазы. Поэтому легко себе представить, насколько сложной может оказаться ситуация, когда (при конкретных условиях практической работы без контроля за состоянием среды) преобладают случаи смещения от состояния равновесия. [c.93]

Система гидрофильных растворителей 50 нл = 10 нг для каждой аминокислоты элюент — смесь пронилового сипрта и воды в соотношении 80 20 или [c.137]

Для аналитических и препаративных разделений пептидов и белков применяются такие гидрофильные полимерные материалы, как полидекстрины. В эксклюзионной хроматографии используют пористые полимеры с широкими порами. Эксклюзионная хроматография с органическими элюентами называется гель-проникающей хроматографией и применяется для разделения полимеров. Эксклюзионная хроматография с водными элюентами — гель-фильтрационная хроматография — используется для разделения биомолекул. [c.312]

К наиболее часто применяемым гидрофильным гелям относятся DEAE-сефадекс А-25 в сочетании с градиентным элюированием раствором хлорида натрия и сефадекс G-25 с применением в качестве элюента дистиллированной воды. Эти гели применяют для разделения сопряженных экстрогенов (см. ниже) и связанных с белками тестостеронов [42, 43]. [c.223]

В водном элюенте (система И) значения Д/ уменьшаются с увеличением длины цепи замеш ающих групп. Этот случай аналогичен поведению этих фенолов в условиях обращеино-фазового распределительного процесса, следовательно, можно было бы считать, что полиамидная поверхность играет роль неполярной стационарной фазы. Барк и Грэхэм [270] такой трактовки не дают. Они считают, что полиамидный субстрат и в этом случае выступает как полярная протоноакцепторная поверхность. Но механизм сольватации, т. е. отрыва фенола от субстрата и перевод его в мобильную фазу, иной, чем в системе I. В системе II сольватируется гидрофильная часть фенола. Сольватация фенольных грунн будет затрудняться введением алкильных грунн во 2 положение и будет зависеть не только от величины молекулярного веса, но и от степени раз-ветвлениости алкильного радикала. Так, 2-втор-бутилфенол в системе II имеет значение Rf более высокое, чем 2 трет-бу-тилфенол (табл. 14). [c.37]

Белки в пробе можно коагулировать, например нагреванием. Липиды, воски, парафины и другие липофильные соединения удается отделить от гидрофильных компонентов методом экстракционного разделения между фазами петролейного эфира и водных спиртов (например, 60- и 95%-ного метанола в зависимости от природы веществ) в одной делительной воронке или в нескольких, применяя метод противоточного распределения. Различные виды аминокислот (основные, кислые и нейтральные) можно предварительно разделить посредством электрофореза на бумаге или в геле. Для отделения различных органических кислот и ряда соединений типа фенолов от сахароподобных веществ пригодны даже такие старые методы, как осаждение ацетатом свинца, основным ацетатом свинца и т. п. Некоторые группы алкалоидов можно высадить из экстрактов с помощью специфических реагентов, а затем выделить их. В тех случаях, когда представляют интерес органические вещества средней полярности, можно иногда очистить пробу непосредственно на бумаге, на которой должен проводиться хроматографический анализ. Неочищенную пробу хроматографируют сначала чистым петролейным эфиром (иногда несколько раз), липиды при этом перемещаются вместе с фронтом растворителя. Далее хроматограмму сущат, после этого можно хроматографировать пробу еще раз чистой водой, если целевое вещество полностью нерастворимо в ней. Вода вымывает из пробы соли, сахара, аминокислоты и т. д., которые перемещаются вместе с фронтом элюента или вблизи него. В заключение пробу хроматографируют специально подобранным элюентом, следя при этом, чтобы фронт растворителя не продвинулся на такое же расстояние, как при предыдущих операциях по очистке. [c.88]

После нанесения пробы хроматограмму вкладывают в хроматографическую камеру и начинают элюирование. При этом необходимо знать, какое количество вещества неподвижной фазы содержится в подвижной фазе, которая используется для элюирования. Гидрофильные элюенты, чаще всего на основе бутанола, или даже однофазные элюенты (например, смесь изопропиловый спирт — вода) содержат такое количество воды, что в ходе элюирования бумага может впитать из них необходимую воду и набухнуть. В этом случае хроматографирование можно начинать немедленно и получить в результате пятна также правильной круглой формы это обстоятельство доказывает, что разделение происходит по принципу распределительной хроматографии. Однако, если содержание воды в подвижной фазе невелико, ниже примерно 10% (а это имеет место при использовании таких систем, как бутилацетат — вода, бензол — пропионовая кислота — вода, тетрахлорметан — уксусная кислота — вода, системы Буша и др.), необходимо до начала элюирования ввести в бумагу требуемое количество полярной неподвижной фазы. С этой целью бумагу выдерживают над водой в камере с влажной атмосферой (приведение в равновесие), обрабатывают ее водяным паром, опрыскивают мелкодисперсным аэрозолем, содержащим вещества неподвижной фазы, или пропитывают влажным эфиром по методу Буша и Кроушоу [19]. [c.89]

ВИЯ. Так, например, в процессе хроматографирования органических кислот решающую роль играет физическая адсорбция гидрофобных частей молекул на матрице ионита. Особая природа органических ионов используется в хроматографии в водно-органических растворителях. При проведении такого хроматографирования содержание воды в ионите больше, чем в окружающем растворе, и величина Кри изменяется в сторону, благоприятствующую более гидрофильным молекулам. Водорастворимые неионные органические соединения разделяют на ионитах методом высаливающей хроматографии. Элюент при этом содержит сильный электролит, который вытесняет, например, спирты из водной фазы в ионообменную. Ионизованные соединения можно отделять от неионизованных методами исключения иона или задержки иона. Первый метод основан на дон-нановских взаимодействиях ионов с сильнодиссоциированными ионитами (исключение) и неионных соединений с матрицей ионита. При использовании второго метода применяют специальные иониты (так называемые структуры типа змея в клетке , синтезируемые путем полимеризации акриловой кислоты в матрице сильноосновного анионита), которые удерживают все ионы электролита и исключают неионные вещества. [c.244]

Виды сорбентов. Сорбенты для эксклюзионной хроматографии полимеров должны быть термически и механически стойкими с большим объемом пор малым сопротивлением внутрённей массо-передаче и току элюента а главное — они не должны иметь адсорбционной активности. Различают два типа сорбентов ксерогели и аэрогели (рис. VU.16). Ксерогели —это однородносетчатые и гетеросетчатые органические гели, пористая структура которых образуется в результате набухания геля в элюенте. Аэрогели сохраняют пористость в сухом виде, В зависимости от способности набухать в водной среде или в органических растворителях органические гели делятся на гидрофильные, гидрофобные или универсальные. [c.179]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология